發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及結(jié)合cd137的特異性結(jié)合成員。所述特異性結(jié)合成員包含位于特異性結(jié)合成員的恒定結(jié)構(gòu)域中的cd137抗原結(jié)合位點(diǎn)，并且可用于例如癌癥和感染性疾病的治療。

背景技術(shù)：

0、發(fā)明背景

1、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)是所有生物生命的重要組成部分，通常涉及與可溶性或表面表達(dá)的配體相互作用的細(xì)胞表面受體。這種相互作用導(dǎo)致受體，配體或兩者的變化。例如，配體結(jié)合可以誘導(dǎo)受體的構(gòu)象變化，使它們聚集成二聚體或寡聚體。然后，這種聚集效應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑的激活。有許多以此方式激活的受體，包括腫瘤壞死因子受體超家族(tnfrsf)的成員，例如cd137。

2、cd137(4-1bb；tnfrsf9)是腫瘤壞死因子受體超家族(tnfrsf)的共刺激分子。眾所周知，cd137在激活后會(huì)在cd8+t細(xì)胞上被上調(diào)，也可以在激活的cd4+輔助t細(xì)胞、b細(xì)胞、調(diào)節(jié)性t細(xì)胞、自然殺傷(nk)細(xì)胞、自然殺傷t(nkt)細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞(dc)中表達(dá)(bartkowiak和curran，2015年)。在1997年首次描述了cd137在增強(qiáng)t細(xì)胞細(xì)胞毒性中的主要功能作用(shuford等人，1997)，此后不久就提出了抗cd137?mab作為抗癌治療劑。

3、cd137是一種跨膜蛋白，具有四個(gè)胞外富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域，稱為crd1-4，并具有負(fù)責(zé)cd137信號(hào)傳導(dǎo)的胞質(zhì)區(qū)域。cd137的配體是cd137l。盡管不存在cd137/cd137l復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)，但可以預(yù)測cd137與cd137l形成三聚體/三聚體復(fù)合物(won等人，2010)。cd137l的結(jié)合導(dǎo)致受體三聚體的形成和隨后多個(gè)受體三聚體的聚集，并導(dǎo)致cd137信號(hào)級(jí)聯(lián)的激活。該信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)為t細(xì)胞提供了針對(duì)激活誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的生存信號(hào)(hurtado等人，1997)，從而在維持有效的t細(xì)胞免疫應(yīng)答和產(chǎn)生免疫記憶中起著至關(guān)重要的作用(bartkowiak和curran，2015)。

4、cd137在白細(xì)胞生物學(xué)中的作用已被廣泛了解，其在腫瘤免疫學(xué)中的作用有著明確的生物學(xué)基礎(chǔ)。cd137由活化的t細(xì)胞表達(dá)，并已用作鑒定抗原特異性cd4+和cd8+t細(xì)胞的標(biāo)志物。通常，cd137在cd8+t細(xì)胞上的表達(dá)高于cd4+t細(xì)胞(wen等人，2002)。就cd8+t細(xì)胞而言，通過產(chǎn)生干擾素γ和白介素2引起的增殖、存活和細(xì)胞毒性效應(yīng)功能歸因于cd137聚集。cd137聚集還有助于記憶cd8+t細(xì)胞的分化和維持。在cd4+t細(xì)胞的某些亞群中，cd137聚集類似地導(dǎo)致增殖和活化，并導(dǎo)致細(xì)胞因子如白介素2的釋放(makkouk等人，2016)。

5、通過腫瘤靶向單克隆抗體介導(dǎo)的自然殺傷細(xì)胞(nk)介導(dǎo)的抗體依賴性細(xì)胞毒性(adcc)已被證明在體外和體內(nèi)通過激動(dòng)性抗cd137單克隆抗體刺激cd137而增強(qiáng)(bartkowiak和curran，2015)。nk細(xì)胞通過其fc受體結(jié)合抗體，根據(jù)抗體同種型，這可以導(dǎo)致nk細(xì)胞活化，引起細(xì)胞毒性顆粒釋放和靶細(xì)胞裂解(kohrt等人，2012)。kohrt及其同事證明了抗cd137激動(dòng)劑抗體與治療性藥物利妥昔單抗、曲妥珠單抗和西妥昔單抗組合給藥時(shí)可通過增強(qiáng)adcc來增強(qiáng)它們的抗腫瘤活性(kohrt等人，2014；kohrt等人，2011)。此外，人nk細(xì)胞通過fcγr與細(xì)胞結(jié)合抗體結(jié)合后，上調(diào)cd137的表達(dá)。已顯示，隨后用抗cd137抗體刺激這些nk細(xì)胞可增強(qiáng)其針對(duì)腫瘤細(xì)胞的adcc(chester等人，2015；chester等人，2016)。

6、b淋巴細(xì)胞在激活時(shí)也表達(dá)cd137。cd137配體與cd137的結(jié)合增強(qiáng)了b細(xì)胞的增殖、存活和細(xì)胞因子的產(chǎn)生。在cd40與其配體cd154(cd40配體)結(jié)合后，在正常和惡性人b細(xì)胞上也誘導(dǎo)cd137表達(dá)，如果隨后cd137被激活，則導(dǎo)致b細(xì)胞存活增加。(vinay和kwon，2011)。

7、還已經(jīng)證明cd137在腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞(til)的腫瘤反應(yīng)性亞型上表達(dá)。已證明cd137單一療法在幾種臨床前免疫原性腫瘤模型(例如mc38、ct26和b細(xì)胞淋巴瘤)中有效。已證明將cd137與其他抗癌藥(例如化學(xué)療法，細(xì)胞因子和其他檢查點(diǎn)調(diào)節(jié)劑)結(jié)合使用，可提高既有腫瘤的生長降低。具體地，在各種臨床前異種移植模型中，抗cd137抗體與抗cd20、抗egfr和抗her-2抗體的組合已顯示出對(duì)降低腫瘤生長的協(xié)同作用(kohrt等人，2014；kohrt等人，2012；kohrt等人，2011)。

8、腫瘤靶向單克隆抗體療法與用抗cd137激動(dòng)劑抗體治療的結(jié)合在淋巴瘤(kohrt等人，2011)、頭頸癌、結(jié)直腸癌(kohrt等人，2014)和乳腺癌(kohrt等人，2012)的臨床前模型中顯示出令人鼓舞的結(jié)果。臨床上還測試了多種靶向腫瘤的單克隆抗體與cd137激動(dòng)劑抗體的結(jié)合，包括抗cd20?mab利妥昔單抗(nct01307267，nct02951156)、抗egfr?mab西妥昔單抗(nct02110082)和抗cs1?mab依洛珠單抗(nct02252263)。但是，由于與cd137激動(dòng)劑抗體治療相關(guān)的劑量限制性高度肝臟炎癥，臨床發(fā)展已減緩。尤魯單抗(urelumab，bms-663513)是一種非配體封閉性人igg4同種型抗體(chester等人，2018)，是首個(gè)進(jìn)入臨床試驗(yàn)的抗cd137抗體，但在觀察到顯著的靶向性、劑量依賴性肝毒性后，這些藥物被停用(chester等人，2018)。最近，治療實(shí)體癌的臨床試驗(yàn)建議使用尤魯單抗，其中將尤魯單抗治療與放療(nct03431948)或其他治療性抗體，如利妥昔單抗(nct01775631)、西妥昔單抗(nct02110082)、抗pd-1抗體納武單抗(nct02253992、nct02534506、nct02845323)、以及納武單抗和抗lag-3抗體bms986016(nct02658981)的組合聯(lián)合使用。但是，為減少與尤魯單抗治療相關(guān)的肝毒性，在這些試驗(yàn)中必須限制尤魯單抗的劑量，且療效令人失望(chester等人，2018)。

9、輝瑞抗cd137抗體埃托米魯單抗(utomilumab)(pf-05082566)是人igg2同種型抗體，在晚期癌癥的i期臨床試驗(yàn)中劑量范圍為0.03mg/kg至10mg/kg，未觀察到劑量限制性毒性(chester等人，2016；segal等人，2018)。但是，在實(shí)體瘤患者中，使用該抗體的總體客觀應(yīng)答率僅為3.8％，這可能表明埃托米魯單抗的藥效和臨床療效比尤魯單抗弱，同時(shí)具有更有利的安全性(chester等人，2018；segal等人，2018)。已將埃托米魯單抗與放射療法(nct03217747)或化學(xué)療法結(jié)合進(jìn)行測試，并與其他抗體療法(包括抗pd-l1抗體阿維單抗(nct02554812)和抗pd-1抗體派姆單抗(nct02179918))結(jié)合進(jìn)行測試，以評(píng)估不同治療組合的安全性、耐受性、劑量限制性毒性(dlt)、最大耐受劑量(mtd)和功效。這些試驗(yàn)正在進(jìn)行中，早期結(jié)果表明，劑量達(dá)到5mg/kg時(shí)無dlt，且埃托米魯單抗和派姆單抗聯(lián)合用藥的患者反應(yīng)率為26％。埃托米魯單抗與阿維單抗的三聯(lián)組合以及其他免疫腫瘤學(xué)療法也正在測試中(nct02554812，nct03217747)。

10、許多靶向cd137的雙特異性分子也處于早期開發(fā)階段，其中許多衍生自基于非抗體的支架或融合蛋白技術(shù)。已經(jīng)報(bào)道了使用基于darpin支架蛋白的技術(shù)開發(fā)靶向cd137和fapalpha的雙特異性分子的方法(link等人，2018；reichen等人，2018)。還顯示了使用靶向her2和epha2的dart分子通過腫瘤靶向cd137激動(dòng)活化t細(xì)胞(liu等人，2017)。也正在開發(fā)通過fapalpha或cd19靶向?qū)嶓w瘤和淋巴瘤中腫瘤的cd137l融合蛋白。臨床上最先進(jìn)的cd137雙特異性分子(也是唯一一種含有全長抗體的cd137)是prs-343，一種cd137/her2雙特異性分子。在該分子中，cd137通過人工結(jié)合蛋白(抗心動(dòng)肽)以igg4格式與靶向her2的抗體曲妥珠單抗的fc部分相連。據(jù)報(bào)道，prs-343在人源化小鼠模型中可在her2過表達(dá)的部位的淋巴細(xì)胞上提供cd137的腫瘤靶標(biāo)依賴性活化作用，但與單獨(dú)使用曲妥珠單抗治療相比，未觀察到腫瘤生長抑制作用的改善(hinner等人，2016年和wo?2016/177802?a1)。prs-343最近已進(jìn)入i期臨床試驗(yàn)，用于治療一系列實(shí)體瘤，以評(píng)估其安全性、耐受性和功效(nct03330561)。

11、發(fā)明說明

12、如上文背景部分所述，由于治療與劑量限制的高度肝炎(尤魯單抗)或低臨床療效(埃托米魯單抗)有關(guān)，cd137激動(dòng)劑分子的臨床發(fā)展受到了阻礙。

13、本發(fā)明人認(rèn)識(shí)到，本領(lǐng)域需要表現(xiàn)出高活性但不與劑量限制性肝炎相關(guān)的cd137激動(dòng)劑分子。這樣的分子可以以該分子最優(yōu)的效力和功效的劑量施用于個(gè)體，并且可以例如作為免疫治療劑用于癌癥的治療，或在感染性疾病的治療中使用。

14、不希望被理論所束縛，認(rèn)為存在于肝臟中的t細(xì)胞可能具有被抗cd137激動(dòng)劑分子激活的潛力，從而導(dǎo)致肝臟炎癥。膿毒血癥/病毒感染后，cd8+t細(xì)胞可促進(jìn)肝臟炎癥和凋亡(wesche-soldato等人，2007)。小鼠中的抗cd137激動(dòng)劑抗體療法已顯示可導(dǎo)致cd137依賴性t細(xì)胞浸潤肝臟(dubrot?j等人，2010)。這些研究的結(jié)果加在一起表明，高活性的抗cd137激動(dòng)劑抗體(如尤魯單抗)可能導(dǎo)致活化的cd8+t細(xì)胞浸潤肝臟，從而導(dǎo)致肝臟炎癥。或者，用尤魯單抗治療觀察到的劑量限制性肝毒性可能是由于該抗體結(jié)合的特定表位。

15、本發(fā)明人進(jìn)行了廣泛的選擇和親和力成熟程序以分離一組抗原結(jié)合fc片段(在本文中也稱為“fcabs”)，其在其ch3結(jié)構(gòu)域中包含cd137結(jié)合位點(diǎn)，并且結(jié)合二聚cd137的親和力高于結(jié)合單體cd137的與。

16、如本文所述，“親和力”可以指抗體分子與其同源抗原之間的結(jié)合相互作用的強(qiáng)度，通過kd測量。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，其中抗體分子能夠與抗原形成多重結(jié)合相互作用(例如，其中抗體分子能夠與抗原二價(jià)結(jié)合并且任選地抗原是二聚體)，通過kd測得的親和力也可能受親合力影響，其中親合力是指抗體-抗原復(fù)合物的整體強(qiáng)度。

17、激活后，t細(xì)胞的cd137表達(dá)上調(diào)。不希望受理論的束縛，據(jù)認(rèn)為由于cd137在活化的t細(xì)胞上高表達(dá)，cd137在此類細(xì)胞表面上將以二聚體、三聚體和更高階多聚體的形式存在。相反，幼稚的免疫細(xì)胞，例如幼稚的t細(xì)胞，在其細(xì)胞表面表達(dá)的cd137水平低或可忽略，因此存在的任何cd137都可能是單體形式。因此，與例如幼稚的免疫細(xì)胞相反，預(yù)期結(jié)合二聚體cd137的親和力比結(jié)合單體cd137的親和力更高的fcabs將優(yōu)先結(jié)合活化的免疫細(xì)胞，例如活化的t細(xì)胞。

18、本發(fā)明的fcab也能夠結(jié)合二聚體食蟹猴cd137。這是有益的，因?yàn)樗试S在臨床前開發(fā)過程中對(duì)食蟹猴進(jìn)行毒理學(xué)和功效測試。考慮到用某些抗cd137抗體觀察到的肝臟炎癥，在抗體分子與cd137結(jié)合的情況下這是特別有利的。分離的兩個(gè)fcab?fs22-053-014和fs22-053-017也與小鼠cd137結(jié)合。這是有利的，因?yàn)樗沟迷谙蚴承泛锘蛉祟惤o藥之前在小鼠中測試相同的fcab。在正常情況下，需要一種與小鼠cd137結(jié)合的fcab。

19、本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，分離的抗cd137?fcab分子優(yōu)先結(jié)合二聚體而不是單體cd137，并且能夠親和力成熟，在它們的ch3結(jié)構(gòu)域的ab環(huán)中都包含ppy基序以及5個(gè)氨基酸的插入。在初始文庫篩選后分離的另一種抗cd137?fcab譜系不具有這些功能，并且不能使其親和力成熟，因此無法進(jìn)一步研究。不希望受理論的束縛，據(jù)認(rèn)為由于脯氨酸殘基的柔性有限，ppy基序的存在可通過形成更剛性或暴露的環(huán)結(jié)構(gòu)來促進(jìn)延伸的抗原結(jié)合區(qū)的形成。或者，ppy序列可以代表參與與cd137結(jié)合的特定保守基序，因?yàn)橐呀?jīng)證明富含脯氨酸的序列與例如sh3結(jié)構(gòu)域蛋白中的芳香族序列結(jié)合。此外，由于已經(jīng)在兩個(gè)分開的fcab譜系中獨(dú)立地選擇了ppy保守序列，因此對(duì)于cd137上的表位結(jié)合可能是重要的。此外，在分離的大多數(shù)fcab的ch3結(jié)構(gòu)域的ef環(huán)中存在保守的le或ld序列，這表明該氨基酸序列對(duì)于cd137結(jié)合也可能是重要的。

20、如上文背景部分所述，cd137配體與其受體cd137的初始連接引發(fā)了一系列事件，導(dǎo)致cd137三聚化，接著是受體聚集，激活了nfkb細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑，隨后激活了免疫細(xì)胞。為了使治療劑有效活化cd137，需要以模仿三聚體配體的方式將幾種cd137單體橋接在一起。

21、埃托米魯單抗是igg2分子，其激動(dòng)劑活性依賴于通過fcγ受體的交聯(lián)。尤魯單抗是具有組成性活性的igg4分子，因此它的活性不需要通過fcγ受體的交聯(lián)，盡管它的激動(dòng)劑活性在某些fcγ受體交聯(lián)時(shí)會(huì)增強(qiáng)。fcγ受體遍布整個(gè)人體。因此，埃托米魯單抗和尤魯單抗的免疫細(xì)胞激活活性不僅限于體內(nèi)的特定部位，還可能發(fā)生在肝臟或體內(nèi)其他部位。

22、本發(fā)明人已經(jīng)證明，本發(fā)明的fcab需要交聯(lián)以聚集和活化cd137。但是，應(yīng)注意，這不是結(jié)合cd137的fcab的固有特征。而是，在篩選程序中分離出的許多fcab都與cd137結(jié)合，但不需要交聯(lián)進(jìn)行cd137聚集和活化，或者在沒有交聯(lián)的情況下誘導(dǎo)有限的cd137聚集和活化。

23、如上所述，fcγ受體介導(dǎo)的交聯(lián)具有在整個(gè)人體中發(fā)現(xiàn)fcγ受體的缺點(diǎn)，因此cd137活化不限于特定部位。因此，本發(fā)明人將突變引入fcab的ch2結(jié)構(gòu)域中以減少或消除fcγ受體結(jié)合。因此，在沒有通過除fcγ受體以外的試劑的交聯(lián)的情況下，本發(fā)明的fcab不表現(xiàn)出cd137激動(dòng)劑活性，因此預(yù)期不會(huì)誘導(dǎo)肝炎癥。

24、本發(fā)明人已經(jīng)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的抗cd137?fcab可以用于制備結(jié)合除cd137外的第二抗原，例如腫瘤抗原的多特異性，例如雙特異性分子。優(yōu)選地，多特異性分子雙價(jià)地結(jié)合第二抗原，盡管預(yù)期在第二抗原是細(xì)胞結(jié)合的腫瘤抗原的情況下，抗原的單價(jià)結(jié)合也將足以交聯(lián)特異性結(jié)合成員/抗體分子并誘導(dǎo)cd137聚集和活化。具體地，本發(fā)明人已經(jīng)制備了包含本發(fā)明的抗cd137?fcab的抗體分子，該抗體分子通過其fab區(qū)雙價(jià)結(jié)合第二抗原。本發(fā)明人已經(jīng)表明，這種雙特異性抗體分子能夠在所述第二抗原的存在下條件性激活cd137，而無需例如通過常規(guī)抗體分子所需的fcγ受體介導(dǎo)的交聯(lián)來激活cd137。認(rèn)為抗體分子與第二抗原的結(jié)合引起抗體分子在所述抗原位點(diǎn)的交聯(lián)，這繼而導(dǎo)致t細(xì)胞表面上cd137的聚集和活化。因此，抗體分子的激動(dòng)活性取決于存在的第二抗原和cd137。換句話說，激動(dòng)活性取決于兩種抗原的存在。此外，認(rèn)為在第二抗原的存在下抗體的交聯(lián)有助于通過抗體分子的恒定域抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合的cd137的聚集。因此，在第二抗原是疾病抗原，例如腫瘤抗原的情況下，預(yù)期抗體分子能夠以疾病依賴的方式例如在腫瘤微環(huán)境中活化免疫細(xì)胞。例如，預(yù)期免疫細(xì)胞的這種靶向活化將有利于避免用尤魯單抗治療所見的肝臟炎癥。

25、本發(fā)明人還證明，包含本發(fā)明的抗cd137?fcab的雙特異性抗體分子能夠抑制體內(nèi)的腫瘤生長，其中被抗體分子結(jié)合的第二抗原是免疫細(xì)胞抗原、腫瘤抗原或在腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞上均表達(dá)的抗原。此外，與兩個(gè)單特異性抗體分子的組合相比，用雙特異性抗體分子觀察到更有效的腫瘤生長抑制，其中兩個(gè)抗體分子之一包含與雙特異性分子相同的恒定域，另一個(gè)抗體分子包含與雙特異性分子相同的可變域結(jié)合位點(diǎn)，表明當(dāng)兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)存在于同一分子中時(shí)，可以觀察到cd137的聚集和信號(hào)傳導(dǎo)增強(qiáng)，以及由此導(dǎo)致的t細(xì)胞活化和相應(yīng)的抗腫瘤作用。

26、包含本發(fā)明的抗cd137?fcab和對(duì)第二抗原具有特異性的fab區(qū)的抗體分子優(yōu)選地雙價(jià)結(jié)合cd137和第二抗原。這是有利的，因?yàn)轭A(yù)計(jì)兩個(gè)靶標(biāo)的二價(jià)結(jié)合將使表達(dá)cd137的t細(xì)胞與第二種抗原之間的橋接更穩(wěn)定，從而延長t細(xì)胞位于特定部位(例如腫瘤微環(huán)境)的時(shí)間，并且可以對(duì)疾病(例如腫瘤)發(fā)揮作用。這與絕大多數(shù)常規(guī)的雙特異性抗體形式不同，后者是異二聚體并通過一個(gè)fab臂單價(jià)結(jié)合每個(gè)靶抗原。預(yù)期這樣的單價(jià)相互作用不僅不穩(wěn)定，而且在許多情況下首先不足以在第一位置誘導(dǎo)tnf受體，例如cd137的聚集。

27、在一個(gè)替代的優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體分子包含能夠雙價(jià)結(jié)合cd137的本發(fā)明的抗cd137?fcab和第二抗原(例如單個(gè)fab結(jié)構(gòu)域)的特異性單價(jià)結(jié)合位點(diǎn)。單價(jià)結(jié)合位點(diǎn)可以結(jié)合例如腫瘤相關(guān)抗原。在此類分子的背景下，第二抗原的單價(jià)結(jié)合有望使抗體分子更緊密地堆積在細(xì)胞表面，從而增強(qiáng)cd137的聚集，從而導(dǎo)致t細(xì)胞活化。

28、包含本發(fā)明的抗cd137?fcab的抗體分子的另一個(gè)特征是cd137和第二抗原的兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)都包含在抗體結(jié)構(gòu)本身內(nèi)。尤其是，抗體分子不需要經(jīng)由接頭或其他手段將其他蛋白質(zhì)與抗體分子融合以產(chǎn)生與兩個(gè)靶標(biāo)均二價(jià)結(jié)合的分子。這具有許多優(yōu)點(diǎn)。具體地，可以使用與用于產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)抗體的方法相似的方法來產(chǎn)生抗體分子，因?yàn)樗鼈儾话魏晤~外的融合部分。由于接頭可能隨時(shí)間降解，導(dǎo)致抗體分子的異質(zhì)群體，因此該結(jié)構(gòu)還有望提高抗體的穩(wěn)定性。僅具有一種融合蛋白的群中的那些抗體可能無法像具有兩種融合蛋白的那些抗體一樣有效地誘導(dǎo)tnf受體(如cd137)的條件激動(dòng)。接頭的裂解/降解可以在向患者施用治療劑之前或之后進(jìn)行(例如，通過酶促裂解或患者的體內(nèi)ph)，從而導(dǎo)致其有效性降低，同時(shí)在患者體內(nèi)循環(huán)。由于抗體分子中沒有接頭，因此預(yù)期抗體分子在給藥前后都保留相同數(shù)目的結(jié)合位點(diǎn)。此外，從分子的免疫原性的觀點(diǎn)來看，抗體分子的結(jié)構(gòu)也是優(yōu)選的，因?yàn)楫?dāng)將分子施用于患者時(shí)，融合蛋白或接頭或兩者的引入可誘導(dǎo)免疫原性，導(dǎo)致治療效果降低。

29、本發(fā)明人進(jìn)一步證明，與其中cd137結(jié)合位點(diǎn)不是抗體結(jié)構(gòu)的一部分，但是提供了例如通過柔性接頭經(jīng)結(jié)合附接到例如抗體分子或其部分的分子相比，由本發(fā)明的fcab分子的剛性結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的cd137抗原結(jié)合位點(diǎn)的剛性定位和/或緊密接近，有利于誘導(dǎo)cd137聚集。

30、因此，本發(fā)明提供：

31、[1]一種特異性結(jié)合成員，其結(jié)合cd137并且包含位于該特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域中的cd137抗原結(jié)合位點(diǎn)，所述cd137抗原結(jié)合位點(diǎn)包括位于所述ch3結(jié)構(gòu)域的ab結(jié)構(gòu)環(huán)中的第一序列，其中所述序列包含序列ppy(seq?id?no：10)。

32、[2]根據(jù)[1]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包括在ab結(jié)構(gòu)環(huán)中的插入。

33、[3]根據(jù)[2]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述插入的長度為1至10個(gè)氨基酸。

34、[4]根據(jù)[3]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述插入的長度為4至6個(gè)氨基酸。

35、[5]根據(jù)[4]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述插入長度為5個(gè)氨基酸。

36、[6]根據(jù)[2]至[5]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述插入位于所述特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域的10和19位之間，其中氨基酸殘基編號(hào)根據(jù)immunogenetics(imgt)編號(hào)方案。

37、[7]根據(jù)[6]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述插入位于所述特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域的14和17位之間。

38、[8]根據(jù)[7]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述插入位于所述特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域的16和17位之間。

39、[9]根據(jù)[2]至[8]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述插入位于所述特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域的16.5至16.1位，其中氨基酸殘基編號(hào)根據(jù)immunogenetics(imgt)編號(hào)方案。

40、[10]根據(jù)[1]至[9]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中ppy序列位于ch3結(jié)構(gòu)域的15和17位之間，并且其中氨基酸殘基編號(hào)根據(jù)imgt編號(hào)方案。

41、[11]根據(jù)[1]至[10]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中ppy序列位于ch3結(jié)構(gòu)域的16和17位之間，并且其中氨基酸殘基編號(hào)根據(jù)imgt編號(hào)方案。

42、[12]根據(jù)[11]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述ppy序列位于ch3結(jié)構(gòu)域的16.3、16.2和16.1位。

43、[13]根據(jù)[1]至[12]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第一序列為以下特異性結(jié)合成員的第一序列：

44、(i)seq?id?no：138所示的fs22-172-003；

45、(ii)seq?id?no：129所示的fs22-172-002；

46、(iii)seq?id?no：147所示的fs22-172-004：

47、(iv)seq?id?no：120所示的fs22-172-001：

48、(v)seq?id?no：156所示的fs22-172-005。

49、(vi)seq?id?no：110所示的fs22-172-006；或

50、(vii)seq?id?no：110所示的fs22-172。

51、[14]根據(jù)[13]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第一序列是以下特異性結(jié)合成員的第一序列：

52、(i)seq?id?no：138所示的fs22-172-003；

53、(ii)seq?id?no：129所示的fs22-172-002；

54、(iii)seq?id?no：147所示的fs22-172-004：

55、(iv)seq?id?no：120所示的fs22-172-001：

56、(v)seq?id?no：156所示的fs22-172-005。或

57、(vi)seq?id?no：110所示的fs22-172-006。

58、[15]根據(jù)[14]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第一序列是以下特異性結(jié)合成員的第一序列：

59、(i)seq?id?no：138所示的fs22-172-003；

60、(ii)seq?id?no：129所示的fs22-172-002；或

61、(iii)seq?id?no：147所示的fs22-172-004。

62、[16]根據(jù)[15]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第一序列是seq?id?no：138所示的特異性結(jié)合成員fs22-172-003的第一序列。

63、[17]根據(jù)[10]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述ppy序列位于ch3結(jié)構(gòu)域的16、16.5和16.4位。

64、[18]根據(jù)[1]至[10]或[17]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第一序列為特異性結(jié)合成員fs22-053-008、fs22-053-009、fs22-053-011、fs22-053-017、fs22-053-014、fs22-053-010、fs22-053-012、fs22-053-013、fs22-053-015、fs22-053-016或fs22-053，優(yōu)選特異性結(jié)合成員fs22-053-008的第一序列，如seq?id?no：19所示。

65、[19]根據(jù)[13]至[16]或[18]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第一序列位于所述特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域的14和17位之間，其中氨基酸殘基編號(hào)根據(jù)imgt編號(hào)方案。

66、[20]根據(jù)[19]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第一序列位于所述特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域的15、16、16.5、16.4、16.3、16.2和16.1位。

67、[21]根據(jù)[1]至[20]中任一項(xiàng)的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員還包含位于ch3結(jié)構(gòu)域的ef結(jié)構(gòu)環(huán)中的第二序列。

68、[22]根據(jù)[21]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第二序列是特異性結(jié)合成員fs22-172-003、fs22-172-002、fs22-172-004、fs22-172-001、fs22-172-005、fs22-172-006或fs22-172，優(yōu)選特異性結(jié)合成員fs22-172-003的第二序列，如seq?id?no：111所示。

69、[23]根據(jù)[21]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第二序列是以下特異性結(jié)合成員的第二序列：

70、(i)seq?id?no：20所示的fs22-053-008；

71、(ii)seq?id?no：29所示的fs22-053-009；

72、(iii)seq?id?no：47所示的fs22-053-011；

73、(iv)seq?id?no：101所示的fs22-053-017：

74、(v)seq?id?no：74所示的fs22-053-014；

75、(vi)seq?id?no：38所示的fs22-053-010；

76、(vii)seq?id?no：56所示的fs22-053-012；

77、(viii)seq?id?no：66所示的fs22-053-013；

78、(ix)seq?id?no：83所示的fs22-053-015；

79、(x)seq?id?no：92所示的fs22-053-016；或

80、(xi)seq?id?no：174所示的fs22-053。

81、[24]根據(jù)[23]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第二序列是以下特異性結(jié)合成員的第二序列：

82、(i)seq?id?no：20所示的fs22-053-008；

83、(ii)seq?id?no：29所示的fs22-053-009；

84、(iii)seq?id?no：47所示的fs22-053-011；

85、(iv)seq?id?no：101所示的fs22-053-017：

86、(v)seq?id?no：74所示的fs22-053-014。

87、[25]根據(jù)[24]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第二序列是以下特異性結(jié)合成員的第二序列：

88、(i)seq?id?no：20所示的fs22-053-008；

89、(ii)seq?id?no：29所示的fs22-053-009；

90、(iii)seq?id?no：47所示的fs22-053-011；或

91、(iv)seq?id?no：101所示的fs22-053-017。

92、[26]根據(jù)[25]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第二序列是seq?id?no：20所示的特異性結(jié)合成員fs22-053-008的第二序列。

93、[27]根據(jù)[21]至[26]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第二序列位于所述特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域的92-98位，其中氨基酸殘基編號(hào)根據(jù)imgt編號(hào)方案。

94、[28]根據(jù)[1]至[27]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員還包含位于ch3結(jié)構(gòu)域的cd結(jié)構(gòu)環(huán)中的第三序列。

95、[29]根據(jù)[28]所述的特異性結(jié)合成員，其中第三序列位于特異性結(jié)合成員的43至78位，其中氨基酸殘基編號(hào)根據(jù)imgt編號(hào)方案。

96、[30]根據(jù)[28]至[29]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第三序列具有seq?id?no：2所示的序列。

97、[31]根據(jù)[1]至[30]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述ch3結(jié)構(gòu)域是人igg1?ch3結(jié)構(gòu)域。

98、[32]根據(jù)[1]至[16]，[19]至[22]和[27]至[31]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含以下特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域序列：

99、(i)seq?id?no：139所示的fs22-172-003；

100、(ii)seq?id?no：130所示的fs22-172-002；

101、(iii)seq?id?no：148所示的fs22-172-004；

102、(iv)seq?id?no：121所示的fs22-172-001；

103、(v)seq?id?no：157所示的fs22-172-005；

104、(vi)seq?id?no：165所示的fs22-172-006；或

105、(vii)seq?id?no：112所示的fs22-172。

106、[33]根據(jù)[32]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含以下特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域序列：

107、(i)seq?id?no：139所示的fs22-172-003；

108、(ii)seq?id?no：130所示的fs22-172-002；

109、(iii)seq?id?no：148所示的fs22-172-004；

110、(iv)seq?id?no：121所示的fs22-172-001；

111、(v)seq?id?no：157所示的fs22-172-005；或

112、(vi)seq?id?no：165所示的fs22-172-006。

113、[34]根據(jù)[33]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含以下特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域序列：

114、(i)seq?id?no：139所示的fs22-172-003；

115、(ii)seq?id?no：130所示的fs22-172-002；或

116、(iii)seq?id?no：148所示的fs22-172-004。

117、[35]根據(jù)[34]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含seq?id?no：139所示的特異性結(jié)合成員fs22-172-003的ch3結(jié)構(gòu)域序列。

118、[36]根據(jù)[1]至[10]，[17]至[18]，[19]至[21]和[23]至[31]中任一項(xiàng)的所述特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包括以下特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域序列：

119、(i)seq?id?no：21所示的fs22-053-008；

120、(ii)seq?id?no：30所示的fs22-053-009；

121、(iii)seq?id?no：48所示的fs22-053-011；

122、(iv)seq?id?no：102所示的fs22-053-017；

123、(v)seq?id?no：75所示的fs22-053-014；

124、(vi)seq?id?no：39所示的fs22-053-010；

125、(vii)seq?id?no：57所示的fs22-053-012；

126、(viii)seq?id?no：66所示的fs22-053-013；

127、(ix)seq?id?no：84所示的fs22-053-015；

128、(x)seq?id?no：93所示的fs22-053-016；或

129、(xi)seq?id?no：175所示的fs22-053。

130、[37]根據(jù)[36]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含以下特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域序列：

131、(i)seq?id?no：21所示的fs22-053-008；

132、(ii)seq?id?no：30所示的fs22-053-009；

133、(iii)seq?id?no：48所示的fs22-053-011；

134、(iv)seq?id?no：102所示的fs22-053-017；或

135、(v)seq?id?no：75所示的fs22-053-014。

136、[38]根據(jù)[37]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含以下特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域序列：

137、(i)seq?id?no：21所示的fs22-053-008；

138、(ii)seq?id?no：30所示的fs22-053-009；

139、(iii)seq?id?no：48所示的fs22-053-011；或

140、(iv)seq?id?no：102所示的fs22-053-017。

141、[39]根據(jù)[38]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含seq?id?no：21所示的特異性結(jié)合成員fs22-053-008的ch3結(jié)構(gòu)域序列。

142、[40]根據(jù)[37]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含seq?id?no：102所示的特異性結(jié)合成員fs22-053-017的ch3結(jié)構(gòu)域序列。

143、[41]根據(jù)[37]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含seq?id?no：75所示的特異性結(jié)合成員fs22-053-014的ch3結(jié)構(gòu)域序列。

144、[42]根據(jù)[1]至[41]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員還包含ch2結(jié)構(gòu)域，優(yōu)選人igg1的ch2結(jié)構(gòu)域。

145、[43]根據(jù)[1]至[42]中任一項(xiàng)的所述特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員是兩條相同的多肽鏈的二聚體，其各自包含ch2和ch3結(jié)構(gòu)域。

146、[44]根據(jù)[42]或[43]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述ch2結(jié)構(gòu)域具有seq?idno：6或5所示的序列。

147、[45]根據(jù)[42]至[44]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其在ch2結(jié)構(gòu)域的n末端還包含免疫球蛋白鉸鏈區(qū)或其部分，優(yōu)選人igg1鉸鏈區(qū)或其部分。

148、[46]根據(jù)[45]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述鉸鏈區(qū)具有seq?id?no：179所示的序列或其片段。

149、[47]根據(jù)[46]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述鉸鏈區(qū)具有seq?id?no：7所示的序列。

150、[48]根據(jù)[1]至[16]，[19]至[22]，[27]至[35]和[42]至[47]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含分別如seq?id?no：141、132、150、123、159、167和114所示的特異性結(jié)合成員fs22-172-003、fs22-172-002、fs22-172-004、fs22-172-001、fs22-172-005、fs22-172-006或fs22-172的序列。

151、[49]根據(jù)[48]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包括分別如seqid?no：141、132、150、123、159和167所示的特異性結(jié)合成員fs22-172-003、fs22-172-002、fs22-172-004、fs22-172-001、fs22-172-005或fs22-172-006的序列。

152、[50]根據(jù)[49]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含分別如seqid?no：141、132和150所示的特異性結(jié)合成員fs22-172-003、fs22-172-002或fs22-172-004的序列。

153、[51]根據(jù)[50]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包括seq?id?no：141所示的特異性結(jié)合成員fs22-172-003的序列。

154、[52]根據(jù)[1]至[10]，[17]至[18]，[19]至[21]，[23]至[31]和[36]至[47]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包括如seq?id?no：23、32、50、104、77、41、59、68、86、95和175所示的特異性結(jié)合成員fs22-053-008、fs22-053-009、fs22-053-011、fs22-053-017、fs22-053-014、fs22-053-010、fs22-053-012、fs22-053-013、fs22-053-015、fs22-053-016或fs22-053的序列。

155、[53]根據(jù)[52]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含分別如seqid?no：23、32、50、104和77所示的特異性結(jié)合成員fs22-053-008、fs22-053-009、fs22-053-011、fs22-053-017或fs22-053-014的序列。

156、[54]根據(jù)[53]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包含分別如seqid?no：23、32、50和103所示的特異性結(jié)合成員fs22-053-008、fs22-053-009、fs22-053-011或fs22-053-017的序列。

157、[55]根據(jù)[54]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員包括seq?id?no：23所示的特異性結(jié)合成員fs22-053-008的序列。

158、[56]根據(jù)[1]至[55]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員結(jié)合人cd137。

159、[57]根據(jù)[56]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述人cd137具有、包含如seq?id?no:181所示的序列或由其組成。

160、[58]根據(jù)[1]至[55]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員結(jié)合二聚體cd137的親和力比結(jié)合單體cd137的更高。

161、[59]根據(jù)[1]至[58]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員結(jié)合食蟹猴cd137。

162、[60]根據(jù)[59]所述的特異性結(jié)合成員或抗體分子，其中所述食蟹猴cd137具有、包含如seq?id?no:183所示的序列或由其組成。

163、[61]根據(jù)[1]至[60]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員還包含第二抗原結(jié)合位點(diǎn)。

164、[62]根據(jù)[61]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員是多特異性分子。

165、[63]根據(jù)[62]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員是雙特異性、三特異性或四特異性分子。

166、[64]根據(jù)[63]所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員是雙特異性分子。

167、[65]根據(jù)[61]至[64]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第二抗原結(jié)合位點(diǎn)是基于cdr的抗原結(jié)合位點(diǎn)。

168、[66]根據(jù)[65]所述的特異性結(jié)合成員，其中第二抗原結(jié)合位點(diǎn)包含重鏈可變域cdr1、cdr2和cdr3，以及輕鏈可變域cdr1、cdr2和cdr3。

169、[67]根據(jù)[61]至[66]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述第二抗原結(jié)合位點(diǎn)包含重鏈可變域和輕鏈可變域。

170、[68]根據(jù)[61]至[67]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員，其中所述特異性結(jié)合成員是抗體分子。

171、[69]根據(jù)[68]所述的抗體分子，其中所述抗體分子是人igg1分子。

172、[70]根據(jù)[65]至[69]中任一項(xiàng)所述的抗體分子，其中所述抗體分子的基于cdr的抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合選自下組的第二抗原：免疫細(xì)胞抗原，和疾病抗原。

173、[71]根據(jù)[70]所述的抗體分子，其中所述疾病抗原是腫瘤抗原或病原體抗原。

174、[72]根據(jù)[70]所述的抗體分子，其中所述免疫細(xì)胞抗原是免疫調(diào)節(jié)分子，例如pd-l1。

175、[73]根據(jù)[70]所述的抗體分子，其中所述免疫細(xì)胞抗原是腫瘤壞死因子受體超家族(tnfrsf)的成員。

176、[74]根據(jù)[71]所述的抗體分子，其中所述腫瘤抗原是腫瘤相關(guān)抗原(taa)。

177、[75]根據(jù)[71]或[74]所述的抗體分子，其中所述腫瘤抗原是癌細(xì)胞上的細(xì)胞表面抗原。

178、[76]根據(jù)[71]所述的抗體分子，其中所述腫瘤抗原是可溶性多聚體。

179、[77]根據(jù)[76]所述的抗體分子，其中可溶性多聚體至少是二聚體。

180、[78]根據(jù)[77]所述的抗體分子，其中可溶性多聚體至少是三聚體。

181、[79]根據(jù)[71]所述的抗體分子，其中所述病原體抗原是細(xì)菌或病毒抗原。

182、[80]根據(jù)[70]至[79]中任一項(xiàng)所述的抗體分子，其中所述抗體分子能夠在第二抗原存在下活化免疫細(xì)胞上存在的cd137。

183、[81]根據(jù)[70]至[80]中任一項(xiàng)所述的抗體分子，其中所述抗體分子與cd137和第二抗原的結(jié)合引起cd137在免疫細(xì)胞上的聚集。

184、[82]根據(jù)[80]或[81]所述的抗體分子，其中所述免疫細(xì)胞是t細(xì)胞。

185、[83]根據(jù)[1]至[82]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員或抗體分子，其中所述特異性結(jié)合成員或抗體分子已經(jīng)被修飾以減少或消除特異性結(jié)合成員或抗體分子的ch2結(jié)構(gòu)域與一個(gè)或多個(gè)fcγ受體的結(jié)合。

186、[84]根據(jù)[1]至[83]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員或抗體分子，其中所述特異性結(jié)合成員或抗體分子不激活fcγ受體。

187、[85]根據(jù)[83]或[84]所述的特異性結(jié)合成員或抗體分子，其中所述fcγ受體選自下組：fcγri、fcγriia、fcγri?ib和fcγriii。

188、[86]根據(jù)[1]至[85]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員或抗體分子，其中所述特異性結(jié)合成員或抗體分子與生物活性分子綴合。

189、[87]根據(jù)[1]至[85]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員或抗體分子，其中所述特異性結(jié)合成員或抗體分子綴合至可檢測標(biāo)記。

190、[88]一種核酸分子，其編碼[1]至[85]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員或抗體分子。

191、[89]根據(jù)[88]所述的核酸分子，其中所述核酸分子包括：

192、(i)分別如seq?id?no:22、31、49、103、76、40、58、67、85、94和176所示的特異性結(jié)合成員fs22-053-008、fs22-053-009、fs22-053-011、fs22-053-017、fs22-053-014、fs22-053-010、fs22-053-012、fs22-053-013、fs22-053-015、fs22-053-016或fs22-053的ch3結(jié)構(gòu)域核酸序列；或

193、(ii)分別如seq?id?no:140、131、149、122、158、166和113所示的特異性結(jié)合成員fs22-172-003、fs22-172-002、fs22-172-004、fs22-172-001、fs22-172-005、fs22-172-006或fs22-172的ch3結(jié)構(gòu)域核酸序列。

194、[90]根據(jù)[88]或[89]所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含以下核酸序列：特異性結(jié)合成員：

195、(i)分別如seq?id?no：24、33、51、105、78、42、60、69、87、96和177所示的fs22-053-008、fs22-053-009、fs22-053-011、fs22-053-017、fs22-053-014、fs22-053-010、fs22-053-012、fs22-053-013、fs22-053-015、fs22-053-016或fs22-053；或

196、(ii)分別如seq?id?no：142、133、151、124、160、168和115所示的fs22-172-003、fs22-172-002、fs22-172-004、fs22-172-001、fs22-172-005、fs22-172-006或fs22-172。

197、[91]根據(jù)[89]或[90]所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含以下特異性結(jié)合成員的ch3結(jié)構(gòu)域核酸序列或核酸序列：

198、(i)fs22-172-003；或

199、(ii)fs22-053-008。

200、[92]一種載體，其包含[88]至[91]中任一項(xiàng)所述的核酸。

201、[93]一種重組宿主細(xì)胞，其包含[88]至[91]中任一項(xiàng)所述的核酸或[92]所述的載體。

202、[94]一種產(chǎn)生根據(jù)[1]至[85]中任一項(xiàng)所述的產(chǎn)生特異性結(jié)合成員或抗體分子的方法，包括在產(chǎn)生特異性結(jié)合成員或抗體分子的條件下培養(yǎng)[93]所述的重組宿主細(xì)胞。

203、[95][94]所述的方法，其進(jìn)一步包括分離和/或純化所述特異性結(jié)合成員或抗體分子。

204、[96]一種藥物組合物，其包含根據(jù)[1]至[87]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員或抗體分子和藥學(xué)上可接受的賦形劑。

205、[97]根據(jù)[1]至[87]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員或抗體分子用于通過療法治療人或動(dòng)物體的方法中。

206、[98]一種治療個(gè)體疾病或病癥的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的根據(jù)[1]至[87]中任一項(xiàng)所述的特異性結(jié)合成員或抗體分子。

207、[99]根據(jù)[97]所述使用的特異性結(jié)合成員或抗體分子，或根據(jù)[98]所述的方法，其中所述治療是個(gè)體癌癥或感染性疾病的治療。

208、[10]根據(jù)[97]或[99]所述使用的特異性結(jié)合成員或抗體分子，或根據(jù)[98]或[99]所述的方法，其中所述治療方法包括將所述特異性結(jié)合成員或抗體分子與第二種治療劑組合施用于個(gè)體。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路