本發(fā)明涉及生物及食品，尤其涉及一種抗疲勞肽及其篩選方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、活性氧(ros)是標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞代謝的次生產(chǎn)物，也可能源自環(huán)境因素，如壓力、污染和工業(yè)化學(xué)品。過(guò)多的自由基可能導(dǎo)致氧化應(yīng)激，觸發(fā)疲勞等疾病。氧化環(huán)境可以改變身體的代謝，導(dǎo)致能量穩(wěn)態(tài)發(fā)生變化。細(xì)胞通過(guò)根據(jù)代謝需求調(diào)整三磷酸腺苷(atp)的產(chǎn)生來(lái)不斷維持細(xì)胞能量穩(wěn)態(tài)。線粒體的參與對(duì)滿足這種能量需求至關(guān)重要。除了作為真核細(xì)胞的生物引擎外，線粒體還是細(xì)胞器內(nèi)ros的主要產(chǎn)生和靶標(biāo)。過(guò)多的ros生成可以損傷線粒體dna(mtdna)和其他關(guān)鍵成分，破壞線粒體功能，并加劇線粒體產(chǎn)生ros，最終導(dǎo)致組織損傷和身體機(jī)能下降，引起疲勞。此外，氧化應(yīng)激誘導(dǎo)了重要線粒體通道的開(kāi)放，觸發(fā)與線粒體相關(guān)的凋亡途徑，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。減輕氧化應(yīng)激和線粒體功能障礙代表了緩解體內(nèi)抗氧化和抗疲勞的新療法。目前，許多合成抗疲勞劑由于具有藥物依賴性、細(xì)胞毒性等其他潛在的副作用而不能長(zhǎng)期使用。因此，尋找天然抗疲勞肽，尤其是食源性蛋白質(zhì)生物活性肽用以取代傳統(tǒng)抗疲勞劑已成為解決上述問(wèn)題的新策略。

2、鱸魚(yú)(lateolabrax?japonicus)是一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的海洋魚(yú)類，因其豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值而受到消費(fèi)者的青睞。利用鱸魚(yú)全魚(yú)開(kāi)發(fā)制備抗疲勞肽，不僅提高水產(chǎn)品資源的綜合利用度，符合綠色協(xié)調(diào)可持續(xù)發(fā)展的理念，而且為抗疲勞肽基功能性食品或藥物的開(kāi)發(fā)與利用奠定基礎(chǔ)，并為生物活性肽的應(yīng)用提供新的視角與啟示。目前，利用鱸魚(yú)全魚(yú)制備抗疲勞肽的工藝迄今為止尚未見(jiàn)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種抗疲勞肽及其篩選方法和應(yīng)用。

2、本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明一方面提供一種抗疲勞肽，所述抗疲勞肽的氨基酸序列為asp-asp-trp-glu-asn-trp-ala-lys。

4、本發(fā)明提出的一種抗疲勞肽，其具有良好的細(xì)胞dpph自由基清除能力(ic50為0.60mg/ml)和線粒體能量穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)作用，抗氧化和抗疲勞功效好。該抗疲勞肽能夠提高細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的活性，包括超氧化物歧化酶(sod)和過(guò)氧化氫酶(cat)，減少乳酸脫氫酶(ldh)的釋放，降低丙二醛(mda)的水平；改善線粒體網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的損傷并提高細(xì)胞atp的水平，對(duì)h2o2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷能起到保護(hù)作用。本發(fā)明開(kāi)發(fā)的抗疲勞肽的安全性和有效性好，克服了現(xiàn)有抗疲勞劑具有藥物依賴性、細(xì)胞毒性等缺點(diǎn)，可以廣泛應(yīng)用于食品、藥品和保健品等行業(yè)。

5、優(yōu)選的，所述抗疲勞肽的分子量為1063.19da。

6、本發(fā)明另一方面提供一種上述任意一項(xiàng)技術(shù)方案所述的抗疲勞肽的篩選方法，包括以下步驟：以鱸魚(yú)全魚(yú)為原料，對(duì)其進(jìn)行蛋白酶解和分離純化，收集最高自由基清除活性的組分，利用納升液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)序，再通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助篩選，得到抗疲勞肽。

7、本發(fā)明以鱸魚(yú)全魚(yú)為原料，進(jìn)行抗疲勞肽的酶解可控制備，具有簡(jiǎn)單高效，能對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行活性跟蹤從而達(dá)到定向酶切等優(yōu)點(diǎn)，有利于實(shí)現(xiàn)海洋蛋白的充分利用；同時(shí)，本發(fā)明通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助篩選進(jìn)行抗疲勞肽的篩選，具有操作簡(jiǎn)便、生產(chǎn)成本低、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)，有利于實(shí)現(xiàn)抗疲勞肽的規(guī)?；a(chǎn)和應(yīng)用。

8、優(yōu)選的，所述蛋白酶解的方法為：將鱸魚(yú)與超純水按一定的料液比混勻進(jìn)行溶液配制，加入木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解結(jié)束后，高溫滅酶，離心收集上清，得到鱸魚(yú)酶解液。

9、優(yōu)選的，所述料液比為1:7w/v；

10、所述酶解的條件如下：溶液的ph為7.0，酶解溫度為50℃，酶解時(shí)間為9h，酶底比為4.3％w/w。

11、優(yōu)選的，所述分離純化的方法為：采用sephadex?g-25凝膠柱層析對(duì)所述蛋白酶解得到的鱸魚(yú)酶解液進(jìn)行分離純化，洗脫液為去離子水，上樣量為5ml，流速為0.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm，收集分級(jí)組分，并測(cè)定各組分的dpph自由基清除活性，將最高dpph自由基清除活性的組分冷凍干燥。

12、優(yōu)選的，所述計(jì)算機(jī)輔助篩選的方法為：先通過(guò)peptide?ranker數(shù)據(jù)庫(kù)篩選活性>0.5的肽序列，再通過(guò)toxinpred數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步篩選無(wú)毒可食用、親水性>0的肽序列，得到抗疲勞肽。

13、本發(fā)明再一方面提供一種上述任意一項(xiàng)技術(shù)方案所述的抗疲勞肽或任意一項(xiàng)技術(shù)方案所述的抗疲勞肽的篩選方法得到的抗疲勞肽在制備抗疲勞的藥品、保健品或食品領(lǐng)域中的應(yīng)用。

技術(shù)特征：

1.一種抗疲勞肽，其特征在于，所述抗疲勞肽的氨基酸序列為asp-asp-trp-glu-asn-trp-ala-lys。

2.如權(quán)利要求1所述的抗疲勞肽，其特征在于，所述抗疲勞肽的分子量為1063.19da。

3.一種如權(quán)利要求1所述的抗疲勞肽的篩選方法，包括以下步驟：以鱸魚(yú)全魚(yú)為原料，對(duì)其進(jìn)行蛋白酶解和分離純化，收集最高dpph自由基清除活性的組分，利用納升液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)序，再通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助篩選，得到抗疲勞肽。

4.如權(quán)利要求3所述的抗疲勞肽的篩選方法，其特征在于，所述蛋白酶解的方法為：將鱸魚(yú)與超純水按一定的料液比混勻進(jìn)行溶液配制，加入木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解結(jié)束后，高溫滅酶，離心收集上清，得到鱸魚(yú)酶解液。

5.如權(quán)利要求4所述的抗疲勞肽的篩選方法，其特征在于，所述料液比為1:7w/v；

6.如權(quán)利要求3所述的抗疲勞肽的篩選方法，其特征在于，所述分離純化的方法為：采用sephadex?g-25凝膠柱層析對(duì)所述蛋白酶解得到的鱸魚(yú)酶解液進(jìn)行分離純化，洗脫液為去離子水，上樣量為5ml，流速為0.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm，收集分級(jí)組分，并測(cè)定各組分的dpph自由基清除活性，將最高dpph自由基清除活性的組分冷凍干燥。

7.如權(quán)利要求3所述的抗疲勞肽的篩選方法，其特征在于，所述計(jì)算機(jī)輔助篩選的方法為：先通過(guò)peptide?ranker數(shù)據(jù)庫(kù)篩選活性>0.5的肽序列，再通過(guò)toxinpred數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步篩選無(wú)毒可食用、親水性>0的肽序列，得到抗疲勞肽。

8.一種如權(quán)利要求1-2中任意一項(xiàng)所述的抗疲勞肽或如權(quán)利要求3-7中任意一項(xiàng)所述的抗疲勞肽的篩選方法得到的抗疲勞肽在制備抗疲勞的藥品、保健品或食品領(lǐng)域中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種抗疲勞肽，所述抗疲勞肽的氨基酸序列為Asp?Asp?Trp?Glu?Asn?Trp?Ala?Lys。本發(fā)明提出的一種抗疲勞肽，其具有良好的細(xì)胞DPPH自由基清除能力(IC<subgt;50</subgt;為0.60mg/mL)和線粒體能量穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)作用，抗氧化和抗疲勞功效好。該抗疲勞肽能夠提高細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的活性，包括超氧化物歧化酶(SOD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)，減少乳酸脫氫酶(LDH)的釋放，降低丙二醛(MDA)的水平；改善線粒體網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的損傷并提高細(xì)胞ATP的水平，對(duì)H<subgt;2</subgt;O<subgt;2</subgt;誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷能起到保護(hù)作用。本發(fā)明開(kāi)發(fā)的抗疲勞肽的安全性和有效性好，克服了現(xiàn)有抗疲勞劑具有藥物依賴性、細(xì)胞毒性等缺點(diǎn)，可以廣泛應(yīng)用于食品、藥品和保健品等行業(yè)。

技術(shù)研發(fā)人員：汪少蕓,蔡茜茜,陳旭,李晨,林書(shū)華,胡顏寓,田韓,羅維,吳曉平,岳鵬翔
受保護(hù)的技術(shù)使用者：福州大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10