本發(fā)明涉及靶向gpc3xcd28(cd28激動型)的完全人雙特異性抗體(如κλ體)和靶向gpc3xcd3的雙特異性抗體，并且涉及本發(fā)明的gpc3xcd3與gpc3xcd28的組合。當(dāng)表達(dá)gpc3的腫瘤細(xì)胞上的gpc3和t細(xì)胞上的cd28接合時，與gpc3xcd3單藥劑治療相比，本發(fā)明的組合治療能夠增強t細(xì)胞激活和殺腫瘤活性。本發(fā)明進(jìn)一步涉及在治療gpc3陽性惡性病時使用此類抗體的方法。

背景技術(shù)：

1、在過去的幾年中，開發(fā)了新的方法來刺激身體自身的免疫細(xì)胞以更好地攻擊和殺傷癌細(xì)胞。成功的癌癥免疫療法的實例是能夠阻斷所謂的免疫檢查點的單克隆抗體。目前批準(zhǔn)的免疫檢查點抑制劑(ici)阻斷ctla-4(例如，伊匹單抗(ipilimumab)，以商標(biāo)名yervoy銷售)、pd-1(例如，派姆單抗(pembrolizumab)，以商標(biāo)名keytruda和cemiplimab銷售，以商標(biāo)名libtayo銷售)和pd-l1(例如，阿特珠單抗(atezolizumab)，以商標(biāo)名tecentriq銷售)。ici可以在幾種但并非所有癌癥類型中誘導(dǎo)持久的抗腫瘤應(yīng)答，其中應(yīng)答局限于患者亞群。

2、其它經(jīng)批準(zhǔn)的癌癥免疫療法包含t細(xì)胞雙特異性抗體——通過t細(xì)胞上的cd3受體將t細(xì)胞與表達(dá)腫瘤相關(guān)抗原(taa)的靶細(xì)胞橋接。不同的策略是使用嵌合抗原受體(car)t細(xì)胞。盡管在使用t細(xì)胞雙特異性抗體或car?t細(xì)胞治療血液惡性病時觀察到非常好的抗腫瘤應(yīng)答，但迄今為止，這些方法在實體癌的背景下沒有顯著突破，使得許多癌癥患者沒有治療選擇。

3、因此，盡管這些免疫療法在一些癌癥類型中取得了成功，但很大一部分癌癥患者缺乏有效的治療選擇，這凸顯了需要新的治療。能夠通過靶向t細(xì)胞上的共刺激信號來激活免疫系統(tǒng)的分子的使用尚未得到充分探索，并且這可能為實體癌患者的新的治療選擇開辟道路。

4、需要用于靶向可用于治療實體癌的t細(xì)胞激活的組合物和方法。本文提供了解決此需求的方法和組合物。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本公開提供了一種雙特異性抗體，其包括：a.第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與cd3結(jié)合；其中所述第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括：i.第一重鏈可變區(qū)，所述第一重鏈可變區(qū)具有：包括seq?id?no:6的氨基酸序列的互補決定區(qū)1(cdrh1)；包括seq?id?no:7的氨基酸序列的互補決定區(qū)2(cdrh2)；以及包括seq?id?no:8的氨基酸序列的互補決定區(qū)3(cdrh3)；以及ii.第一輕鏈可變區(qū)，所述第一輕鏈可變區(qū)具有：包括seq?id?no:11的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:12的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:13的氨基酸序列的cdrl3；以及b.第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與gpc3結(jié)合，其中所述第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括：i.第二重鏈可變區(qū)，所述第二重鏈可變區(qū)具有：包括seq?idno:6的氨基酸序列的cdrh1；包括seq?id?no:7的氨基酸序列的cdrh2；以及包括seq?id?no:8的氨基酸序列的cdrh3；以及ii.第二輕鏈可變區(qū)，所述第二輕鏈可變區(qū)具有：1.包括seqid?no:16的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:17的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seqid?no:18的氨基酸序列的cdrl3；或2.包括seq?id?no:21的氨基酸序列的cdrl1；包括seqid?no:22的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:23的氨基酸序列的cdrl3。

2、在一些實施例中，第一重鏈可變區(qū)和第二重鏈可變區(qū)包括seq?id?no:9的氨基酸序列。在一些實施例中，第一重鏈和第二重鏈包括seq?id?no:10的氨基酸序列。在一些實施例中，第一輕鏈可變區(qū)包括seq?id?no:14的氨基酸序列。在一些實施例中，第一輕鏈包括seq?id?no:15的氨基酸序列。

3、在一些實施例中，對于第二輕鏈可變區(qū)，a.部分b.ii.1.包括seq?id?no:19的氨基酸序列；或b.部分b.ii.2.包括seq?id?no:24的氨基酸序列。

4、在一些實施例中，對于第二輕鏈，a.部分b.ii.1.包括seq?id?no:20的氨基酸序列；或b.部分b.ii.2.包括seq?id?no:25的氨基酸序列。

5、本公開提供了一種雙特異性抗體，其包括：a.第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與cd28結(jié)合；其中所述第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括：i.第一重鏈可變區(qū)，所述第一重鏈可變區(qū)具有：包括seq?id?no:1的氨基酸序列的cdrh1；包括seq?id?no:2的氨基酸序列的cdrh2；以及包括seq?id?no:3的氨基酸序列的cdrh3；以及ii.第一輕鏈可變區(qū)，所述第一輕鏈可變區(qū)具有：1.包括seq?id?no:41的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:42的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:43的氨基酸序列的cdrl3；或2.包括seq?id?no:46的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:47的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:48的氨基酸序列的cdrl3；或3.包括seq?id?no:51的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:52的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:53的氨基酸序列的cdrl3；以及b.第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合gpc3，其中所述第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括：i.第二重鏈可變區(qū)，所述第二重鏈可變區(qū)具有：包括seq?id?no:1的氨基酸序列的cdrh1；包括seq?idno:2的氨基酸序列的cdrh2；以及包括seq?id?no:3的氨基酸序列的cdrh3；以及ii.第二輕鏈可變區(qū)，所述第二輕鏈可變區(qū)具有：1.包括seq?id?no:26的氨基酸序列的cdrl1；包括seqid?no:27的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:28的氨基酸序列的cdrl3；或2.包括seq?id?no:31的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:32的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:33的氨基酸序列的cdrl3；或3.包括seq?id?no:36的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:37的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:38的氨基酸序列的cdrl3。

6、在一些實施例中，第一重鏈可變區(qū)和第二重鏈可變區(qū)包括seq?id?no:4的氨基酸序列。在一些實施例中，第一重鏈和第二重鏈包括seq?id?no:5的氨基酸序列。

7、在一些實施例中，對于第一輕鏈可變區(qū)：a.部分a.ii.1.包括seq?id?no:44的氨基酸序列；b.部分a.ii.2.包括seq?id?no:49的氨基酸序列；或c.部分a.ii.3.包括seq?idno:54的氨基酸序列。

8、在一些實施例中，對于第一輕鏈：a.部分a.ii.1.包括seq?id?no:45的氨基酸序列；b.部分a.ii.2.包括seq?id?no:50的氨基酸序列；或c.部分a.ii.3.包括seq?id?no:55的氨基酸序列。

9、在一些實施例中，對于第二輕鏈可變區(qū)：a.部分b.ii.1.包括seq?id?no:29的氨基酸序列；b.部分b.ii.2.包括seq?id?no:34的氨基酸序列；或c.部分b.ii.3.包括seq?idno:39的氨基酸序列。

10、在一些實施例中，對于第二輕鏈：a.部分b.ii.1.包括seq?id?no:30的氨基酸序列；b.部分b.ii.2.包括seq?id?no:35的氨基酸序列；或c.部分b.ii.3.包括seq?id?no:40的氨基酸序列。

11、在一些實施例中，第一輕鏈為κ，并且第二輕鏈為λ。在一些實施例中，第一輕鏈為λ，并且第二輕鏈為κ。

12、在一些實施例中，雙特異性抗體包括fc結(jié)構(gòu)域，所述fc結(jié)構(gòu)域包括一個或多個氨基酸取代，所述一個或多個氨基酸取代減少與激活fc受體的結(jié)合和/或降低效應(yīng)子功能。在一些實施例中，氨基酸取代包括l234a和l235a取代。在一些實施例中，氨基酸取代包括：i)l234a取代；ii)l235a取代；以及iii)p329a、p329g或p329r取代。

13、在一些實施例中，抗體具有igg同種型。在一些實施例中，抗體是人抗體。

14、本公開提供了一種組合物，其包括本公開的雙特異性抗體中的任一種。

15、本公開提供了一種組合物，其包括：第一雙特異性抗體，所述第一雙特異性抗體包括：a.第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與cd3結(jié)合；其中所述第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括：i.第一重鏈可變區(qū)，所述第一重鏈可變區(qū)具有：包括seq?id?no:6的氨基酸序列的互補決定區(qū)1(cdrh1)；包括seq?id?no:7的氨基酸序列的互補決定區(qū)2(cdrh2)；以及包括seq?id?no:8的氨基酸序列的互補決定區(qū)3(cdrh3)；以及ii.第一輕鏈可變區(qū)，所述第一輕鏈可變區(qū)具有：包括seq?id?no:11的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:12的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:13的氨基酸序列的cdrl3；以及b.第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與gpc3結(jié)合，其中所述第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括：i.第二重鏈可變區(qū)，所述第二重鏈可變區(qū)具有：包括seq?id?no:6的氨基酸序列的cdrh1；包括seq?id?no:7的氨基酸序列的cdrh2；以及包括seq?id?no:8的氨基酸序列的cdrh3；以及ii.第二輕鏈可變區(qū)，所述第二輕鏈可變區(qū)具有：1.包括seq?id?no:16的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?idno:17的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:18的氨基酸序列的cdrl3；或2.包括seqid?no:21的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:22的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seqid?no:23的氨基酸序列的cdrl3；以及第二雙特異性抗體，所述第二雙特異性抗體包括：a.第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與cd28結(jié)合；其中所述第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括：i.第一重鏈可變區(qū)，所述第一重鏈可變區(qū)具有：包括seq?id?no:1的氨基酸序列的cdrh1；包括seq?id?no:2的氨基酸序列的cdrh2；以及包括seq?id?no:3的氨基酸序列的cdrh3；以及ii.第一輕鏈可變區(qū)，所述第一輕鏈可變區(qū)具有：1.包括seq?id?no:41的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:42的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:43的氨基酸序列的cdrl3；或2.包括seq?id?no:46的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:47的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:48的氨基酸序列的cdrl3；或3.包括seq?id?no:51的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:52的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:53的氨基酸序列的cdrl3；以及b.第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合gpc3，其中所述第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括：i.第二重鏈可變區(qū)，所述第二重鏈可變區(qū)具有：包括seq?idno:1的氨基酸序列的cdrh1；包括seq?id?no:2的氨基酸序列的cdrh2；以及包括seq?id?no:3的氨基酸序列的cdrh3；以及ii.第二輕鏈可變區(qū)，所述第二輕鏈可變區(qū)具有：1.包括seqid?no:26的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:27的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seqid?no:28的氨基酸序列的cdrl3；或2.包括seq?id?no:31的氨基酸序列的cdrl1；包括seqid?no:32的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:33的氨基酸序列的cdrl3；或3.包括seq?id?no:36的氨基酸序列的cdrl1；包括seq?id?no:37的氨基酸序列的cdrl2；以及包括seq?id?no:38的氨基酸序列的cdrl3。

16、在一些實施例中，所述組合物使得腫瘤特異性t細(xì)胞激活成為可能。

17、本公開提供了一種減少癌細(xì)胞的增殖和/或殺傷癌細(xì)胞的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞與本公開的組合物中的任一種接觸。

18、本公開提供了一種治療受試者的癌癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用本公開的組合物中的任一種。在一些實施例中，癌癥是gpc3陽性的。

19、除非另有定義，否則本文所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語的含義與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解的含義相同。雖然在本發(fā)明的實踐中可以使用與本文描述的那些方法和材料類似或等效的方法和材料，但下文描述了合適的方法和材料。本文提及的所有出版物、專利申請、專利和其它參考文獻(xiàn)通過引用整體明確地并入。如有沖突，以本說明書(包含定義)為準(zhǔn)。另外，本文描述的材料、方法和實例僅是說明性的，而不旨在進(jìn)行限制。

20、根據(jù)以下詳細(xì)描述和權(quán)利要求，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點將變得顯而易見并涵蓋在其中。