本發(fā)明涉及有機(jī)污染土壤微生物修復(fù)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法。
背景技術(shù)：
苯系污染物（btex）是一類毒性、致癌性較大的有機(jī)污染物，在化工行業(yè)中常作為原輔材料或有機(jī)溶劑大量使用。由于其疏水性強，易在土壤中吸附富集，同時，由于其比重小、揮發(fā)性強，對人體健康和生態(tài)環(huán)境危害性較大。
針對由苯系污染物（btex）造成的污染土壤，現(xiàn)有技術(shù)中，常規(guī)的修復(fù)手段包括氣相抽提、熱脫附、水泥窯協(xié)同處置、化學(xué)氧化等物流化學(xué)措施，但上述處理方式均不同程度存在能耗大、易形成二次污染等不足；與之相比，生物修復(fù)技術(shù)，特別是微生物降解技術(shù)，則具有環(huán)境友好、無二次污染等特點。因此，生物修復(fù)技術(shù)成為了btex污染土壤修復(fù)技術(shù)的主要研究發(fā)展方向。
微生物降解技術(shù)的核心在于降解菌的篩選。傳統(tǒng)篩菌方式多為以污染物作為唯一碳源進(jìn)行培養(yǎng)篩選，雖針對性強，但工作量大、時間長、篩選效率不高。通過查閱文獻(xiàn)可知，漆酶為一種對苯系物、多環(huán)芳烴具有良好降解轉(zhuǎn)化效果的多酚氧化酶，具有漆酶分泌能力的微生物對土壤中btex能起到一定修復(fù)效果?；谏鲜鲫愂觯景l(fā)明提出了一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點，而提出的一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法。
一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法，包括以下步驟：
包括初篩和復(fù)篩兩個階段，并對培養(yǎng)因子進(jìn)行優(yōu)化后獲取具有高效降解特性的菌株；
包括以下步驟：
s1、菌源的采集：選取長期受苯系物污染的區(qū)域土壤作為降解菌篩選的菌源；
s2、取步驟s1中選取的降解菌篩選的菌源土壤加入盛有無菌水的錐形瓶中，以170～250rpm的振蕩頻率，振蕩1～3h后靜置；
s3、取步驟s2中錐形瓶內(nèi)靜置后的上清液，涂布至初篩培養(yǎng)基平板上，在25～30℃的條件下，培養(yǎng)44～52h，得鐵紅色氧化圈菌落；
s4、利用接種環(huán)挑取初篩培養(yǎng)基平板上的鐵紅色氧化圈菌落至液體培養(yǎng)基中進(jìn)行富集培養(yǎng)，在25～30℃的條件下，以110～180rpm的振蕩頻率，振蕩44～52h，得培養(yǎng)液；
s5、取步驟s4中所得的培養(yǎng)液，涂布至復(fù)篩培養(yǎng)基平板上，在25～30℃的條件下，培養(yǎng)20～28h，得透明暈圈菌落；
s6、利用接種環(huán)挑取復(fù)篩培養(yǎng)基平板上的透明暈圈菌落進(jìn)行劃線純化，直至得到形態(tài)單一的純化菌落；
s7、將步驟s6中純化后的菌落接種至菌種保藏培養(yǎng)基斜面上，在25～30℃的條件下，培養(yǎng)20～28h后，保存于2～6℃的冰箱中，備用。
優(yōu)選地，所述步驟s3中的初篩培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸20～30min，過濾取濾液，濾渣棄用；
濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min。
優(yōu)選地，所述步驟s4中的液體培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸20～30min，過濾取濾液，濾渣棄用；
濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min。
優(yōu)選地，所述步驟s5中的復(fù)篩培養(yǎng)基為：苯0.2g，nacl10g，kh2po41g，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，cacl20.2g，(nh4)2so41g，微量元素溶液1ml，蒸餾水1000ml，瓊脂20g，ph7.2；
在參數(shù)為0.1mpa、121℃狀態(tài)下，高壓滅菌20min；
其中，所述微量元素溶液為由以下成分組成：na2moo41g，znso4·5h2o28g，cuso4·5h2o2g，mnso4·5h2o4g，h3bo44g，coso4·7h2o4.7g，feso410g，ph7.2；將上述成分定容至1l。
優(yōu)選地，所述步驟s7中的菌種保藏培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸20～30min，過濾取濾液，濾渣棄用；
濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min。
本發(fā)明提出的一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法，以長期污染土壤為菌源，利用漆酶可將2-甲氧基酚氧化為鐵紅色物質(zhì)的特性，在培養(yǎng)基中加入一定量的2-甲氧基酚作為篩選培養(yǎng)基進(jìn)行快速篩選，從而獲取具有產(chǎn)漆酶活性的微生物菌株；再將獲得的菌株接種至以btex為單一碳源的無機(jī)培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)篩，獲得能以btex為唯一碳源生長，且具有修復(fù)能力的高效降解菌，其篩選效率高，工作量小，所得降解菌針對性強，對土壤中苯系污染物具有良好的降解去除效果，用于由苯系污染物btex造成的污染土壤的修復(fù)，具有修復(fù)時間短，修復(fù)效率高，修復(fù)成本低，環(huán)境友好、無污染等優(yōu)點，值得推廣。
具體實施方式
本發(fā)明提供一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法，包括以下步驟：
s1、菌源的采集：選取長期受苯系物污染的區(qū)域土壤作為降解菌篩選的菌源；
s2、取步驟s1中選取的降解菌篩選的菌源土壤加入盛有無菌水的錐形瓶中，以170～250rpm的振蕩頻率，振蕩1～3h后靜置；
s3、取步驟s2中錐形瓶內(nèi)靜置后的上清液，涂布至初篩培養(yǎng)基平板上，在25～30℃的條件下，培養(yǎng)44～52h，得鐵紅色氧化圈菌落；
s4、利用接種環(huán)挑取初篩培養(yǎng)基平板上的鐵紅色氧化圈菌落至液體培養(yǎng)基中進(jìn)行富集培養(yǎng)，在25～30℃的條件下，以110～180rpm的振蕩頻率，振蕩44～52h，得培養(yǎng)液；
s5、取步驟s4中所得的培養(yǎng)液，涂布至復(fù)篩培養(yǎng)基平板上，在25～30℃的條件下，培養(yǎng)20～28h，得透明暈圈菌落；
s6、利用接種環(huán)挑取復(fù)篩培養(yǎng)基平板上的透明暈圈菌落進(jìn)行劃線純化，直至得到形態(tài)單一的純化菌落；
s7、將步驟s6中純化后的菌落接種至菌種保藏培養(yǎng)基斜面上，在25～30℃的條件下，培養(yǎng)20～28h后，保存于2～6℃的冰箱中，備用。
優(yōu)選地，所述步驟s3中的初篩培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸20～30min，過濾取濾液，濾渣棄用；
濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min。
優(yōu)選地，所述步驟s4中的液體培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸20～30min，過濾取濾液，濾渣棄用；
濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min。
優(yōu)選地，所述步驟s5中的復(fù)篩培養(yǎng)基為：苯0.2g，nacl10g，kh2po41g，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，cacl20.2g，(nh4)2so41g，微量元素溶液1ml，蒸餾水1000ml，瓊脂20g，ph7.2；
在參數(shù)為0.1mpa、121℃狀態(tài)下，高壓滅菌20min；
其中，所述微量元素溶液為由以下成分組成：na2moo41g，znso4·5h2o28g，cuso4·5h2o2g，mnso4·5h2o4g，h3bo44g，coso4·7h2o4.7g，feso410g，ph7.2；將上述成分定容至1l。
優(yōu)選地，所述菌種保藏培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸20～30min，過濾取濾液，濾渣棄用；
濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min。
可見，本發(fā)明提出的一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法，以長期污染土壤為菌源，利用漆酶可將2-甲氧基酚氧化為鐵紅色物質(zhì)的特性，在培養(yǎng)基中加入一定量的2-甲氧基酚作為篩選培養(yǎng)基進(jìn)行快速篩選，從而獲取具有產(chǎn)漆酶活性的微生物菌株；再將獲得的菌株接種至以btex為單一碳源的無機(jī)培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)篩，獲得能以btex為唯一碳源生長，且具有修復(fù)能力的高效降解菌，其篩選效率高，工作量小，所得降解菌針對性強，對土壤中苯系污染物具有良好的降解去除效果，用于由苯系污染物btex造成的污染土壤的修復(fù)，具有修復(fù)時間短，修復(fù)效率高，修復(fù)成本低，環(huán)境友好、無污染等優(yōu)點，值得推廣。
本發(fā)明通過具體實施方式對進(jìn)行詳細(xì)說明：
本發(fā)明一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法，包括以下步驟：
s1、菌源的采集：選取長期受苯系物污染的區(qū)域土壤作為降解菌篩選的菌源；
s2、取步驟s1中選取的降解菌篩選的菌源土壤加入盛有無菌水的錐形瓶中，以170～250rpm的振蕩頻率，振蕩1～3h后靜置；
s3、取步驟s2中錐形瓶內(nèi)靜置后的上清液，涂布至初篩培養(yǎng)基平板上，在25～30℃的條件下，培養(yǎng)44～52h，得鐵紅色氧化圈菌落；
其中，初篩培養(yǎng)基是200g馬鈴薯加水煮沸20～30min，過濾取濾液，濾渣棄用；
濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min；
s4、利用接種環(huán)挑取初篩培養(yǎng)基平板上的鐵紅色氧化圈菌落至液體培養(yǎng)基中進(jìn)行富集培養(yǎng)，在25～30℃的條件下，以110～180rpm的振蕩頻率，振蕩44～52h，得培養(yǎng)液；
初篩培養(yǎng)基是200g馬鈴薯加水煮沸20～30min，過濾取濾液，濾渣棄用；
濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min。
s5、取步驟s4中所得的培養(yǎng)液，涂布至復(fù)篩培養(yǎng)基平板上，在25～30℃的條件下，培養(yǎng)20～28h，得透明暈圈菌落；
復(fù)篩培養(yǎng)基為：苯0.2g，nacl10g，kh2po41g，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，cacl20.2g，(nh4)2so41g，微量元素溶液1ml，蒸餾水1000ml，瓊脂20g，ph7.2；
在參數(shù)為0.1mpa、121℃狀態(tài)下，高壓滅菌20min；
其中，所述微量元素溶液為由以下成分組成：na2moo41g，znso4·5h2o28g，cuso4·5h2o2g，mnso4·5h2o4g，h3bo44g，coso4·7h2o4.7g，feso410g，ph7.2；將上述成分定容至1l；
s6、利用接種環(huán)挑取復(fù)篩培養(yǎng)基平板上的透明暈圈菌落進(jìn)行劃線純化，直至得到形態(tài)單一的純化菌落；
s7、將步驟s6中純化后的菌落接種至菌種保藏培養(yǎng)基斜面上，在25～30℃的條件下，培養(yǎng)20～28h后，保存于2～6℃的冰箱中，備用；
本步驟s7所述菌種保藏培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸20～30min，過濾取濾液，濾渣棄用；
濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min。
本發(fā)明提出的一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法，包括初篩和復(fù)篩兩個階段，并對培養(yǎng)因子進(jìn)行優(yōu)化后獲取具有高效降解特性的菌株；其中，初篩是指步驟s1-s4，復(fù)篩是只步驟s5-s7。
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步解說：
實施例一
本發(fā)明提出的一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法，包括初篩和復(fù)篩兩個階段，并對培養(yǎng)因子進(jìn)行優(yōu)化后獲取具有高效降解特性的菌株；
具體操作，包括以下步驟：
s1、菌源的采集：取自某農(nóng)化廠搬遷后長期閑置用地內(nèi)，經(jīng)前期調(diào)查發(fā)現(xiàn)該場地內(nèi)部分區(qū)域土壤中存在較嚴(yán)重的苯系物（苯、甲苯、二甲苯）污染，該區(qū)域具有30多年生產(chǎn)歷史，廠區(qū)搬遷后空置近10年，選擇本區(qū)域內(nèi)0.2m深度土壤作為苯系污染物降解菌篩選菌源，進(jìn)行多點采樣采集若干供篩用土，單一點位取土樣1.5kg左右；
s2、將步驟s1中取得的土壤樣品風(fēng)干、破碎、除雜、混勻、研磨后過5目篩，取供篩土壤10g加入盛有100ml無菌水的錐形瓶中，置于往復(fù)振蕩機(jī)上,以170rpm的振蕩頻率，振蕩1h后靜置0.5h；
s3、取步驟s2中錐形瓶內(nèi)的上清液0.5ml，均勻涂布至初篩培養(yǎng)基平板上，在25℃的條件下，培養(yǎng)44h，得鐵紅色氧化圈菌落，其中，初篩培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸25min，過濾取濾液，濾渣棄用；濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min；
s4、利用接種環(huán)挑取初篩培養(yǎng)基平板上的鐵紅色氧化圈菌落至液體培養(yǎng)基中進(jìn)行富集培養(yǎng)，在25℃的條件下，以110rpm的振蕩頻率，振蕩44h，得培養(yǎng)液，其中，液體培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸25min，過濾取濾液，濾渣棄用；濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min；
s5、取步驟s4中所得的培養(yǎng)液0.5ml，均勻涂布至復(fù)篩培養(yǎng)基平板上，在25℃的條件下，培養(yǎng)20h，得透明暈圈菌落，其中，復(fù)篩培養(yǎng)基為：苯0.2g，nacl10g，kh2po41g，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，cacl20.2g，(nh4)2so41g，微量元素溶液1ml，蒸餾水1000ml，瓊脂20g，ph7.2；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min；其中微量元素溶液為na2moo41g，znso4·5h2o28g，cuso4·5h2o2g，mnso4·5h2o4g，h3bo44g，coso4·7h2o4.7g，feso410g，ph7.2；
s6、利用接種環(huán)挑取復(fù)篩培養(yǎng)基平板上的透明暈圈菌落進(jìn)行劃線純化，直至得到形態(tài)單一的純化菌落；
s7、將步驟s6中純化后的菌落接種至菌種保藏培養(yǎng)基斜面上，在25℃的條件下，培養(yǎng)20h后，保存于2℃的冰箱中，備用，其中，菌種保藏培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸25min，過濾取濾液，濾渣棄用；濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min。
實施例二
本發(fā)明提出的一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法，包括初篩和復(fù)篩兩個階段，并對培養(yǎng)因子進(jìn)行優(yōu)化后獲取具有高效降解特性的菌株；
具體操作，包括以下步驟：
s1、菌源的采集：取自某農(nóng)化廠搬遷后長期閑置用地內(nèi)，經(jīng)前期調(diào)查發(fā)現(xiàn)該場地內(nèi)部分區(qū)域土壤中存在較嚴(yán)重的苯系物（苯、甲苯、二甲苯）污染，該區(qū)域具有30多年生產(chǎn)歷史，廠區(qū)搬遷后空置近10年，選擇本區(qū)域內(nèi)0.3m深度土壤作為苯系污染物降解菌篩選菌源，進(jìn)行多點采樣采集若干供篩用土，單一點位取土樣1.5kg左右；
s2、將步驟s1中取得的土壤樣品風(fēng)干、破碎、除雜、混勻、研磨后過5目篩，取供篩土壤10g加入盛有100ml無菌水的錐形瓶中，置于往復(fù)振蕩機(jī)上,以250rpm的振蕩頻率，振蕩3h后靜置0.5h；
s3、取步驟s2中錐形瓶內(nèi)的上清液0.5ml，均勻涂布至初篩培養(yǎng)基平板上，在30℃的條件下，培養(yǎng)52h，得鐵紅色氧化圈菌落，其中，初篩培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸25min，過濾取濾液，濾渣棄用；濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min；
s4、利用接種環(huán)挑取初篩培養(yǎng)基平板上的鐵紅色氧化圈菌落至液體培養(yǎng)基中進(jìn)行富集培養(yǎng)，在30℃的條件下，以180rpm的振蕩頻率，振蕩52h，得培養(yǎng)液，其中，液體培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸25min，過濾取濾液，濾渣棄用；濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min；
s5、取步驟s4中所得的培養(yǎng)液0.5ml，均勻涂布至復(fù)篩培養(yǎng)基平板上，在30℃的條件下，培養(yǎng)28h，得透明暈圈菌落，其中，復(fù)篩培養(yǎng)基為：苯0.2g，nacl10g，kh2po41g，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，cacl20.2g，(nh4)2so41g，微量元素溶液1ml，蒸餾水1000ml，瓊脂20g，ph7.2；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min；其中微量元素溶液為na2moo41g，znso4·5h2o28g，cuso4·5h2o2g，mnso4·5h2o4g，h3bo44g，coso4·7h2o4.7g，feso410g，ph7.2；
s6、利用接種環(huán)挑取復(fù)篩培養(yǎng)基平板上的透明暈圈菌落進(jìn)行劃線純化，直至得到形態(tài)單一的純化菌落；
s7、將步驟s6中純化后的菌落接種至菌種保藏培養(yǎng)基斜面上，在30℃的條件下，培養(yǎng)28h后，保存于6℃的冰箱中，備用，其中，菌種保藏培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸25min，過濾取濾液，濾渣棄用；濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min。
實施例三
本發(fā)明提出的一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法，包括初篩和復(fù)篩兩個階段，并對培養(yǎng)因子進(jìn)行優(yōu)化后獲取具有高效降解特性的菌株；
具體操作，包括以下步驟：
s1、菌源的采集：取自某農(nóng)化廠搬遷后長期閑置用地內(nèi)，經(jīng)前期調(diào)查發(fā)現(xiàn)該場地內(nèi)部分區(qū)域土壤中存在較嚴(yán)重的苯系物（苯、甲苯、二甲苯）污染，該區(qū)域具有30多年生產(chǎn)歷史，廠區(qū)搬遷后空置近10年，選擇本區(qū)域內(nèi)0.25m深度土壤作為苯系污染物降解菌篩選菌源，進(jìn)行多點采樣采集若干供篩用土，單一點位取土樣1.5kg左右；
s2、將步驟s1中取得的土壤樣品風(fēng)干、破碎、除雜、混勻、研磨后過5目篩，取供篩土壤10g加入盛有100ml無菌水的錐形瓶中，置于往復(fù)振蕩機(jī)上,以210rpm的振蕩頻率，振蕩2h后靜置0.5h；
s3、取步驟s2中錐形瓶內(nèi)的上清液0.5ml，均勻涂布至初篩培養(yǎng)基平板上，在28℃的條件下，培養(yǎng)48h，得鐵紅色氧化圈菌落，其中，初篩培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸25min，過濾取濾液，濾渣棄用；濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min；
s4、利用接種環(huán)挑取初篩培養(yǎng)基平板上的鐵紅色氧化圈菌落至液體培養(yǎng)基中進(jìn)行富集培養(yǎng)，在28℃的條件下，以140rpm的振蕩頻率，振蕩48h，得培養(yǎng)液，其中，液體培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸25min，過濾取濾液，濾渣棄用；濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，2-甲氧基酚0.1ml，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min；
s5、取步驟s4中所得的培養(yǎng)液0.5ml，均勻涂布至復(fù)篩培養(yǎng)基平板上，在28℃的條件下，培養(yǎng)24h，得透明暈圈菌落，其中，復(fù)篩培養(yǎng)基為：苯0.2g，nacl10g，kh2po41g，k2hpo43g，mgso4·7h2o1.5g，cacl20.2g，(nh4)2so41g，微量元素溶液1ml，蒸餾水1000ml，瓊脂20g，ph7.2；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min；其中微量元素溶液為na2moo41g，znso4·5h2o28g，cuso4·5h2o2g，mnso4·5h2o4g，h3bo44g，coso4·7h2o4.7g，feso410g，ph7.2；
s6、利用接種環(huán)挑取復(fù)篩培養(yǎng)基平板上的透明暈圈菌落進(jìn)行劃線純化，直至得到形態(tài)單一的純化菌落；
s7、將步驟s6中純化后的菌落接種至菌種保藏培養(yǎng)基斜面上，在28℃的條件下，培養(yǎng)24h后，保存于4℃的冰箱中，備用，其中，菌種保藏培養(yǎng)基為：200g馬鈴薯加水煮沸25min，過濾取濾液，濾渣棄用；濾液加水布置1000ml，加蔗糖20g，瓊脂20g，ph自然；0.1mpa，121℃，高壓滅菌20min。
將本發(fā)明實施例一中篩選獲得的若干株降解菌株分別接種至液體培養(yǎng)基中，富集培養(yǎng)至光密度（od600）達(dá)到0.8時，取5ml菌株培養(yǎng)液加入100g污染土壤中拌勻；維持土壤含水率25～30%的條件下培養(yǎng)30d后，測得土壤中苯系污染物的去除率達(dá)42～51%。
由此可知：采用本發(fā)明提出的一種苯系污染物btex降解菌的篩選方法篩選的降解菌對土壤中苯系污染物具有良好的降解去除效果。
以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。