本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地，涉及用于治療牙痛的紅茶菌代謝產(chǎn)物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：紅茶菌雖然在我國(guó)有悠久的歷史，但對(duì)它的科學(xué)研究卻起步較晚。我國(guó)著名微生物學(xué)家方心芳先生于1951年《黃海》雜志第12卷第5期刊登了《海寶是什么》一文，這是我國(guó)關(guān)于紅茶菌的首篇科學(xué)論文。文中認(rèn)為紅茶菌的微生物種類主要是醋酸菌和酵母，同時(shí)指出紅茶菌中的醋酸菌不只一種，但以膜醋菌為主。20世紀(jì)70年代末期到80年代初期，紅茶菌飲料在我國(guó)非常流行，一些介紹紅茶菌效果及制作方法的文章大量涌現(xiàn)。從20世紀(jì)初期到中期，一些醫(yī)生和學(xué)者紛紛報(bào)道了紅茶菌在治療各種疾病中的效果和作用。從20世紀(jì)中期開始一直到現(xiàn)在，有關(guān)紅茶菌的微生物組成及相互作用、發(fā)酵條件、菌液成分、作用機(jī)理等方面的研究陸續(xù)有文獻(xiàn)報(bào)道。紅茶菌菌種的類型及菌種間的相互關(guān)系用于發(fā)酵培養(yǎng)紅茶菌的菌種主要是醋酸菌和酵母菌，有的紅茶菌有少量乳酸菌[主要是保加利亞乳桿菌(lactobacteriumbulagricum)]。到目前為止，人們從各種紅茶菌中分離到的醋酸菌有：木醋桿菌(acetobacterxylinum)、擬木醋桿菌(acetobacterxylinoides)、葡萄糖酸桿菌(bacteriumgluconicum)、產(chǎn)酮醋桿菌(acetobacterketogenum)、弱氧化醋酸菌(acetobactersuboxydans)、葡萄糖醋酸菌(gluconobacterliquefaciens)、醋化醋桿菌(acetobacteraceti)和巴氏醋桿菌(acetobacterpasteurianus)，其中最主要的是木醋桿菌。酵母菌有釀酒酵母(saccharomycescerevisiae)、不顯酵母(saccharomycesinconspicus)、路德類酵母(saccharomycodesludwigii)、粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)、熱帶假絲酵母(candidatropicans)、克魯斯假絲酵母(candidacrusei)、漢遜德巴利酵母(debaryomyceshansenii)、酒香酵母(brettanyomyces)、克勒克酵母(kloeckera)、拜耳接合酵母(zygosaccharomycesbailii)等。發(fā)酵紅茶菌的菌種是由上述的一種或多種醋酸菌和上述的一種或多種酵母菌組成，有的還有乳酸菌。不同的菌種組成，其菌液中代謝產(chǎn)物的種類和數(shù)量也會(huì)有所不同。酵母菌和醋酸菌在紅茶菌中是互惠互利的共生關(guān)系。在發(fā)酵開始階段，由于醋酸菌不能直接利用蔗糖或利用蔗糖的速度很慢，由酵母菌將蔗糖降解為葡萄糖和果糖并進(jìn)一步發(fā)酵產(chǎn)生乙醇，醋酸菌則在培養(yǎng)液中有了葡萄糖、果糖和乙醇之后開始大量生長(zhǎng)繁殖，將葡萄糖和果糖氧化產(chǎn)生葡萄糖酸、乙酸等代謝產(chǎn)物，并將酵母產(chǎn)生的乙醇氧化生成乙酸。有資料表明，酵母菌產(chǎn)生的乙醇能刺激醋酸菌的生長(zhǎng)，產(chǎn)生更多的纖維素膜和乙酸，而醋酸菌產(chǎn)生的乙酸又會(huì)刺激酵母菌產(chǎn)生乙醇，而乙酸、乙醇的存在可保護(hù)醋酸菌和酵母菌，使它們免受其它微生物的侵染。一些學(xué)者對(duì)紅茶菌菌液中所含成分進(jìn)行了分析，由于所采用的菌種、培養(yǎng)條件、分析方法、分析的側(cè)重點(diǎn)等方面都不盡相同，因此不同的資料其結(jié)果也不同。德國(guó)的güntherw.frank(1991)認(rèn)為紅茶菌中含有葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、醋酸、酒精、乳酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、葉酸、地衣酸、vc和多種b族維生素等[14]。c.-h.liu等人(1995)對(duì)來自臺(tái)灣的兩種紅茶菌用hplc進(jìn)行分析，顯示該紅茶菌中含有甘油、乙酸和乙醇。美國(guó)的michaelr.roussin(1996)報(bào)道了用hplc/ms/pdad(高效液相色譜/質(zhì)譜/光電掃描)方法對(duì)來自美國(guó)和世界其他地方的19個(gè)紅茶菌試樣進(jìn)行了化學(xué)成分分析，結(jié)果沒有找到以前幾乎是公認(rèn)的功能因子-葡萄糖醛酸，而且各種維生素的含量很少，不過檢出了許多前人沒有檢出的物質(zhì)。他們從這19種紅茶菌中檢出了40多種化學(xué)物質(zhì)。而這些物質(zhì)進(jìn)入人體后如何起作用還需進(jìn)一步的科學(xué)研究。紅茶菌健身作用的機(jī)理是非常復(fù)雜的，到目前為止，還沒有完全搞清楚，需要進(jìn)一步深入研究。同時(shí)，還應(yīng)加強(qiáng)它的應(yīng)用研究，使之更充分地為人類的健康事業(yè)服務(wù)。目前，紅茶菌的培養(yǎng)條件和菌種的要求都非常嚴(yán)格，也限制了紅茶菌的大量培養(yǎng)及其應(yīng)用的進(jìn)一步開展，因此，提供一種光譜性的紅茶菌的培養(yǎng)方法是非常有必要的；且目前還沒有發(fā)現(xiàn)有紅茶菌治療牙疼的報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種用于治療牙痛的紅茶菌代謝產(chǎn)物及其制備方法，該該培養(yǎng)方法選擇了以無菌水、酒與蜂蜜以及紅茶水按照特定的比例進(jìn)行混合、發(fā)酵制得母菌液，接著將母菌液與糖水制得的培養(yǎng)液進(jìn)行混合進(jìn)行發(fā)酵一定時(shí)間后將培養(yǎng)結(jié)束后的所述培養(yǎng)液進(jìn)行固液分離，取下層液體即為所述紅茶菌代謝產(chǎn)物。該制備方法中母菌液的制備過程簡(jiǎn)單，原料簡(jiǎn)單易得，且紅茶菌的培養(yǎng)條件易控制、培養(yǎng)的菌種污染率小。且用該制備方法制得的紅茶菌代謝產(chǎn)物能夠有效用于治療牙痛，且作為治療牙痛的藥物副作用小，可以廣泛使用。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種用于治療牙痛的紅茶菌代謝產(chǎn)物的制備方法，其中，所述培養(yǎng)方法由以下步驟組成：1)將水煮沸后加入糖，待糖溶化后制得糖水，接著將所述糖水冷卻至20-35℃，即制得所述培養(yǎng)液；2)接種培養(yǎng)：先將培養(yǎng)器消毒、潤(rùn)洗，接著將所述母菌液和所述培養(yǎng)液按照1：20-50的體積比放入到所述培養(yǎng)器中，并用紗布封口，將所述培養(yǎng)器放置于光照強(qiáng)度為0.1萬-0.8萬lx的弱光環(huán)境、通風(fēng)且溫度為30-35℃的條件下發(fā)酵培養(yǎng)7-14天；3)將培養(yǎng)結(jié)束后的所述培養(yǎng)液進(jìn)行固液分離，取下層液體即為所述紅茶菌代謝產(chǎn)物。通過上述技術(shù)方案，本發(fā)明中選擇了以無菌水、酒與蜂蜜以及紅茶水按照特定的比例進(jìn)行混合、發(fā)酵制得母菌液，接著將母菌液與糖水制得的培養(yǎng)液進(jìn)行混合進(jìn)行發(fā)酵一定時(shí)間后將培養(yǎng)結(jié)束后的所述培養(yǎng)液進(jìn)行固液分離，取下層液體即為所述紅茶菌代謝產(chǎn)物。該制備方法中母菌液的制備過程簡(jiǎn)單，原料簡(jiǎn)單易得，且紅茶菌代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)條件易控制、培養(yǎng)的菌種污染率??；該培養(yǎng)方法可以推廣使用大量培養(yǎng)紅茶菌代謝產(chǎn)物，且制得的紅茶菌代謝產(chǎn)物對(duì)于治療牙痛具有很好的治療效果。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式部分予以詳細(xì)說明。具體實(shí)施方式以下對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。在本文中所披露的范圍的端點(diǎn)和任何值都不限于該精確的范圍或值，這些范圍或值應(yīng)當(dāng)理解為包含接近這些范圍或值的值。對(duì)于數(shù)值范圍來說，各個(gè)范圍的端點(diǎn)值之間、各個(gè)范圍的端點(diǎn)值和單獨(dú)的點(diǎn)值之間，以及單獨(dú)的點(diǎn)值之間可以彼此組合而得到一個(gè)或多個(gè)新的數(shù)值范圍，這些數(shù)值范圍應(yīng)被視為在本文中具體公開。本發(fā)明提供了一種用于治療牙痛的紅茶菌代謝產(chǎn)物的制備方法，其中，所述培養(yǎng)方法由以下步驟組成：1)將水煮沸后加入糖，待糖溶化后制得糖水，接著將所述糖水冷卻至20-35℃，即制得所述培養(yǎng)液；2)接種培養(yǎng)：先將培養(yǎng)器消毒、潤(rùn)洗，接著將所述母菌液和所述培養(yǎng)液按照1：20-50的體積比放入到所述培養(yǎng)器中，并用紗布封口，將所述培養(yǎng)器放置于光照強(qiáng)度為0.1萬-0.8萬lx的弱光環(huán)境、通風(fēng)且溫度為30-35℃的條件下發(fā)酵培養(yǎng)7-14天；3)將培養(yǎng)結(jié)束后的所述培養(yǎng)液進(jìn)行固液分離，取下層液體即為所述紅茶菌代謝產(chǎn)物。上述技術(shù)方案中，所述母菌液可以選擇醋酸菌、酵母菌的單獨(dú)菌液或者多種組合的菌液進(jìn)行發(fā)酵，但是為了提高培養(yǎng)的成功率，以及考慮降低成本，優(yōu)選地，所述母菌液是由下述方法制得：將無菌水、酒與蜂蜜按照100：10-20：10-20的重量比進(jìn)行混合制得混合液，將所述混合液置于15-30℃的敞口、陰暗條件下發(fā)酵10-15天，發(fā)酵結(jié)束后分離出所述混合液表面漂浮的一層薄膜即為母菌種；再將所述母菌種、紅茶水、所述糖水按照1：40-50：30-40的重量比混合、于15-30℃的敞口、陰暗條件下培養(yǎng)3-5天即制得所述母菌液。在上述技術(shù)方案中，所述無菌水的溫度可以控制在較寬的范圍內(nèi)，但是為了促進(jìn)母菌種的發(fā)酵生長(zhǎng)，優(yōu)選地，所述無菌水的溫度為40-60℃。另外，在上述技術(shù)方案中，所用的酒的種類及其酒精度均可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了進(jìn)一步提高菌種的培養(yǎng)效率以減少污染的概率，優(yōu)選地，所述酒為白酒或米酒，且所述白酒或米酒的酒精度為30％-50％。在本發(fā)明中所用糖的種類可以在寬的范圍內(nèi)選擇，為了促進(jìn)紅茶菌的發(fā)酵培養(yǎng)，優(yōu)選地，所述糖選自單糖、二糖或多糖；所述單糖為葡萄糖，所述二糖為麥芽糖、蔗糖或乳糖，所述多糖為淀粉；更優(yōu)選地，所述步驟1)中糖與水的重量比為1：20-30。在上述技術(shù)方案中，所述培養(yǎng)器的材質(zhì)可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為減少材質(zhì)對(duì)紅茶菌培養(yǎng)過程中的污染，優(yōu)選地，所述培養(yǎng)器的材質(zhì)為玻璃瓶或陶瓷。所述潤(rùn)洗的過程可以是用無菌水多次沖洗，或者直接用培養(yǎng)液沖洗幾次，但是為了提高潤(rùn)洗效果進(jìn)而促進(jìn)紅茶菌的培養(yǎng)，優(yōu)選地，所述潤(rùn)洗的過程為：用母菌液沖洗所述培養(yǎng)器2-3次。另外，為了在本發(fā)明步驟2)中，消毒的方法可以有多種選擇，但是為了減少操作過程給培養(yǎng)器帶來新的污染源進(jìn)而污染菌種，優(yōu)選地，在步驟2)中，所述消毒的過程是將培養(yǎng)器放置于沸水中煮10-30min。在發(fā)明中，所述的所述固液分離的過程可以是過濾、離心等，但是為了提高制備效率，且為了避免破壞菌種、污染代謝產(chǎn)物，優(yōu)選地，所述固液分離的方法為：直接用過濾的方式將培養(yǎng)液的表面漂浮的紅褐色絮狀物或塊狀物分離出，或者直接用濾網(wǎng)兜或紗布將所述紅褐色絮狀物或塊狀物撈出后取下層液體即為所述紅茶菌代謝產(chǎn)物。本發(fā)明還提供了一種如上述培養(yǎng)方法所制得的用于治療牙痛的紅茶菌代謝產(chǎn)物。本發(fā)明中所述紅茶菌代謝產(chǎn)物的使用要點(diǎn)為：?jiǎn)未沃委煏r(shí)，將5-8毫升所述紅茶菌代謝產(chǎn)物含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復(fù)3-5次；每周治療1-2次，連續(xù)治療3-4周。以下將通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。制備例1將無菌水(40℃)、白酒(酒精度30體積％)與蜂蜜按照100：10：10的重量比進(jìn)行混合制得混合液，將所述混合液置于15℃的敞口、陰暗條件下發(fā)酵15天，發(fā)酵結(jié)束后分離出所述混合液表面漂浮的一層薄膜即為母菌種；再將所述母菌種、紅茶水、所述糖水按照1：40：30的重量比混合、于15℃的敞口、陰暗條件下培養(yǎng)3天即制得所述母菌液；記作w1。制備例2將無菌水(60℃)、米酒(酒精度50體積％)與蜂蜜按照100：20：20的重量比進(jìn)行混合制得混合液，將所述混合液置于30℃的敞口、陰暗條件下發(fā)酵10天，發(fā)酵結(jié)束后分離出所述混合液表面漂浮的一層薄膜即為母菌種；再將所述母菌種、紅茶水、所述糖水按照1：50：40的重量比混合、于30℃的敞口、陰暗條件下培養(yǎng)5天即制得所述母菌液；記作w2。制備例3按照制備例1的方法制得制得所述母菌液；記作w3，不同的是所用酒為酒精度為50體積％的白酒。制備例4按照制備例1的方法制得所述母菌液；記作w4，不同的是所用酒為市售的雪花啤酒。制備例5按照制備例1的方法制得所述母菌液；記作w5，不同的是所用酒為市售的長(zhǎng)城葡萄酒。制備例6按照制備例1的方法制得所述母菌液；記作w5，不同的是所述無菌水的溫度為10℃。實(shí)施例11)制備培養(yǎng)液：將水煮沸后加入糖(糖與水重量比為1：20)，待糖溶化后制得糖水，接著將所述糖水冷卻至35℃，即制得所述培養(yǎng)液；2)接種培養(yǎng)：先將陶瓷培養(yǎng)器放置于沸水中煮15min進(jìn)行消毒、用母菌液(w1)進(jìn)行潤(rùn)洗3次，接著將所述母菌液(w1)和所述培養(yǎng)液按照1：20的體積比放入到所述培養(yǎng)器中，并用紗布封口，將所述陶瓷培養(yǎng)器放置于光照強(qiáng)度為0.1萬lx的弱光環(huán)境、通風(fēng)且溫度為30℃的條件下發(fā)酵培養(yǎng)14天，最后用濾網(wǎng)兜撈出培養(yǎng)結(jié)束后的培養(yǎng)液的表面漂浮的紅褐色絮狀物或塊狀物，取下層液體即為制得的所述紅茶菌代謝產(chǎn)物；記作a1。實(shí)施例21)制備培養(yǎng)液：將水煮沸后加入糖(糖與水重量比為1：25)，待糖溶化后制得糖水，接著將所述糖水冷卻至25℃，即制得所述培養(yǎng)液；2)接種培養(yǎng)：先將陶瓷培養(yǎng)器放置于沸水中煮30min進(jìn)行消毒、用母菌液(w2)進(jìn)行潤(rùn)洗3次，接著將所述母菌液(w2)和所述培養(yǎng)液按照1：35的體積比放入到所述培養(yǎng)器中，并用紗布封口，將所述陶瓷培養(yǎng)器放置于光照強(qiáng)度為0.5萬lx的弱光環(huán)境、通風(fēng)且溫度為35℃的條件下發(fā)酵培養(yǎng)10天，最后用濾網(wǎng)兜撈出培養(yǎng)結(jié)束后的培養(yǎng)液的表面漂浮的紅褐色絮狀物或塊狀物，取下層液體即為制得的所述紅茶菌代謝產(chǎn)物；記作a2。實(shí)施例31)制備培養(yǎng)液：將水煮沸后加入糖(糖與水重量比為1：30)，待糖溶化后制得糖水，接著將所述糖水冷卻至25℃，即制得所述培養(yǎng)液；2)接種培養(yǎng)：先將玻璃培養(yǎng)器放置于沸水中煮25min進(jìn)行消毒、用母菌液(w3)進(jìn)行潤(rùn)洗3次，接著將所述母菌液(w3)和所述培養(yǎng)液按照1：50的體積比放入到所述培養(yǎng)器中，并用紗布封口，將所述玻璃培養(yǎng)器放置于光照強(qiáng)度為0.8萬lx的弱光環(huán)境、通風(fēng)且溫度為35℃的條件下發(fā)酵培養(yǎng)7天，最后用濾網(wǎng)兜撈出培養(yǎng)結(jié)束后的培養(yǎng)液的表面漂浮的紅褐色絮狀物或塊狀物，取下層液體即為制得的所述紅茶菌代謝產(chǎn)物；記作a3。對(duì)比例1按照實(shí)施例1的方法制得所述紅茶菌代謝產(chǎn)物，記作b1，不同的是所用母菌液為w4。對(duì)比例2按照實(shí)施例1的方法制得所述紅茶菌代謝產(chǎn)物，記作b2，不同的是所用母菌液為w5。對(duì)比例3按照實(shí)施例1的方法制得所述紅茶菌代謝產(chǎn)物，記作b3，不同的是所用母菌液為w6。對(duì)比例4按照實(shí)施例1的方法制得所述紅茶菌代謝產(chǎn)物，記作b4，不同的是所用母菌液為純醋酸菌液。對(duì)比例5按照實(shí)施例1的方法制得所述紅茶菌代謝產(chǎn)物，記作b5，不同的是所用培養(yǎng)器為鋁制得培養(yǎng)器。檢測(cè)例1按照上述實(shí)施例1-3以及對(duì)比例1-5的方法各自獨(dú)立重復(fù)100組培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，并統(tǒng)計(jì)a1-a3以及b1-b5的紅茶菌代謝產(chǎn)物的被污染情況、計(jì)算其對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)成功率；當(dāng)紅茶菌顏色為灰色或灰綠色則證明紅茶菌及其代謝產(chǎn)物被污染了，即視為培養(yǎng)不成功；具體結(jié)果見表1。表1a1a2a3b1b2b3b4b5成功率98％96％97％80％82％80％76％79％通過上述實(shí)施例和對(duì)比例的檢測(cè)結(jié)果來看，本發(fā)明提供的制備方法培養(yǎng)紅茶菌的被污染率較小，且培養(yǎng)成功率高達(dá)97％左右；而在本發(fā)明提供的培養(yǎng)方法范圍以外的培養(yǎng)條件都會(huì)明顯降低了其培育的成功率。應(yīng)用例1選擇8位患有牙痛的患者分別服用a1-a3及b1-b5進(jìn)行治療，并記錄治療后患者的牙痛緩解情況，具體結(jié)果見表2：患者1：?jiǎn)未沃委?，?-8毫升所述紅茶菌代謝產(chǎn)物a1含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復(fù)3-5次；每周治療1-2次，連續(xù)3周。患者2：?jiǎn)未沃委?，?-8毫升所述紅茶菌代謝產(chǎn)物a2含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復(fù)3-5次；每周治療1-2次，連續(xù)3周?；颊?：?jiǎn)未沃委煟瑢?-8毫升所述紅茶菌代謝產(chǎn)物a3含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復(fù)3-5次；每周治療1-2次，連續(xù)3周。患者4：?jiǎn)未沃委?，?-8毫升所述紅茶菌代謝產(chǎn)物b1含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復(fù)3-5次；每周治療1-2次，連續(xù)3周?；颊?：?jiǎn)未沃委?，?-8毫升所述紅茶菌代謝產(chǎn)物b2含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復(fù)3-5次；每周治療1-2次，連續(xù)3周?；颊?：?jiǎn)未沃委煟瑢?-8毫升所述紅茶菌代謝產(chǎn)物b3含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復(fù)3-5次；每周治療1-2次，連續(xù)3周。患者7：?jiǎn)未沃委?，?-8毫升所述紅茶菌代謝產(chǎn)物b4含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復(fù)3-5次；每周治療1-2次，連續(xù)3周?；颊?：?jiǎn)未沃委?，?-8毫升所述紅茶菌代謝產(chǎn)物b5含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復(fù)3-5次；每周治療1-2次，連續(xù)3周。表2治療一周治療兩周治療三周患者1明顯緩解完全緩解完全緩解患者2明顯緩解明顯緩解完全緩解患者3完全緩解完全緩解完全緩解患者4輕微緩解輕微緩解輕微緩解患者5未緩解未緩解輕微緩解患者6未緩解未緩解輕微緩解患者7未緩解未緩解未緩解患者8未緩解未緩解未緩解以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡(jiǎn)單變型，這些簡(jiǎn)單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。另外需要說明的是，在上述具體實(shí)施方式中所描述的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對(duì)各種可能的組合方式不再另行說明。此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。當(dāng)前第1頁(yè)12