本實(shí)用新型屬于試劑盒或試劑箱技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種NK細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒。
背景技術(shù)：
NK細(xì)胞(Natural Killer Cell)又稱自然殺傷細(xì)胞，占外周血淋巴細(xì)胞的10％～15％。它是人體防御體系的第一道屏障。它通常處于休眠狀態(tài)，一旦被激活，它們會(huì)滲透到大多數(shù)組織中攻擊腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞。NK細(xì)胞是人體先天免疫的核心組成部分，是腫瘤細(xì)胞免疫的基礎(chǔ)。目前，隨著生物治療臨床應(yīng)用的廣泛發(fā)展，NK細(xì)胞治療取得了一定的臨床療效。據(jù)報(bào)道，多種細(xì)胞因子組合被廣泛應(yīng)用于NK細(xì)胞的體外培養(yǎng)，如IL-2、IL-7、IL-15、IL-18等單獨(dú)或組合均能有效的誘導(dǎo)、刺激特定的NK細(xì)胞增殖和促進(jìn)其分化成熟，其中IL-2和IL-15的作用尤為明顯。大量的研究表明IL-7的合理運(yùn)用和管理，可對患者免疫功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，來治療淋巴細(xì)胞耗竭、腫瘤或自身免疫性疾病。赫賽汀(Herceptin)是針對HER-2的人源化克隆單抗，與腫瘤細(xì)胞表面HER-2結(jié)合后，末端的Fc片段可與NK細(xì)胞表面的Fcγ受體結(jié)合，激活NK細(xì)胞，促進(jìn)NK細(xì)胞對抗體結(jié)合腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。
使用NK細(xì)胞進(jìn)行免疫治療，需要首先在體外擴(kuò)增大量的具有較高殺傷活性的NK細(xì)胞。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員致力于開發(fā)能夠在體外高效擴(kuò)增具有較高殺傷活性的NK細(xì)胞的技術(shù)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本實(shí)用新型提出一種NK細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，該試劑盒采用單克隆抗體聯(lián)合細(xì)胞因子的方法，在保證NK細(xì)胞體外擴(kuò)增倍數(shù)、細(xì)胞比例的前提下，提高擴(kuò)增產(chǎn)物的殺傷活性。
本實(shí)用新型的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：
一種NK細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，包括盒體與可開啟的盒蓋，所述盒體內(nèi)部安裝有海綿固定板，所述海綿固定板上面設(shè)置有無血清培養(yǎng)基放置槽、包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置槽、淋巴分離液放置槽以及細(xì)胞因子存儲(chǔ)單元，所述無血清培養(yǎng)基放置槽位于所述海綿固定板的左側(cè)，所述包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置槽、淋巴分離液放置槽以及細(xì)胞因子存儲(chǔ)單元均位于所述海綿固定板的右側(cè)，所述淋巴分離液放置槽以及細(xì)胞因子存儲(chǔ)單元均位于所述包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置槽上方，所述淋巴分離液放置槽位于所述細(xì)胞因子存儲(chǔ)單元與所述無血清培養(yǎng)基放置槽之間。
進(jìn)一步，所述細(xì)胞因子存儲(chǔ)單元包括細(xì)胞因子IL-2放置槽、細(xì)胞因子IL-7放置槽以及細(xì)胞因子IL-15放置槽。
進(jìn)一步，所述細(xì)胞因子IL-2放置槽的數(shù)量為4個(gè)，所述細(xì)胞因子IL-7放置槽的數(shù)量以及細(xì)胞因子IL-15放置槽的數(shù)量均為1個(gè)。
本實(shí)用新型的有益效果：
本實(shí)用新型提供一種配套齊全的培養(yǎng)NK細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，采用單克隆抗體聯(lián)合細(xì)胞因子的方法，保證NK細(xì)胞體外擴(kuò)增倍數(shù)，提高活化免疫細(xì)胞的殺傷活性。
附圖說明
為了更清楚地說明本實(shí)用新型實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本實(shí)用新型的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
圖1為本實(shí)用新型NK細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。
附圖標(biāo)示：1、盒體，2、可開啟的盒蓋，3、海綿固定板，4、無血清培養(yǎng)基放置槽，5、包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置槽，6、淋巴分離液放置槽，7、細(xì)胞因子IL-2放置槽，8、細(xì)胞因子IL-7放置槽，9、細(xì)胞因子IL-15放置槽。
具體實(shí)施方式
下面將結(jié)合本實(shí)用新型實(shí)施例中的附圖，對本實(shí)用新型實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本實(shí)用新型一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒緦?shí)用新型中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本實(shí)用新型保護(hù)的范圍。
參照圖1，一種NK細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，包括盒體1、可開啟的盒蓋2以及安裝在盒體1內(nèi)部的海綿固定板3，海綿固定板3起到減震作用。海綿固定板3上面設(shè)置有無血清培養(yǎng)基放置槽4、包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置槽5、淋巴分離液放置槽6以及細(xì)胞因子存儲(chǔ)單元。無血清培養(yǎng)基放置槽4位于海綿固定板3的左側(cè)，包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置槽5、淋巴分離液放置槽6以及細(xì)胞因子存儲(chǔ)單元均位于海綿固定板3的右側(cè)。淋巴分離液放置槽6以及細(xì)胞因子存儲(chǔ)單元均位于包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置槽5上方。淋巴分離液放置槽6位于細(xì)胞因子存儲(chǔ)單元與無血清培養(yǎng)基放置槽4之間。細(xì)胞因子存儲(chǔ)單元包括4個(gè)細(xì)胞因子IL-2放置槽7、1個(gè)細(xì)胞因子IL-7放置槽8以及1個(gè)細(xì)胞因子IL-15放置槽9。
利用該細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒培養(yǎng)NK細(xì)胞的步驟如下：
1)抽取外周血30ml～50ml，離心管內(nèi)800g×8分鐘離心全血，收集自體血漿，經(jīng)56℃(干熱或水浴鍋)滅活30分鐘后，800g×8分鐘離心，取上層血漿與另一支滅菌過的離心管，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2)用PBS稀釋去血漿后的外周血至血漿分離前全血體積的一倍。
3)取淋巴細(xì)胞分離液至無菌的15ml離心管中，每管5ml，將已稀釋的外周血輕輕加入到淋巴分離液液面上層，保持與分離液的界面，每管加約10ml外周血稀釋液。
4)750g×15分鐘離心，常溫。
5)離心后吸取單個(gè)核細(xì)胞層至50ml無菌離心管中，加PBS至45ml，混勻，450g×8分鐘離心，洗1次。
6)棄上清液，再用40ml PBS重懸，混勻，取少量計(jì)數(shù)。離心260g×8分鐘，再洗滌1次。
7)用無血清培養(yǎng)基重懸分離得到的單個(gè)核細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1.0×106/ml，轉(zhuǎn)移到已用赫賽汀包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶，按容積比5％的濃度添加已滅活血漿，然后加入細(xì)胞因子IL-7至終濃度1000ng/ml，IL-15至終濃度1000ng/ml，置于飽和濕度、37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
8)連續(xù)培養(yǎng)14天，每2至3天根據(jù)細(xì)胞的生產(chǎn)情況，補(bǔ)加含有2000UI/ml的IL-2的無血清培養(yǎng)基，調(diào)整細(xì)胞密度至0.8×106/ml，并按容積比5％的濃度添加已滅活血漿，血漿不夠時(shí)，可逐漸降低濃度，甚至不加血漿。
以上所述僅為本實(shí)用新型的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本實(shí)用新型，凡在本實(shí)用新型的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。