本發(fā)明屬于有機(jī)化學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種螺環(huán)化合物及其藥物用途。
背景技術(shù)：
：近年研究表明，法尼醇X受體(FXR)激動劑，具有抗淤膽、抗纖維化的效果。FXR是一種核受體，是一種膽酸的傳感器，可調(diào)控膽酸的合成和膽汁在肝內(nèi)的流動，同時(shí)對于膽汁內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、脂質(zhì)代謝、糖代謝以及炎癥/免疫應(yīng)答都有作用。研究數(shù)據(jù)表明，6-α-乙基鵝去氧膽酸(6-ECDCA，OCA)對于FXR的激活作用是鵝去氧膽酸的100倍，臨床研究表明，OCA可以用于治療原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)、門靜脈高壓(Portalhypertension)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、膽汁酸性腹瀉(Bileaciddiarrhea)、酒精性肝炎、原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)等與膽汁分泌有關(guān)的疾病(DrrugDiscoveryToday.Volume17，Numbers17/18，2012)。然而，膽酸類化合物OCA在臨床上已經(jīng)出現(xiàn)比較明顯的副作用：一是瘙癢副作用比較嚴(yán)重，OCA組141例患者中有33例(23％)發(fā)生瘙癢，而安慰劑組142例患者中有9例(6％)出現(xiàn)瘙癢(P＜0.0001)；二是升高了低密度脂蛋白膽，這可能會帶來一些不可接受的副作用。因此，開發(fā)一種非膽酸類的小分子FXR激動劑，可能可以在保持藥效的同時(shí)避免OCA的瘙癢、低密度脂蛋白增加等副作用。大量的文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道了各種FXR小分子激動劑：WO2000037077、WO2008025539、Bioorg.Med.Chem.Lett.19(2009)2595-2598、Bioorg.Med.Chem.Lett.19(2009)4733-4739、WO2009012125、WO2011020615、WO2012087519、WO2013007387。雖然這些FXR激動劑已經(jīng)顯示了一些激動活性，但這些化合物各自都存在一些缺點(diǎn)，如FXR激動劑GW4064，其生物利用度低、半衰期短；其結(jié)構(gòu)中的反式二苯乙烯是潛在的毒性基團(tuán)(toxicology，1981，22(2)，149-160；ToxicolAppl.Pharmacol.2000，167(1)，46-54)；反式二苯乙烯中的烯鍵對于紫外光不穩(wěn)定，從而也存在潛在的毒性問題。因此，有必要開發(fā)一些新型的FXR激動劑，改善成藥性質(zhì)。本發(fā)明提供的這類螺環(huán)類化合物，其成藥性質(zhì)通常優(yōu)于GW4064，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有FXR激動劑成藥性方面的不足，提供一類新的能夠改善成藥性質(zhì)的化合物，更適用于治療、抑制或改善法尼醇X受體介導(dǎo)的疾病。為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案：一種式(I)的化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽，或者它們的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、消旋體、溶劑化物、N-氧化物或氨基酸共軛物：其中，R1選自5-10元芳環(huán)基或5-10元雜芳環(huán)基，其中，每一個(gè)基團(tuán)可被1-3個(gè)R4取代；R2選自氫、C1-3烷基、鹵C1-3烷基或C3-6環(huán)烷基，其中C3-6環(huán)烷基可被C1-3烷基、鹵C1-3烷基取代；Z選自5-10元芳環(huán)基或5-10元雜芳環(huán)基，其中，每一個(gè)基團(tuán)可被1-3個(gè)R4取代；R3選自-CO2R5、-CONR5R6、-CONR5SO2R6、-CONR5(CR7)1-4CO2R5、-SO2R5或四唑；R4選自鹵素、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵C1-6烷氧基或C3-6環(huán)烷基；R5、R6、R7獨(dú)立地選自氫、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基或鹵C3-6環(huán)烷基。根據(jù)本發(fā)明，R2優(yōu)選為環(huán)丙基。根據(jù)本發(fā)明，R1優(yōu)選為可被1-3個(gè)R4取代的苯基；其中，R4選自鹵素、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵C1-6烷氧基或C3-6環(huán)烷基。根據(jù)本發(fā)明，Z優(yōu)選為苯基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、呋喃基、惡唑基、噻吩基、噻唑基、吡唑、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、瞇唑[1，2-a]吡啶基、吡咯[1，2-b]吡嗪基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、苯并惡唑基、萘基、喹啉基、異喹啉基，其中，每一個(gè)基團(tuán)可被1-3個(gè)R4取代；所述的R4選自鹵素、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵C1-6烷氧基或C3-6環(huán)烷基。根據(jù)本發(fā)明，R3優(yōu)選為-CO2R5，其中，R5選自氫或C1-6烷基，更優(yōu)選地，R5獨(dú)選自氫。根據(jù)本發(fā)明，典型的化合物舉例如下：3-(5-((5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異惡唑-4-位)甲氧基)六氫環(huán)戊[c]吡咯-2(1H)-位)苯甲酸4-(5-((5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異惡唑-4-位)甲氧基)六氫環(huán)戊[c]吡咯-2(1H)-位)苯甲酸6-(5-((5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異惡唑-4-位)甲氧基)六氫環(huán)戊[c]吡咯-2(1H)-位)煙酸2-(5-((5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異惡唑-4-位)甲氧基)六氫環(huán)戊[c]吡咯-2(1H)-位)苯并[d]噻唑-6-甲酸5-(5-((5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異惡唑-4-位)甲氧基)六氫環(huán)戊[c]吡咯-2(1H)-位)-1-異丙基-1H-吡唑-3-甲酸5-(5-((5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異惡唑-4-位)甲氧基)六氫環(huán)戊[c]吡咯-2(1H)-位)-1-萘甲酸6-(5-((5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異惡唑-4-位)甲氧基)六氫環(huán)戊[c]吡咯-2(1H)-位)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸及其藥學(xué)上可接受的鹽，或者它們的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、消旋體、溶劑化物、N-氧化物或氨基酸共軛物。本發(fā)明進(jìn)一步提供所述化合物的甘氨酸、牛磺酸或?；咸擒账峁曹椢?。本發(fā)明還進(jìn)一步提供所述化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽，或者它們的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、消旋體和溶劑化物中的一種或多種在制備膽汁調(diào)節(jié)分泌調(diào)節(jié)劑或FXR核受體活性調(diào)節(jié)劑中的應(yīng)用。本發(fā)明進(jìn)一步提供所述化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽，或者它們的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、消旋體和溶劑化物中的一種或多種在制備預(yù)防和/或治療膽固醇性膽結(jié)石癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化、門靜脈高壓、非酒精性脂肪肝炎、膽汁酸性腹瀉、酒精性肝炎、原發(fā)性硬化性膽管炎或動脈粥樣硬化，或者與膽汁分泌有關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種藥物組合物，其包括第一治療劑和藥學(xué)可接受基質(zhì)，其中第一治療劑為選自本發(fā)明所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者它們的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、消旋體和溶劑化物中的一種或多種的組合。進(jìn)一步地，所述藥物組合物還可以包括第二治療劑，所述第二治療劑為選自治療膽汁淤積等藥物中的一種或多種的組合。本發(fā)明還提供一種用所述組合物預(yù)防和/或治療膽固醇性膽結(jié)石癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化、門靜脈高壓、非酒精性脂肪肝炎、膽汁酸性腹瀉、酒精性肝炎、原發(fā)性硬化性膽管炎或動脈粥樣硬化，或者與膽汁分泌有關(guān)疾病的方法。本發(fā)明中，如果無另外說明，用于本發(fā)明申請，包括說明書和權(quán)利要求書中的術(shù)語，定義如下。必須注意，在說明書和所附的權(quán)利要求書中，如果文中無另外清楚指示，單數(shù)形式“一個(gè)”包括復(fù)數(shù)意義。如果無另外說明，使用質(zhì)譜、核磁、HPLC、蛋白化學(xué)、生物化學(xué)、重組DNA技術(shù)和藥理的常規(guī)方法。術(shù)語“烷基”指直鏈或支鏈飽和的、含有1～10個(gè)碳原子(較佳地1～6個(gè)碳原子)的脂族烴類基團(tuán)；C1～Cn烷基則表示1～n個(gè)碳原子的飽和的脂烴基，包括直鏈和支鏈基團(tuán)(例如“C1～C10烷基”，是指該基團(tuán)為烷基，且烷基的碳鏈碳原子數(shù)量在1～10之間，即含1個(gè)碳原子、2個(gè)碳原子或3個(gè)碳原子等，直至包括10個(gè)碳原子的烷基。而該1～10的限制并不包括烷基上的取代的碳原子數(shù)，如取代烷氨基中的“烷基”，當(dāng)沒有特別限制其碳原子數(shù)時(shí)，僅指其中指明的烷基部分的碳原子數(shù)為1～10，而并不包括烷基上的取代基的碳原子數(shù)以及氨基上的其他取代基的碳原子數(shù)。術(shù)語“鹵素”指氟、氯、溴或碘。術(shù)語“元環(huán)”包括任何環(huán)狀結(jié)構(gòu)。術(shù)語“元”意為表示構(gòu)成環(huán)的骨架原子的數(shù)量。這樣，如，環(huán)己基、吡啶基、吡喃基和噻喃基是六元環(huán)；環(huán)戊基、吡咯基、呋喃基和噻吩基是五元環(huán)。術(shù)語“任選取代”或“取代”指參考基團(tuán)可以被一個(gè)或多個(gè)額外基團(tuán)所取代，額外基團(tuán)單獨(dú)地且獨(dú)立地選自于下列基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)：C1～C10烷基、C3～C20環(huán)烷基、C5～C10芳基、C5～C10雜芳基、C2～C20雜脂環(huán)烴、羥基、C1～C5烷氧基、烷硫基、芳硫基、烷亞砜基、芳亞砜基、烷砜基、芳砜基、氰基、鹵基、羰基、硫代羰基、硝基、鹵烷基、氟烷基或氨基(包括單取代和雙取代的胺基基團(tuán)及其被保護(hù)的衍生物)，當(dāng)取代基為多個(gè)時(shí)，所述的取代基相同或不同。舉例說明，任選取代可以是鹵化物、-CN、-NO2或LsRs，其中每個(gè)Ls獨(dú)立的選自于下列一個(gè)鍵：-O-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-NH-、-NHC(＝O)-、-C(＝O)NH-、S(＝O)2NH-、-NHS(＝O)2、-OC(＝O)NH-、-NHC(＝O)O-或-(C1～C10烷基)；每個(gè)Rs選自于氫、烷基、氟烷基、雜烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基?？梢孕纬梢陨先〈谋Ｗo(hù)衍生物的保護(hù)基可以參考Greene和Wuts。一方面，任選取代基選自于鹵素、三氟甲基、羥基、氰基、硝基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2Me、-NH2、-COOH、-CONH2、C1～C5烷氧基、-N(CH3)2和C1～C10烷基。在某些具體實(shí)施例中，所述化合物具有一個(gè)或多個(gè)立體構(gòu)中心，且每個(gè)中心以R或S型獨(dú)立存在。在此提到的化合物包括所有非對映體，對映體，差向構(gòu)體和它們的混合物。立體異構(gòu)體可通過如手性色譜柱對立體異構(gòu)體分離的方法得到。本文所述的方法和分子式包括使用N-氧化物(如果合適)，結(jié)晶形式(也被稱為多晶型)或通式I化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，和具有相同活性的這些化合物的活性代謝物。在某些情況下，化合物可能作為互變異構(gòu)體而存在。所有的互變異構(gòu)體包括在此提到的化合物的范圍之內(nèi)。在某個(gè)具體實(shí)施例中，所述化合物以溶劑化物形式存在，藥學(xué)上可接受的溶劑如水或乙醇等。在其它具體實(shí)施例中，所述化合物以非溶劑化形式存在。術(shù)語“前藥”是指一個(gè)藥物分子的生物轉(zhuǎn)化衍生物，它在體內(nèi)經(jīng)過酶或化學(xué)的轉(zhuǎn)化釋放出活性母藥，然后活性母藥發(fā)揮期望的藥效。關(guān)于前藥也有其他的描述，例如J.Rautio等的文獻(xiàn)(NatRevDrugDiscov.，2008Mar；7(3)：255-70)，據(jù)此通過引用將上述文獻(xiàn)完整地并入。如本文所用的術(shù)語“鹽”是指含陽離子和陰離子的化合物，其可通過可接受質(zhì)子部位的質(zhì)子化和/或可供質(zhì)子部位的去質(zhì)子化來產(chǎn)生。值得注意的是，可接受質(zhì)子部位的質(zhì)子化導(dǎo)致形成陽離子類物質(zhì)，其電荷通過生理陰離子的存在而平衡，而可供質(zhì)子部位的去質(zhì)子化導(dǎo)致形成陰離子類物質(zhì)，其電荷通過生理陽離子的存在而平衡。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指鹽是藥學(xué)上可接受的。藥學(xué)上可接受的鹽的例子包括但不限于：(1)酸加成鹽，與無機(jī)酸形成，如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等等；或與有機(jī)酸形成，如羥基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、3-(4-羥基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羥基乙烷磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4對甲苯磺酸、樟腦酸、十二烷基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、水楊酸、順式-已二烯二酸等等；或(2)堿加成鹽，和上述無機(jī)酸的任一種的共軛堿形成，其中共軛堿包含選自Na+、K+、Mg2+、Ca2+、NHgR”’4-g+中的陽離子組分，其中R”’是C1-3烷基，g是選自0、1、2、3或4的整數(shù)。應(yīng)該理解，所有涉及藥學(xué)上可接受的鹽都包括相同酸加成鹽的本文中所定義的溶劑加成形式(溶劑化物)或晶體形式(多晶型物)。術(shù)語“制劑”或“劑型”特指包括活性化合物的固體和液體配方且本領(lǐng)域的技術(shù)人員將了解活性成分可以不同制劑形式存在，這取決于所需劑量及藥代動力學(xué)參數(shù)。術(shù)語“可接受的”，如本文所用，指一個(gè)處方組分或活性成分對一般治療目標(biāo)的健康沒有過分的有害影響。術(shù)語“受試者”或“病人”包括哺乳動物和非哺乳動物。哺乳動物包括但不限于，哺乳類：人、非人靈長類如猩猩、猿及猴類；農(nóng)業(yè)動物如牛、馬、山羊、綿羊、豬；家畜如兔、狗；實(shí)驗(yàn)動物包括嚙齒類，如大鼠、小鼠及豚鼠等。非哺乳類動物包括但不限于，鳥、魚等。在一優(yōu)選例中，所選哺乳動物是人?！昂耸荏w”是指通常與其他轉(zhuǎn)錄因子一起活化或抑制細(xì)胞核中一個(gè)或多個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄(但也可具有第二信使信號傳導(dǎo)作用)的受體。核受體由受體的天然同源配體活化。核受體通常見于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中，而非膜結(jié)合的。法尼醇X受體(FXR)是核受體超家族的一員，它主要表達(dá)在腸道系統(tǒng)之中，參與膽汁酸代謝與膽固醇代謝等重要環(huán)節(jié)。在自然環(huán)境中其配體包括初級膽汁酸鵝去氧膽酸、次級膽酸石膽酸、去氧膽酸等?！爸委熡行Я俊笔侵冈诮o予受試者時(shí)足以有效治療本文所述的疾病或病癥的化合物的量。雖然構(gòu)成“治療有效量”的化合物的量將根據(jù)化合物、病癥及其嚴(yán)重度、以及欲治療受試者的年齡而變化，但可由本領(lǐng)域技術(shù)人員以常規(guī)方式確定?！罢{(diào)節(jié)(modulating/modulate)”是指治療、預(yù)防、抑制、增強(qiáng)或誘導(dǎo)功能、病況或病癥。如本文所用的“治療(treating/treatment)”涵蓋治療受試者(優(yōu)選人類)中本文所述的疾病或病癥，并且包括：i.抑制疾病或病癥，即，阻止其發(fā)展；或ii.緩解疾病或病癥，即，引起病癥消退。“受試者”是指患有或可能患有一種或多種本文所述的疾病和病癥的溫血動物，如哺乳動物，優(yōu)選人類或人類兒童?！澳懼愿斡不笔侵敢蚰懙雷枞懼俜e而引起的肝硬化，分原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)和繼發(fā)性膽汁性肝硬化。一般認(rèn)為原發(fā)性膽汁性肝硬化是一種自身免疫性疾病?！伴T靜脈高壓”是指一組由門靜脈壓力持久增高引起的癥候群。大多數(shù)由肝硬化引起，少數(shù)繼發(fā)于門靜脈主干或肝靜脈梗阻以及原因不明的其他因素。當(dāng)門靜脈血不能順利通過肝臟回流入下腔靜脈就會引起門靜脈壓力增高。“非酒精性脂肪性肝病”是指一種與胰島素抵抗(insulinresistance，IR)和遺傳易感密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝臟損傷，其病理學(xué)改變與酒精性肝病(alcoholicliverdisease，ALD)相似，但患者無過量飲酒史，疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝(nonalcoholicsimplefattyliver，NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis，NASH)及其相關(guān)肝硬化和肝細(xì)胞癌?！澳懼嵝愿篂a”是指回腸吸收膽汁酸障礙時(shí)，大量膽汁酸到達(dá)結(jié)腸所引起的腹瀉?！熬凭愿窝住笔侵搁L期過量飲酒所致的一種肝臟疾病。其主要臨床特征是惡心、嘔吐、黃疸、肝臟腫大和壓痛，可并發(fā)肝功能衰竭和上消化道出血等。“原發(fā)性硬化性膽管炎”是指慢性膽汁淤積性疾病，其特征為肝內(nèi)外膽管炎癥和纖維化，進(jìn)而導(dǎo)致多灶性膽管狹窄。大多數(shù)患者最終發(fā)展為肝硬化、門靜脈高壓和肝功能失代償。術(shù)語“包括”、“諸如”、“例如”等意指示例性實(shí)施方案并且不限制本發(fā)明的范圍。如本文所用，某一化合物或藥物組合物，給藥后，可以使某一疾病、癥狀或情況得到改善，尤指其嚴(yán)重度得到改善，延遲發(fā)病，減緩病情進(jìn)展，或減少病情持續(xù)時(shí)間。無論固定給藥或臨時(shí)給藥、持續(xù)給藥或斷續(xù)給藥，可以歸因于或與給藥有關(guān)的情況。在本說明書中被描述的所有特征(包括任何所述的權(quán)利要求、摘要和圖)，和/或任何方法或過程中涉及的所有步驟，均有可能以任意一種組合存在，除非某些特征或步驟在同一組合中是相互排斥的。在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí)例。本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：本發(fā)明的FXR受體激動劑活性高，代謝穩(wěn)定，更適用于治療、抑制或改善法尼醇X受體。具體實(shí)施方式以下的實(shí)施例用于為本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員提供有關(guān)如何實(shí)施和使用本發(fā)明的完整披露和描述，并且這些例子并非意在對發(fā)明人所認(rèn)為的發(fā)明范圍進(jìn)行限制，亦非意指下文的實(shí)驗(yàn)是被實(shí)施的全部實(shí)驗(yàn)而且是僅可實(shí)施的實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照廠商所建議的條件，實(shí)施例中所用化學(xué)試劑均為分析純試劑，購買自國藥集團(tuán)。實(shí)施例1.制備3-(5-((5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異惡唑-4-位)甲氧基)六氫環(huán)戊[c]吡咯-2(1H)-位)苯甲酸(01)化合物01按照下列流程制備：將酮(1.000g，0.0044mol，1eq)溶解于10mL甲醇，冰浴下分批加入硼氫化鈉(0.503g，0.0133mol，3eq)，加畢冰浴下反應(yīng)30min，TLC顯示原料轉(zhuǎn)化完畢，濃縮干，滴入水和稀鹽酸淬滅，乙酸乙酯萃取三遍，有機(jī)層合并水洗，飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮干得類白色固體0.990g。中間體1-3：將1-2(0.990g，0.0044mol，1.5eq)加入10mL無水四氫呋喃，冰浴下加入18-冠-6(1.305g，0.0049mol，1.7eq)和叔丁醇鉀(550mg，0.0049mol，1.7eq)，冰浴下攪拌30min。將此溶液滴加入化合物1-1(0.949g，0.0029mol，1.0eq)的10mL無水THF溶液，冰浴保持0度，滴畢自然升至室溫?cái)嚢柽^夜。TLC顯示原料轉(zhuǎn)化完畢，加水淬滅乙酸乙酯萃取得粗品，硅膠柱層析(PE/EA＝4/1)得白色固體0.930g。中間體1-4：將中間體1(0.930g，0.0019mol)溶解于5ml二氯甲烷中，室溫下加入5ml三氟乙酸，室溫下攪拌2小時(shí)，TLC顯示原料轉(zhuǎn)化完畢，減壓濃縮干，加入飽和碳酸鈉淬滅，乙酸乙酯萃取三遍，有機(jī)層合并后分別用水和食鹽水洗滌一遍，干燥后濃縮干得淡黃色油狀物635mg，直接用于下一步。中間體1-6：將中間體1-4(150mg，0.381mmol)和5ml乙腈加入悶罐中，加入中間體1-5(200mg，0.762mmol，2eq)和三乙胺(77mg，0.762mmol，2eq)和醋酸銅(76mg，0.381mmol，1eq)。將體系加熱到80度攪拌過夜。TLC顯示中間體2轉(zhuǎn)化完全，加水淬滅，乙酸乙酯萃取三遍，有機(jī)層合并，依次用水和食鹽水洗滌一遍，干燥后濃縮干，硅膠柱層析(PE/EA＝10/1，5/1)得淡黃色油狀物105mg?；衔?1：將中間體：1-6(105mg，0.199mmol，1.0eq)，溶解于5mlTHF和5mlMeOH，加入氫氧化鉀(0.034mg，0.597mmol，3.0eq)，和1ml水，加熱至90度攪拌4小時(shí)，TLC顯示原料轉(zhuǎn)化完畢。濃縮去甲醇和THF，殘留物加水溶解，水層用MTBE洗滌兩次后用1N鹽酸調(diào)節(jié)PH＝2，EA萃取(20ml*2)，干燥后濃縮干得棕色固體48mg。1HNMR(400MHz，CD3Cl)δ：7.44-7.42(m，1H)，7.39-7.20(m，5H)，6.78(d，J＝7.2，1H)，4.21(s，2H)，3.91-3.88(m，1H)，3.44-3.40(m，2H)，3.14-3.11(m，2H)，2.66-2.60(m，2H)，2.10-2.03(m，3H)，1.40-1.20(m，4H)，1.08-1.05(m，2H).ESI-MSm/z：511.3(M-H)-。中間體1-1的制備：中間體1-8：在0℃下，將3mol/L的氫氧化鈉溶液(21ml，0.063mol，1.1eq)滴入懸浮的3.3ml水的鹽酸羥胺(4.37g，0.063mol，1.1eq)溶液中。再將該混合溶液滴入50ml乙醇與2，6-二氯苯甲醛(10g，0.057mol，1.0eq)的混合溶液中，滴畢，加熱到90℃過夜。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液濃縮干，濃縮干的固體加入29.3ml(H2O∶EtOH＝10∶1)的溶液，打漿析晶后過濾，濾餅抽干，以45℃真空干燥，得到中間體1-8，白色固體10.48g，收率96.5％。中間體1-9將2，6-二氯苯甲羥胺(10.48g，0.055mol，1.0eq)溶于63mlDMF中，分批加入N-氯代丁二酰亞胺(7.36g，0.28mol，1.0eq)。加畢，在40℃攪拌1h。反應(yīng)液反應(yīng)完畢，冷卻到室溫，在0℃倒入200ml的冰水中，用200ml的甲基叔丁基醚萃取一次，水層放棄。有機(jī)層鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，在30℃蒸發(fā)干形成固體油狀，用6ml正己烷搗碎析晶，形成固體過濾，濾餅真空干燥得中間體8-1-2，黃色固體12.10g，收率為97.7％。中間體1-10將三乙胺(10.91g，0.11mol，2.0eq)加到3-環(huán)丙基-3-氧代丙酸甲酯(7.66g，0.054mol，1.0eq)的混合物中，在室溫下攪拌30min，再冷到10℃。將中間體1-9(12.10g，0.054mol，1.0eq)用24.2mL乙醇溶解，再緩慢加入上述反應(yīng)液中，內(nèi)溫不超24℃。此外，該反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)完后，反應(yīng)液用45mlEA稀釋，用15ml水洗，分液，水層用乙酸乙酯萃取一次，合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮到總量的10％，形成沉淀，用乙醚搗碎打漿，過濾，濾餅真空拉干，得中間體1-10，白色固體8.48g，收率為54％。中間體1-11：將1.5mol/L的二異丁基氫化鋁(38ml，0.057mol，2.1eq)的甲苯溶液滴入到中間體1-10(8.48g，0.027mol，1.0eq)和54mlTHF的混合溶解的溶液中，控溫在0℃左右。加畢，室溫?cái)嚢?h。反應(yīng)完畢加入1.8g的甲醇，攪拌10min，再滴加入27ml水和54mlEA。形成的沉淀通過硅藻土過濾，母液真空拉干。固體加入正己烷搗碎，過濾，濾餅真空下干燥得中間體1-11，白色固體8.46g。中間體1-1：將8.46g的中間體1-11(8.46g，0.030mol，1.0eq)和60mlDCM溶解，加入三苯基膦(11.71g，0.045mol，1.5eq)，混合液冷卻到0-10℃，分批加入四溴化碳(14.82g，0.045mol，1.5eq)。反應(yīng)液在室溫下攪拌2h。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液拌樣，柱層析純化PE∶EA＝10∶1，得到中間體1-1，白色晶體7.35g，收率為71.2％。實(shí)施例2.化合物2～7參照實(shí)施例1描述的步驟制備，僅對反應(yīng)原料進(jìn)行相應(yīng)的替換，以得到目標(biāo)化合物?；衔锞幪?、化合物結(jié)構(gòu)和HNMR/MS細(xì)節(jié)列于表1：表1化合物編號、化合物結(jié)構(gòu)和HNMR/MS結(jié)果實(shí)施例3法尼醇X受體(FXR)激活試驗(yàn)采用FXR報(bào)告基因方法來測試本發(fā)明化合物的激活活性，方法如下：I.細(xì)胞培養(yǎng)a.胰蛋白酶化，在10ml完全基質(zhì)中以適當(dāng)?shù)拿芏冉臃N細(xì)胞。b.在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞24小時(shí)。II.細(xì)胞接種和轉(zhuǎn)染用FuGENEHD作為轉(zhuǎn)染試劑。a.按照下表制備轉(zhuǎn)染混合物。pBIND-FXR(ng/well)25pG5Luc(ng/well)25FuGENEHD(ul/well)0.15NoFBSmedia(ul/well)1.85Totalmix(ul/well)2.5b.劇烈拍打管子混勻，室溫下孵育15分鐘。c.胰蛋白酶化，測定細(xì)胞密度。d.以600,000細(xì)胞/ml密度稀釋細(xì)胞液至所需體積。e.加入所需體積的轉(zhuǎn)染混合物(預(yù)先制備成兩份細(xì)胞液)，將100ul/孔的細(xì)胞液懸浮在試驗(yàn)板上。f.在37℃、5％CO2條件下孵育試驗(yàn)板24小時(shí)。III.處理化合物a.制備化合物儲液至10mM工作濃度用于FXR，然后用100％DMSO以3倍依次稀釋。b.加入10ul化合物到90ul的完全基質(zhì)中。c.加入5ul化合物溶液到每一孔中。d.在37℃、5％CO2條件下孵育試驗(yàn)板18小時(shí)。IV.雙熒光素酶報(bào)告基因方法螢火蟲和海洋腔腸熒光素酶信號通過Promega的雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)來分析。EnVision多標(biāo)記微孔板檢測儀用作化學(xué)發(fā)光儀。V.結(jié)果計(jì)算a.數(shù)值的標(biāo)準(zhǔn)化是通過將螢火蟲熒光信號分成renilla信號實(shí)現(xiàn)?！癋/R”意思是“Firefly/Renilla”。標(biāo)準(zhǔn)化消除了每一孔中不同細(xì)胞數(shù)量以及轉(zhuǎn)染效率的差別。b.計(jì)算％活化值(％Activationvalue)通過下列方程式計(jì)算％活化值，X是每一個(gè)濃度點(diǎn)的“F/R”值。Min是無藥對照組的“F/R”平均值。Max是參照對照組的“F/R”平均值。c.用GraphPrism5.0計(jì)算EC50。VI.結(jié)果如表2所示。表2實(shí)驗(yàn)結(jié)果化合物EC50，(nM)化合物EC50，(nM)0119830589002988065630350000747904321GW4064308結(jié)論，本發(fā)明化合物顯示了很好的FXR受體激活活性，甚至有一些化合物激活活性與陽性對照化合物GW4064相當(dāng)。實(shí)施例4化合物的藥代性質(zhì)式I化合物的藥代性質(zhì)可通過肝微粒體代謝穩(wěn)定性試驗(yàn)證明：1、緩沖液配制：緩沖液A：1.0L0.1M磷酸二氫鉀緩沖液(含1.0mMEDTA)；緩沖液B：1.0L0.1M磷酸氫二鉀緩沖液(含1.0mMEDTA)；緩沖液C：0.1M磷酸鉀緩沖液(含1.0mMEDTA)，pH7.4，將緩沖液A加入到700mL緩沖液B中，當(dāng)pH達(dá)到7.4時(shí)停止。2、化合物給藥溶液：500μM溶液：將10μL10mMDMSO儲存液加入到190μLACN中；1.5μM給藥溶液(溶于肝微粒體，肝微粒體終濃度0.75mg/mL)：將1.5μL500μM溶液與18.75μL20mg/mL肝微粒體加入到479.75uL緩沖液C中。3、NADPH溶液(6mM，溶于緩沖液C中)。4、將30L1.5μM給藥溶液加入到96孔板中設(shè)置為不同時(shí)間點(diǎn)的位置。37℃預(yù)熱10分鐘。5、將15LNADPH溶液(6mM)加入到設(shè)置為45分鐘時(shí)間點(diǎn)的位置，并開始計(jì)時(shí)。6、在30分鐘，15分鐘，5分鐘，將15LNADPH溶液(6mM)加入到相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的位置。7、培養(yǎng)結(jié)束時(shí)(0分鐘)，將135LACN(含內(nèi)標(biāo))加入到設(shè)置為所有時(shí)間點(diǎn)的位置中。然后將15LNADPH溶液(6mM)加入到設(shè)置為0分鐘的位置。8、離心：3220g離心10分鐘。9、取出50μL上清液，與50μL超純水(Millipore)混合，送樣至LC/MS分析。實(shí)施例中化合物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表3。表3化合物實(shí)驗(yàn)結(jié)果化合物t1/2(分鐘)0155037304105GW406430結(jié)果表明，本發(fā)明提供了一類結(jié)構(gòu)新穎的比陽性對照化合物GW4064代謝更穩(wěn)定的化合物。應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3