本發(fā)明涉及培養(yǎng)基制備領(lǐng)域，尤其涉及一種微生物顆粒培養(yǎng)基的簡便制備方法。

背景技術(shù)：

微生物培養(yǎng)基在微生物檢測以及研究等方面的應(yīng)用及其廣泛。一般而言，微生物培養(yǎng)基的典型組分包括蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物、無機(jī)鹽、維生素、痕量金屬和碳水化合物等，有時還需根據(jù)不同微生物生長的需求，添加一些特殊的物質(zhì)(例如維生素或輔因子以及抗生素)等。

目前根據(jù)微生物培養(yǎng)基的狀態(tài)，可大致分為液體培養(yǎng)基、粉末培養(yǎng)基以及顆粒培養(yǎng)基等。其中液體培養(yǎng)基具有能馬上使用等優(yōu)點，但是不利于培養(yǎng)基的長期保存和運輸。作為液體培養(yǎng)基的替代形式，目前比較普遍使用粉狀培養(yǎng)基。粉狀培養(yǎng)基通常具有比液體培養(yǎng)基更長的保質(zhì)期，并且在配制后，可通過照射(例如γ或紫外線照射)或環(huán)氧乙烷滲透將培養(yǎng)基滅菌。但是，粉狀培養(yǎng)基具有若干缺點。粉末狀培養(yǎng)基在生產(chǎn)過程中會產(chǎn)生粉塵污染，危害生產(chǎn)人員的身體健康；而且粉末狀培養(yǎng)基在水中會發(fā)生聚團(tuán)凝結(jié)現(xiàn)象，溶解速度也比較的慢。

相比較而言，顆粒培養(yǎng)基因為顆粒大，無粉塵污染，且溶解速度快，具有許多優(yōu)點。但在實際制備中，需要使用造粒機(jī)來對粉末培養(yǎng)基進(jìn)行造粒，往往只能在大型的工廠使用專門的設(shè)備來進(jìn)行。而且在造粒過程中需使用熱風(fēng)等來對顆粒進(jìn)行干燥，對于一些含有熱敏感添加劑的培養(yǎng)基不適用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明提供一種微生物顆粒培養(yǎng)基的簡便制備方法，能在幾個小時內(nèi)實現(xiàn)小批量微生物顆粒培養(yǎng)基的快速制備。

本發(fā)明的微生物顆粒培養(yǎng)基的簡便制備方法，具體步驟如下：

將制備微生物培養(yǎng)基的各固體試劑制備成粉末并過標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩，過篩后按所需培養(yǎng)基成分配比用天平稱出后混勻得到培養(yǎng)基粉末；

將混勻后的培養(yǎng)基粉末均勻平攤開在無菌環(huán)境中，紫外線照射后放入無菌容器中，用無菌玻璃棒攪拌培養(yǎng)基粉末的同時噴灑75％酒精，將培養(yǎng)基粉末濕潤到一定程度后，用大孔徑檢驗篩過濾；

過濾后的顆粒放入收集篩，收集篩過濾后，將收集篩上保留的顆粒放入無菌托盤，無菌托盤放入普通超凈臺，用超凈臺風(fēng)機(jī)風(fēng)干，制備得到微生物顆粒培養(yǎng)基；

大孔徑檢驗篩上的大顆粒、收集篩篩下的小顆粒及培養(yǎng)基粉末重新放入無菌容器造粒直至所有培養(yǎng)基粉末形成顆粒培養(yǎng)基。

優(yōu)選的，標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩為50-70目檢驗篩；更優(yōu)選的，標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩為60目檢驗篩。

優(yōu)選的，紫外線照射的時間為0.5-2h，更優(yōu)選的，紫外線照射的時間為1h。

優(yōu)選的，大孔徑檢驗篩為10-15目檢驗篩，更優(yōu)選的，大孔徑檢驗篩為12目檢驗篩。

優(yōu)選的，收集篩為35-45目收集篩；更優(yōu)選的，收集篩為40目檢驗篩。

優(yōu)選的，無菌托盤在超凈臺風(fēng)機(jī)風(fēng)干的具體操作為，風(fēng)干的同時進(jìn)行紫外照射1-2小時。

相比目前顆粒培養(yǎng)基的制備方法，本發(fā)明的有益效果在于:(1)本發(fā)明的制備方法更簡單，不需要大型設(shè)備，適應(yīng)性廣；(2)在制粒過程中不需加熱，能較好保持培養(yǎng)基中熱敏感物質(zhì)的活性；(3)本發(fā)明整合了75％酒精和紫外線的雙重滅菌方式，制備的顆粒培養(yǎng)基不需要再次滅菌，使用方便，無菌率高，可以直接用于微生物的培養(yǎng)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例顆粒培養(yǎng)基制備的流程圖。

具體實施方式

下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明實施例提供了一種微生物顆粒培養(yǎng)基的簡便制備方法，具體步驟如下：

S1將制備微生物培養(yǎng)基的各固體試劑制備成粉末并過50-70目標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩，過篩后按所需培養(yǎng)基成分配比用天平稱出后混勻得到培養(yǎng)基粉末。

本步驟中，將制備微生物培養(yǎng)基的各固體實際制備成粉末過篩，可以使不同成分的試劑達(dá)到統(tǒng)一目徑，有利于后續(xù)制備顆粒。

S2將混勻后的培養(yǎng)基粉末均勻平攤開在無菌環(huán)境中，紫外線照射0.5-2h后放入無菌容器中，用無菌玻璃棒攪拌培養(yǎng)基粉末的同時噴灑75％酒精，將培養(yǎng)基粉末濕潤到一定程度后，用大孔徑10-15目檢驗篩過濾。

本步驟中，把混勻后的粉末試劑均勻平攤開在無菌環(huán)境中，可以保證紫外線的充分照射殺菌，紫外殺菌后的培養(yǎng)基再加入75％酒精后無菌率高，同時將粉末成團(tuán)，過大孔徑篩可以將大團(tuán)的顆粒打散從而保證顆粒的形成。

S3過濾后的顆粒放入35-45目收集篩，收集篩過濾后，將收集篩上保留的顆粒放入無菌托盤，無菌托盤放入普通超凈臺，用超凈臺風(fēng)機(jī)風(fēng)干，風(fēng)干的同時進(jìn)行紫外照射1-2小時，風(fēng)干后即制備完成顆粒培養(yǎng)基。

本步驟中，超凈臺風(fēng)機(jī)吹干的同時紫外照射能夠同時起到消毒和風(fēng)干的效果。制備得到的顆粒大小位于10-15目與35-45目之間，該大小的顆粒在具有優(yōu)異溶解性能的同時兼顧顆粒的美觀性，能夠符合市售產(chǎn)品的基本要求，如果顆粒較大，則在培養(yǎng)基使用時有可能造成稱量不便，造成稱量重量過多或多少；如果顆粒較小，則其溶解碎裂成粉末，造成溶解性能不高，因此，在本發(fā)明的上述顆粒大小的基礎(chǔ)上能夠兼具美觀性和快速溶解性。

S4大孔徑檢驗篩上的大顆粒、收集篩篩下的小顆粒及培養(yǎng)基粉末重新放入無菌容器造粒直至所有培養(yǎng)基粉末形成顆粒培養(yǎng)基。

本步驟可以在不浪費原材料的情況下盡可能使粉末成粒。

為了更清楚詳細(xì)地介紹本發(fā)明實施例所提供的微生物顆粒培養(yǎng)基的簡便制備方法，以下將結(jié)合具體實施例進(jìn)行說明。

實施例1

將制備微生物培養(yǎng)基的各固體試劑制備成粉末并過60目標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩，過篩后按所需培養(yǎng)基成分配比用天平稱出后混勻得到培養(yǎng)基粉末；

將混勻后的培養(yǎng)基粉末均勻平攤開在無菌環(huán)境中，紫外線照射1h后放入無菌容器中，用無菌玻璃棒攪拌培養(yǎng)基粉末的同時噴灑75％酒精，將培養(yǎng)基粉末濕潤到一定程度后，用大孔徑12目檢驗篩過濾；

過濾后的顆粒放入40目收集篩，收集篩過濾后，將收集篩上保留的顆粒放入無菌托盤，無菌托盤放入普通超凈臺，用超凈臺風(fēng)機(jī)風(fēng)干，風(fēng)干的同時進(jìn)行紫外照射1-2小時，風(fēng)干后即制備完成顆粒培養(yǎng)基；

大孔徑檢驗篩上的大顆粒、收集篩篩下的小顆粒及培養(yǎng)基粉末重新放入無菌容器造粒直至所有培養(yǎng)基粉末形成顆粒培養(yǎng)基。

實施例2

將制備微生物培養(yǎng)基的各固體試劑制備成粉末并過50目標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩，過篩后按所需培養(yǎng)基成分配比用天平稱出后混勻得到培養(yǎng)基粉末；

將混勻后的培養(yǎng)基粉末均勻平攤開在無菌環(huán)境中，紫外線照射0.5h后放入無菌容器中，用無菌玻璃棒攪拌培養(yǎng)基粉末的同時噴灑75％酒精，將培養(yǎng)基粉末濕潤到一定程度后，用大孔徑10目檢驗篩過濾；

過濾后的顆粒放入35目收集篩，收集篩過濾后，將收集篩上保留的顆粒放入無菌托盤，無菌托盤放入普通超凈臺，用超凈臺風(fēng)機(jī)風(fēng)干，風(fēng)干的同時進(jìn)行紫外照射1-2小時，風(fēng)干后即制備完成顆粒培養(yǎng)基；

大孔徑檢驗篩上的大顆粒、收集篩篩下的小顆粒及培養(yǎng)基粉末重新放入無菌容器造粒直至所有培養(yǎng)基粉末形成顆粒培養(yǎng)基。

實施例3

將制備微生物培養(yǎng)基的各固體試劑制備成粉末并過70目標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩，過篩后按所需培養(yǎng)基成分配比用天平稱出后混勻得到培養(yǎng)基粉末；

將混勻后的培養(yǎng)基粉末均勻平攤開在無菌環(huán)境中，紫外線照射2h后放入無菌容器中，用無菌玻璃棒攪拌培養(yǎng)基粉末的同時噴灑75％酒精，將培養(yǎng)基粉末濕潤到一定程度后，用大孔徑15目檢驗篩過濾；

過濾后的顆粒放入45目收集篩，收集篩過濾后，將收集篩上保留的顆粒放入無菌托盤，無菌托盤放入普通超凈臺，用超凈臺風(fēng)機(jī)風(fēng)干，風(fēng)干的同時進(jìn)行紫外照射1-2小時，風(fēng)干后即制備完成顆粒培養(yǎng)基；

大孔徑檢驗篩上的大顆粒、收集篩篩下的小顆粒及培養(yǎng)基粉末重新放入無菌容器造粒直至所有培養(yǎng)基粉末形成顆粒培養(yǎng)基。

采用實施例1的制備方法制備200g顆粒大腸桿菌培養(yǎng)基，具體流程參見圖1。

將制備大腸桿菌培養(yǎng)基的各固體試劑制備成粉末并過60目標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩，過篩后按所需培養(yǎng)基成分配比用天平稱出，組分配比為：蛋白胨100g、氯化鈉29g、磷酸氫二鉀59g、磷酸二氫鉀12g，混勻得到培養(yǎng)基粉末；

將混勻后的培養(yǎng)基粉末均勻平攤開在無菌環(huán)境中，紫外線照射1h后放入無菌容器中，用無菌玻璃棒攪拌培養(yǎng)基粉末的同時噴灑75％酒精，將培養(yǎng)基粉末濕潤到一定程度后，用大孔徑12目檢驗篩過濾；

過濾后的顆粒放入40目收集篩，收集篩過濾后，將收集篩上保留的顆粒放入無菌托盤，無菌托盤放入普通超凈臺，用超凈臺風(fēng)機(jī)風(fēng)干，風(fēng)干的同時進(jìn)行紫外照射1-2小時，風(fēng)干后即制備完成顆粒培養(yǎng)基；

大孔徑檢驗篩上的大顆粒、收集篩篩下的小顆粒及培養(yǎng)基粉末重新放入無菌容器造粒直至所有培養(yǎng)基粉末形成顆粒培養(yǎng)基。

將制備好的顆粒培養(yǎng)基加入無菌水復(fù)溶，肉眼可見在1分鐘內(nèi)即完全溶解。溶解后培養(yǎng)基pH值為6.93，顏色透明，溶解后液體與常規(guī)制備的培養(yǎng)基液體基本相同，說明顆粒培養(yǎng)基成分在配制過程中改變較少，能保持基本的性能需求。

進(jìn)一步驗證制備的顆粒培養(yǎng)基是否污染細(xì)菌以及對大腸桿菌ATCC25922的培養(yǎng)情況，結(jié)果顯示復(fù)溶后的顆粒培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)3天后，無雜菌生長，說明制備過程中紫外性和75％酒精有很好的滅菌效果。并且接入大腸桿菌的復(fù)溶培養(yǎng)基在培養(yǎng)24小時后，即可見明顯的菌生長，菌濁度與現(xiàn)配的液體培養(yǎng)基濁度相當(dāng)，說明制備過程中培養(yǎng)基各成分的營養(yǎng)等不受影響。