本發(fā)明涉及植物育種和遺傳學，特別是，涉及用于提高植物諸如干旱的非生物脅迫抗性的重組DNA載體。
背景技術：
：生物和非生物原因可以對植物產(chǎn)生脅迫，例如造成生物脅迫的原因包括病原菌感染、昆蟲取食、一種植物對另一種植物的寄生，例如槲寄生；非生物脅迫包括諸如有效水分的過量或者不足、極限溫度和諸如除草劑的合成化學藥品。非生物脅迫是造成世界范圍內(nèi)農(nóng)作物減產(chǎn)的主要原因，造成主要農(nóng)作物平均減產(chǎn)50％以上(Boyer,J.S.(1982)Science218：443-448；Bray,E.A.等(2000)InBiochemistryandMolecularBiologyofPlants,editedbyBuchannan,B.B.等,Amer.Soc.PlantBiol.,pp.1158-1249)。植物固著于地面，必須調整以適應周圍的環(huán)境條件，這就導致了植物發(fā)育中基因調控、形態(tài)建成和新陳代謝的巨大可塑性。植物的適應和防御策略包括激活編碼重要蛋白的基因，這些蛋白可以使植物適應或防御不同脅迫條件。干旱(有效水分不足)是一種主要的非生物脅迫，限制了世界范圍內(nèi)農(nóng)作物的生產(chǎn)。在植物生長發(fā)育階段，將植物暴露于水分限制環(huán)境下，將會激活植物各種不同生理和發(fā)育變化。近年來，盡管對非生物脅迫響應的分子機制和植物耐旱性的遺傳調控網(wǎng)絡進行了廣泛的研究(Valliyodan，B.和Nguyen，H.T.(2006)Curr.Opin.PlantBiol.9：189-195；Wang，W.等(2003)Planta218：1-14；Vinocur，B.和Altman，A.(2005)Curr.Opin.Biotechnol.16：123-132；Chaves，M.M.和Oliveira，M.M.(2004)J.Exp.Bot.55：2365-2384；Shinozaki，K.等(2003)Curr.Opin.PlantBiol.6:410-417；Yamaguchi-Shinozaki，K.和Shinozaki，K.(2005)TrendsPlantSci.10:88-94)，但是植物如何感受、傳導干旱脅迫信號和其耐旱性的生物化學和分子機制仍然是生物學研究中面臨的一個主要挑戰(zhàn)。遺傳學研究表明植物的耐旱性是一個由多基因調控的數(shù)量性狀，分子標記輔助育種能夠提高農(nóng)作物的耐旱性，但是標記的準確性和育種效率仍然是有疑問的(AshrafM.(2010)Biotechnol.Adv.28：169-183)。轉基因途徑提高農(nóng)作物的耐旱性已經(jīng)取得了很大進展(VinocurB.andAltmanA.(2005)Curr.Opin.Biotechnol.16:123-132；LawlorDW.(2013)J.Exp.Bot.64：83-108)。早期非生物脅迫響應分子方面的研究主要借助差異和/或加減法分析(Bray，E.A.(1993)PlantPhysiol.103：1035-1040；Shinozaki，K.和Yamaguchi-Shinozaki，K.(1997)PlantPhysiol.115：327-334；Zhu，J.-K.等(1997)Crit.Rev.PlantSci.16：253-277；Thomashow，M.F.(1999)Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMol.Biol.50：571-599)；和其它的方法，如分離候選基因，分析脅迫條件下該基因的表達或活性產(chǎn)物，或進行特定脅迫條件下功能互補分析(Xiong，L.和Zhu，J.-K.(2001)PhysiologiaPlantarum112：152-166)。另外，用于鑒定和分離調控基因突變體的正向和反向遺傳學研究為脅迫條件下基因表達的變化提供了證據(jù)(Xiong，L.和Zhu，J.-K.(2001)PhysiologiaPlantarum112：152-166)。激活標簽可以用于鑒定影響植物性狀的基因，這一方法已經(jīng)用于模式植物擬南芥的研究中(Weigel，D.等(2000)PlantPhysiol.122：1003-1013)。轉錄增強子序列的插入主要激活和/或提高鄰近內(nèi)源基因的表達，因此該方法可以用于分離具有重要農(nóng)藝性狀表型的基因，包括提高非生物脅迫如耐旱性的基因。發(fā)明概述本發(fā)明包括以下具體實施方案：在一個實施方案中，本發(fā)明包括一種分離的多核苷酸，所述多核苷酸包括(a)一種多核苷酸，其核苷酸序列與SEQIDNO：3、6、9、12、15或18的序列一致性至少為85％；(b)一種多核苷酸，其核苷酸序列與SEQIDNO：4、7、10、13、16或19的序列一致性至少為85％；(c)一種多核苷酸，其編碼多肽的氨基酸序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20的序列一致性至少為90％；或(d)核苷酸序列(a)、(b)或(c)的全長互補序列，其中過量表達所述多核苷酸能夠提高植物的耐旱性。所述分離的多核苷酸包括SEQIDNO：3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18或19所示的核苷酸序列；所述多肽包括SEQIDNO：5、8、11、14、17或20所示的氨基酸序列。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括一個重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包括一個分離的多核苷酸和與其可操作的連接至少一個異源調控序列，其中所述多核苷酸包括(a)一種多核苷酸，其核苷酸序列與SEQIDNO：3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18或19的序列一致性至少為85％；(b)一種多核苷酸，其編碼多肽的氨基酸序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20的序列一致性至少為90％；或者(c)核苷酸序列(a)或(b)的全長互補序列。在另一個實施例中，本發(fā)明包括一種轉基因的植物或種子，所述植物或種子包括一個重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包括一個多核苷酸和與其可操作的連接至少一個調控序列，其中所述多核苷酸包括(a)一個多核苷酸，其核苷酸序列與SEQIDNO：3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18或19的序列一致性至少為85％；(b)一種多核苷酸，其編碼的多肽的氨基酸序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20的序列一致性至少為90％；或(c)核苷酸序列(a)或(b)的全長互補序列。在另一個實施例中，本發(fā)明包括一個轉基因植物，所述轉基因植物在其基因組中包括一個重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包括一個多核苷酸和與其可操作的連接至少一個調控序列，其中所述多核苷酸序列包括(a)一個多核苷酸，其核苷酸序列與SEQIDNO：3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18或19的序列一致性至少為85％；(b)一個多核苷酸，其編碼的多肽的氨基酸序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20的序列一致性至少為90％；或(c)核苷酸序列(a)或(b)的全長互補序列，其中，與對照植物相比，所述轉基因植物顯示提高的耐旱性能。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括任一公開的植物，所述植物選自水稻、玉米、大豆、向日葵、高粱、油菜、小麥、苜蓿、棉花、大麥、粟、甘蔗或柳枝稷。在另一實施方案中，公開了提高植物耐旱性的方法，所述方法包括的步驟為：(a)將重組DNA構建體轉入可再生植物細胞，所述重組DNA構建體包括一個多核苷酸和與其可操作連接的至少一個調控序列，其中所述多核苷酸編碼的多肽的氨基酸能序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20相比，具有至少50％的序列一致性；(b)步驟(a)后由可再生植物細胞再生轉基因植物，其中所述轉基因在其基因組中含有重組DNA構建體；和(c)獲得步驟(b)轉基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因組中含有重組DNA構建體；與不含有重組DNA構建體的對照植物相比，所述子代植物顯示出提高的耐旱性。在另一實施方案中，公開了評估植物耐旱性的方法，所述方法包括的步驟為：(a)將重組DNA構建體轉入可再生植物細胞，所述重組DNA構建體包括一個多核苷酸和與其可操作連接的至少一個調控序列，其中所述多核苷酸編碼的多肽的氨基酸序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20相比，具有至少50％的序列一致性；(b)步驟(a)后由可再生植物細胞再生出轉基因植物，其中所述轉基因植物在其基因組中含有重組DNA構建體；(c)獲得轉基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因組中含有重組DNA構建體；和(d)與不含有重組DNA構建體的對照植物相比，評估所述子代植物的耐旱性。在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包含本發(fā)明任一分離的多核苷酸和與其可操作連接至少一個調控序列；以及含有所述重組DNA構建體的細胞、植物或種子。所述細胞可以是真核細胞，如酵母、昆蟲或植物細胞；也可以是原核細胞，諸如細菌細胞。附圖說明和序列表根據(jù)以下發(fā)明詳述和附圖及序列表，可以更全面的理解本發(fā)明，以下發(fā)明詳述和附圖及序列表形成本發(fā)明的一部分。圖1.為OsGSTU41轉基因水稻第一次田間干旱試驗中不同發(fā)育階段的土壤體積含水量。OsGSTU41轉基因水稻在斷水后26天開始抽穗，斷水后63天成熟。圖2.為OsGSTU41轉基因水稻第二次田間干旱試驗中不同發(fā)育階段的土壤體積含水量。OsGSTU41轉基因水稻在斷水后43天開始抽穗，斷水后73天成熟。圖3.為實時PCR分析測定的不同轉基因水稻株系葉片中OsGSTU41基因的相對表達量。DP0043.15中的表達量設置為1.00，其它轉基因株系表達量柱上面的數(shù)字表示與DP0043.15相比的變化倍數(shù)，ZH11為野生型水稻。圖4.為實時PCR分析測試的不同轉基因水稻株系葉片中OsPPCK4基因的相對表達量。ZH11-TC中的OsPPCK4基因表達水平設置為1.00，OsPPCK4轉基因株系中相對表達量為與ZH11-TC相比的倍數(shù)變化，ZH11-TC為組織培養(yǎng)的ZH11水稻植株，DP0158為空載體轉化的ZH11水稻植株。圖5.為實時PCR分析測試的不同轉基因水稻株系葉片中OsDN-DTP4基因的相對表達量。ZH11-TC中的表達量設置為1.00,表達量柱上的數(shù)字為與ZH11-TC水稻相比的倍數(shù)變化，ZH11-TC為組織培養(yǎng)的ZH11水稻植株，DP0158為空載體轉化的ZH11水稻植株。圖6.為實時PCR分析測試的不同轉基因水稻株系葉片中OsLecRK4.1基因的相對表達量。ZH11-TC中的表達量設置為1.00,表達量柱上的數(shù)字為與ZH11-TC水稻相比的倍數(shù)變化，ZH11-TC為組織培養(yǎng)的ZH11水稻植株。圖7.為實時PCR分析測試的不同轉基因水稻株系葉片中OsLecRK4.2基因的相對表達量。ZH11-TC中的表達量設置為1.00,表達量柱上的數(shù)字為與ZH11-TC水稻相比的倍數(shù)變化，ZH11-TC為組織培養(yǎng)的ZH11水稻植株。圖8.為OsPPCK4轉基因水稻干旱試驗中不同發(fā)育階段土壤體積含水量的變化。圖9.為OsCAM2轉基因水稻第一次田間干旱測試中不同發(fā)育階段土壤體積含水量。OsCAM2轉基因水稻在斷水后31天開始抽穗。圖10.為OsCAM2轉基因水稻第二次田間干旱測試中不同發(fā)育階段土壤體積含水量。OsCAM2轉基因水稻在斷水后24天開始抽穗。圖11.為OsLecRK4.1轉基因水稻田間干旱測試中不同發(fā)育階段土壤體積含水量。OsLecRK4.1轉基因水稻在斷水后22天開始抽穗。圖12.為OsLecRK4.2轉基因水稻田間干旱試驗中不同發(fā)育階段體積含水量。OsLecRK4.2轉基因水稻在斷水后25天開始抽穗。表1.序列表中核苷酸和氨基酸序列的編號表2.水稻基因名稱、基因ID(TIGR)和構建體的ID表3.克隆水稻耐旱性基因的引物表4.克隆耐旱性基因的PCR反應混合液表5.PCR循環(huán)狀況表6.溫室條件下OsGSTU41轉基因水稻增強耐旱性(第一次試驗)表7.溫室條件下OsGSTU41轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，構建體水平)表8.溫室條件下OsGSTU41轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，轉基因株系水平)表9.溫室條件下OsPPCK4轉基因水稻增強耐旱性(第一次試驗)表10.溫室條件下OsPPCK4轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，構建體水平)表11.溫室條件下OsPPCK4轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，轉基因株系水平)表12.溫室條件下OsCAM2轉基因水稻增強耐旱性(第一次試驗)表13.溫室條件下OsCAM2轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，構建體水平)表14.溫室條件下OsCAM2轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，轉基因株系水平)表15.溫室條件下OsCAM2轉基因水稻增強耐旱性(第三次試驗，構建體水平)表16.溫室條件下OsCAM2轉基因水稻增強耐旱性(第三次試驗，轉基因株系水平)表17.溫室條件下OsDN-DTP4轉基因水稻的耐旱性試驗(第一次試驗)表18.溫室條件下OsDN-DTP4轉基因水稻的耐旱性試驗(第二次試驗，構建體水平)表19.溫室條件下OsDN-DTP4轉基因水稻的耐旱性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)表20.溫室條件下OsDN-DTP4轉基因水稻的耐旱性試驗(第三次試驗，構建體水平)表21.溫室條件下OsDN-DTP4轉基因水稻的耐旱性試驗(第三次試驗，轉基因株系水平)表22.OsGSTU41轉基因水稻在田間干旱條件下的籽粒產(chǎn)量分析(第一次試驗)表23.OsGSTU41轉基因水稻在田間干旱條件下籽粒產(chǎn)量分析(第二次試驗)表24.OsPPCK4轉基因水稻在田間干旱條件下的籽粒產(chǎn)量分析表25.OsCAM2轉基因水稻在田間干旱條件下籽粒產(chǎn)量分析(第一次試驗)表26.OsCAM2轉基因水稻在田間干旱條件下籽粒產(chǎn)量分析(第二次試驗)表27.OsLecRK4.1轉基因水稻在田間干旱條件下籽粒產(chǎn)量分析表28.OsLecRK4.2轉基因水稻在田間干旱條件下籽粒產(chǎn)量分析表29.OsGSTU41轉基因水稻百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系水平)表30.OsGSTU41轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)表31.OsPPCK4轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系水平)表32.OsPPCK4轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)表33.OsPPCK4轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第三次試驗，轉基因株系水平)表34.OsCAM2轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系)表35.OsCAM2轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)表36.OsDN-DTP4轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系水平)表37.OsDN-DTP4轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)表38.OsLecRK4.1轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系水平)表39.OsLecRK4.1轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)表40.OsLecRK4.2轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系水平)表41.OsLecRK4.2轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)表1.序列表中核苷酸和氨基酸序列的編號序列表包含核苷酸序列字符的單字母碼以及氨基酸的三字母碼，如遵照IUPAC-IUBMB標準所定義的，該標準在NucleicAcidsRes.13：3021-3030(1985)以及在BiochemicalJ.219(No.2)：345-373(1984)中有所描述，這兩篇文獻以引用的方式并入本發(fā)明。用于核苷酸和氨基酸序列數(shù)據(jù)的符號和格式遵循37C.F.R.§1.822中列出的規(guī)則。SEQIDNO：1為DP0005載體的核苷酸序列。SEQIDNO：2為DsRed表達盒的核苷酸序列。SEQIDNO：3為OsGSTU41基因cDNA的核苷酸序列。SEQIDNO：4為OsGSTU41基因CDS的核苷酸序列。SEQIDNO：5為OsGSTU41的氨基酸序列。SEQIDNO：6為OsPPCK4基因cDNA的核苷酸序列。SEQIDNO：7為OsPPCK4基因CDS的核苷酸序列。SEQIDNO：8為OsPPCK4的氨基酸序列。SEQIDNO：9為OsCAM2基因cDNA的核苷酸序列。SEQIDNO：10為OsCAM2基因CDS的核苷酸序列。SEQIDNO：11為OsCAM2的氨基酸序列。SEQIDNO：12為OsDN-DTP4基因gDNA的核苷酸序列。SEQIDNO：13為OsDN-DTP4基因CDS的核苷酸序列。SEQIDNO：14為OsDN-DTP4的氨基酸序列。SEQIDNO：15為OsLecRK4.1基因gDNA的核苷酸序列。SEQIDNO：16為OsLecRK4.1基因CDS的核苷酸序列。SEQIDNO：17為OsLecRK4.1的氨基酸序列。SEQIDNO：18為OsLecRK4.2基因gDNA的核苷酸序列。SEQIDNO：19為OsLecRK4.2基因CDS的核苷酸序列。SEQIDNO:20為OsLecRK4.2的氨基酸序列。SEQIDNO：21為克隆OsGSTU41基因cDNA的正向引物。SEQIDNO：22為克隆OsGSTU41基因cDNA的反向引物。SEQIDNO：23為克隆OsPPCK4基因cDNA的正向引物。SEQIDNO：24為克隆OsPPCK4基因cDNA的反向引物。SEQIDNO：25為克隆OsCAM2基因cDNA的正向引物。SEQIDNO：26為克隆OsCAM2基因cDNA的反向引物。SEQIDNO：27為克隆OsDN-DTP4基因gDNA的正向引物。SEQIDNO：28為克隆OsDN-DTP4基因gDNA的反向引物。SEQIDNO：29為克隆OsLecRK4.1基因gDNA的正向引物。SEQIDNO：30為克隆OsLecRK4.1基因gDNA的反向引物。SEQIDNO：31為克隆OsLecRK4.2基因gDNA的正向引物。SEQIDNO：32為克隆OsLecRK4.2基因gDNA的反向引物。SEQIDNO：33為OsGSTU41基因實時PCR分析的正向引物。SEQIDNO：34為OsGSTU41基因實時PCR分析的反向引物。SEQIDNO：35為OsPPCK4基因實時PCR分析的正向引物。SEQIDNO：36為OsPPCK4基因實時PCR分析的反向引物。SEQIDNO：37為OsDN-DTP4基因實時PCR分析的正向引物。SEQIDNO：38為OsDN-DTP4基因實時PCR分析的反向引物。SEQIDNO：39為OsLecRK4.1基因實時PCR分析的正向引物。SEQIDNO：40為OsLecRK4.1基因實時PCR分析的反向引物。SEQIDNO：41為OsLecRK4.2基因實時PCR分析的正向引物。SEQIDNO：42為OsLecRK4.2基因實時PCR分析的反向引物。詳細描述本發(fā)明中所列出的每篇參考文獻的公開內(nèi)容的全文均以引用的方式并入本發(fā)明。如本發(fā)明所用的并在所附權利要求書中的單數(shù)形式“一個”和“所述”包括復數(shù)涵義，除非上下文中清楚地另有指明。因此，例如，“一株植物”的涵義包括多株該類植物?！耙粋€細胞”的涵義包括一個或多個細胞及其本領域的技術人員已知的等同物，等等。如本發(fā)明所述：術語“OsGSTU41”是谷胱甘肽S-轉移酶TAU41(glutathioneS-transferaseTAU41)，指水稻基因位點LOC_Os01g72160.1編碼的，賦予植物耐旱性和百草枯耐性表型的水稻多肽?！癎STU41多肽”此處指OsGSTU41多肽和其它植物中的同源物。OsGSTU41多肽(SEQIDNO：5)是水稻基因位點LOC_Os01g72160.1的編碼序列(CDS)(SEQIDNO：4)或核苷酸序列(SEQIDNO：3)編碼的氨基酸序列，該多肽在TIGR中注釋為“谷胱甘肽S-轉移酶，推測，表達”。術語“OsPPCK4”是磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶激酶4(phosphoenolpyruvatecarboxylasekinase4)，指水稻基因位點LOC_Os02g56310.1編碼的，賦予植物耐旱性和百草枯耐性表型的水稻多肽?！癙PCK4多肽”此處指OsPPCK4多肽和其它植物中的同源物。OsPPCK4多肽(SEQIDNO：8)是水稻基因位點LOC_Os02g56310.1的編碼序列(CDS)(SEQIDNO：7)或核苷酸序列(SEQIDNO：6)的氨基酸序列。該多肽在TIGR中注釋為“鈣依賴蛋白激酶異構體AK1，推測，表達”，在NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)中注釋為“假定磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶激酶”。術語“OsCAM2”是鈣調素2(Calmodulin2)，指水稻基因位點LOC_Os05g41210.1編碼的，賦予植物耐旱性和百草枯耐性表型的水稻多肽?！癈AM2多肽”此處指OsCAM2多肽和其它植物中的同源物。OsCAM2多肽(SEQIDNO：11)是水稻基因位點LOC_Os05g41210.1的編碼序列(CDS)(SEQIDNO：10)或核苷酸序列(SEQIDNO：9)編碼的氨基酸序列。該多肽在TIGR中注釋為“Oscam2，鈣調素，表達”。術語“OsDN-DTP4”是耐旱性蛋白4(droughttoleranceprotein4)，指水稻基因位點LOC_Os07g04720.1編碼的，賦予植物耐旱性和百草枯耐性表型的水稻多肽?！癉N-DTP4多肽”此處指OsDN-DTP4多肽和其它植物中的同源物。OsDN-DTP4多肽(SEQIDNO：14)是水稻基因位點LOC_Os07g04720.1的編碼序列(CDS)(SEQIDNO：13)或核苷酸序列(SEQIDNO：12)編碼的氨基酸序列。該多肽在TIGR中注釋“表達的蛋白”。術語“OsLecRK4.1”是植物血凝素-類似受體激酶4.1(lectin-likereceptorkinase4.1)，指水稻基因位點LOC_Os04g44900.1編碼的，賦予植物耐旱性和百草枯耐性表型的水稻多肽?！癓ecRK4.1多肽”此處指OsLecRK4.1多肽和其它植物中的同源物。OsLecRK4.1多肽(SEQIDNO：17)是水稻基因位點LOC_Os04g44900.1的編碼序列(CDS)(SEQIDNO：16)或核苷酸序列(SEQIDNO：15)編碼的氨基酸序列。該多肽在TIGR中注釋為“植物血凝素-類似受體激酶，推定，表達”。術語“OsLecRK4.2”是植物血凝素-類似受體激酶4.2(lectin-likereceptorkinase4.2)，指水稻基因位點LOC_Os04g44910.1編碼的，賦予植物耐旱性和百草枯耐性的水稻多肽?！癓ecRK4.2多肽”指OsLecRK4.2多肽和其它植物中的同源物。OsLecRK4.2多肽(SEQIDNO：20)是水稻基因位點LOC_Os04g44910.1的編碼序列(CDS)(SEQIDNO：19)或核苷酸序列(SEQIDNO：18)編碼的氨基酸序列。該多肽在TIGR中注釋為“受體類似蛋白激酶，推測，表達”。本發(fā)明中的單子葉植物包括禾本科的植物；雙子葉植物包括十字花科、豆科和茄科的植物?！叭L互補序列”是指給定核苷酸序列的互補序列，互補序列和核苷酸序列含有相同的核苷酸數(shù)，并且100％的互補?！氨磉_序列標簽”(EST)是從cDNA文庫中獲得的DNA序列，代表已經(jīng)轉錄的序列。EST通常通過cDNA插入序列單程測序獲取。將完整的cDNA插入序列稱為“全長插入序列”(“FIS”)。“重疊群”序列是由選自但不限于EST、FIS和PCR序列的兩個或更多個序列裝配成的序列。將編碼完整或功能性蛋白的序列稱為“完全基因序列”(“CGS”)，該序列可得自FIS或重疊群?！靶誀睢敝钢参锘蛱囟ㄖ参锊牧匣蚣毎纳淼?、形態(tài)的、生化的或物理的特征。在一些實施例中，這些特征可以是肉眼可見的，比如種子、植株的大小等；可用生物化學技術測定的指標，如種子或葉片中蛋白、淀粉或油份的含量等；可觀察的代謝或生理過程，如測定對水分脅迫、特定鹽、糖或氮濃度的耐性；可檢測的基因表達水平；或可觀察滲透脅迫的耐性或產(chǎn)量等農(nóng)藝性狀?！稗r(nóng)藝性狀”是可測量的指標參數(shù)，包括但不限于：葉片綠色、籽粒產(chǎn)量、生長速率、總生物量或積累速率、成熟時的鮮重、成熟時的干重、果實產(chǎn)量、種子產(chǎn)量、植物總氮含量、果實氮含量、種子氮含量、植物營養(yǎng)組織氮含量、植物總游離氨基酸含量、果實游離氨基酸含量、種子游離氨基酸含量、植物營養(yǎng)組織游離氨基酸含量、植物總蛋白含量、果實蛋白含量、種子蛋白含量、植物營養(yǎng)組織蛋白質含量、耐旱性、氮的吸收、根的倒伏、收獲指數(shù)、莖的倒伏、株高、穗高、穗長、耐鹽性、分蘗數(shù)、圓錐花序的大小、早期苗的活力和低溫脅迫下的出苗狀況。可以測量增加的生物量，例如與對照植物相比，增加的植物高度、植物總葉面積、植物鮮重、植物干重或植物種子產(chǎn)量等。增加植株生物量或大小的能力具有多種重要商業(yè)應用，作物栽培品種可用于產(chǎn)生較高植物營養(yǎng)組織部分，用于食品、飼料、纖維和/或生物燃料。人們對葉片大小的增加特別有興趣。增加的葉片的生物量可用于增加植物源藥或工業(yè)產(chǎn)品的生產(chǎn)，增加的分蘗數(shù)可以增加產(chǎn)量，增加植物葉片面積可提高植物總的光合作用，增加的光合合成能力可以增加特定植物組織的產(chǎn)量，并使植物在低光強或高光強下生長，所述特定植物組織包括葉片、根、果實或種子。其它組織如根的生物量的改變有利于提高植物在嚴酷條件下生長的能力，所述嚴酷條件包括干旱、營養(yǎng)貧瘠，因為大量的根系可以更好地吸收水分和營養(yǎng)。對于觀賞植物，人們所期望獲得較大的品種，許多植物包括果樹，用于木材生產(chǎn)的樹，作為視圖或風簾的喬木或灌木，可以通過增加其大小以獲得較大的產(chǎn)量或增加屏障?！稗D基因的”指其基因組因異源核酸(如重組DNA構建體)的存在而發(fā)生改變的任何細胞、細胞系、愈傷組織、組織、植物部分或植物，包括那些最初的轉基因事件以及從最初的轉基因事件通過有性雜交或無性生殖而產(chǎn)生的那些。如本發(fā)明所用的術語“轉基因”不涵蓋通過常規(guī)植物育種方法或通過諸如隨機異花受精、非重組病毒感染、非重組細菌轉化、非重組轉座或自發(fā)突變之類的自然發(fā)生事件導致的基因組(染色體基因組或染色體外基因組)改變?！皩φ铡?、“對照植物”或“對照植物細胞”為測定受測試植物或植物細胞的表型變化提供參考，由于轉化，受測植物或植物細胞的基因組改變影響到目的基因，測試的植物或植物細胞可以是上述改變并含有上述變化的植物或植物細胞的子代。對照植物或對照植物細胞包括，例如：(a)用于基因改變產(chǎn)生受測植物或細胞的相同基因型的作為起始材料的野生型植物或細胞；(b)相同基因組作為起始材料但是轉入空載體(如帶有標記基因的并對目標的性狀沒有影響的載體)的植物或植物細胞；(c)轉基因植物或植物細胞性狀分離，獲得的非轉基因的子代植物或植物細胞；(d)沒有暴露于可以誘導基因表達的條件或刺激下的，與轉基因植物或植物細胞基因組相同的植物或植物細胞；(e)特定的目標基因不表達情況下的，轉基因植物或者植物細胞本身?！盎蚪M”在用于植物細胞時不僅涵蓋存在于細胞核中的染色體DNA，而且還包括存在于細胞的亞細胞組分(如線粒體、質粒)中的細胞器DNA?！爸参铩卑ㄕ麄€植株、植物器官、植物組織、種子和植物細胞以及同一植株的子代。植物細胞包括但不限于得自下列物質的細胞：種子、懸浮培養(yǎng)物、胚、分生區(qū)域、愈傷組織、葉、根、芽、配子體、孢子體、花粉和小孢子?！白哟卑ㄖ参锏娜魏魏罄m(xù)世代?！稗D基因的植物”包括在其基因組內(nèi)包含異源多核苷酸的植物。例如異源多核苷酸能夠穩(wěn)定地整合進基因組中，且多聚核苷酸能夠遺傳到后續(xù)世代。異源多核苷酸可單獨地或作為重組DNA構建體的部分整合進基因組中。T0植物直接源于轉化和再生過程，T0植物的子代為T1代(第一個子代)，T2代(第二個子代)等。針對序列而言的“異源”意指來自外來物種的序列，或者如果來自相同物種，則指通過蓄意的人為干預而從其天然形式發(fā)生了組成和/或基因座的顯著改變的序列?！岸嗪塑账帷薄ⅰ昂怂嵝蛄小?、“核苷酸序列”或“核酸片段”可互換使用并且是任選含有合成的、非天然的或改變的核苷酸堿基的單鏈或雙鏈RNA或DNA聚合物。核苷酸(通常以它們的5’-單磷酸形式存在)通過如下它們的單個字母名稱來指代：“A”為腺苷酸或脫氧腺苷酸(分別對應RNA或DNA)，“C”表示胞苷酸或脫氧胞苷酸，“G”表示鳥苷酸或脫氧鳥苷酸，“U”表示尿苷酸，“T”表示脫氧胸苷酸，“R”表示嘌呤(A或G)，“Y”表示嘧啶(C或T)，“K”表示G或T，“H”表示A或C或T，“I”表示肌苷，并且“N”表示任何核苷酸。“多肽”、“肽”、“氨基酸序列”和“蛋白質”在本發(fā)明中可互換使用，指氨基酸殘基的聚合物。該術語適用于其中一個或多個氨基酸殘基是相應的天然存在的氨基酸的人工化學類似物的氨基酸聚合物，以及適用于天然存在的氨基酸聚合物。術語“多肽”、“肽”、“氨基酸序列”和“蛋白質”還可包括修飾形式，包括但不限于糖基化、脂質連接、硫酸鹽化、谷氨酸殘基的γ羧化、羥化和ADP-核糖基化?！靶攀筊NA(mRNA)”指無內(nèi)含子并且可通過細胞翻譯成蛋白質的RNA?！癱DNA”指與mRNA模板互補并且利用逆轉錄酶從mRNA模板合成的DNA。cDNA可為單鏈的或者可用DNA聚合成酶I的Klenow片段合成雙鏈形式?！俺墒臁钡鞍踪|指經(jīng)翻譯后加工的多肽；即已經(jīng)去除了存在于初級翻譯產(chǎn)物中的任何前肽或原肽的多肽?！扒绑w”蛋白質指mRNA的翻譯初級產(chǎn)物；即帶有前肽和原肽的蛋白質。前肽和原肽可為并且不限于細胞內(nèi)定位信號?！胺蛛x的”指物質，例如核酸和/或蛋白質，該物質基本上不含在天然存在的環(huán)境中通常伴隨該物質或與其反應的組分，或者說是該物質被從所述組分移出。分離的多核苷酸可從它們天然存在的宿主細胞中純化。技術人員已知的常規(guī)核酸純化方法可用于獲得分離的多核苷酸。該術語也涵蓋重組多核苷酸和化學合成的多核苷酸?！爸亟M體”指(例如)通過化學合成或者通過用基因工程技術操縱分離的核酸片段來實現(xiàn)的兩個原本分離的序列片段的人工組合?！爸亟M體”也包括指已經(jīng)通過引入異源核酸而進行了修飾的細胞或載體，或源于經(jīng)這樣修飾的細胞的細胞，但不涵蓋由天然發(fā)生的事件(如自發(fā)突變、自然轉化/轉導/轉座)對細胞或載體的改變，例如沒有蓄意人為干擾而發(fā)生的那些?！爸亟MDNA構建體”指在自然界中通常不會一起存在的核酸片段的組合。因此，重組DNA構建體可包含源于不同來源的調控序列和編碼序列，或源于相同來源但以不同于通常天然存在的方式排列的調控序列和編碼序列。術語“入門克隆”和“入門載體”本發(fā)明可互換使用?！罢{控序列”和“調控元件”可互換使用，指位于編碼序列的上游(5'非編碼序列)、中間或下游(3'非編碼序列)，并且影響相關編碼序列的轉錄、RNA加工或穩(wěn)定性或者翻譯的核苷酸序列。調控序列可包括但不限于啟動子、翻譯前導序列、內(nèi)含子和多腺苷酸化識別序列?！皢幼印敝改軌蚩刂屏硪缓怂崞无D錄的核酸片段?！爸参镏杏泄δ軉幼印笔悄軌蚩刂浦参锛毎谢蜣D錄的啟動子，無論其是否來源于植物細胞。“組織特異性啟動子”和“組織優(yōu)選啟動子”可互換使用，并且指主要但非必須專一地在一種組織或器官中表達，而且也可在一種特定細胞或細胞型中表達的啟動子。“發(fā)育調控啟動子”指其活性由發(fā)育事件決定的啟動子。術語“可操作地連接”指核酸片段連接成單一片段，使得其中一個核酸片段的功能受到另一個核酸片段的調控。例如，在啟動子能夠調節(jié)核酸片段的轉錄時，該啟動子與該核酸片段進行了可操作地連接?！氨磉_”指功能產(chǎn)物的產(chǎn)生。例如，核酸片段的表達可指核酸片段的轉錄(如轉錄生成mRNA或功能RNA)和/或RNA翻譯成前體或成熟蛋白質?！氨硇汀币庵讣毎蛏矬w的可檢測的特征。有關將核酸片段(例如重組DNA構建體)插入細胞內(nèi)的“導入”是指“轉染”或“轉化”或“轉導”，并且包括指將核酸片段整合進真核或原核細胞中，在該細胞中核酸片段可整合進細胞的基因組(如染色體、質粒、質體或線粒體DNA)內(nèi)，轉變成自主的復制子或瞬時表達(如轉染的mRNA)。“轉化細胞”是將核酸片段(如重組DNA構建體)導入其中的任何細胞。本發(fā)明所用的“轉化”指穩(wěn)定轉化和瞬時轉化兩者?！胺€(wěn)定轉化”指將核酸片段導入宿主生物體的基因組中，導致基因穩(wěn)定遺傳。一旦穩(wěn)定轉化，核酸片段穩(wěn)定地整合進宿主生物體和任何連續(xù)世代的基因組中?！八矔r轉化”指將核酸片段導入宿主生物體的核中或包含DNA的細胞器中，引起基因表達而沒有基因穩(wěn)定遺傳?！暗任换颉笔钦紦?jù)染色體上給定位點的基因的幾種供選擇形式的其中一種。當二倍體植物中一對同源染色體上給定基因座上存在的等位基因相同時，該植物在該基因座處是純合的。如果二倍體植物中一對同源染色體上給定基因座上存在的等位基因不同，則該植物在該基因座處是雜合的。如果轉基因存在于二倍體植物中一對同源染色體中的其中之一上，則該植物在該基因座處是半合子的?！叭~綠體轉運肽”是與蛋白協(xié)同翻譯并將蛋白導向葉綠體或翻譯蛋白的細胞中存在的其它質體類型的氨基酸序列。“葉綠體轉運序列”指編碼葉綠體轉運肽的核苷酸序列。“信號肽”是一種與蛋白協(xié)同翻譯并將蛋白導向分泌器官的氨基酸序列(Chrispeels，M.(1991)Ann.Rev.PlantPhys.PlantMol.Biol.42：21-53)。如果將所述蛋白導向液泡，可另外加上液泡靶向信號，或者如果將所述蛋白導向內(nèi)質網(wǎng)，可加上內(nèi)質網(wǎng)駐留信號。如果將蛋白導向細胞核，將移除任何存在的信號肽并用以核定位信號替代(Raikhel(1992)PlantPhys.100：1627-1632)。“線粒體信號肽”是引導前體蛋白進入線粒體的氨基酸序列(Zhang和Glaser(2002)TrendsPlantSci7：14-21)。目前已知有多種可以用來研究各種多聚核苷酸和多肽序列之間關系的方法。本發(fā)明中，“參考序列”是一個界定序列，用作序列比對的基礎。參考序列是一個特定序列的子集或全部，例如全長cDNA/基因序列的片段，抑或完整的cDNA/基因序列。此處用到的“比對窗口”，涉及到一個多聚核苷酸或多肽序列的共有或特定片段，其中兩個序列的最佳比對時，與參考序列(沒有添加或者刪除)相比，比較窗口中序列可能會包含添加或刪除(換言之既間隙)。通常比對窗口中至少包含20個連續(xù)的堿基或氨基酸，還可以選擇30、40、50、100甚至更長。本領域的技術人員為了避免因引入序列間隙而導致的與參考序列的高相似性，引入空位罰分，并減去相應的匹配數(shù)目。使用數(shù)學算法可以計算任意兩條序列的序列一致性(百分比)。序列比對算法的例子包括Myers和Miller運算法則(CABIOS4：11-17，1988)；局部聯(lián)配算法(smith等，Adv.Appl.Math.2：482，1981)；全局聯(lián)配算法(Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48：443-453，1970)；局部搜索聯(lián)配算法(Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.85：2444-2448，1988)；和Karlin和Altschul運算法則(Proc.Natl.Acad.Sci.USA872264(1990)，Karlin和Altschul于1993年修訂Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：5873-5877)。計算機可以利用這些算法來確定序列的一致性，這些應用包括但不限于CLUSTALinthePC/GeneProgram(Intelligenetics，MountainView，美國加州)；ALIGN(Ver2.0)和GCGWisconsin遺傳學軟件包(Ver10)(AccelrysInc.，9685美國加州圣地亞哥斯克蘭頓路)中的GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA；和bioinformaticscomputingsuite(Inc.，Madison，WI)的使用缺省參數(shù)就可以通過上述程序開展序列聯(lián)配工作。Higgins等(Gene73：237-244，1988)，Higgins等(CABIOS5：151-153，1989)，Corpet等(NucleicAcidsRes.16：10881-10890，1988)，Huang等(CABIOS8：155-165，1992)和Pearson等(Meth.Mol.Biol.24：307-331，1994)對CLUSTAL進行了詳細的描述；ALIGN程序則以Myers和Miller提出的supra算法(1988)為基礎。進行氨基酸序列比對時，當使用PAM120殘基重量表，且空位罰分為12和空位罰分為4時，可以與ALIGN程序相結合對氨基酸序列進行比較。BLAST程序(Altschul等，J.Mol.Biol.215：403，1990)以Karlin和Altschul的supra算法(1990)為基礎，可以使用BLASTN對核苷酸序列進行檢索，score＝100，wordlength＝12，以獲得本發(fā)明所涉及蛋白質對應編碼核苷酸序列的同源序列；可以使用BLASTX，score＝50，wordlength＝3，以獲得本發(fā)明所涉及蛋白質或多肽的同源氨基酸序列。GappedBLAST(BLAST2.0)(Altschul等，(1997)NucleicAcidsRes.25：3389)可以用于Gap比對。作為一種選擇，PSI-BLAST(BLAST2.0)可以開展交互式搜索，從而檢測到親緣關系較遠的兩個分子(Altschul等(1997)supra)。當使用BLAST時，GappedBLAST、PSI-BLAST和相應程序的缺省參數(shù)(例如用于核甘酸序列的BLASTN，用于蛋白質的BLASTX)也可以一并使用(美國政府國立衛(wèi)生研究院國立醫(yī)學圖書館國家生物技術信息中心)。序列聯(lián)配也可以用于人工檢索。通過使用GAP(Ver10)和以下參數(shù)可以得到配對序列一致性/相似性值：使用GAPWeight50、LengthWeight3以及nwsgapdna.cmp得分矩陣來計算核酸序列的一致性(％)和相似性(％)；使用GAPWeight8、LengthWeight2以及BLOSUM62得分矩陣可以計算氨基酸序列的一致性(％)和相似性(％)；或者任何等同程序。任何序列比較程序都可以被看作“等同程序”，因為任意兩條序列進行比較，都會產(chǎn)生一個聯(lián)配結果，包含一致的核苷酸或氨基酸堿基配對。當與GAPVer10所產(chǎn)生序列聯(lián)配結果進行比較時，還會產(chǎn)生序列一致性百分比。GAP利用Needleman和Wunsch算法((1970)J.Mol.Biol.48：443-453)，以發(fā)現(xiàn)兩個全長序列聯(lián)配的最大匹配數(shù)和最小間隙數(shù)。GAP考慮所有可能的聯(lián)配和gap位點，并創(chuàng)造聯(lián)配位點數(shù)目最大且gap數(shù)目結果，它允許匹配堿基單元中存在間隙創(chuàng)造罰分和間隙延展罰分，GAP必須利用每個插入間隙的間隙創(chuàng)造罰分匹配數(shù)，另外，如果選擇間隙延展罰分大于0，GAP必須利用每個插入間隙的長度間隙次數(shù)，間隙延展罰分。GCGWisconsin遺傳學軟件包Ver10中，缺省間隙創(chuàng)造罰分值和間隙延展罰分值分別為8和2，核苷酸序列中，缺省間隙創(chuàng)造罰分是50，缺省間隙延展罰分為3，間隙創(chuàng)造和間隙延展罰分可以是0-200中的整數(shù)，因此間隙創(chuàng)造和間隙延展罰分可以是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或更大。GAP作為最好的序列比對工具之一，而且在序列比對質量上表現(xiàn)最為優(yōu)異。GAP主要表現(xiàn)四個比對的性能指數(shù)：質量、比率、一致性和相似性，質量指度量化為比對序列，比率指質量除以較短的片段中堿基數(shù)，一致性百分數(shù)指匹配符號的百分數(shù)，相似性百分數(shù)指類似符號的百分數(shù)。符號對面的差距被忽略，當配對符號得分矩陣值大于或等于0.50(相似性閾值)，需要計算相似度。GCGWisconsin遺傳學軟件程序包(Ver10)使用的得分矩陣是BLOSUM62(Henikoff和Henikoff.Proc.Natl.Acad.Sci.USA89：10915，1989)。除非特別說明，本發(fā)明中的多序列比對采用ClustalV比對方法(Higgins和Sharp.(1989)CABIOS.5：151-153)和缺省參數(shù)(間隙罰分＝10，間隙長度罰分＝10)，兩個比對的缺省參數(shù)和計算氨基酸序列一致性百分數(shù)使用ClustalV方法：KTUPLE＝1，間隙罰分＝3，窗口＝5和對角線拯救＝5；用于核酸序列的參數(shù)KTUPLE＝2，間隙罰分＝5，窗口＝4和對角線拯救＝4。序列比對后應用ClustalV程序，通過觀察“序列距離”表，可以得到“一致性百分比”和“散度”值，除非特別說明，一致性百分比和散度值以相同的方式獲得。本發(fā)明中，當在特定比對窗口中最大一致性比對時，兩個多聚核苷酸或多肽序列的“序列一致性”或“一致性”指參考兩序列中殘基相同，當序列一致性百分數(shù)用于提及的蛋白質，被認為不同殘基位置與保守氨基酸替代不同，氨基酸殘基被具有相似化學性質的其它氨基酸殘基(如電荷或疏水性)替代，而不改變分子的功能特性，當序列在保守區(qū)替代不同，序列一致性百分數(shù)可以上調以更正替代的保守性，保守替代不同的序列被認為具有“序列相似性”或“相似性”。本領域的技術人員熟悉進行調整的方法，包括計算作為部分的而不是全長錯配的保守替代，因而增加序列一致性百分數(shù)，因此，相同氨基酸給與1分，不保守的替代給與0分，保守替代給與0-1分，計算保守替代的得分，如在PC/GENE執(zhí)行(Intelligenetics，MountainView，加州)。本發(fā)明中“序列一致性百分數(shù)”的計算包括確定兩個序列中相同核苷酸堿基或氨基酸殘基的位置數(shù)目，獲得匹配位置數(shù)，然后將匹配的位置數(shù)除以比對窗口中位置總數(shù)再乘以100。本發(fā)明中使用的標準重組DNA和分子克隆技術為本領域技術人員熟知，并且在如下文獻中有更全面的描述：Sambrook，J.，F(xiàn)ritsch，E.F.和Maniatis，T.，MolecularCloning：ALaboratoryManual；ColdSpringHarborLaboratoryPress：ColdSpringHarbor，1989(下文稱為“Sambrook”)。實施方案包括分離的多核苷酸和多肽、賦予耐旱性的重組DNA構建體、包含重組DNA構建體的諸如植物或種子的組合物、以及利用這些重組DNA構建體的方法。分離的多核苷酸和多肽：本發(fā)明包括如下分離的多核苷酸和多肽：一種分離的多核苷酸，包括(i)一種核酸序列，其編碼的多肽的氨基酸序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20相比，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列一致性；或(ii)核酸序列(i)的全長互補序列，其中核酸序列(i)與全長互補序列具有相同數(shù)目的核苷酸，并且100％的互補。前述任一分離的多核苷酸可用于構建本發(fā)明的任一重組DNA構建體，過量表達所述編碼的多肽可提高植物的耐旱性和/或百草枯耐性。一種分離的多肽，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20相比，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列一致性。所述多肽優(yōu)選為耐旱性多肽，過量表達所述多肽增加植物的耐旱性和/或百草枯耐性。一種分離的多核苷酸，包括(i)一種核酸序列，其核苷酸序列與SEQIDNO：4、7、10、13、16或19相比，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列一致性；(ii)一種核酸序列，其核苷酸序列與SEQIDNO：3、6、9、12、15或18相比，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列一致性；或(iii)核酸序列(i)或(ii)的全長互補序列。前述任一分離的多核苷酸可用于構建本發(fā)明任一重組DNA構建體。所述分離的多核苷酸優(yōu)選為編碼耐旱性多肽，過量表達所述多肽提高植物的耐旱性和/或百草枯耐性。重組DNA構建體：一方面，本發(fā)明包括重組DNA構建體。在一個實施方案中，一種重組DNA構建體包含一個多核苷酸和與其可操作連接的至少一個調控序列(如植物中有功能的啟動子)，其中所述多核苷酸包括(i)一種核酸序列，其編碼的多肽的氨基酸序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20相比，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列一致性；或(ii)核酸序列(i)的全長互補序列。在另一個實施方案中，一種重組DNA構建體包含一個多核苷酸和與其可操作連接的至少一個調控序列(如植物中有功能的啟動子)，其中，所述多核苷酸包括(i)一種核酸序列，其核苷酸序列與SEQIDNO：4、7、10、13、16或19相比，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列一致性；(ii)一種核酸序列，其核苷酸序列與SEQIDNO：3、6、9、12、15或18相比，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列一致性；或(iii)核酸序列(i)或(ii)的全長互補序列。在另一個實施方案中，一種重組DNA構建體包含一個多核苷酸和與其可操作連接的至少一個調控序列(如植物中有功能的啟動子)，其中所述多核苷酸編碼一個耐旱性多肽，所述多肽優(yōu)選為具有耐旱性和/或百草枯耐性，并可來自，例如水稻(Oryzasativa)、野生稻(Oryzaaustraliensis)、短舌野生稻(Oryzabarthii)、非洲型稻(Oryzaglaberrima)、闊葉稻(Oryzalatifolia)、長雄野生稻(Oryzalongistaminata)、南方野生稻(Oryzameridionalis)、藥用野生稻(Oryzaofficinalis)、斑點野生稻(Oryzapunctata)、普通野生稻(Oryzarufipogon)(紅稻)、印度野生稻(Oryzanivara)、擬南芥(Arabidopsisthaliana)、玉米(Zeamays)、大豆(Glycinemax)、煙豆(Glycinetabacina)、野大豆(Glycinesoja)和短絨野大豆(Glycinetomentella)。應當理解(正如本領域技術人員將會理解的)，本發(fā)明不僅僅涵蓋這些具體的示例性序列。導致給定位點處產(chǎn)生化學上等價的氨基酸但不影響所編碼多肽的功能特性的核酸片段中的改變是本領域眾所周知的。例如，丙氨酸(一種疏水性氨基酸)的密碼子可被編碼另一個疏水性較弱的殘基(例如甘氨酸)或疏水性較強的殘基(例如纈氨酸、亮氨酸或異亮氨酸)的密碼子取代。類似地，導致一個帶負電荷的殘基替換為另一個帶負電荷的殘基(例如，天冬氨酸替代谷氨酸)或者一個帶正電荷的殘基替換為另一個帶正電荷的殘基(例如，賴氨酸替換精氨酸)的改變也可預期產(chǎn)生功能上等價的產(chǎn)物。導致多肽分子的N-末端和C-末端部分改變的核苷酸變化也將預計不會改變多肽的活性。所提出的修飾中的每一種均完全在本領域常規(guī)技術內(nèi)，如測定所編碼的產(chǎn)物的生物活性的保留。“抑制DNA構建體”是在轉化或穩(wěn)定整合進植物基因組時，導致該植物中的靶基因“沉默”的重組DNA構建體。對該植物來說，該靶基因可為內(nèi)源性的基因或是轉入的基因。如本文針對靶基因所使用的，“沉默”通常指在由靶基因表達的mRNA或蛋白質/酶的水平上的抑制，和/或在酶活性或蛋白質功能性的水平上的抑制。本文中可交換使用的術語“抑制”、“抑制性”以及“沉默”包括降低、減少、減退、減小、抑制、消除或防止?！俺聊被颉盎虺聊辈惶刂笝C理并且包括但不限于反義、病毒-抑制、發(fā)夾抑制、莖-環(huán)抑制、基于RNAi的方法以及基于小RNAi的方法。抑制DNA構建體可包含源自所關注的靶基因的區(qū)域并且可包含所關注的靶基因的有義鏈(或反義鏈)的核酸序列的全部或部分。取決于所要利用的方法，所述區(qū)域可與所關注基因的有義鏈(或反義鏈)的全部或部分100％相同或者具有少于100％序列的一致性(如，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的一致性)。抑制DNA構建體是本領域所熟知的，一旦選定所關注的靶基因就很容易構建，并且包括但不限于共抑制構建體、反義構建體、病毒-抑制構建體、發(fā)夾抑制構建體、莖-環(huán)抑制構建體、產(chǎn)生雙鏈RNA的構建體，以及更通常的是，RNAi(RNA干擾)構建體和小RNA構建體，例如siRNA(短干擾RNA)構建體和miRNA(微RNA)構建體?！胺戳x抑制”指產(chǎn)生能夠抑制靶基因或基因產(chǎn)物表達的反義RNA轉錄物。“反義RNA”指與靶初級轉錄物或mRNA的全部或部分互補，并阻斷分離的靶核酸片段表達的RNA轉錄物(美國專利號5,107,065)。反義RNA可與特定基因轉錄物的任何部分，即5′非編碼序列、3′非編碼序列、內(nèi)含子或編碼序列互補?！肮惨种啤敝府a(chǎn)生正義RNA轉錄物可以抑制目的基因或基因產(chǎn)物的表達；“正義”RNA涉及RNA轉錄物，包括在細胞內(nèi)或者生物體外翻譯成蛋白質的mRNA，過去，植物中的共抑制載體用于在正義方向過表達與天然mRNA同源的核酸序列，因此減少所有與過表達序列同源的所有RNA(Vaucheret等(1998)PlantJ.16：651-659；和Gura.(2000)Nature404：804-808)。RNA干擾(RNAi)是指由短干擾性RNA(siRNA)介導的動物中序列特異性轉錄后基因沉默的過程(Fire等人，(1998)Nature391：806)。在植物中的對應過程通常稱為轉錄后基因沉默(PTGS)或RNA沉默，并且在真菌中也稱為阻抑作用(quelling)。據(jù)信PTGS轉錄后基因沉默過程是用于防止外來基因表達的進化保守性細胞防御機制，并且通常由不同植物區(qū)系和門所共有(Fire等人，(1999)TrendsGenet.15：358)。小RNA在控制基因表達中起重要作用。很多發(fā)育過程(包括開花)的調節(jié)是由小RNA控制的?，F(xiàn)在有可能通過使用在植物中產(chǎn)生小RNA的轉基因構建體來以基因工程手段改變植物基因的表達。小RNA似乎是通過與互補RNA或DNA靶序列堿基配對來行使功能的。當與RNA結合時，小RNA或者引發(fā)靶序列的RNA裂解或者引發(fā)翻譯抑制。當與DNA靶序列結合時，小RNA可介導靶序列的DNA甲基化。無論具體機制是什么，這些事件的后果是基因表達受到抑制。微RNA(miRNA)是長度為約19至約24個核苷酸(nt)的已經(jīng)在動物和植物中鑒定出的非編碼RNA(Lagos-Quintana等人，(2001)Science294：853-858；Lagos-Quintana等人，(2002)Curr.Biol.12：735-739；Lau等人，(2001)Science294：858-862；Lee和Ambros，Science294：(2001)862-864；Llave等人，(2002)PlantCell14：1605-1619；Mourelatos等人，(2002)Genes.Dev.16：720-728；Park等人，(2002)Curr.Biol.12：1484-1495；Reinhart等人，(2002)Genes.Dev.16：1616-1626)。它們是由大小為大約70至200nt較長的前體轉錄物加工生成的，并且這些前體轉錄物能夠形成穩(wěn)定的發(fā)夾結構。微RNA(miRNA)通過與位于由這些基因產(chǎn)生的轉錄物中的互補序列結合來調節(jié)靶基因。miRNA可進入至少兩條靶基因調控途徑：(1)翻譯抑制；和(2)RNA裂解。進入RNA裂解途徑的微RNA類似于在動物中的RNA干涉作用(RNAi)和植物中的轉錄后基因沉默(PTGS)期間生成的21-25nt的短干涉RNA(siRNA)，并且可能摻入了RNA誘導沉默復合物(RISC)，該復合物與RNAi相似或相同。調控序列：本發(fā)明的重組DNA構建體包含至少一個調控序列。調控序列可以是啟動子。多種啟動子可用于本發(fā)明的重組DNA構建體，啟動子根據(jù)期望的結果選擇，可包括宿主生物體中表達的組成型、組織特異型、誘導型、或其它啟動子。一般將引起基因在多數(shù)細胞類型中在多數(shù)情況下表達的啟動子稱為“組成型啟動子”。當組成型啟動子驅動候選基因表達時能夠評估候選基因的效應，但候選基因在35S或UBI啟動子控制下的高水平、組成型表達可具有多重效應。使用組織特異和/或脅迫特異啟動子可消除不需要的效應但保留提高植物耐旱性的能力。在擬南芥屬中已經(jīng)觀察到了該效應(Kasuga等人(1999)NatureBiotechnol.17：287-91)。適用于植物宿主細胞的組成型啟動子包括(例如)Rsyn7啟動子的核心啟動子和在WO99/43838和美國專利6,072,050中公開的其它組成型啟動子；CaMV35S核心啟動子(Odell等人，(1985)Nature313：810-812)；稻肌動蛋白(McElroy等人，(1990)PlantCell2：163-171)；泛素啟動子(Christensen)等人，(1989)PlantMol.Biol.12：619-632和Christensen等人，(1992)PlantMol.Biol.18：675-689)；pEMU(Last等人，(1991)Theor.Appl.Genet.81：581-588)；MAS(Velten等人，(1984)EMBOJ.3：2723-2730)；ALS啟動子(美國專利5,659,026)等。其它組成型啟動子包括例如在美國專利5,608,149、5,608,144、5,604,121、5,569,597、5,466,785、5,399,680、5,268,463、5,608,142和6,177,611中公開的那些啟動子。在選擇啟動子用于本發(fā)明方法時，期望使用組織特異性啟動子或發(fā)育調節(jié)啟動子。組織特異性啟動子或發(fā)育調節(jié)啟動子是這樣的DNA序列，其調節(jié)DNA序列選擇性地在對雄穗發(fā)育、結籽或兩者重要的植物細胞/組織中表達，并限制這種DNA序列只在植物的雄穗發(fā)育或種子成熟期間表達。任何引起所需時空表達的可鑒定啟動子均可用于本發(fā)明的方法中。本領域的技術人員知道多種葉片優(yōu)選的啟動子(Yamamoto等(1997)PlantJ.12(2)：255-265；Kwon等(1994)PlantPhysiol.105：357-367；Yamamoto等(1994)PlantCellPhysiol.35(5)：773-778；Gotor等(1993)PlantJ.3：509-518；Orozco等(1993)PlantMol.Biol.23(6)：1129-1138；和Matsuoka等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90(20)：9586-9590)?？捎糜诒景l(fā)明的種子或胚特異性啟動子包括大豆Kunitz胰蛋白酶抑制劑(Kti3，Jofuku和Goldberg，(1989)PlantCell1：1079-1093)，伴豌豆球蛋白、豌豆球蛋白和豆球蛋白(豌豆子葉)(Rerie，W.G.等，(1991)Mol.Gen.Genet.259：149-157；Newbigin，E.J.等，(1990)Planta180：461-470；Higgins，T.J.V.等，(1988)Plant.Mol.Biol.11：683-695)，玉米蛋白(玉米胚乳)(Schemthaner，J.P.等，(1988)EMBOJ.7：1249-1255)，菜豆蛋白(菜豆子葉)(Segupta-Gopalan，C.等，(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82：3320-3324)，植物血球凝集素(菜豆子葉)(Voelker，T.等，(1987)EMBOJ.6：3571-3577)，B-伴球蛋白和大豆球蛋白(大豆子葉)(Chen，Z-L等，(1988)EMBOJ.7：297-302)，谷蛋白(稻胚乳)，大麥醇溶蛋白(大麥胚乳)(Marris，C.等，(1988)PlantMol.Biol.10：359-366)，麥谷蛋白和麥醇溶蛋白(小麥胚乳)(Colot，V.等，(1987)EMBOJ.6：3559-3564)?？刹僮鞯剡B接至嵌合基因構建體異源編碼區(qū)的種子特異性基因的啟動子在轉基因植物中保持它們的時空表達模式。這樣的實施例包括在擬南芥和甘藍型油菜(Brassicanapus)種子中表達腦啡肽的擬南芥屬2S種子儲藏蛋白基因啟動子(Vanderkerckhove等，(1989)Bio/Technology7：L929-932)，表達熒光素酶的菜豆凝集素和β-菜豆蛋白啟動子(Riggs等，(1989)PlantSci.63：47-57)，以及表達氯霉素乙酰轉移酶的小麥谷蛋白啟動子(Colot等，(1987)EMBOJ6：3559-3564)。誘導啟動子響應內(nèi)源性或外源性刺激的存在，例如，通過化合物(化學誘導劑)，或響應環(huán)境、激素、化學信號和/或發(fā)育信號而選擇性表達可操縱連接的DNA序列。誘導啟動子或受調控的啟動子包括(例如)受光、熱、脅迫、水澇或干旱、植物激素、創(chuàng)傷或諸如乙醇、茉莉酮酸酯、水楊酸或安全劑之類的化學品調控的啟動子。用于本發(fā)明的啟動子包括以下啟動子：1)脅迫誘導型RD29A啟動子(Kasuga等，(1999)NatureBiotechnol.17：287-91)；2)脅迫誘導啟動子Rab17(Vilardell等，(1991)PlantMol.Bio.17:985-993；KampBusk等(1997)PlantJ11(6)：1285-1295)；3)大麥啟動子B22E；B22E是發(fā)育中玉米籽粒中的柄所特異表達的啟動子(“PrimaryStructureofaNovelBarleyGeneDifferentiallyExpressedinImmatureAleuroneLayers”(在未成熟糊粉層中差異表達的新大麥基因的一級結構)Klemsdal,S.S.等，(1991)Mol.Gen.Genet.228(1/2)：9-16)；和4)玉米啟動子Zag2(“IdentificationandmolecularcharacterizationofZAG1，themaizehomologoftheArabidopsisfloralhomeoticgeneAGAMOUS”，Schmidt，R.J.等，(1993)PlantCell5(7)：729-737；“Structuralcharacterization，chromosomallocalizationandphylogeneticevaluationoftwopairsofAGAMOUS-likeMADS-boxgenesfrommaize”，Theissen等，(1995)Gene156(2)：155-166；NCBIGenBank登錄號X80206))。Zag2轉錄物可在授粉前5天至授粉后(DAP)7至8天被檢測到，并且引導Ciml在發(fā)育中的雌花序的心皮中表達，Ciml是發(fā)育玉米籽粒的籽仁特異的啟動子。Ciml轉錄物在授粉前4至5天至授粉后6至8天被檢測到。其它可用的啟動子包括可源自其表達與發(fā)育中的雌小花母系相關的基因的任何啟動子。對于在發(fā)育種子組織中表達的多聚核苷酸，特定的啟動子包括種子優(yōu)選的啟動子，尤其是早期籽粒/胚啟動子和晚期籽粒/胚啟動子，授粉后籽粒的發(fā)育大致可以分為三個基本階段，籽粒生長的停滯期起始于授粉后0天到10-12天，在此期間，籽粒不再明顯的生長，但是決定籽?；盍Φ闹匾录⒃诖似陂g發(fā)生(如細胞建成數(shù)目)。線性籽粒灌漿期起始于授粉后的10-12天并延續(xù)到授粉后的40天左右，在此籽粒發(fā)育期間，籽粒達到最終的質量，并產(chǎn)生多種儲藏物質如淀粉、蛋白質和油等；成熟期起始于授粉后大約40天到收獲，在這一過程中，籽粒開始休眠，變干并為萌芽前的種子休眠做準備。本發(fā)明中的“早期籽粒/胚啟動子”指主要在種子發(fā)育的停滯期(也就是授粉第0天到授粉后第12天期間)驅動基因表達的啟動子；“后期籽粒/胚啟動子”主要驅動基因在授粉后12天到成熟過程中的種子中基因表達；表達窗口可能會有一些重疊，將根據(jù)使用的ABA偶聯(lián)的序列和期望的表型選擇啟動子。早期籽粒/胚啟動子包括，Cim1，其在授粉后第5天活躍在特定組織中(WO00/11177)；其它的早期籽粒/胚胎啟動子包括種子偏愛啟動子end1，其在授粉后7-10天表達，和end2，其在授粉后9-14天在整個籽粒中表達，在授粉后10天在胚乳和果皮中表達(WO00/12733)，此處以全文引用方式并入本文。本發(fā)明中的特定方法使用的其它早期籽粒/胚乳啟動子包括種子偏愛啟動子ltp2(美國專利號5,525,716)；玉米Zm40啟動子(美國專利號6,403,862)；玉米nuc1c(美國專利號6,407,315)；玉米ckx1-2啟動子(美國專利號6,921,815和美國專利申請公開號2006/0037103)；玉米lec1啟動子(美國專利號7,122,658)；玉米ESR啟動子(美國專利號7,276,596)；玉米ZAP啟動子(美國專利申請公開號20040025206和20070136891)；玉米啟動子eep1(美國專利申請公開號20070169226)；和玉米啟動子ADF4(美國專利申請?zhí)?0/963,878，2007年8月7日申請)。本發(fā)明中調控核酸序列在植物中表達的其它啟動子是莖特異啟動子，包括苜蓿S2A啟動子(GenBank登錄號EF030816；Abrahams等(1995)PlantMol.Biol.27：513-528)和S2B啟動子(GenBank登錄號EF030817)和類似的啟動子。啟動子可以整個源于天然基因，或者由源于不同的天然存在的啟動子的不同元件組成，或者甚至包括合成的DNA片段。用于本發(fā)明特定實施例的啟動子包括：RIP2、mLIP15、ZmCOR1、Rab17、CaMV35S、RD29A、B22E、Zag2、SAM合成酶、泛素、CaMV19S、nos、Adh、蔗糖合成酶、R-等位基因、維管組織偏愛啟動子S2A(Genbank登錄號EF030816)和S2B(Genbank登錄號EF030817)及來自玉米的組成型啟動子GOS2。其它啟動子還包括根偏愛啟動子，例如玉米NAS2啟動子、玉米Cyclo啟動子(US2006/0156439，公開于2006年7月13日)、玉米ROOTMET2啟動子(WO05063998，公開于2005年7月14日)、CRlBIO啟動子(WO06055487，公開于2006年5月26日)、CRWAQ81(WO05035770，公開于2005年4月21日)和玉米ZRP2.47啟動子(NCBI登錄號：U38790；GINo.1063664)。本發(fā)明的重組DNA構建體也可包括其它調控序列，包括但不限于翻譯前導序列、內(nèi)含子和多腺苷酸化識別序列。在特定實施方案中，重組DNA構建體還包括增強子或沉默子。內(nèi)含子序列可加至5’非翻譯區(qū)、蛋白編碼區(qū)或3’非翻譯區(qū)以增加積聚在胞漿中的成熟信息的量。已經(jīng)顯示，在植物和動物兩者的表達構建體的轉錄單位中包含可剪接內(nèi)含子可使基因表達在mRNA和蛋白質水平上均增強高達1000倍。參見Buchman和Berg，(1988)Mol.CellBiol.8：4395-4405；Callis等，(1987)GenesDev.1：1183-1200。任何植物都可以選擇用來鑒定將用于本發(fā)明重組DNA構建體的調控序列和基因。適用于分離基因和調控序列的靶植物的實例應該包括但不限于苜蓿、蘋果、杏、擬南芥、洋薊、芝麻菜、蘆筍、鱷梨、香蕉、大麥、豆類、甜菜、黑莓、藍莓、西蘭花、抱子甘藍、卷心菜、加拿大油菜、香瓜、胡蘿卜、木薯、蓖麻子、菜花、芹菜、櫻桃、菊苣、芫荽、柑桔、克萊門氏小柑橘、三葉草、椰子、咖啡、玉米、棉、蔓越莓、黃瓜、花旗松、茄子、菊苣、茅菜、桉樹、茴香、無花果、大蒜、葫蘆、葡萄、柚子樹、白蘭瓜、豆薯、獼猴桃、生菜、韭蔥、檸檬、酸橙、火炬松、亞麻子、芒果、甜瓜、蘑菇、油桃、堅果、燕麥、油棕、油菜、秋葵、橄欖樹、洋蔥、橙、觀賞植物、棕櫚、木瓜樹、歐芹、歐洲防風草、豌豆、桃樹、花生、梨樹、胡椒、柿樹、松樹、菠蘿、車前草、李樹、石榴樹、白楊、馬鈴薯、南瓜、溫柏、輻射松、紅菊苣、蘿卜、油菜、樹莓、稻、黑麥、高粱、南方松、大豆、菠菜、南瓜、草莓、甜菜、甘蔗、向日葵、甘薯、楓香樹、柑橘、茶、煙草、蕃茄、黑小麥、草皮草、蕪菁、葡萄樹、西瓜、小麥、薯蕷和西葫蘆。組合物：本發(fā)明的組合物是其基因組中包含本發(fā)明的任何重組DNA構建體(例如上面所討論的任何一種構建體)的植物。組合物還包括所述植物的任何子代，以及獲取自所述植物或其子代的任何種子，其中所述子代或種子在其基因組中包含重組DNA構建體。所述子代包括植物通過自花授粉或異型雜交而獲得的連續(xù)世代。子代也包括雜交種和自交系。在雜交種子繁殖的農(nóng)作物中，成熟的轉基因植物可自花授粉而產(chǎn)生純合的自交系植物。該自交系植物產(chǎn)生的種子含有新導入的重組DNA構建體。這些種子可生長成植物，所述植物表現(xiàn)出改變的農(nóng)學特性(如水分限制條件下增加農(nóng)業(yè)特性)，或者可用于育種程序以產(chǎn)生雜交種子，這些雜交種子可生長成植物，所述植物將會表現(xiàn)出如改變的農(nóng)學特性。所述種子可為玉米種子或水稻種子。植物可為單子葉植物或雙子葉植物，例如水稻、玉米或大豆植物，如玉米雜種植物或玉米自交系植物。植物還可為向日葵、高梁、油菜、小麥、苜蓿、棉花、大麥、粟、甘蔗或柳枝稷。重組DNA構建體可穩(wěn)定地整合進植物的基因組中。特定的實施方案包括但不限于以下實施方案：1.在其基因組中包含重組DNA構建體的轉基因植物，如水稻、玉米或大豆，所述重組DNA構建體包含一個多核苷酸和與其可操作連接至少一個調控序列，其中所述多核苷酸編碼一個多肽，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20相比，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列一致性；與對照植物相比，所述植物表現(xiàn)出增加的耐旱性和/或百草枯耐性，且所述植物進一步表現(xiàn)出至少一個改變的農(nóng)藝性狀。2.在其基因組中包含重組DNA構建體的轉基因植物，如水稻、玉米或大豆，所述重組DNA構建體包含一個多核苷酸和與其可操作連接至少一個調控序列，其中所述多核苷酸編碼一個耐旱性多肽，與對照植物相比，所述植物表現(xiàn)出增加的耐旱性和/或百草枯耐性，且所述植物進一步表現(xiàn)出至少一個改變的農(nóng)藝性狀。3.在其基因組中包含重組DNA構建體的轉基因植物，例如水稻、玉米或大豆，所述重組DNA構建體包含一個多核苷酸和與其可操作連接的至少一個調控序列，其中所述多核苷酸編碼一個耐旱性多肽，與對照植物相比，所述植物表現(xiàn)出至少一個農(nóng)藝性狀的變化。4.實施方案1-3所述的植物的任何子代植物，實施方案1-3所述的植物的任何種子，實施方案1-3所述的植物的任何子代植物的種子，和源于實施方案1-3的植物和其子代植物的細胞。前述1-4任一實施方案或其它實施方案中，所述耐旱性多肽可來自水稻(Oryzasativa)、野生稻(Oryzaaustraliensis)、短舌野生稻(Oryzabarthii)、非洲型稻(Oryzaglaberrima)、闊葉稻(Oryzalatifolia)、長雄野生稻(Oryzalongistaminata)、南方野生稻(Oryzameridionalis)、藥用野生稻(Oryzaofficinalis)、斑點野生稻(Oryzapunctata)、普通野生稻(Oryzarufipogon)(紅稻)、印度野生稻(Oryzanivara)、擬南芥(Arabidopsisthaliana)、玉米(Zeamays)、大豆(Glycinemax)、煙豆(Glycinetabacina)、野大豆(Glycinesoja)和短絨野大豆(Glycinetomentella)。前述1-4任一實施方案或其它實施方案中，重組DNA構建體包含至少一個植物中有功能的啟動子作為調控序列。前述1-4任一實施方案或其它實施方案中，至少一種農(nóng)藝性狀的變化可以是增加也可以是減少。前述1-4任一實施方案或其它實施方案中，至少一種農(nóng)藝性狀選自葉片綠色、籽粒產(chǎn)量、生長速率、生物量、成熟時的鮮重、成熟時的干重、果實產(chǎn)量、種子產(chǎn)量、植物總氮含量、果實氮含量、種子氮含量、植物營養(yǎng)組織氮含量、植物總游離氨基酸含量、果實游離氨基酸含量、種子游離氨基酸含量、植物營養(yǎng)組織游離氨基酸含量、植物總蛋白含量、果實蛋白含量、種子蛋白含量、植物營養(yǎng)組織蛋白含量、耐旱性、氮吸收能力、根倒伏、收獲指數(shù)、莖倒伏、株高、穗高、穗長、耐鹽性、分蘗數(shù)、圓錐花序大小、幼苗活力和低溫脅迫下的出苗情況。例如，至少一個農(nóng)藝性狀的改變可以是籽粒產(chǎn)量、葉綠素含量或生物量的增加。前述1-4任一實施方案或其它實施方案中，與對照植物相比，所述植物在水分限制條件下表現(xiàn)出至少一個農(nóng)藝性狀的變化。前述1-4任一實施方案或其它實施方案中，與對照植物相比，所述植物在氧化脅迫即百草枯脅迫下表現(xiàn)出至少一個農(nóng)藝性狀的變化。“干旱”指植物可用水分的減少，特別是較長時間的缺水或者在植物重要的生長階段發(fā)生，會造成植物損傷，或阻止植物的生長(限制植物的生長，降低籽粒的產(chǎn)量)?！澳秃敌浴敝父珊得{迫下能夠存活并且沒有實質性的生理或物理改變的能力，和/或一段時間干旱后復水能夠恢復的能力。多肽的“耐旱能力”表示與參照或對照植物相比，過表達該多肽可以提高轉基因植物的耐旱性能。植物“增強的耐旱性”是與參照或對照植物相比測定的，反映了植物在干旱脅迫下存活的能力，并且與參照或對照相比，具有較小的生理或物理損傷，或者干旱脅迫后復水時，恢復較快的能力?！碍h(huán)境條件”指植物生長的環(huán)境，諸如可用的水分、可用的營養(yǎng)物質或存在的昆蟲或病害?！鞍俨菘荨?1,1-二甲基-4,4-聯(lián)吡啶二氯化物)是一類葉面噴施的非選擇性的吡啶除草劑，能夠引起光氧化脅迫，并進一步造成植物的損害或者阻止植物的正常生長。“百草枯耐性”是植物的一種性狀，反映了百草枯溶液處理后，與參照或對照植物相比，植物的存活或生長良好的能力。植物“增加的百草枯耐性”是相對于參照或對照植物測定的，反映了植物在百草枯溶液處理后，與參照或對照植物相比，能夠存活并具有較小的生理或物理傷害的能力。通常，針對較低濃度的百草枯溶液的耐性用作諸如干旱脅迫的非生物脅迫耐性的一種指標。“氧化脅迫”反映了活性氧分子的生成和生物系統(tǒng)清除活性氧中間體或修復損傷的能力之間的不平衡。擾亂細胞正常的氧化還原狀態(tài)會導致產(chǎn)生過氧化氫和自由基的毒性效應，過氧化氫和自由基能夠損害包括蛋白、脂質和DNA在內(nèi)的細胞組成部件。下面的例子描述一些代表性的方法或技術用于模擬干旱條件和/或評估耐旱性；模擬氧化條件。本領域的技術人員也可以測試模擬或者自然發(fā)生的干旱條件下的植物保持足夠產(chǎn)量(至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或者100％的產(chǎn)量)的能力評估耐旱性，例如，干旱條件下產(chǎn)生與非干旱條件下相比實質相當?shù)漠a(chǎn)量；與對照或參照植物相比，干旱條件下產(chǎn)量減少較少。本發(fā)明中涉及的參數(shù)包括與對照細胞或對照植物相比的恢復度、存活率、百草枯耐性率、基因表達水平、水分利用效率、編碼蛋白的水平或活性和其它參數(shù)?！皩φ铡薄ⅰ皩φ罩参铩被颉皩φ罩参锛毎睘闇y定受測試植物或植物細胞的表型變化提供參考，由于轉化，受測植物或植物細胞的基因組改變影響到目的基因，測試的植物或植物細胞可以是轉基因植物或轉基因植物細胞的子代，并含有上述的基因的改變。本領域技術人員很容易找到適當?shù)膶φ栈騾⒄罩参?，當采用本發(fā)明描述的組合物或方法評估或測定轉基因植物一個農(nóng)藝性狀或表型時。例如，但不限于下述舉例：1.轉化植物的子代，所述轉化植物對于重組DNA構建體來說是半合子的，所述子代分離成包含或不包含該重組DNA構建體的植株：包含該重組DNA構建體的子代將通常相對于不包含該重組DNA構建體的子代來進行測量，即不包含該重組DNA構建體的子代是對照或參照植物。2.重組DNA構建體基因滲入至近交系中，例如在水稻和玉米中，或基因滲入進變種中，例如在大豆中：基因滲入品系將通常相對于親本近交系或變種品系進行測量(即，親本近交系或品種品系是對照或參照植物)。3.雙雜交系，其中第一雜交系由兩個親本近交系產(chǎn)生，而第二雜交系由相同的兩個親本近交系產(chǎn)生，不同的是其中一個親本近交系含有重組DNA構建體：第二雜交系通常將相對于第一雜交系進行測量(即第一雜交系為對照植物或參照植物)。4.包含重組DNA構建體的植物：該植株可以相對于這樣的對照植物進行評價或測量，該對照植物不包含重組DNA構建體，但具有與該植株相當?shù)倪z傳背景(例如，與包含重組DNA構建體的植株相比較，核遺傳物質具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性)。存在許多可用于分析、比較和表征植物遺傳背景的實驗室的技術；其中這些技術是同工酶電泳、限制性片段長度多態(tài)性(RFLPs)、隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPDs)、任何引物聚合成酶鏈式反應(AP-PCR)、DNA擴增指紋(DAF)、序列特異擴增區(qū)域(SCARs)、擴增片段長度多態(tài)性()和也稱為微衛(wèi)星的簡單序列重復(SSRs)。對照植物或對照植物細胞包括，例如：(a)用于基因改變產(chǎn)生受測植物或細胞的野生型植物或細胞；(b)相同基因組作為起始材料但是轉入空載體(如帶有標記基因的并對目標的性狀沒有影響的載體)的植物或植物細胞；(c)轉基因植物或植物細胞性狀分離，獲得的非轉基因的子代植物或植物細胞；(d)沒有暴露于可以誘導基因表達的條件或刺激下的，與轉基因植物或植物細胞基因組相同的植物或植物細胞；(e)特定的目標基因不表達情況下的，轉基因植物或者植物細胞本身。對照可以包括多種代表上述一種或多種類型的個體，例如，(c)中性狀分離后非轉基因的材料的混合通常認為是空白對照。本發(fā)明中，株系空白(Linenull)、空白對照(Bulknull)、ZH11-TC、和VC指對照植物。株系空白(Linenull)表示半合子轉基因水稻株系分離的相應空白，空白對照(Bulknull)表示半合子轉基因株系分離的非轉基因空白對照的混合，ZH11-TC表示通過組織培養(yǎng)中花11獲得的水稻植株，VC表示轉化空載體DP0005或DP0158獲得水稻植株。方法：方法包括但不限于：提高植物耐旱性的方法，評估植物耐旱性的方法，提高植物百草枯耐受性的方法，改變植物農(nóng)藝性狀的方法，確定植物農(nóng)藝性狀變化的方法，和生產(chǎn)種子的方法。植物可以是單子葉植物，也可以是雙子葉植物，例如水稻、玉米或大豆，植物也可以是向日葵、油菜、小麥、苜蓿、棉花、大麥、粟、甘蔗或高粱，種子是玉米或大豆種子，例如玉米雜交種子或玉米自交種子。方法包括但不限于：轉化細胞方法包括將本發(fā)明公開的任意一個或多個分離的多核苷酸轉化細胞，其中，在特定的實施方案中，所述細胞是真核細胞，如酵母、昆蟲或植物細胞；或原核細胞如細菌細胞。產(chǎn)生轉基因植物的方法包括將本發(fā)明公開的任一分離的核苷酸或重組DNA構建體轉化植物細胞和由轉化的植物細胞再生轉基因植物，其中本方法獲得轉基因植物和轉基因種子可用于本發(fā)明的其它方法。從細胞或細胞培養(yǎng)物中分離本發(fā)明的多肽的方法，其中，所述細胞包含重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包含本發(fā)明的一個多核苷酸和與其可操作連接的至少一個調控序列，所述宿主細胞在適于重組DNA構建體表達的條件下生長。改變本發(fā)明多肽在宿主細胞中表達水平的方法包括：(a)將本發(fā)明重組DNA構建體轉化宿主細胞；和(b)使轉化宿主細胞在適于重組DNA構建體表達的條件下生長，其中重組DNA構建體的表達導致轉化宿主細胞中本發(fā)明多肽含量的變化。一種提高植物耐旱性和/或百草枯耐受性的方法，包括(a)將重組DNA構建體導入到可再生的植物細胞中，所述重組DNA構建體包含一個多核苷酸和與其可操作地連接至少一種調控序列(例如在植物中有功能的啟動子)，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述所述多肽的氨基酸序列在與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20進行比較時，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列一致性；(b)在步驟(a)之后，由所述可再生的植物細胞再生轉基因植物，其中所述轉基因植物在其基因組中包含所述重組DNA構建體并且在與對照植物進行比較時表現(xiàn)出提高的耐旱性和/或百草枯耐性；和進一步的(c)獲得來源于所述轉基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因組中包含重組DNA構建體，與對照植物相比，表現(xiàn)出提高的耐旱性和/或百草枯耐性。一種評估植物耐旱性和/或百草枯耐性的方法，包括(a)獲得轉基因植物，所述轉基因植物在其基因組中包含重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包含一個多核苷酸和與其可操作連接的至少一個調控序列(如，植物中有功能的啟動子)，其中，所述多核苷酸編碼一個多肽，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20相比，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列一致性；(b)獲得源于所述轉基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因組中包含重組DNA構建體；和(c)與對照植物相比，評估子代植物的耐旱性和/或百草枯耐性。確定植物一種農(nóng)藝性狀變化的方法，包括(a)獲得轉基因植物，所述轉基因植物在其基因組中包含重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包含一個多核苷酸和與其可操作連接至少一個調控序列(如，植物中有功能的啟動子)，其中所述多核苷酸編碼的多肽的氨基酸序列與SEQIDNO：5、8、11、14、17或20相比，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列一致性；(b)獲得源于所述轉基因植物的子代植物，其中所述子代植物的基因組中包含重組DNA構建體；和(c)水分限制條件下，確定與對照植物相比，所述子代植物是否表現(xiàn)出至少一個農(nóng)藝性狀的變化。一種生產(chǎn)種子的方法包括前述的任一方法，進一步還包括從所述子代植物獲得種子，其中所述種子在其基因組中包含重組DNA構建體。在前述任一的方法或本文其它實施方案披露的任一方法中，所述引入步驟中所述再生植物細胞可包括愈傷細胞、胚胎愈傷細胞、配子細胞、分生細胞、或不成熟的胚胎細胞?？稍偕参锛毎稍从谧越挥衩字仓辍Ｔ谇笆鋈我环椒ɑ虮疚呐兜钠渌鼘嵤┓桨钢械娜我环椒ㄖ?，所述再生步驟可包括：(i)在含有胚促激素培養(yǎng)基上培養(yǎng)所述轉化的植物細胞直至長出愈傷組織；(ii)將步驟(i)所述的轉化植物細胞轉移至含有組織促激素的第一培養(yǎng)基上；和(iii)將步驟(ii)所述轉化植物細胞接種到第二培養(yǎng)基上，使其莖伸長、根發(fā)育或兩者均發(fā)育。在前述任一方法或本發(fā)明的其它實施方案的方法中，確定轉基因植物農(nóng)藝性狀的變化的步驟，如果可行，可包括在可變的環(huán)境條件下，確定與不含有重組DNA構建體的對照植物相比，所述轉基因植物是否表現(xiàn)出至少一個農(nóng)藝性狀的變化。在前述任一方法或者本發(fā)明其它實施方案的任一方法中，如果可能，確定子代植物農(nóng)藝性狀變化的步驟包括可變的環(huán)境條件下，確定與不含有重組DNA構建體的對照植物相比，所述子代植物是否表現(xiàn)出至少一個農(nóng)藝性狀的變化。在前述任一方法或者本發(fā)明其它實施方案的任一方法中，與對照植物相比，所述植物在水分限制條件下表現(xiàn)出至少一個農(nóng)藝性狀的變化。在前述任一方法或者本發(fā)明其它實施方案的任一方法中，存在將重組DNA構建體導入可再生植物的供選方案，所述重組DNA構建體包含一個多核苷酸和與其可操作連接的至少一個調控序列，例如可以將一個調控序列(如一個或多個增強子、任選的轉座子元件的一部分)導入可再生植物細胞，接著篩選帶有調控序列和與其可操作連接的編碼本發(fā)明多肽的內(nèi)源基因的轉基因事件。可以通過任何適當?shù)募夹g將本發(fā)明的重組DNA構建體導入植物中，所述技術包括但不限于直接DNA吸收、化學藥品處理、電穿孔、顯微注射、細胞融合、感染、載體介導的DNA轉移、基因槍轟擊或農(nóng)桿菌的轉化。植物轉化和再生的技術在國際專利公開號WO2009/006276中描述，其全部內(nèi)容并入作為參考。另外，也有修飾或改變宿主內(nèi)源基因組DNA的方法，包括改變宿主天然DNA序列或包括調控元件、編碼或非編碼序列等前體轉基因序列。這些方法也可以用于將核酸序列靶向到基因組中改造目標識別序列。例如本文中轉基因修飾的細胞或植物使用傳統(tǒng)的基因工程核酸酶如產(chǎn)生修飾植物基因組的歸位核酸內(nèi)切酶產(chǎn)生(例如WO2009/114321；Gao等(2010)PlantJournal1：176-187)。其它的位點定向工程是通過使用鋅指結構域識別偶聯(lián)的限制性內(nèi)切酶的限制性特點修飾內(nèi)源基因(例如Urnov等(2010)NatRevGenet.11(9)：636-46；Shukla等(2009)Nature459(7245)：437-41)。轉錄激活樣(TAL)效應因子-DNA修飾酶(transcriptionactivator-likeeffector-DNAmodifyingenzyme，TALE或TALEN)可用于基因工程修飾植物基因組，參見例如US20110145940,Cermak等(2011)NucleicAcidsRes.39(12)和Boch等(2009)，Science326(5959)：1509-12。植物基因組定點修飾也可以使用細菌II型CRISPR(成簇的規(guī)律的間隔的短回文的重復序列，clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats)/Cas(CRISPR關聯(lián)蛋白，CRISPR-associated)系統(tǒng)，參考例如Belhaj等(2013)，PlantMethods9:39.CRISPR/Cas系統(tǒng)可以允許可定制的小的非編碼RNA引導的基因組DNA靶向切割。本領域的技術人員熟悉將編碼期望多肽的外源基因轉化植物和培育再生植物的方法。再生植物可以自花授粉產(chǎn)生純合子轉基因植物，或者將再生植物的花粉與種子長出的農(nóng)藝重要的植物雜交，或者農(nóng)藝重要的植物的花粉與再生的轉基因植物雜交。本領域的技術人員熟知培育本文披露的含有期望多肽的轉基因植物的方法。實施例本文的具體實施進一步在下列實例中示明。在這些實例中，除非特別說明，采用攝氏/公制。在這些實例中，僅用舉例說明具體的實施過程。通過上述討論和具體事例，本領域的專業(yè)人員可以查明本發(fā)明的基本特征，經(jīng)過各種改變和修改將本發(fā)明應用于各種用途和條件，并不偏離本發(fā)明主體和范圍。因此，除了本專利表述和討論的各種修改外，本領域內(nèi)的專業(yè)人員所做的不偏離本發(fā)明主題的修改也將落入本專利的權力要求范圍內(nèi)。實施例1.耐旱性基因的克隆和構建體的構建根據(jù)水稻激活標簽突變體庫初步的篩選結果和表2的基因ID序列信息，設計引物，克隆了水稻非生物脅迫耐性基因OsGSTU41、OsPPCK4、OsCAM2、OsDN-DTP4、OsLecRK4.1和OsLecRK4.2。引物序列和擴增基因片段的長度如表3所示。以中花11號水稻葉、莖和根混合的cDNA庫為模板克隆OsGSTU41、OsPPCK4和OsCAM2的cDNA；以ZH11基因組DNA為模板克隆OsDN-DTP4、OsLecRK4.1和OsLecRK4.2的gDNA。PCR反應混合液和PCR程序如表4和5所示。表2.水稻基因名稱、基因ID(TIGR)和構建體ID基因名稱LOCID構建體IDOsGSTU41LOC_Os01g72160DP0043OsPPCK4LOC_Os02g56310DP0058OsCAM2LOC_Os05g41210DP0059OsDN-DTP4LOC_Os07g04720DP0167OsLecRK4.1LOC_Os04g44900DP0173OsLecRK4.2LOC_Os04g44910DP0209表3.克隆水稻耐旱性基因的引物表4.克隆耐旱性基因的PCR反應混合液表5.PCR循環(huán)狀況PCR擴增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠電泳分離后采用柱式試劑盒回收，并與TA克隆載體連接。通過測序確定PCR產(chǎn)物的核酸序列和在構建體中的方向，然后將基因克隆到植物雙元載體DP0005(pCAMBIA1300-AsRed，SEQIDNO：1)或DP0158中，DP0158為將DsRed基因表達盒(SEQIDNO：2)連接入DP0005載體后獲得的。OsGSTU41、OsPPCK4和OsCAM2基因克隆入DP0005構建體中，產(chǎn)生的過表達構建體列在表2中。DP0043構建體中克隆的核苷酸序列和OsGSTU41的編碼序列如SEQIDNO：3和4所示，OsGSTU41的氨基酸序列如SEQIDNO：5所示；DP0058構建體中克隆的核苷酸序列和OsPPCK4的編碼序列如SEQIDNO：6和7所示，OsPPCK4的氨基酸序列如SEQIDNO：8所示；DP0059構建體中克隆的核苷酸序列和OsCAM2的編碼序列如SEQIDNO：9和10所示，OsCAM2的氨基酸序列如SEQIDNO：11所示。OsDN-DTP4、OsLecRK4.1和OsLecRK4.2克隆入DP0158構建體中，DP0167構建體中克隆的核苷酸序列和OsDN-DTP4的編碼序列如SEQIDNO：12和13所示，OsDN-DTP4的氨基酸序列如SEQIDNO：14所示；DP0173構建體中克隆的核苷酸序列和OsLecRK4.1的編碼序列如SEQIDNO：15和16所示，OsLecRK4.1的氨基酸序列如SEQIDNO：17所示；和DP0209構建體中克隆的核苷酸序列和OsLecRK4.2的編碼序列如SEQIDNO：18和19所示，OsLecRK4.2的氨基酸序列如SEQIDNO：20所示。實施例2.轉化獲得轉基因水稻本研究中，所有過表達構建體和空載體(DP0005和DP0158)采用林擁軍和張啟發(fā)((2005)PlantCellRep.23：540-547)描述的農(nóng)桿菌介導的方法轉化入中花11號水稻。中花11號水稻為中國農(nóng)業(yè)科學院作物研究所培育的品種，第一批種子由北京未名凱拓農(nóng)業(yè)生物公司提供。將含有構建體的農(nóng)桿菌侵染胚誘導產(chǎn)生的愈傷組織，轉化實驗室獲得的T0代轉基因幼苗移栽至田間水田中獲得T1種子，T1和T2代種子儲藏在4℃冷庫中。OsGSTU41、OsPPCK4和OsCAM2轉基因種子在綠色熒光燈下不能顯示紅色，使用潮霉素篩選T1代轉基因植株，將生長到1-2cm高的水稻植株在50mg/L的潮霉素溶液中培養(yǎng)，存活的植株即潮霉素抗性植株種植到田間收獲T2代種子，只有潮霉素抗性的T2代轉基因種子用于性狀篩選。OsDN-DTP4、OsLecRK4.1和OsLecRK4.2轉基因種子在綠色熒光燈下顯示紅色即為轉基因種子，用于下述試驗。實施例3.基因表達分析采用標準的實時RT-PCR程序諸如源于的反轉錄試劑盒和實時RT-PCR(SYBRRPremixExTaqTM，寶生物)分析轉基因水稻植株中基因的表達水平。EF1α基因用作內(nèi)參顯示轉基因水稻和對照植物的擴增和上樣量類似。以EF1αmRNA水平為參照確定基因表達量。如圖3所示，OsGSTU41基因在DP0043.15水稻葉片中的表達量設置為1.00，OsGSTU41在所有10個測試的轉基因水稻株系中過量表達，而在ZH11-TC植株中沒有檢測到OsGSTU41基因表達，實時PCR的引物為：DP0043-3：5'-GGCTGTCGTTCTGGATGG-3'(SEQIDNO：33)DP0043-4：5'-GCAGTGAACAAGGCGACG-3'(SEQIDNO：34)如圖4所示，OsPPCK4基因在ZH11-TC水稻葉片中的表達量設置為1.00，OsPPCK4在所有轉基因株系中過量表達，而OsPPCK4基因在ZH11-TC和DP0158對照中的表達量較低。DP0058-F1：5'-GCTCTACATGATGCTCTCCG-3'(SEQIDNO：35)DP0058-R1：5'-GAGACGTCCTTGCAGAGC-3'(SEQIDNO：36)OsDN-DTP4基因在ZH11-TC水稻中的表達量設置為1.00，OsDN-DTP4基因在所有9個轉基因株系中過量表達(圖5.)。DP0167-F1：5'-CCAGTTCAGAGTACGGTGCCG-3'(SEQIDNO：37)DP0167-R1：5'-GTGTCCACGTCAGCCTCCTTTC-3'(SEQIDNO：38)OsLecRK4.1基因在ZH11-TC水稻中的表達量設置為1.00，OsLecRK4.1在所有9個轉基因水稻株系中過量表達(圖6.)。DP0173-F1：5'-CGCTCAACATCTCATCCC-3'(SEQIDNO：39)DP0173-R1：5'-CCGCATGAACACGAACAC-3'(SEQIDNO：40)如圖7所示，OsLecRK4.2基因在ZH11-TC水稻中的表達量設置為1.00，OsLecRK4.2在所有測試的轉基因株系中過量表達，而OsLecRK4.2基因在ZH11-TC植株中表達量較低。DP0209-F1：5'-CCGACGATGGTGAGCTAC-3'(SEQIDNO：41)DP0209-R1：5'-GTGACGGTGGAAGGGAAG-3'(SEQIDNO：42)實施例4.轉基因水稻植株的干旱驗證水稻幼苗的耐旱性篩選試驗在溫室中進行。溫室中設置比例為1:1的鈉燈和金屬鹵化物燈作為光源，光照/黑暗時間為16h/8h，光源設置在苗床上部大約1.5m處，晴天時，高于苗床30cm處的光強度為10,000-20,000lx，陰天時為6,000-10,000lx；溫室相對濕度為30％-90％，溫度為20-35℃。干旱驗證方法：T2轉基因種子和對照種子首先采用800ppm的多菌靈在32℃消毒8h，然后使用蒸餾水沖洗3～5次，然后32℃浸種16h，在35-37℃培養(yǎng)箱中萌發(fā)18h。發(fā)芽的種子種植在裝有有機質、蛭石和沙子(V:V:V＝3:3:2)的托盤或小盆中。幼苗在正常的溫室條件下生長，并澆灌改良的IRRI營養(yǎng)液，當幼苗生長到3-葉期時，停止?jié)菜⑺居酌绶胖迷诟稍锏奈恢?，直至水稻葉片變干和卷曲(大約9～15天，根據(jù)季節(jié)不同)，然后再將托盤放在水槽中使水稻苗復水5-7天，并計算恢復程度。應用以下的打分系統(tǒng)：大于半個綠莖＝1，大于2/3的綠葉＝1，大于1/3綠葉并低于2/3綠葉＝0.5，低于1/3綠葉＝0.2，零綠葉或綠莖＝0?；謴投仁蔷G色組織得分的總和，數(shù)據(jù)利用混合模型(MixedModel)進行統(tǒng)計分析，表現(xiàn)顯著優(yōu)于對照的水稻株系被認為是陽性株系(P＜0.05)。存活率指存活株數(shù)除以總株數(shù)的百分數(shù)，是干旱驗證的一個指標。本試驗中采用兩種實驗設計：1)采用拉丁方設計，每個株系的16株水稻種植在同一托盤的不同位置，種在同一托盤中的組織培養(yǎng)后的野生型中花11(ZH11-TC)和/或空載體轉基因轉化對照(DP0005或DP0158)用作對照，耐旱型品種綿恢501作為陽性對照、敏旱性品種東北引2號作為陰性對照種植在同一個托盤中；2)隨機區(qū)組設計用于從構建體水平驗證水稻的功能，同一構建體的9-12個轉基因株系種植在一個試驗單元中，采用混合模型(MixedModel)考慮構建體、株系和環(huán)境效應來評估基因的功能。如果轉基因水稻的存活率或恢復度顯著高于對照(P＜0.05)，則認為測試的基因具有耐旱性的功能。GH干旱試驗結果：1)OsGSTU41轉基因水稻(DP0043)的GHDRT驗證結果第一次試驗中采用拉丁方設計對10個OsGSTU41轉基因株系進行測試，不同的株系種植在不同的托盤上，同一托盤上的ZH11-TC和DP0005幼苗用作相應的對照。表6表明10個轉基因株系的存活率和恢復度高于ZH11-TC對照，6個株系的恢復度顯著高于ZH11-TC對照。8個轉基因株系的存活率和恢復度高于DP0005對照，4個株系的恢復度顯著高于DP0005對照。這些結果表明OsGSTU41轉基因水稻增強了苗期耐旱性。表6.溫室條件下OsGSTU41轉基因水稻增強耐旱性(第一次試驗)第二次試驗中采用構建體水平的實驗設計對9個轉基因株系進行測試，當生長到三葉期，水稻植株第一次干旱脅迫17天后，在水中恢復6天，隨后進行第二次干旱脅迫22天，恢復7天。如表7所示，108株OsGSTU41轉基因幼苗中，69株存活；而24株ZH11-TC植株中，9株存活；12株DP0158幼苗中，5株存活。構建體水平，OsGSTU41轉基因水稻的存活率和平均恢復度均高于ZH11-TC和DP0158對照(表7)。轉基因株系水平的分析表明8個株系的存活率和平均恢復度高于ZH11-TC和DP0158對照(表8)。這些結果表明OsGSTU41轉基因水稻增強了苗期耐旱性，OsGSTU41基因在提高轉基因植物耐旱性中發(fā)揮作用。表7.溫室條件下OsGSTU41轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，構建體水平)表8.溫室條件下OsGSTU41轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，轉基因株系水平)2)OsPPCK4轉基因水稻(DP0058)的GHDRT驗證結果第一次試驗中對12個OsPPCK4轉基因株系進行干旱脅迫測試，不同的株系種植在不同的托盤上，同一托盤上的ZH11-TC幼苗用作相應的對照。表9表明10個轉基因株系的存活率和恢復度高于ZH11-TC對照，5個株系的恢復度顯著高于ZH11-TC對照，表明OsPPCK4轉基因水稻提高了苗期耐旱性。表9.溫室條件下OsPPCK4轉基因水稻增強耐旱性(第一次試驗)第二次試驗中采用構建體水平的實驗設計對9個轉基因株系進行測試，當生長到三葉期，水稻植株干旱脅迫17天后，在水中恢復7天。108株OsPPCK4轉基因水稻植株中，49株存活；而24株ZH11-TC植株中，6株存活；12株DP0158幼苗中，只有1株存活。構建體水平，OsPPCK4轉基因水稻的存活率高于ZH11-TC和DP0158幼苗，平均恢復度顯著高于ZH11-TC和DP0158幼苗(表10)。轉基因株系水平的分析表明6個株系的存活率高于ZH11-TC和DP0158對照，9個株系的恢復度高于兩個對照(表11)。這些結果表明OsPPCK4轉基因水稻增強了苗期耐旱性，OsPPCK4基因在提高轉基因植物耐旱性中發(fā)揮作用。表10.溫室條件下OsPPCK4轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，構建體水平)表11.溫室條件下OsPPCK4轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，轉基因株系水平)3)OsCAM2轉基因水稻(DP0059)的GHDRT驗證結果第一次試驗中采用拉丁方設計對8個OsCAM2轉基因株系進行測試，不同的株系種植在不同的托盤上，同一托盤上的ZH11-TC幼苗用作相應的對照。表12表明6個轉基因株系的存活率和恢復度高于ZH11-TC對照，4個株系的恢復度顯著高于ZH11-TC對照，表明OsCAM2轉基因水稻提高了苗期耐旱性。第二次試驗中采用構建體水平的實驗設計對8個OsCAM2轉基因株系進行測試。如表13所示，干旱脅迫后，96株OsCAM2轉基因幼苗中，83株存活。構建體水平，OsCAM2轉基因水稻的存活率和恢復度高于DP0158對照(P值＝0.0679)，并顯著高于ZH11-TC對照(P值＝0.0090)。轉基因株系水平的分析表明8個株系的存活率和平均恢復度高于ZH11-TC和DP0158對照，5個株系的恢復度顯著高于ZH11-TC對照，3個株系的恢復度顯著高于DP0158對照(表14)。這些結果進一步表明OsCAM2基因增強了植物耐旱性。表12.溫室條件下OsCAM2轉基因水稻增強耐旱性(第一次試驗)表13.溫室條件下OsCAM2轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，構建體水平)表14.溫室條件下OsCAM2轉基因水稻增強耐旱性(第二次試驗，轉基因株系水平)第三次試驗中采用構建體水平的實驗設計對8個OsCAM2轉基因株系進行測試。當生長到三葉期，水稻植株干旱脅迫15天后，在水中恢復7天。96株OsCAM2轉基因水稻植株中，55株存活；而24株ZH11-TC幼苗中，4株存活；12株DP0158幼苗中，4株存活。構建體水平，OsCAM2轉基因水稻的存活率高于ZH11-TC和DP0158幼苗，平均恢復度顯著高于ZH11-TC對照(表15)。轉基因株系水平的分析表明8個株系的存活率和平均恢復度高于ZH11-TC和DP0158對照(表16)。三次試驗結果中，OsCAM2轉基因水稻顯示出增強的苗期耐旱性。這些結果表明OsCAM2基因在提高轉基因植物耐旱性中發(fā)揮作用。表15.溫室條件下OsCAM2轉基因水稻增強耐旱性(第三次試驗，構建體水平)表16.溫室條件下OsCAM2轉基因水稻增強耐旱性(第三次試驗，轉基因株系水平)4)OsDN-DTP4轉基因水稻(DP0167)的GHDRT驗證結果第一次試驗中采用拉丁方設計對12個OsDN-DTP4轉基因株系進行測試，不同的株系種植在不同的托盤上，同一托盤上的ZH11-TC幼苗用作相應的對照。表17表明8個轉基因株系的存活率和恢復度高于ZH11-TC對照，4個株系的恢復度顯著高于ZH11-TC對照。這些結果表明OsDN-DTP4轉基因水稻提高了苗期耐旱性。第二次和第三次試驗中采用構建體水平的實驗設計對9個OsDN-DTP4轉基因株系進行測試。如表18所示，第二次試驗中，構建體水平，所測試的OsDN-DTP4轉基因水稻的存活率和恢復度高于ZH11-TC和DP0158對照；轉基因株系水平的分析表明9個株系的存活率和恢復度高于ZH11-TC和DP0158對照(表19)。第三次試驗的結果表現(xiàn)出相同的趨勢(表20和21)，所測試的OsDN-DTP4轉基因水稻的恢復度高于ZH11-TC和DP0158對照。這些結果進一步表明OsDN-DTP4基因增強了植物耐旱性。表17.溫室條件下OsDN-DTP4轉基因水稻耐旱性試驗(第一次試驗)表18.溫室條件下OsDN-DTP4轉基因水稻耐旱性試驗(第二次試驗，構建體水平)表19.溫室條件下OsDN-DTP4轉基因水稻耐旱性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)表20.溫室條件下OsDN-DTP4轉基因水稻耐旱性試驗(第三次試驗，構建體水平)表21.溫室條件下OsDN-DTP4轉基因水稻耐旱性試驗(第三次試驗，轉基因株系水平)實施例5.成熟轉基因水稻的田間耐旱性試驗開花期干旱脅迫是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中嚴重的問題。轉基因水稻進一步在田間干旱條件下進行驗證。田間干旱試驗中，每個基因構建體選擇9-12個轉基因株系。T2代種子首先參照實施例4描述的方法消毒，萌發(fā)的種子種植在田間苗床上，三葉期時，將水稻幼苗移栽到田間試驗地，設置三到四個重復，每個重復每轉基因株系8-10株苗，并將三到四個重復種植在同一地塊。根據(jù)統(tǒng)計分析，同一地塊中，鄰近種植轉基因株系種植的ZH11-TC、DP0158或空白對照(BulkNull或LineNull)用作統(tǒng)計分析中的對照。水稻植株正常管理，并使用相應的殺蟲劑和化肥，幼穗期分化II期停止?jié)菜虼碎_花期時產(chǎn)生干旱脅迫，干旱時間長短取決于溫度和濕度等天氣條件。干旱期間，使用TDR30(SpectrumTechnologies，Inc.)在每塊地的不同位點每四天測定土壤相對含水量。試驗過程中，觀察并記錄植株表型，植株的表型主要包括抽穗期、卷葉程度、敏旱性和抗旱性，尤其關注中午時植株的卷葉程度。收獲時，每個株系在每行中間挑選約6株具有代表性的植株，并稱量每株水稻籽粒的重量，利用混合線性模型(mixedlinearmodel)對籽粒重量進行統(tǒng)計分析。根據(jù)分析結果選擇陽性轉基因株系。田間干旱試驗結果：1)OsGSTU41轉基因水稻(DP0043)的田間DRT驗證結果第一次試驗中，22個OsGSTU41轉基因株系在海南省進行驗證，鄰近種植的株系空白(linenull)用作相應的對照。每個株系種植10株，并設置4個重復，種在同一個地塊。幼穗分化II期斷水直至種子成熟，產(chǎn)生較嚴重的干旱脅迫，抽穗和成熟過程中土壤體積含水量從30％降到10％(圖1)。收獲時，每個株系在每行中間挑選約6株具有代表性的植株，并稱量每株水稻籽粒的重量。如表22所示，13個株系的單株籽粒產(chǎn)量高于相應的linenull，7個株系的單株籽粒產(chǎn)量顯著高于相應的linenull(P<0.05)。這些結果表明，干旱脅迫后，OsGSTU41水稻植株的單株籽粒產(chǎn)量高于對照。第二次試驗在海南省進行，對12個OsGSTU41轉基因株系進行驗證，鄰近種植的空白對照(bulknull)水稻植株用作對照，每個株系種植8株，設置三個重復。幼穗分化II期斷水直至種子成熟，產(chǎn)生較嚴重的干旱脅迫，抽穗和成熟過程中土壤體積含水量從27％降到6％(圖2)。3個轉基因株系DP0043.10、DP0043.16和DP0043.22顯示出耐旱性表型，如卷葉程度較輕和葉色較綠；4個株系DP0043.10、DP0043.16、DP0043.22、DP0043.26在成熟期顯示出較好的結實率。收獲時，每個株系在每行中間挑選約6株具有代表性的植株，并稱量每株水稻籽粒的重量。如表23所示，11個OsGSTU41轉基因水稻的單株籽粒產(chǎn)量高于bulknull對照，2個株系的單株籽粒產(chǎn)量顯著高于bulknull對照(P<0.1)。這些結果進一步表明干旱脅迫后，OsGSTU41轉基因水稻的單株籽粒產(chǎn)量高于對照。如實施例4所述，OsGSTU41轉基因水稻增強了苗期耐旱性，這些結果表明OsGSTU41基因在增強植物苗期和成熟期耐旱性中發(fā)揮作用。表22.OsGSTU41轉基因水稻在田間干旱條件下的籽粒產(chǎn)量分析(第一次試驗)表23.OsGSTU41轉基因水稻在田間干旱條件下的籽粒產(chǎn)量分析(第二次試驗)2)OsPPCK4轉基因水稻(DP0058)的田間DRT驗證結果第一次試驗中，9個OsPPCK4轉基因株系在北京進行驗證，ZH11-TC和DP0158用作對照。每個轉基因株系種植8株，并設置3個重復，種植在同一地塊中。幼穗分化II期斷水直至種子成熟，產(chǎn)生較嚴重的干旱脅迫，抽穗和成熟過程中土壤體積含水量從50％降到10％(圖8)。轉基因株系DP0058.14表現(xiàn)出耐旱性表型，如保持葉片伸展和葉色濃綠。收獲時，每個株系在每行中間挑選約6株具有代表性的植株，并稱量每株水稻籽粒的重量。如表24所示，9個株系的單株籽粒產(chǎn)量高于DP0158對照，4個株系的單株籽粒產(chǎn)量高于ZH11-TC對照。這些結果表明，干旱脅迫后，OsPPCK4水稻植株的單株籽粒產(chǎn)量高于對照。表24.OsPPCK4轉基因水稻在田間干旱條件下的籽粒產(chǎn)量分析3)OsCAM2轉基因水稻(DP0059)的田間DRT驗證結果第一次試驗中，8個OsCAM2轉基因株系在北京進行驗證，ZH11-TC和DP0158用作對照。每個轉基因株系種植8株，并設置3個重復，種植在同一地塊中。幼穗分化II期斷水直至種子成熟，產(chǎn)生較嚴重的干旱脅迫，抽穗和成熟過程中土壤體積含水量從50％降到10％(圖9)。轉基因株系DP0059.05在干旱脅迫過程中表現(xiàn)出較好的耐旱性表型，并表現(xiàn)出較好的結實率。收獲時，每個株系在每行中間挑選約6株具有代表性的植株，并稱量每株水稻籽粒的重量。如表25所示，構建體水平上，OsCAM2轉基因水稻的單株籽粒產(chǎn)量顯著高于DP0158對照；8個株系的單株籽粒產(chǎn)量高于DP0158對照，3個株系的單株籽粒產(chǎn)量高于ZH11-TC對照。這些結果表明，干旱脅迫后，OsCAM2水稻植株的單株籽粒產(chǎn)量高于對照。表25.OsCAM2轉基因水稻在田間干旱條件下的籽粒產(chǎn)量分析(第一次試驗)第二次試驗中，同樣的8個OsCAM2轉基因株系在海南省進行驗證，ZH11-TC和DP0158用作對照。每個轉基因株系種植10株，并設置4個重復。幼穗分化II期斷水直至種子成熟，產(chǎn)生較嚴重的干旱脅迫，抽穗和成熟過程中土壤體積含水量從35％降到5％(圖10)。5個轉基因株系DP0059.04、DP0059.05、DP0059.09、DP0059.11和DP0059.14表現(xiàn)出耐旱性表型，卷葉程度比對照輕和葉色比對照更綠。收獲時，OsCAM2轉基因水稻沒有表現(xiàn)出較高的單株籽粒產(chǎn)量，只有2個株系的單株籽粒產(chǎn)量較高(表26)。這些結果表明，OsCAM2過表達轉基因水稻植株獲得了苗期耐旱性，過量表達OsCAM2基因提高了植物耐旱性。表26.OsCAM2轉基因水稻在田間干旱條件下的籽粒產(chǎn)量分析(第二次試驗)4)OsLecRK4.1轉基因水稻(DP0173)的田間DRT驗證結果第一次試驗中，對12個OsLecRK4.1轉基因株系進行驗證，ZH11-TC和DP0158水稻植株用作對照。每個轉基因株系種植10株，并設置4個重復，種植在同一地塊中。幼穗分化II期斷水直至種子成熟，產(chǎn)生較嚴重的干旱脅迫，抽穗和成熟過程中土壤體積含水量從40％降到5％(圖11)。4個轉基因株系DP0173.01、DP0173.04、DP0173.08和DP0173.14比鄰近種植的ZH11-TC和DP0158對照葉色更綠，卷葉程度較輕。DP0173.04在成熟期還表現(xiàn)出較好的結實率。構建體水平上，OsLecRK4.1轉基因水稻的單株籽粒產(chǎn)量低于ZH11-TC對照但高于DP0158對照；表27為轉基因株系水平的分析。這些結果表明，OsLecRK4.1轉基因水稻植株提高了苗期耐旱性，并提高了的干旱脅迫后單株籽粒產(chǎn)量。表27.OsLecRK4.1轉基因水稻在田間干旱條件下的籽粒產(chǎn)量分析5)OsLecRK4.2轉基因水稻(DP0209)的田間DRT驗證結果第一次試驗中，對12個OsLecRK4.2轉基因株系進行驗證，ZH11-TC和DP0158水稻植株用作對照。每個轉基因株系種植10株，并設置4個重復，種植在同一地塊中。幼穗分化II期斷水直至種子成熟，產(chǎn)生較嚴重的干旱脅迫，抽穗和成熟過程中土壤體積含水量從35％降到5％(圖12)。4個轉基因株系DP0209.13、DP0209.26、DP0209.28和DP0209.34比鄰近種植的ZH11-TC和DP0158對照葉色更綠，卷葉程度較輕。DP0209.34在成熟期還表現(xiàn)出較好的結實率。構建體水平上，OsLecRK4.2轉基因水稻的單株籽粒產(chǎn)量低于ZH11-TC和DP0158對照；表28為轉基因株系水平的分析。這些結果表明，OsLecRK4.2轉基因水稻植株在干旱脅迫后提高了苗期耐旱性。表28.OsLecRK4.2轉基因水稻在田間干旱條件下的籽粒產(chǎn)量分析實施例6.轉基因水稻植株的實驗室百草枯試驗百草枯(1,1-二甲基-4,4-聯(lián)吡啶二氯化物)是一類葉面噴施的非選擇性的吡啶除草劑，是世界范圍內(nèi)廣泛應用一種除草劑，能夠控制大量作物如玉米、水稻、大豆等中生長的雜草。在植物細胞中，百草枯主要靶向葉綠體，百草枯通過接受光系統(tǒng)I的電子，然后與氧氣發(fā)生化學反應生成過氧化物和過氧化氫，而過氧化物和過氧化氫可以導致產(chǎn)生光氧化脅迫。干旱脅迫通常導致植物中產(chǎn)生活性氧(ROS)，有時，植物的耐旱性與增強的抗活性氧能力相關。百草枯是強有力的氧化脅迫誘導劑，能夠大大的增加活性氧(ROS)的產(chǎn)生，同時抑制抗氧化系統(tǒng)活性所需的的還原物和化合物的再生。非生物脅迫增加了ROS的產(chǎn)生，而植物響應耐性到死亡的范圍取決于脅迫力度和與其相關的ROS水平。相對較低水平的百草枯能夠模擬脅迫相關的ROS產(chǎn)生，并用作植物脅迫生物學中脅迫耐性的標記(HasaneenM.N.A.(2012)Herbicide-Properties,SynthesisandControlofWeedsbook)。因此，進一步采用百草枯驗證耐旱性的轉基因水稻。百草枯試驗方法：每個構建體的水稻選擇8-10個轉基因株系用于百草枯試驗，組培中花11(ZH11-TC)和空載體轉化植株DP0158用作對照。T2代種子參照實施例4描述的方法消毒和萌發(fā)。百草枯試驗在溫度28-30℃，濕度30％的生長室中進行。萌發(fā)的種子放置在底部有孔的離心管中，采用水稻水培方法，培養(yǎng)5天，至一葉一心期；然后選擇高度大約3.5～4cm的一致的幼苗用于百草枯試驗。本實驗采用隨機區(qū)組設計，在同一個篩選水槽內(nèi)設置5個區(qū)組；區(qū)組內(nèi)包含所有測試的8-10個轉基因株系、ZH11-TC和DP0158；區(qū)組的行列為16*12，每一行為一份測試材料，故每個轉基因株系在區(qū)組內(nèi)各12株，對照ZH11-TC和DP0158在區(qū)組內(nèi)各3行；區(qū)組內(nèi)的所有轉基因株系和對照均隨機排布。幼苗用終濃度為0.8μM的百草枯溶液進行處理7天，光周期為10h黑暗/14h光照，每兩天更換一次溶液，在處理和更換溶液后，保證幼苗首先進入光周期的黑暗時期。處理7天后，計算綠色的幼苗。綠色沒有損傷的幼苗為百草枯耐性幼苗；葉片、莖部變白褪色的幼苗為非百草枯耐性的幼苗。耐性率是百草枯試驗的一個指標，指保持綠色并顯示百草枯耐性表型的幼苗數(shù)除以總幼苗數(shù)的百分數(shù)。試驗數(shù)據(jù)在構建體水平(所有的轉基因幼苗與對照幼苗相比)和轉基因株系水平(不同的轉基因株系與對照相比)進行分析，采用的統(tǒng)計模型為“Y～seg+line(seg)+rep+error”，隨機效應為“rep”，統(tǒng)計方法是“PROCGLIMMIX”。百草枯試驗結果：1)OsGSTU41轉基因水稻(DP0043)的百草枯驗證結果第一次試驗中，0.8μM百草枯溶液處理7天后，540株OsGSTU41轉基因幼苗中，231株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而240株ZH11-TC幼苗中，48株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，55株顯示百草枯耐性表型。OsGSTU41轉基因幼苗的百草枯耐性率為43％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為20％和31％。OsGSTU41轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0000)和DP0158(P值＝0.0087)對照。0.8μM百草枯溶液處理后，與ZH11-TC和DP0158幼苗相比，OsGSTU41轉基因幼苗生長的更好，這些結果表明OsGSTU41轉基因幼苗在構建體水平顯示出高于ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性。表29為進一步在轉基因株系水平的分析，表明8個OsGSTU41轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC對照，且其中5個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC對照；5個株系的百草枯耐性率高于DP0158對照，其中4個株系的百草枯耐性率顯著高于DP0158對照。這些結果表明，過量表達OsGSTU41基因提高了轉基因植物百草枯耐性或抗氧化能力。表29.OsGSTU41轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系水平)第二次試驗中，0.8μM百草枯溶液處理7天后，600株OsGSTU41轉基因幼苗中，372株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而180株ZH11-TC幼苗中，86株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，73株顯示百草枯耐性表型。OsGSTU41轉基因幼苗的百草枯耐性率為62％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為48％和41％。OsGSTU41轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0008)和DP0158(P值＝0.0000)對照。轉基因株系水平的分析，表明9個OsGSTU41轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158對照，且其中5個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC對照，8個株系的百草枯耐性率顯著高于DP0158對照(表30)。這些結果進一步表明，OsGSTU41轉基因水稻增強了百草枯耐性，過量表達OsGSTU41基因提高了轉基因植物百草枯耐性或抗氧化能力。如實施例4和5所述，過量表達OsGSTU41基因提高了水稻植株在苗期和成熟期的耐旱性，這些交叉驗證進一步證明OsGSTU41基因在提高植物抗氧化能力并進一步提高耐旱性中發(fā)揮作用。表30.OsGSTU41轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)2)OsPPCK4轉基因水稻(DP0058)的百草枯驗證結果第一次試驗中，0.8μM百草枯溶液處理7天后，600株OsPPCK4轉基因幼苗中，380株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而180株ZH11-TC幼苗中，76株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，65株顯示百草枯耐性表型。OsPPCK4轉基因幼苗的百草枯耐性率為63％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為42％和36％。OsPPCK4轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0000)和DP0158(P值＝0.0000)對照。與ZH11-TC和DP0158幼苗相比，OsPPCK4轉基因幼苗生長的更好，這些結果表明OsPPCK4轉基因幼苗在構建體水平顯示出高于ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性。表31為進一步在轉基因株系水平的分析，9個OsPPCK4轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158對照，其中6個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC和DP0158對照，這些結果表明，與ZH11-TC和DP0158兩個對照相比，OsPPCK4轉基因水稻在構建體水平和轉基因株系水平均提高了幼苗的百草枯耐性。表31.OsPPCK4轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系水平)第二次試驗中，0.8μM百草枯溶液處理7天后，540株OsPPCK4轉基因幼苗中，265株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而240株ZH11-TC幼苗中，88株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，75株顯示百草枯耐性表型。OsPPCK4轉基因幼苗的百草枯耐性率為49％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為37％和42％。構建體水平上，OsPPCK4轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0030)和并高于DP0158(P值＝0.1075)對照。這些結果表明OsPPCK4轉基因幼苗在構建體水平顯示增強的百草枯耐性。轉基因株系水平的分析表明5個OsPPCK4轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158對照(表32)，其中5個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC，和4個株系的百草枯耐性率顯著高于DP0158對照。這些結果表明，與ZH11-TC和DP0158兩個對照相比，OsPPCK4轉基因水稻在構建體水平和轉基因株系水平均提高了幼苗的百草枯耐性。表32.OsPPCK4轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)第三次試驗中，0.8μM百草枯溶液處理7天后，540株OsPPCK4轉基因幼苗中，290株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而180株ZH11-TC幼苗中，77株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，89株顯示百草枯耐性表型。OsPPCK4轉基因幼苗的百草枯耐性率為54％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為43％和49％。構建體水平上，OsPPCK4轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0086)和并高于DP0158(P值＝0.2236)對照。轉基因株系水平的分析表明6個OsPPCK4轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158對照(表33)，其中4個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC，和2個株系的百草枯耐性率顯著高于DP0158對照。這些結果表明，與ZH11-TC和DP0158兩個對照相比，OsPPCK4轉基因水稻在構建體水平和轉基因株系水平均提高了幼苗的百草枯耐性，過量表達OsPPCK4基因增強了轉基因植物的百草枯耐性或抗氧化能力。表33.OsPPCK4轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第三次試驗，轉基因株系水平)如實施例4或5所示，過量表達OsPPCK4基因提高了轉基因水稻的耐旱性，三個不同試驗的交叉驗證證明OsPPCK4基因提高了植物的耐旱性。3)OsCAM2轉基因水稻(DP0059)的百草枯驗證結果第一次試驗中，百草枯溶液處理后，480株OsCAM2轉基因幼苗中，341株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而300株ZH11-TC幼苗中，165株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，71株顯示百草枯耐性表型。OsCAM2轉基因幼苗的百草枯耐性率為71％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為55％和39％。構建體水平上，OsCAM2轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0000)和DP0158(P值＝0.0000)對照。百草枯溶液處理后，與ZH11-TC和DP0158幼苗相比，OsCAM2轉基因幼苗生長的更好，這些結果表明OsCAM2轉基因幼苗在構建體水平顯示出高于ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性。表34為轉基因株系水平的分析，8個OsCAM2轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158幼苗，其中8個株系的百草枯耐性率顯著高于DP0158對照，這些結果進一步表明，過量表達OsCAM2基因增強轉基因植物在構建體水平和轉基因株系水平的苗期百草枯耐性。表34.OsCAM2轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系水平)第二次試驗中，百草枯溶液處理后，480株OsCAM2轉基因幼苗中，287株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而300株ZH11-TC幼苗中，134株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，75株顯示百草枯耐性表型。OsCAM2轉基因幼苗的百草枯耐性率為60％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為45％和42％。構建體水平上，OsCAM2轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0000)和DP0158(P值＝0.0000)對照。表35為轉基因株系水平的分析，5個OsCAM2轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158幼苗，其中4個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC和DP0158對照，這些結果進一步表明，OsCAM2轉基因水稻顯示出較好的百草枯耐性和/或抗氧化能力，過量表達OsCAM2基因增強轉基因植物在構建體水平和轉基因株系水平的苗期百草枯耐性。如實施例4和5所述，過量表達OsCAM2基因提高了轉基因植物的耐旱性，兩個不同試驗的交叉驗證表明OsCAM2基因提高了植物的耐旱性。表35.OsCAM2轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)4)OsDN-DTP4轉基因水稻(DP0167)的百草枯驗證結果第一次試驗中，所有測試的OsDN-DTP4轉基因幼苗在構建體水平的分析表明，600株OsDN-DTP4轉基因幼苗中，486株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而180株ZH11-TC幼苗中，101株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，71株顯示百草枯耐性表型。OsDN-DTP4轉基因幼苗的百草枯耐性率為81％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為56％和39％。構建體水平上，所測試的OsDN-DTP4轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0000)和DP0158(P值＝0.0000)對照。這些結果表明0.8μM百草枯溶液處理后，與ZH11-TC或DP0158幼苗相比，OsDN-DTP4轉基因幼苗生長的更好，并顯示出增強的百草枯耐性。進一步在轉基因株系水平的分析表明所有10個OsDN-DTP4轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158對照，其中9個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC對照，10個株系的百草枯耐性率顯著高于DP0158對照(表36)。這些結果表明，與ZH11-TC和DP0158兩個對照相比，OsDN-DTP4轉基因水稻在構建體水平和轉基因株系水平均提高了幼苗的百草枯耐性。表36.OsDN-DTP4轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系水平)第二次試驗中，百草枯溶液處理后，600株OsDN-DTP4轉基因幼苗中，366株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而180株ZH11-TC幼苗中，63株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，98株顯示百草枯耐性表型。OsDN-DTP4轉基因幼苗的百草枯耐性率為61％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為35％和54％。所測試的OsDN-DTP4轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0000)和DP0158(P值＝0.0491)對照。這些結果表明，與ZH11-TC或DP0158幼苗相比，OsDN-DTP4轉基因幼苗生長的更好，并顯示出增強的百草枯耐性。在構建體水平顯示出高于ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性。轉基因株系水平的分析表明8個OsDN-DTP4轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158對照，其中8個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC對照，2個株系的百草枯耐性率顯著高于DP0158對照(表37)。這些結果進一步表明，OsDN-DTP4轉基因水稻提高了苗期百草枯耐性和/或抗氧化能力，過量表達OsDN-DTP4基因提高了轉基因植物百草枯耐性或抗氧化能力。如實施例4所述，過量表達OsDN-DTP4基因提高了轉基因植物的耐旱性，兩個不同試驗的交叉驗證表明，過量表達OsDN-DTP4基因提高植物的耐旱性。表37.OsDN-DTP4轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)5)OsLecRK4.1轉基因水稻(DP0173)的百草枯驗證結果第一次試驗中，百草枯溶液處理后，600株OsLecRK4.1轉基因幼苗中，462株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而180株ZH11-TC幼苗中，99株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，95株顯示百草枯耐性表型。OsLecRK4.1轉基因幼苗的百草枯耐性率為77％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為55％和53％。OsLecRK4.1轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0000)和DP0158(P值＝0.0000)對照。百草枯溶液處理后，與ZH11-TC或DP0158幼苗相比，OsLecRK4.1轉基因水稻生長的較好，這些結果表明OsLecRK4.1轉基因幼苗在構建體水平顯示出高于ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性。如表38所示，轉基因株系水平，9個OsLecRK4.1轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158對照，其中7個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC對照，8個株系的百草枯耐性率顯著高于DP0158對照。這些結果進一步表明，過量表達OsLecRK4.1基因提高了轉基因水稻的百草枯耐性或抗氧化能力。表38.OsLecRK4.1轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系水平)第二次試驗中，百草枯溶液處理后，600株OsLecRK4.1轉基因幼苗中，425株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而180株ZH11-TC幼苗中，103株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，108株顯示百草枯耐性表型。OsLecRK4.1轉基因幼苗的百草枯耐性率為71％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為57％和60％。OsLecRK4.1轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0002)和DP0158(P值＝0.0020)對照。轉基因株系水平的分析表明9個OsLecRK4.1轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158對照，其中，4個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC對照，3個株系的百草枯耐性率顯著高于DP0158對照(表39)。這些結果進一步表明，過量表達OsLecRK4.1基因提高了轉基因水稻的百草枯耐性或抗氧化能力。如實施例5所述，過量表達OsLecRK4.1基因提高了轉基因水稻的耐旱性，兩個不同試驗的交叉驗證表明OsLecRK4.1基因在提高植物耐旱性中發(fā)揮作用。表39.OsLecRK4.1轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)6)OsLecRK4.2轉基因水稻(DP0209)的百草枯驗證結果第一次試驗中，將600株OsLecRK4.2轉基因幼苗作為整體在構建體水平分析，600株OsLecRK4.2轉基因幼苗中，221株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而180株ZH11-TC幼苗中，30株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，29株顯示百草枯耐性表型。OsLecRK4.2轉基因幼苗的百草枯耐性率為37％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為17％和16％。構建體水平上，OsLecRK4.2轉基因幼苗的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0000)和DP0158(P值＝0.0000)對照。這些結果表明OsLecRK4.2轉基因幼苗在構建體水平顯示出增強的百草枯耐性，0.8μM百草枯溶液處理后，與ZH11-TC和DP0158幼苗相比，OsLecRK4.2轉基因幼苗生長的更好。轉基因株系水平的分析表明9個OsLecRK4.2轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158對照，其中8個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC和DP0158對照(表40)。這些結果表明，與ZH11-TC和DP0158兩個對照相比，OsLecRK4.2轉基因水稻在構建體水平和轉基因株系水平均提高了幼苗的百草枯耐性，過量表達OsLecRK4.2基因提高了轉基因植物百草枯耐性或抗氧化能力。表40.OsLecRK4.2轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第一次試驗，轉基因株系水平)第二次試驗中，600株OsLecRK4.2轉基因幼苗中，351株保持綠色并顯示出百草枯耐性表型；而180株ZH11-TC幼苗中，66株具有百草枯耐性表型；180株DP0158幼苗中，85株顯示百草枯耐性表型。OsLecRK4.2轉基因幼苗的百草枯耐性率為59％，ZH11-TC和DP0158幼苗的百草枯耐性率分別為37％和47％。構建體水平上，OsLecRK4.2轉基因幼苗的耐性率顯著高于ZH11-TC(P值＝0.0000)和DP0158(P值＝0.0080)對照。這些結果表明OsLecRK4.2轉基因幼苗在構建體水平顯示增強的百草枯耐性。轉基因株系水平的分析表明8個OsLecRK4.2轉基因株系的百草枯耐性率高于ZH11-TC和DP0158對照，其中8個株系的百草枯耐性率顯著高于ZH11-TC對照，5個株系的百草枯耐性率顯著高于DP0158對照(表41)。這些結果進一步表明，OsLecRK4.2轉基因水稻提高了幼苗的百草枯耐性，過量表達OsLecRK4.2基因提高了轉基因植物百草枯耐性或抗氧化能力。如實施例5所示，過量表達OsLecRK4.2基因提高了轉基因水稻的耐旱性，兩個不同試驗的交叉驗證證實OsLecRK4.2基因能夠提高植物的耐旱性。表41.OsLecRK4.2轉基因水稻的百草枯耐性試驗(第二次試驗，轉基因株系水平)實施例7.水稻耐旱基因轉化玉米并評估在玉米中的抗旱性將水稻耐旱性基因或者玉米、擬南芥或其它物種中的相應的同源基因轉化玉米植株，并使基因過量表達，以組成型的啟動子如玉米泛素啟動子(Christensen等(1989)PlantMol.Biol.12：619-632和Christensen等(1992)PlantMol.Biol.18：675-689)或諸如脅迫響應啟動子或組織偏愛啟動子的其它啟動子驅動玉米轉化載體中基因的表達，采用微粒轟擊法(國際專利公布WO2009/006276)將構建的重組DNA載體轉化玉米細胞，也可以以采用農(nóng)桿菌介導法(Zhao等，Meth.Mol.Biol.318：315-323(2006)和Zhao等，Mol.Breed.8：323-333(2001)和美國專利號5,981,840，1999年11月9日公布)轉化玉米植株。農(nóng)桿菌介導轉化的過程包括細菌的接種、共培養(yǎng)、靜止、篩選和植株的再生。再生植株的子代如T1代植株可以種在土壤中進行干旱脅迫，采用圖像分析，測量干旱脅迫前和干旱脅迫過程中多個時期點植株面積、體積、生長速率和葉片顏色。與對照相比，明顯延遲脅迫期間植株的萎蔫，葉面積的減小，黃色素積累的減少，和/或促進生長速率的增加被認為GLR基因提高玉米的耐旱性能。實施例8.轉化玉米株系衍生的GaspeFlint并評價其在玉米中的功能如實施例7所述，可以轉化玉米使其過表達水稻的GLR基因或者其它物種的同源基因。在某些情況下，具有短生活周期(快速循環(huán))、小株型和高轉化潛力的玉米(Tomes等，美國專利7,928,287)也可以成為植物受體細胞。以玉米胚作為受體，轉化獲得的轉基因玉米(T0)群體，然后將轉基因玉米按照優(yōu)化的隨機分組設計種植在條件可控的溫室中減小或消除環(huán)境誤差，比如每個重復30株包括24株轉化獲得植株和6株對照植株種植在盆中排成一排擺放在溫室中的苗床上，每個對照或試驗植株隨機擺在不同設計的位置，一個實驗的多個重復組種植在同一溫室中，根據(jù)最小化空間需求量和環(huán)境效應來確定溫室中重復組的排列，這樣的排列可以被認為是壓縮的溫室排列。在研究過程中，轉基因庫中每一個植株都會被識別和追蹤調查，植物上采集的數(shù)據(jù)自動與植株相關連，因此采集的數(shù)據(jù)可以與轉化植株中基因相關聯(lián)，比如每一個植物容器有可機讀的標簽(如通用產(chǎn)品碼(UPC)條形碼)包括植物身份信息，并與溫室的位置相互關聯(lián)，因此采集的數(shù)據(jù)自動與植物相關聯(lián)。本研究中可以利用任何有效，機器可讀的植物識別系統(tǒng)如二維矩陣碼或射頻識別標簽(RFID)收到的數(shù)據(jù)，并用無線電頻率接收器/數(shù)據(jù)處理器(美國專利7,403,855和7,702,462)翻譯。對照和T0代溫室植株用于目標農(nóng)藝性狀的分析，每個植株農(nóng)藝數(shù)據(jù)會被記錄或以一定的方式保存，并因此與植物的識別信息相關聯(lián)。T1代植株采用前述類似的實驗設計確認植株的表型(基因效應)。實施例9.水稻耐旱基因轉化的擬南芥的實驗室干旱驗證為了驗證水稻耐旱性基因是否提高雙子葉植物的耐旱性或其它性狀，采用農(nóng)桿菌介導的花浸轉化法將水稻耐旱性基因過表達載體轉化擬南芥(Cloumbia)，并鑒定轉基因擬南芥(Clough,S.T.和Bent,A.F.(1998)ThePlantJournal16，735–743；Zhang,X.等(2006)NatureProtocols1：641-646)。一個稱為pBC-yellow的16.8-kbT-DNA雙元載體用于本試驗。該載體包含一個RD29a啟動子驅動ZS-Yellow基因表達，ZS-Yellow基因賦予轉化種子黃色熒光。參照實施例1描述的方法克隆水稻耐旱基因，并構建gateway載體；隨后采用INVITROGENTM的技術，一個LR重組反應在含有定向克隆的PCR產(chǎn)物的進入克隆和pBC-yellow載體之間進行，獲得過表達載體。T2代種子用于實驗室干旱試驗，擬南芥的干旱試驗是一種基于土壤的水分限制試驗，在生長室中進行，光照強度為145μMol，溫度22℃白天/20℃夜晚，濕度為60％。轉基因種子采用COPASTM(復雜對象的參數(shù)分析和分選機、種子分選機，UnionBiometrica)分離，然后層積放置在0.1％的瓊脂溶液中，4℃放置3天。野生型擬南芥用作對照，按照上述方法打破休眠。36株過表達擬南芥和36株野生型等距種植，并成“Z”字型排布。土壤的成分為3份泥煤苔、2份蛭石和1份珍珠巖，除此之外，肥料和殺真菌劑以下述的濃度添加在土壤中：NPK(氮磷鉀)-1m/kg土壤、微量營養(yǎng)物-0.5g/kg土壤、殺真菌劑-0.5g/kg土壤。間苗后，每盆中有9株擬南芥，一個平盤中有72株擬南芥，前12天正常澆水，最后以1L去離子水使擬南芥的土壤飽和30min，多余的水分完全流出。種子萌發(fā)后28天到36天，采用成像儀使植株成像，并分析成像數(shù)據(jù)。種子種植后的第二天開始每天轉動平盤直至成像的最后一天。成像系統(tǒng)產(chǎn)生的文件轉變成XLS文件，并轉換成Stan’s格式，發(fā)送給ESL產(chǎn)生每個試驗株系的Stan’s分數(shù)。干旱條件下?lián)p害或萎蔫的速率用作測試參數(shù)，截止點分數(shù)＝1.5。序列表<110>先鋒海外公司<120>非生物脅迫條件下改良農(nóng)藝性狀的植物和方法<130>RTS14370S<150>PCT/CN2014/081601<151>2014-07-03<160>42<170>PatentInversion3.5<210>1<211>10952<212>DNA<213>合成序列<220><223>DP0005載體的核苷酸序列<400>1gaattctctagtcccgatctagtaacatagatgacaccgcgcgcgataatttatcctagt60ttgcgcgctatattttgttttctatcgcgtattaaatgtataattgcgggactctaatca120taaaaacccatctcataaataacgtcatgcattacatgttaattattacatgcttaacgt180aattcaacagaaattatatgataatcatcgcaagaccggcaacaggattcaatcttaaga240aacgcggccgcttcagttgtggcccagcttggaggtcgactcgcgaggatcctctagtcc300cgatctagtaacatagatgacaccgcgcgcgataatttatcctagtttgcgcgctatatt360ttgttttctatcgcgtattaaatgtataattgcgggactctaatcataaaaacccatctc420ataaataacgtcatgcattacatgttaattattacatgcttaacgtaattcaacagaaat480tatatgataatcatcgcaagaccggcaacaggattcaatcttaagaaacgcggccgcttc540agttgtggcccagcttggagggggcggcgtcgcagtagcggcccacggcggcctcgtact600gcttgtagcacttgcccttctccacctcctccaggatctcgatgcggtggtcctcgaagt660ggaagccgggcatcttcagggcggaggcgggcttcttggagcggtaggtggtgtgcaggt720ggcaggtcaggtggcgaccgccggggcactccagggccatcagggactggccgcgcagca780cgccgtccacctcgtacacgatctcggtggagggctcccagcggccggccttgttctgca840tcacggggccgtcggcggggaagttgttgcccaggatcttcaccttgtacaccaggcagt900cgccgtccagggaggtgtcctggtgggcggtcaggaagccgccgtcctcgtaggtggtgg960tgcgctcccaggtgaagccctcggggagggactgcttgaagtagtcggggatgccggaca1020cgtacttgatgaaggccttggagccgtacatgcaggaggtggacaggatgtggaaggcga1080agggcagggggccgccctcgatcacctcgatcttcatctcctgggtgccctccagggggt1140tgccctcgcccttgccggtgcacttgaagtagtggccgttcacggtgccctcgatggtgg1200tcctgaagggcatggtcttcttcagcaaagaggccatggtggcgaccggtaccagatctc1260tgcagagagatagatttgtagagagagactggtgatttcagcgtgtcctctccaaatgaa1320atgaacttccttatatagaggaagggtcttgcgaaggatagtgggattgtgcgtcatccc1380ttacgtcagtggagatatcacatcaatccacttgctttgaagacgtggttggaacgtctt1440ctttttccacgatgctcctcgtgggtgggggtccatctttgggaccactgtcggcagagg1500catcttgaacgatagcctttcctttatcgcaatgatggcatttgtaggtgccaccttcct1560tttctactgtccttttgatgaagtgacagatagctgggcaatggaatccgaggaggtttc1620ccgatattaccctttgttgaaaagtctcaatagccctttggtcttctgagactgtatctt1680tgatattcttggagtagacgagagtgtcgtgctccaccatgttcacatcaatccacttgc1740tttgaagacgtggttggaacgtcttctttttccacgatgctcctcgtgggtgggggtcca1800tctttgggaccactgtcggcagaggcatcttgaacgatagcctttcctttatcgcaatga1860tggcatttgtaggtgccaccttccttttctactgtccttttgatgaagtgacagatagct1920gggcaatggaatccgaggaggtttcccgatattaccctttgttgaaaagtctcaatagcc1980ctttggtcttctgagactgtatctttgatattcttggagtagacgagagtgtcgtgctcc2040accatgttgccaagctgctctaagcttggcactggccgtcgttttacaacgtcgtgactg2100ggaaaaccctggcgttacccaacttaatcgccttgcagcacatccccctttcgccagctg2160gcgtaatagcgaagaggcccgcaccgatcgcccttcccaacagttgcgcagcctgaatgg2220cgaatgctagagcagcttgagcttggatcagattgtcgttactatcagtgtttgacagga2280tatattggcgggtaaacctaagagaaaagagcgtttattagaataacggatatttaaaag2340ggcgtgaaaaggtttatccgttcgtccatttgtatgtgcatgccaaccacagggttcccc2400tcgggatcaaagtactttgatccaacccctccgctgctatagtgcagtcggcttctgacg2460ttcagtgcagccgtcttctgaaaacgacatgtcgcacaagtcctaagttacgcgacaggc2520tgccgccctgcccttttcctggcgttttcttgtcgcgtgttttagtcgcataaagtagaa2580tacttgcgactagaaccggagacattacgccatgaacaagagcgccgccgctggcctgct2640gggctatgcccgcgtcagcaccgacgaccaggacttgaccaaccaacgggccgaactgca2700cgcggccggctgcaccaagctgttttccgagaagatcaccggcaccaggcgcgaccgccc2760ggagctggccaggatgcttgaccacctacgccctggcgacgttgtgacagtgaccaggct2820agaccgcctggcccgcagcacccgcgacctactggacattgccgagcgcatccaggaggc2880cggcgcgggcctgcgtagcctggcagagccgtgggccgacaccaccacgccggccggccg2940catggtgttgaccgtgttcgccggcattgccgagttcgagcgttccctaatcatcgaccg3000cacccggagcgggcgcgaggccgccaaggcccgaggcgtgaagtttggcccccgccctac3060cctcaccccggcacagatcgcgcacgcccgcgagctgatcgaccaggaaggccgcaccgt3120gaaagaggcggctgcactgcttggcgtgcatcgctcgaccctgtaccgcgcacttgagcg3180cagcgaggaagtgacgcccaccgaggccaggcggcgcggtgccttccgtgaggacgcatt3240gaccgaggccgacgccctggcggccgccgagaatgaacgccaagaggaacaagcatgaaa3300ccgcaccaggacggccaggacgaaccgtttttcattaccgaagagatcgaggcggagatg3360atcgcggccgggtacgtgttcgagccgcccgcgcacgtctcaaccgtgcggctgcatgaa3420atcctggccggtttgtctgatgccaagctggcggcctggccggccagcttggccgctgaa3480gaaaccgagcgccgccgtctaaaaaggtgatgtgtatttgagtaaaacagcttgcgtcat3540gcggtcgctgcgtatatgatgcgatgagtaaataaacaaatacgcaaggggaacgcatga3600aggttatcgctgtacttaaccagaaaggcgggtcaggcaagacgaccatcgcaacccatc3660tagcccgcgccctgcaactcgccggggccgatgttctgttagtcgattccgatccccagg3720gcagtgcccgcgattgggcggccgtgcgggaagatcaaccgctaaccgttgtcggcatcg3780accgcccgacgattgaccgcgacgtgaaggccatcggccggcgcgacttcgtagtgatcg3840acggagcgccccaggcggcggacttggctgtgtccgcgatcaaggcagccgacttcgtgc3900tgattccggtgcagccaagcccttacgacatatgggccaccgccgacctggtggagctgg3960ttaagcagcgcattgaggtcacggatggaaggctacaagcggcctttgtcgtgtcgcggg4020cgatcaaaggcacgcgcatcggcggtgaggttgccgaggcgctggccgggtacgagctgc4080ccattcttgagtcccgtatcacgcagcgcgtgagctacccaggcactgccgccgccggca4140caaccgttcttgaatcagaacccgagggcgacgctgcccgcgaggtccaggcgctggccg4200ctgaaattaaatcaaaactcatttgagttaatgaggtaaagagaaaatgagcaaaagcac4260aaacacgctaagtgccggccgtccgagcgcacgcagcagcaaggctgcaacgttggccag4320cctggcagacacgccagccatgaagcgggtcaactttcagttgccgg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