本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及用動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備金銀花單體的方法。

背景技術(shù)：

金銀花(Lonicerae Flos)為忍冬科(Caprifoliaceae)植物忍冬(Lonicera.japonica Thunb.)的干燥花蕾或帶初開(kāi)的花。具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱的功效。用于癰腫疔瘡，喉痹，丹毒，熱毒血痢，風(fēng)熱感冒，溫病發(fā)熱。

金銀花的主要成分為有機(jī)酸類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)、黃酮類(lèi)、三萜皂苷類(lèi)、無(wú)機(jī)元素等。綠原酸類(lèi)化合物是金銀花的主要有效成分。金銀花主要的藥理作用有：1.抗菌、抗病毒作用。金銀花對(duì)多種致病菌均有一定的抑制作用，包括金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、傷寒桿菌，肺炎球菌、綠膿桿菌、結(jié)核桿菌等。金銀花中抗菌消炎的主要成分是綠原酸及異綠原酸。2.抗炎及解熱作用。研究結(jié)果表明，金銀花對(duì)角叉菜膠、蛋清、二甲苯所致的水中游不同程度的抑制作用。3.利膽保肝作用。金銀花所含的多種綠原酸類(lèi)化合物具有顯著的利膽作用，可以促進(jìn)大鼠膽汁的分泌。3.降血脂作用。4.對(duì)免疫系統(tǒng)作用。5.止血作用。6.抗氧化作用。金銀花所含的綠原酸可以引起大鼠、小鼠中樞神經(jīng)興奮，口服大劑量綠原酸能增加胃腸蠕動(dòng)，促進(jìn)膽汁分泌。

綠原酸類(lèi)化合物是金銀花的主要有效成分?，F(xiàn)階段關(guān)于從金銀花中提取綠原酸的研究較多，但幾乎沒(méi)有從金銀花中同時(shí)分離出多種單體的報(bào)道。目前工業(yè)上制備綠原酸的方法得到的綠原酸純度較低，需經(jīng)過(guò)多步分離純化方可得到高純度的綠原酸，且制備工藝復(fù)雜，分離步驟繁瑣，溶劑消耗量大。

研究一種能夠從金銀花中大量制備出多種高純單體的制備工藝可以有效的利用植物資源，為天然產(chǎn)物的開(kāi)發(fā)提供物質(zhì)基礎(chǔ)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種用動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備金銀花單體的方法，該方法工藝簡(jiǎn)單，可同時(shí)制備多種高純化合物，植物原料利用率高。

本發(fā)明通過(guò)一些技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

用動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備金銀花單體的方法，包括以下步驟：

(1)提取溶劑的配制：用乙醇和水配制30％-95％的乙醇-水混合溶液作為樣品提取溶劑；

(2)樣品的提取濃縮：金銀花藥材，用步驟(1)配制的提取溶劑超聲、回流或微波提取，過(guò)濾，減壓濃縮得到樣品濃縮液；

(3)濃縮液的萃?。簩⒉襟E(2)得到的樣品濃縮液用1～3倍量乙酸乙酯萃取2～3次，萃取物濃縮至干，得到乙酸乙酯層浸膏；

(4)流動(dòng)相配制：用弱極性溶劑配制流動(dòng)相，作為樣品洗脫液。

(5)樣品溶液稀釋過(guò)濾：將步驟(3)得到的乙酸乙酯浸膏，用步驟(4)配制的流動(dòng)相稀釋至濃度為10～50mg/ml，過(guò)濾作為樣品；

(6)動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱填裝：將色譜填料用步驟(4)配制的流動(dòng)相勻漿得到勻漿液，將勻漿液送入動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排出流動(dòng)相后壓實(shí)色譜填料，完成動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱的填裝；

(7)系統(tǒng)平衡：用步驟(4)配制的流動(dòng)相沖洗步驟(6)填裝的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，持續(xù)15-20分鐘，直到色譜儀檢測(cè)的色譜基線(xiàn)平穩(wěn)，至平衡狀態(tài)；

(8)洗脫分離：將步驟(5)得到的樣品注入步驟(7)平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，用紫外檢測(cè)器在線(xiàn)檢測(cè)樣品分離情況，根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰的高度確定所制備金銀花單體的收集起止時(shí)間點(diǎn)；

(9)濃縮：將步驟(8)收集得到的每種單體溶液分別減壓濃縮，除去溶劑，得到高純度的單體。

所述步驟(1)配制樣品提取溶劑為乙醇-水混合溶液，體積比例30％-95％，優(yōu)選為30％-60％。

所述步驟(2)超聲提取的時(shí)間為25-30分鐘。

所述步驟(3)乙酸乙酯萃取中樣品濃縮液與乙酸乙酯的比例為1:1-1:3，萃取2-3次。

所述步驟(4)配制的流動(dòng)相的弱極性溶劑為無(wú)水乙醇，流動(dòng)相的體積比例乙醇：水＝12％-50％。

所述步驟(5)的樣品濃度為10-50mg/ml。

所述步驟(5)采用0.45μm有機(jī)濾膜對(duì)稀釋的樣品溶液進(jìn)行過(guò)濾。

所述步驟(6)的色譜柱填料為粒徑為5-20μm的C18填料。

所述步驟(7)動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱的填料高度為200-300mm。

所述步驟(8)的紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為237nm。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：采用動(dòng)態(tài)軸向壓縮系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)多種金銀花單體的在線(xiàn)分離，在一次制備過(guò)程中，可以獲得新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體化合物，且高效液相色譜法檢測(cè)純度均在90％以上，植物資源利用率較高；有機(jī)試劑可回收利用，經(jīng)濟(jì)環(huán)保；制備工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品質(zhì)量可控，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1為新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷單體分離流程圖

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋為濃度為42mg/ml作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到94.2％，92.5％，96.8％，93.7％。

實(shí)施例2

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，回流提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋為濃度為42mg/ml作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè) 器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到91.2％，90.5％，91.1％，90.7％。

實(shí)施例3

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，微波提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋為濃度為42mg/ml作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到90.2％，90.5％，92.1％，90.7％。

實(shí)施例4

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取25min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋為濃度為42mg/ml作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到92.5％，90.1％，95.8％，93.2％。

實(shí)施例5

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入30％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋為濃度為42mg/ml作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到90.4％，91.3％，93.6％，90.8％。

實(shí)施例6

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入90％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋42mg/ml作為樣品溶液，作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到93.5％，90.1％，96.3％，92.7％。

實(shí)施例7

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋42mg/ml作為樣品溶液，作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm 的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到93.5％，90.1％，96.3％，92.7％。

實(shí)施例8

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取2次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋42mg/ml作為樣品溶液，作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到93.3％，91.3％，95.8％，93.9％。

實(shí)施例9

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用1倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋42mg/ml作為樣品溶液，作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶 液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到91.8％，90.2％，94.7％，92.4％。

實(shí)施例10

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用2倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋42mg/ml作為樣品溶液，作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到92.4％，90.7％，94.9％，92.6％。

實(shí)施例11

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋13mg/ml作為樣品溶液，作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收 集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到94.5％，91.2％，97.4％，95.8％。

實(shí)施例12

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋28mg/ml作為樣品溶液，作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到93.5％，90.9％，96.7％，94.9％。

實(shí)施例13

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋42mg/ml作為樣品溶液，作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為187mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到92.7％，90.2％，95.8％，94.1％。

實(shí)施例14

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋50mg/ml作為樣品溶液，作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為140ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到91.7％，90.0％，93.6％，92.5％。

實(shí)施例15

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋42mg/ml作為樣品溶液，作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為100ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到93.4％，92.7％，96.9％，94.8％。

實(shí)施例16

稱(chēng)取金銀花藥材50g，加入60％乙醇，超聲提取30min；將提取液過(guò)濾后出去濾渣，將濾液濃縮至密度為1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯進(jìn)行萃取1次，萃取物濃縮至干；將乙酸乙酯浸膏用流動(dòng)相稀釋42mg/ml作為樣品溶液，作為樣品溶液；將1000g粒徑為10μm的C18填料，加入2800mL勻漿試劑，設(shè)定DAC色譜柱系統(tǒng)壓力，室溫下超聲30min，超 聲并攪拌20min后,將勻漿液送入直徑為80mm的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，排除流動(dòng)相后壓實(shí)色譜柱填料，完成DAC柱的填裝；用流動(dòng)相持續(xù)沖洗動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱15-20分鐘，直到色譜儀基線(xiàn)平穩(wěn)；設(shè)定紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為237nm,輸液泵的流速為200ml/min，將稀釋好的樣品溶液用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，注入平衡后的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，進(jìn)樣量為300mg，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品分離情況；根據(jù)保留時(shí)間和色譜峰高度以及TLC鑒定，確定每種金銀花單體的起止收集時(shí)間，收集的到新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷氧化馬錢(qián)子苷四種單體；經(jīng)收集到的每種單體溶解分別減壓濃縮，除去溶劑，配制成一定濃度的溶液，用高效液相色譜法檢測(cè)純度，純度分別可以達(dá)到91.4％，90.2％，92.5％，91.3％。