一種從腸衣中提取肝素鈉的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從腸衣中提取肝素鈉的方法：技術(shù)方案是，先將豬小腸的腸衣洗凈，用攪碎機(jī)絞碎，混合均勻，投入反應(yīng)鍋中，采用鹽解加酶解，以及二次酶解法，控制溶液的鹽度，PH，溫度等重要條件，從酶解液中運(yùn)用新型樹(shù)脂吸附法，運(yùn)用正向反相吸附法，只吸附溶液中分子量適用段的肝素鈉，采用分步洗脫法，洗脫樹(shù)脂，得到不同分子量分步的肝素鈉。得到符合藥用安全的原料藥，增加了肝素鈉來(lái)源的途徑，創(chuàng)造了巨大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。
【專利說(shuō)明】一種從腸衣中提取肝素鈉的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體的說(shuō)涉及從豬腸衣中在加工提取肝素鈉的新工
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【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉是一種抗凝血類原料藥，是一種高度硫酸化的黏多糖硫酸酯鈉鹽，最早是由Mclean等人在狗的肝臟組織里分離出的一種天然產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)活性研宄發(fā)現(xiàn)，此天然產(chǎn)物具有凝血作用。后來(lái)肝素具有的最優(yōu)的作用抗凝血性被科學(xué)家Brinkhous等人進(jìn)一步確認(rèn)和證實(shí)了。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和發(fā)展，越來(lái)越多的科學(xué)家對(duì)肝素鈉表現(xiàn)出了極大的興趣，也推動(dòng)肝素鈉的研宄，Charles等人最早作為抗凝血?jiǎng)?yīng)用到臨床上的研宄，在此之后肝素鈉作為商業(yè)產(chǎn)品大量應(yīng)用，肝素鈉在抗凝血方面表現(xiàn)出的優(yōu)越性在全世界產(chǎn)生了廣泛的影響，受到了各個(gè)國(guó)家的廣泛重視。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供一種從腸衣中提取肝素鈉的新工藝，豐富了肝素鈉的制備來(lái)源，創(chuàng)造了巨大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。
[0004]本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
一、新樹(shù)脂的處理方法
(I )、將樹(shù)脂置于較大的容器內(nèi)，用清水且最好用純水漂洗干凈，抽干，用80~90%工業(yè)酒精(或無(wú)水乙醇)浸泡24小時(shí)左右，洗去樹(shù)脂中的有機(jī)雜質(zhì)，抽干。(酒精可回收)
(2)、用40-50°C熱水反復(fù)清洗至無(wú)酒精味，抽干。
[0005](3 )、用2倍于樹(shù)脂量的4%HC1溶液浸泡2~3小時(shí)，并不斷地翻動(dòng)，用純水洗至近中性。
[0006](4)、用2倍于樹(shù)脂量的4%(lmol/L)NaOH溶液浸泡2小時(shí)，用純水洗至近中性，抽干。
[0007](5)、最后再用2倍于樹(shù)脂量的4%HC1溶液浸泡3~4小時(shí)，并不斷攪拌，用純水洗至近中性，用23%(4mol/L)NaCl溶液浸泡2小時(shí)，用水洗凈鹽水，抽干，備用。
[0008]二、腸衣提取肝素鈉
(I)將腸衣投入反應(yīng)鍋中，按腸衣重的5%加入胰蛋白酶，用3mol/L的NaOH溶液調(diào)pH為8~9之間，同時(shí)攪拌升溫達(dá)40°C時(shí)左右，維持2.5h后，升溫達(dá)60°C時(shí)，按腸衣重的2%加入NaCl固體，然后升溫到90°C，調(diào)pH為6~7之間，保持1min后直接加熱到沸騰，然后趁熱用200目尼龍篩子過(guò)濾。
[0009]三、吸附
待濾液冷卻至60°C左右時(shí)，用3mol/L的NaOH溶液調(diào)pH8?9之間，然后加入已處理好的樹(shù)脂，加量為濾液量的5%，攪拌吸附6h后，靜置lh，用200目尼龍篩子過(guò)濾。整個(gè)吸附過(guò)程的pH保持8?9。
[0010]四、脫附
在樹(shù)脂中加入等體積自來(lái)水漂洗數(shù)次，再用3mol/LNaCl溶液攪拌洗脫樹(shù)脂2h，NaCl溶液的用量與樹(shù)脂量相等；脫附后以200目尼龍篩子過(guò)濾，收集濾液。重復(fù)脫附兩次，合并幾次濾液。
[0011]五、沉淀
在濾液中加入等體積乙醇，攪拌lOmin，然后靜置12h以上。
[0012]六、脫水干燥
收集下層沉淀物，乙醇脫水3次。將沉淀置于60°C烘箱中烘干得肝素鈉粗品。

【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0014]實(shí)施例1:
一、新樹(shù)脂的處理方法
(I )、將20KG樹(shù)脂置于較大的容器內(nèi)，用清水且最好用純水漂洗干凈，抽干，用90%工業(yè)酒精(或無(wú)水乙醇)浸泡24小時(shí)，洗去樹(shù)脂中的有機(jī)雜質(zhì)，抽干。(酒精可回收)
(2)、用50°C熱水反復(fù)清洗至無(wú)酒精味，抽干。
[0015](3 )、用40L的4%HC1溶液浸泡3小時(shí)，并不斷地翻動(dòng)，用純水洗至中性。
[0016](4)、用40L的4%(lmol/L)NaOH溶液浸泡2小時(shí)，用純水洗至中性，抽干。
[0017](5)、最后再用40L的4%HC1溶液浸泡4小時(shí)，并不斷攪拌，用純水洗至中性，用23%(4mol/L)NaCl溶液浸泡2小時(shí)，用水洗凈鹽水，抽干，備用。
[0018]二、腸衣提取肝素鈉
(I)將50KG腸衣投入反應(yīng)鍋中，加水50KG，加2.5KG胰蛋白酶，用3mol/L的NaOH溶液調(diào)pH為9，同時(shí)攪拌升溫達(dá)40°C時(shí)，維持2.5h后，升溫達(dá)60°C時(shí)，加入NaCl固體1KG，然后升溫到90°C，調(diào)pH為7之間，保持1min后直接加熱到沸騰，然后趁熱用200目尼龍篩子過(guò)濾。
[0019]三、吸附
待濾液冷卻至60°C時(shí)，用3mol/L的NaOH溶液調(diào)pH9之間，然后加入已處理好的樹(shù)脂25KG，攪拌吸附6h后，靜置lh，用200目尼龍篩子過(guò)濾。整個(gè)吸附過(guò)程的pH保持9。
[0020]四、脫附
在樹(shù)脂中加入50L自來(lái)水漂洗數(shù)次，再用3mol/LNaCl溶液攪拌洗脫樹(shù)脂2h，NaCl溶液的用量為25L;脫附后以200目尼龍篩子過(guò)濾，收集濾液。重復(fù)脫附兩次，合并幾次濾液。
[0021]五、沉淀
在濾液中加入50L乙醇，攪拌lOmin，然后靜置12h以上。
[0022]六、脫水干燥
收集下層沉淀物，乙醇脫水3次。將沉淀置于60°C烘箱中烘干得肝素鈉粗品。
[0023]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施案例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述解釋的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為同等變化的等效實(shí)施例，但凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改，等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種從腸衣中提取肝素鈉的方法，其特征在于，采用鹽解加酶解，以及二次酶解法酶解絞碎后的腸衣，用新型樹(shù)脂采用正向反相兩種吸附方法，吸附肝素鈉，結(jié)合分級(jí)洗脫樹(shù)脂法，得到不同分子量片段的肝素鈉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從腸衣中提取肝素鈉的方法，其特征包括如下步驟: 一、新樹(shù)脂的處理方法 (I )、將樹(shù)脂置于較大的容器內(nèi)，用清水且最好用純水漂洗干凈，抽干，用80~90%工業(yè)酒精(或無(wú)水乙醇)浸泡24小時(shí)左右，洗去樹(shù)脂中的有機(jī)雜質(zhì)，抽干；(酒精可回收) (2)、用40-50°C熱水反復(fù)清洗至無(wú)酒精味，抽干； (3)、用2倍于樹(shù)脂量的4%HC1溶液浸泡2~3小時(shí)，并不斷地翻動(dòng)，用純水洗至近中性； (4)、用2倍于樹(shù)脂量的4%(ImoVL)NaOH溶液浸泡2小時(shí)，用純水洗至近中性，抽干； (5)、最后再用2倍于樹(shù)脂量的4%HC1溶液浸泡3~4小時(shí)，并不斷攪拌，用純水洗至近中性，用23%(4mol/L)NaCl溶液浸泡2小時(shí)，用水洗凈鹽水，抽干，備用； 二、腸衣提取肝素鈉 (I)將腸衣投入反應(yīng)鍋中，按腸衣重的5%加入胰蛋白酶，用3mol/L的NaOH溶液調(diào)pH為8~9之間，同時(shí)攪拌升溫達(dá)40°C時(shí)左右，維持2.5h后，升溫達(dá)60°C時(shí)，按腸衣重的2%加ANaCl固體，然后升溫到90°C，調(diào)pH為6~7之間，保持1min后直接加熱到沸騰，然后趁熱用200目尼龍篩子過(guò)濾； 三、吸附 待濾液冷卻至60°C左右時(shí)，用3mol/L的NaOH溶液調(diào)pH8?9之間，然后加入已處理好的樹(shù)脂，加量為濾液量的5%，攪拌吸附6h后，靜置lh，用200目尼龍篩子過(guò)濾； 整個(gè)吸附過(guò)程的PH保持8?9 ; 四、脫附 在樹(shù)脂中加入等體積自來(lái)水漂洗數(shù)次，再用3mol/LNaCl溶液攪拌洗脫樹(shù)脂2h，NaCl溶液的用量與樹(shù)脂量相等；脫附后以200目尼龍篩子過(guò)濾，收集濾液； 重復(fù)脫附兩次，合并幾次濾液； 五、沉淀 在濾液中加入等體積乙醇，攪拌lOmin，然后靜置12h以上； 六、脫水干燥 收集下層沉淀物，乙醇脫水3次； 將沉淀置于60°C烘箱中烘干得肝素鈉粗品。
【文檔編號(hào)】C08B37/10GK104448049SQ201410813606
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月24日
【發(fā)明者】劉乃山, 劉汝榮, 遲培升 申請(qǐng)人:青島九龍生物醫(yī)藥有限公司