一種高活性猴頭菇多糖的提取方法
【專利摘要】一種高活性猴頭菇多糖的提取方法，該提取方法的主要步驟為：步驟1、粉碎；步驟2、熱水浸提、抽濾濃縮；步驟3、醇析、離心；步驟4、去淀粉、除蛋白、去小分子物質(zhì)、醇析；步驟5、離心、干燥；步驟6、檢測(cè)；本發(fā)明的高活性猴頭菇多糖的提取方法，提取出來的產(chǎn)品色澤好、效率高、純度高，工藝簡(jiǎn)單，適宜工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種高活性猴頭菇多糖的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種多糖提取方法，特別是一種高活性猴頭菇多糖的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002]猴頭菇又名猴頭、猴頭蘑、猴頭菌、刺猬菌等，是一種大型真菌，屬擔(dān)子菌綱、多孔菌目、齒菌科、猴頭屬，因其子實(shí)體形狀像猴子頭部而得名。從猴頭菇中提取的多糖是主鏈由β_1，3糖苷鍵，支鏈為β_1，6糖苷鍵連接的葡聚糖混合物。猴頭菇作為一種藥用菌，對(duì)消化系統(tǒng)的癌變、潰瘍、胃竇炎、慢性胃炎等病均有療效，并且能夠提高人體的免疫能力。藥用真菌多糖作為一類重要的生物活性物質(zhì)，在對(duì)一些人類疑難病癥的治療方面已顯示出很好的療效。
[0003]目前比較常用的猴頭菇多糖的提取方法有堿提法、酸提法、鹽提法還有熱水浸提法。稀酸、稀堿法，試劑用量少，儀器均為常規(guī)儀器，因此操作簡(jiǎn)單易行，但在稀酸、稀堿條件下，易使多糖發(fā)生糖苷鍵的斷裂，部分多糖發(fā)生水解而使多糖的提取率減少，而且雜質(zhì)含量也比較多，有一定的使用范圍。專利“真菌多糖精化提純工藝”(200610012682.3)指出了提純真菌多糖的方法，但針對(duì)猴頭菇多糖而言，其本身存在使顏色較深的酚型化合物與糖鏈連接，較難除去，且存在纖維素、果膠等生物大分子的干擾，超濾膜孔易阻塞等問題。因此，由此法獲得的猴頭菇多糖還存在產(chǎn)品色澤、效率、純度等需要進(jìn)一步提高的缺陷。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種高活性猴頭菇多糖的提取方法。
[0005]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):一種高活性猴頭菇多糖的提取方法，該提取方法的主要步驟為:
步驟1、粉碎:取新鮮猴頭菇，自然風(fēng)干，得到干燥的猴頭菇，用粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，得干燥猴頭菇粉末；
步驟2、熱水浸提、抽濾濃縮:按照干燥猴頭菇粉末與蒸餾水1:5-20的質(zhì)量比，加入蒸餾水，然后在75°C的恒溫水浴鍋中進(jìn)行浸提2-8小時(shí)，邊提取邊進(jìn)行磁力攪拌，浸提后將混合物進(jìn)行抽濾，將濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮，得濃縮液；
步驟3、醇析、離心:將濃縮液轉(zhuǎn)入小錐形瓶中，加入濃度為70-100%的乙醇，醇析24小時(shí)，將提取出的高活性猴頭菇多糖完全沉淀，然后將混合物以3500r/min的轉(zhuǎn)速離心分離，離心得猴頭菇多糖粗品；
步驟4、去淀粉、除蛋白、去小分子物質(zhì)、醇析:用糖化酶去除猴頭菇多糖粗品中的淀粉除凈；加入胰蛋白酶去除猴頭菇多糖粗品中的蛋白質(zhì)；使用透析袋去除猴頭菇多糖粗品中的小分子物質(zhì)，去除猴頭菇多糖粗品中的其他物質(zhì)后，再進(jìn)行醇析24小時(shí)；
步驟5、離心、干燥:將醇析后的猴頭菇多糖粗品在3500r/min的轉(zhuǎn)速下離心，并于40°C下真空干燥，稱重，即得高活性猴頭菇多糖；
步驟6、檢測(cè):將得到的高活性猴頭菇多糖提取物用硫酸蒽酮法檢測(cè)多糖含量，得到高活性猴頭菇多糖成品。
[0006]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明的高活性猴頭菇多糖的提取方法，提取出來的產(chǎn)品色澤好、效率高、純度高，工藝簡(jiǎn)單，適宜工業(yè)化生產(chǎn)，同時(shí)本發(fā)明研究了提取工藝過程中料液t匕、乙醇濃度、提取時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響。

【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1
1、粉碎:取干燥的猴頭菇(由新鮮猴頭菇經(jīng)自然風(fēng)干得到)，用粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，得猴頭菇干燥粉末；
2、熱水浸提、抽濾濃縮:準(zhǔn)確稱取猴頭菇干燥粉末6.25g，加入5倍質(zhì)量比的蒸餾水，在75°C的恒溫水浴鍋中進(jìn)行浸提2小時(shí)，邊提取邊進(jìn)行磁力攪拌，浸提后將混合物用抽濾機(jī)進(jìn)行抽濾，將得到濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至20mL左右；
3、醇析、離心:濃縮液轉(zhuǎn)入小錐形瓶中，加入濃度為70%的乙醇進(jìn)行醇析24小時(shí)，使提取出的高活性猴頭菇多糖完全沉淀，將混合物以3500r/min的轉(zhuǎn)速離心得猴頭菇多糖的粗品;
4、去淀粉、除蛋白:多糖粗品轉(zhuǎn)入小燒杯中并加蒸餾水20mL使其溶解，在90°C下水浴30min將多糖糊化，降溫至60°C ,用糖化酶(酶活力:10萬(wàn)U/g)0.005g處理lOmin,用碘液檢測(cè)至碘液不變色，稱取0.00125g胰蛋白酶(酶活:2500U/g)在37°C下處理50min，在280nm下紫外檢測(cè)無(wú)明顯吸收峰則說明蛋白質(zhì)已被除盡；
5、去小分子物質(zhì)、醇析:把透析袋放入大燒杯中煮沸l(wèi)Omin待其完全分離后撈出待用，將處理液裝入已用線綁好一端的透析袋，然后在離液面疒3cm處綁好另一端并進(jìn)行流動(dòng)透析，透析24小時(shí)，直至透析袋中的溶液從淡黃色變?yōu)闊o(wú)色，在透析后的多糖溶液中加入40mL的無(wú)水乙醇放置24小時(shí)沉淀；
6、離心、干燥:將沉淀后的混合物離心，沉淀轉(zhuǎn)入小燒杯中(記錄燒杯的重量)，在40°C下真空干燥，完全干燥后再次稱重，前后的質(zhì)量差即為提取的高活性猴頭菇多糖的質(zhì)量。
[0008]實(shí)施例2
1、粉碎:同實(shí)施例1;
2、熱水浸提、抽濾濃縮:準(zhǔn)確稱取猴頭菇干燥粉末6.25g，加入10倍質(zhì)量比的蒸餾水，在75°C的恒溫水浴鍋中進(jìn)行浸提4小時(shí)，邊提取邊進(jìn)行磁力攪拌，浸提后將混合物用抽濾機(jī)進(jìn)行抽濾，將得到濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至20mL左右；
3、醇析、離心:濃縮液轉(zhuǎn)入小錐形瓶中，加入濃度為80%的乙醇進(jìn)行醇析24小時(shí)，使提取出的高活性猴頭菇多糖完全沉淀，將混合物以3500r/min的轉(zhuǎn)速離心得猴頭菇多糖的粗品;
4、去淀粉、除蛋白:同實(shí)施例1;
5、去小分子物質(zhì)、醇析:同實(shí)施例1;
6、離心、干燥:同實(shí)施例1。
[0009]實(shí)施例3
1、粉碎:同實(shí)施例1;
2、熱水浸提、抽濾濃縮:準(zhǔn)確稱取猴頭菇干燥粉末6.25g，加入15倍質(zhì)量比的蒸餾水，在75°C的恒溫水浴鍋中進(jìn)行浸提6小時(shí)，邊提取邊進(jìn)行磁力攪拌，浸提后將混合物用抽濾機(jī)進(jìn)行抽濾，將得到濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至20mL左右；
3、醇析、離心:濃縮液轉(zhuǎn)入小錐形瓶中，加入濃度為90%的乙醇進(jìn)行醇析24小時(shí)，使提取出的高活性猴頭菇多糖完全沉淀，將混合物以3500r/min的轉(zhuǎn)速離心得猴頭菇多糖的粗品;
4、去淀粉、除蛋白:同實(shí)施例1;
5、去小分子物質(zhì)、醇析:同實(shí)施例1;
6、離心、干燥:同實(shí)施例1。
[0010]實(shí)施例4
1、粉碎:同實(shí)施例1;
2、熱水浸提、抽濾濃縮:準(zhǔn)確稱取猴頭菇干燥粉末6.25g，加入20倍質(zhì)量比的蒸餾水，在75°C的恒溫水浴鍋中進(jìn)行浸提8小時(shí)，邊提取邊進(jìn)行磁力攪拌，浸提后將混合物用抽濾機(jī)進(jìn)行抽濾，將得到濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至20mL左右；
3、醇析、離心:濃縮液轉(zhuǎn)入小錐形瓶中，加入濃度為100%的乙醇進(jìn)行醇析24小時(shí)，使提取出的高活性猴頭菇多糖完全沉淀，將混合物以3500r/min的轉(zhuǎn)速離心得猴頭菇多糖的粗品;
4、去淀粉、除蛋白:同實(shí)施例1;
5、去小分子物質(zhì)、醇析:同實(shí)施例1;
6、離心、干燥:同實(shí)施例1。
【權(quán)利要求】
1.一種高活性猴頭菇多糖的提取方法，其特征在于:該提取方法的主要步驟為: 步驟1、粉碎:取新鮮猴頭菇，自然風(fēng)干，得到干燥的猴頭菇，用粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，得干燥猴頭菇粉末； 步驟2、熱水浸提、抽濾濃縮:按照干燥猴頭菇粉末與蒸餾水1:5-20的質(zhì)量比，加入蒸餾水，然后在751的恒溫水浴鍋中進(jìn)行浸提2-8小時(shí)，邊提取邊進(jìn)行磁力攪拌，浸提后將混合物進(jìn)行抽濾，將濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮，得濃縮液； 步驟3、醇析、離心:將濃縮液轉(zhuǎn)入小錐形瓶中，加入濃度為70-100%的乙醇，醇析24小時(shí)，將提取出的高活性猴頭菇多糖完全沉淀，然后將混合物以350017^111的轉(zhuǎn)速離心分離，離心得猴頭菇多糖粗品； 步驟4、去淀粉、除蛋白、去小分子物質(zhì)、醇析:用糖化酶去除猴頭菇多糖粗品中的淀粉除凈；加入胰蛋白酶去除猴頭菇多糖粗品中的蛋白質(zhì)；使用透析袋去除猴頭菇多糖粗品中的小分子物質(zhì)，去除猴頭菇多糖粗品中的其他物質(zhì)后，再進(jìn)行醇析24小時(shí)； 步驟5、離心、干燥:將醇析后的猴頭菇多糖粗品在350017^111的轉(zhuǎn)速下離心，并于401下真空干燥，稱重，即得高活性猴頭菇多糖； 步驟6、檢測(cè):將得到的高活性猴頭菇多糖提取物用硫酸蒽酮法檢測(cè)多糖含量，得到高活性猴頭菇多糖成品。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK104403021SQ201410700230
【公開日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】戴路 申請(qǐng)人:哈爾濱墨醫(yī)生物技術(shù)有限公司