一種金針菇多糖及其制備與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種金針菇多糖，以及其制備方法和應(yīng)用。所述金針菇多糖的特征在于，其制備方法包括先用水提取金針菇中的多糖，再用堿溶液提取金針菇中的多糖，然后合并的步驟。采用的原料為市售金針菇，本發(fā)明獲得的金針菇多糖得率高，且具有較高的抗氧化活性：清除自由基的能力強(qiáng)，還原能力強(qiáng)，因而可應(yīng)用于抗氧化、抗腫瘤和增強(qiáng)免疫力的食品和藥物中。
【專利說(shuō)明】一種金針菇多糖及其制備與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品加工【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種多糖及其制備與應(yīng)用，尤其涉及一種以金針菇為原料的多糖及其制備與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]金針菇是一種秋冬栽培的藥食兩用菌，其菌蓋滑嫩、菌柄細(xì)長(zhǎng)脆嫩、形美、味鮮，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值。金針菇含有一種重要的高生物活性的多糖。研究發(fā)現(xiàn)金針菇多糖具有抗腫瘤、抗氧化、抗癌、增強(qiáng)免疫力等多種生物活性。另外，金針菇作為天然植物，它對(duì)人體基本上沒(méi)有負(fù)作用。所以，開(kāi)發(fā)金針菇的生物活性，提高其應(yīng)用范圍和應(yīng)用價(jià)值，有著廣闊的需求市場(chǎng)。
[0003]近年來(lái)有關(guān)金針菇多糖的提取方法的研究報(bào)道有很多。采用微波輔助提取法，通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化得出最佳金針菇多糖提取工藝(于汩等，微波輔助提取法提取金針菇多糖的工藝研究，吉林農(nóng)業(yè)，2010，250(12):75-79)。采用木瓜蛋白酶處理，對(duì)酶量、作用溫度、最適PH值、作用時(shí)間進(jìn)行正交試驗(yàn)，得出酶法提取金針菇多糖的最佳工藝條件(梁敏等，酶法提取金針菇多糖的研究，食品研究與開(kāi)發(fā)，2012，33 (11):100-102)。利用木瓜蛋白酶和纖維素酶復(fù)合處理從金針菇中提取金針菇多糖，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)研究酶用量、酶解溫度、pH、酶解時(shí)間對(duì)金針菇多糖提取率的影響(梁敏等，復(fù)合酶法提取金針菇多糖及光譜分析，湖北農(nóng)業(yè)科技，2012，51(6): 1210-1213)。采用超聲波輔助提取法，通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)對(duì)提取溫度、提取時(shí)間和提取功率對(duì)金針菇多糖的提取率影響進(jìn)行了研究(馬寅斐等，超聲波輔助提取金針菇多糖的工藝研究，食品工程，2012，4:105-109)。采用水提醇沉法提取金針菇多糖，得出最佳提取工藝，并對(duì)金針菇多糖的抗氧化活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，結(jié)果表明，金針菇多糖在體外具有較好的抗氧化活性(葉敏，金針菇多糖的提取及清除羥自由基活性的研究，畢節(jié)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，29(4):90-94)。多糖的提取或制備方法影響其抗氧化活性(王艷麗等，超聲參數(shù)對(duì)白術(shù)多糖抗氧化活性的影響，生物加工過(guò)程[J]，2012，10(1):7-12 ;張麗霞等，不同提取方法對(duì)樺褐孔菌多糖抗氧化活性的影響，安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)[J]，2012，40 (10): 5870-5872)。
[0004]因此，本領(lǐng)域的技術(shù)人員致力于開(kāi)發(fā)一種能提高產(chǎn)率和增強(qiáng)多糖抗氧化活性及還原能力的金針菇多糖制備方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]有鑒于現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種制備金針菇多糖的方法，其制得的金針菇多糖得率較高且具有強(qiáng)的抗氧化活性。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種金針菇多糖，所述金針菇多糖的制備采用水提和堿提相結(jié)合的方式進(jìn)行提取，即先采用水提，得到部分多糖提取液，再對(duì)濾渣進(jìn)行堿提，得到另一部分多糖提取液，將上述兩部分提取液合并濃縮得到最終產(chǎn)物，
[0007]本發(fā)明制備的金針菇多糖可應(yīng)用于抗氧化、抗腫瘤和增強(qiáng)免疫力的食品和藥品中。
[0008]本發(fā)明金針菇多糖的具體制備方法包括以下步驟:
[0009]一、混合:將金針菇除雜洗凈，加入蒸餾水，用打磨機(jī)高速打碎，得到混合液；
[0010]二、水提:在加熱條件下，對(duì)步驟一中的混合液進(jìn)行磁力攪拌，一段時(shí)間后將混合液用濾布過(guò)濾，得到的濾液即為水提液，將濾渣取出進(jìn)行堿提；
[0011]三、堿提:在步驟二的濾渣中加入NaOH溶液，在加熱條件下進(jìn)行磁力攪拌，一段時(shí)間后用濾布過(guò)濾，得到的濾液即為堿提液；
[0012]四、透析:向步驟三的堿提液中加入鹽酸，調(diào)溶液pH值至7，然后用透析袋透析；
[0013]五、濃縮:合并步驟二中的水提液和步驟四中透析后的堿提液，加熱濃縮，得到濃縮液；
[0014]六、沉淀:在步驟五的濃縮液中加入乙醇，靜置過(guò)夜，以除去蛋白質(zhì)；
[0015]七、潤(rùn)洗:將步驟六中靜置過(guò)夜后得到的濃縮液離心，去除上層清液，用低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑潤(rùn)洗沉淀；
[0016]八、干燥:將步驟七潤(rùn)洗后的沉淀吹干，得到金針菇多糖。
[0017]優(yōu)選地，步驟一中的金針菇為市售金針菇，按重量計(jì)其含水量為8% ;加入蒸餾水的重量為金針菇重量的20-50倍；所用打磨機(jī)為家用型或?qū)嶒?yàn)室用型。
[0018]優(yōu)選地，步驟二和步驟三中的加熱溫度為80_100°C，攪拌時(shí)間為2-3小時(shí)；所用的濾布為200目或以上。
[0019]優(yōu)選地，步驟三中加入NaOH溶液的濃度為0.5_lmol/L，加入的重量為濾渣重量的20-40 倍。
[0020]優(yōu)選地，步驟四中加入的鹽酸是濃鹽酸稀釋后的稀鹽酸溶液，其較佳的濃度為6mol/L ;透析過(guò)程中所使用的透析袋規(guī)格為3500Da的截留分子量，透析時(shí)間為24小時(shí)。
[0021]優(yōu)選地，步驟五的濃縮過(guò)程在可調(diào)溫度的恒溫加熱裝置上進(jìn)行，加熱溫度為80-100°C ;最終得到的濃縮液體積為濃縮前體積的1/20。
[0022]優(yōu)選地，步驟六中加入乙醇的量為使最終混合后的溶液中乙醇的體積百分比濃度大于80%。
[0023]優(yōu)選地，步驟七中離心的轉(zhuǎn)速為4000rpm ;潤(rùn)洗所用的低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑為丙酮、乙醇和乙醚中的一種或多種。
[0024]本發(fā)明采用了以上技術(shù)方案，具有如下的優(yōu)點(diǎn)和有益效果:
[0025]1、本發(fā)明提供了一種金針菇多糖的制備方法，相較于現(xiàn)有的常規(guī)制備方法，所得的多糖具有更高的得率；
[0026]2、本發(fā)明所得的金針菇多糖，相較于現(xiàn)有的常規(guī)制備方法，具有更高的抗氧化活性；
[0027]3、本發(fā)明所得的金針菇多糖，相較于現(xiàn)有的常規(guī)制備方法，具有更強(qiáng)的還原能力。
[0028]以下將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的構(gòu)思、具體步驟及產(chǎn)生的技術(shù)效果作進(jìn)一步說(shuō)明，以充分地了解本發(fā)明的目的、特征和效果。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0029]圖1是本發(fā)明的兩個(gè)較佳實(shí)施例與對(duì)比例獲得的多糖的得率對(duì)比圖；
[0030]圖2是本發(fā)明的兩個(gè)較佳實(shí)施例與對(duì)比例獲得的多糖的ORAC抗氧化活性對(duì)比圖，其中TE為trolox當(dāng)量；
[0031 ] 圖3是本發(fā)明的兩個(gè)較佳實(shí)施例與對(duì)比例獲得的多糖的FRAP還原活性對(duì)比圖，其中TE為trolox當(dāng)量。

【具體實(shí)施方式】
[0032]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0033]實(shí)施例1
[0034]一、混合:將市售金針菇除雜洗凈，加入20倍重量蒸餾水，用打磨機(jī)高速打碎，得到混合液；
[0035]二、水提:在加熱溫度為100°C條件下，對(duì)步驟一中混合液進(jìn)行磁力攪拌，水提2小時(shí)，再將混合液用濾布過(guò)濾，得到濾液即為水提液，將濾渣取出進(jìn)行堿提；
[0036]三、堿提:在步驟二的濾渣中加入20倍重量的NaOH溶液(0.5mol/L)，在加熱溫度為100°C條件下進(jìn)行磁力攪拌，堿提2小時(shí)后用濾布過(guò)濾，得到濾液即為堿提液；
[0037]四、透析:向步驟三的堿提液中加入鹽酸(6mol/L),調(diào)節(jié)溶液pH值至7,然后透析24小時(shí)；
[0038]五、濃縮:合并步驟二中的水提液和步驟四中透析后的堿提液，在加熱溫度為80°C條件下濃縮至原來(lái)體積的1/20，得到濃縮液；
[0039]六、沉淀:在步驟五的濃縮液中加入乙醇，使得混合均勻后乙醇最終的體積百分比濃度大于80%，靜置過(guò)夜；
[0040]七、潤(rùn)洗:將步驟六中靜置過(guò)夜的濃縮液離心后去除上層清液，相繼用丙酮和乙醚潤(rùn)洗沉淀；
[0041]八、干燥:將步驟七潤(rùn)洗后的沉淀吹干、稱重，并進(jìn)行抗氧化活性評(píng)價(jià)。
[0042]實(shí)施例2
[0043]一、混合:將市售金針菇除雜洗凈，加入50倍重量的蒸餾水，用打磨機(jī)高速打碎，得到混合液；
[0044]二、水提:在加熱溫度為80°C條件下，對(duì)步驟一中混合液進(jìn)行磁力攪拌，水提3小時(shí)，再將混合液用濾布過(guò)濾，得到濾液即為水提液，將濾渣取出進(jìn)行堿提；
[0045]三、堿提:在步驟二的濾渣中加入40倍重量的NaOH溶液(lmol/L)，在加熱溫度為80°C的條件下進(jìn)行磁力攪拌，堿提3小時(shí)后用濾布過(guò)濾，得到濾液即為堿提液；
[0046]四、透析:向步驟三的堿提液中加入鹽酸(6mol/L),調(diào)節(jié)溶液pH值至7,然后透析24小時(shí)；
[0047]五、濃縮:合并步驟二中的水提液和步驟四中透析后的堿提液，在加熱溫度為100°C條件下濃縮至原來(lái)體積的1/20，得到濃縮液；
[0048]六、沉淀:在步驟五的濃縮液中加入乙醇，使得混合均勻后乙醇最終的體積百分比濃度大于80%，靜置過(guò)夜；
[0049]七、潤(rùn)洗:將步驟六中靜置過(guò)夜的濃縮液離心后去除上層清液，用無(wú)水乙醇潤(rùn)洗沉淀兩次；
[0050]八、干燥:將步驟七潤(rùn)洗后的沉淀吹干、稱重，并進(jìn)行抗氧化活性評(píng)價(jià)。
[0051]對(duì)比例
[0052]一、混合:將市售金針菇除雜洗凈，加入20倍重量蒸餾水，用打磨機(jī)高速打碎，得到混合液；
[0053]二、第一次水提:在加熱溫度為100°C的條件下，對(duì)步驟一中的混合液進(jìn)行磁力攪拌，水提3小時(shí)，再將混合液用濾布過(guò)濾，將得到的水提液保留，將濾渣進(jìn)一步水提；
[0054]三、第二次水提:在步驟二的濾渣中加入20倍重量的蒸餾水，在加熱溫度為100°C的條件下進(jìn)行磁力攪拌，水提3小時(shí)，然后用濾布過(guò)濾，將得到的水提液保留；
[0055]四、濃縮:合并步驟二和步驟三中的水提液，在加熱溫度為80°C條件下濃縮至原來(lái)體積的1/20，得到濃縮液；
[0056]五、沉淀:在步驟四的濃縮液中加入乙醇，并使乙醇的最終體積百分比濃度大于80%，靜置過(guò)夜；
[0057]六、潤(rùn)洗:將步驟五中的靜置過(guò)夜后的濃縮液離心去除上層清液，相繼用丙酮和乙醚潤(rùn)洗沉淀；
[0058]七、干燥:將步驟六潤(rùn)洗后的沉淀吹干、稱重，并進(jìn)行抗氧化活性評(píng)價(jià)。
[0059]評(píng)價(jià)實(shí)駘
[0060]將實(shí)施例1、實(shí)施例2和對(duì)比例所得金針菇多糖分別進(jìn)行抗氧化ORAC評(píng)價(jià)。
[0061]具體評(píng)價(jià)方法如下:在96孔酶標(biāo)板(黑色)最外周加入300 μ L水。測(cè)量孔中依次加入25 μ L樣品，150 μ L 4xlO_6mM熒光素鈉溶液。將酶標(biāo)板放入酶標(biāo)儀中，37°C下預(yù)熱3011^11后，加入25111^ AAPH開(kāi)始熒光淬滅反應(yīng)。其中空白組以25 μ L緩沖液代替樣品，對(duì)照組以25 μ L不同濃度的Trolox溶液代替樣品。樣品平行測(cè)定三次。結(jié)果以Trolox含量作為當(dāng)量來(lái)表不ORAC值。酶標(biāo)儀測(cè)量條件設(shè)置如下:激發(fā)波長(zhǎng)485nm,發(fā)射波長(zhǎng)528nm ;加入AAPH后,振幅Imm,震蕩8S。反應(yīng)開(kāi)始后,測(cè)量循環(huán)次數(shù)為120,循環(huán)周期為lmin。
[0062]將實(shí)施例1、實(shí)施例2和對(duì)比例所得金針菇多糖分別進(jìn)行抗氧化FRAP評(píng)價(jià)。
[0063]具體評(píng)價(jià)方法如下:分別量取50mL的醋酸鹽緩沖溶液(pH3.6)、5ml的TPTZ鹽酸溶液(10mmol/L)和5ml的FeCl3水溶液(20mmol/L)，混勻后即得FRAP試劑，置于37°C水浴中備用；在各個(gè)試管中分別平行加入150 μ L的50、100、200、300、400、500ymol/L的Trolox溶液和金針菇多糖溶液，空白對(duì)照組加入等量的DMSO ;向各個(gè)試管中加入2.85mL、在37°C下保存的FRAP試劑，置于暗處30min ;在593nm下測(cè)定各溶液的吸光值。
[0064]結(jié)果與比較
[0065]如圖1所示，實(shí)施例1和實(shí)施例2的多糖得率分別為3.14%和4.19% (w/w)，而對(duì)比例為1.74% (w/w) 0由此可見(jiàn)，發(fā)明所提供的金針菇多糖的制備方法可以提高金針菇多糖的產(chǎn)率。
[0066]如圖2所示，實(shí)施例2制得的多糖ORAC值最高，為4.7 μ mol TE/mg，即清除自由基的活性最好，其次為實(shí)施例1，為3.2μπι01 TE/mg，對(duì)比例制得的多糖抗氧化值最小，僅為
0.5 μ moI TE/mg。
[0067]如圖3所示，實(shí)施例1和實(shí)施例2制得的金針菇多糖FRAP還原值為12.5和18.4 μ mo I TE/mg,均比對(duì)比例(6.1 μ mo I TE/mg)高，證明實(shí)施例1和實(shí)施例2獲得的多糖具有更好的還原性。由此可見(jiàn)，發(fā)明所提供的金針菇多糖的制備方法，不僅提高了金針菇多糖的自由基清除作用而且增強(qiáng)其還原能力。
[0068]以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的較佳具體實(shí)施例。應(yīng)當(dāng)理解，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員無(wú)需創(chuàng)造性勞動(dòng)就可以根據(jù)本發(fā)明的構(gòu)思作出諸多修改和變化。因此，凡本【技術(shù)領(lǐng)域】中技術(shù)人員依本發(fā)明的構(gòu)思在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上通過(guò)邏輯分析、推理或者有限的實(shí)驗(yàn)可以得到的技術(shù)方案，皆應(yīng)在由權(quán)利要求書(shū)所確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種金針菇多糖，其特征在于，所述金針菇多糖的制備采用水提和堿提相結(jié)合的方式進(jìn)行提取:先采用水提，得到部分多糖提取液，再對(duì)濾渣進(jìn)行堿提，得到另一部分多糖提取液，將上述兩部分提取液合并濃縮得到最終產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金針菇多糖，其特征在于，其制備方法包括以下步驟: 一、混合:將金針菇除雜洗凈，加入蒸餾水，用打磨機(jī)高速打碎，得到混合液； 二、水提:在加熱條件下，對(duì)步驟一中的混合液進(jìn)行磁力攪拌，一段時(shí)間后將混合液用濾布過(guò)濾，得到的濾液即為水提液，將濾渣取出進(jìn)行堿提； 三、堿提:在步驟二的濾渣中加入NaOH溶液，在加熱條件下進(jìn)行磁力攪拌，一段時(shí)間后用濾布過(guò)濾，得到的濾液即為堿提液； 四、透析:向步驟三的堿提液中加入鹽酸，調(diào)溶液PH值至7，然后用透析袋透析； 五、濃縮:合并步驟二中的水提液和步驟四中透析后的堿提液，加熱濃縮，得到濃縮液； 六、沉淀:在步驟五的濃縮液中加入乙醇，靜置過(guò)夜，以除去蛋白質(zhì)； 七、潤(rùn)洗:將步驟六中靜置過(guò)夜后得到的濃縮液離心，去除上層清液，用低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑潤(rùn)洗沉淀； 八、干燥:將步驟七潤(rùn)洗后的沉淀吹干，得到金針菇多糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的金針菇多糖，其特征在于，步驟一中的金針菇按重量計(jì)，其含水量為5%,加入蒸懼水的重量為金針菇重量的20-40倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的金針菇多糖，其特征在于，步驟二和步驟三中的加熱溫度為80-100°C，攪拌時(shí)間為2-3小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的金針菇多糖，其特征在于，步驟二和步驟三中所述濾布為200目或以上；步驟四中所述透析使用的透析袋規(guī)格為3500Da的截留分子量，透析時(shí)間為24小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的金針菇多糖，其特征在于，步驟三中加入的所述NaOH溶液的濃度為0.5-lmol/L，加入的重量為濾渣重量的20-40倍。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的金針菇多糖，其特征在于，步驟六中所述加入乙醇的量為使混合后的溶液中乙醇的最終體積百分比濃度大于80%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述的金針菇多糖在抗氧化食品和抗氧化藥品中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述的金針菇多糖在抗腫瘤食品和抗腫瘤藥品中的應(yīng)用。
10.一種金針菇多糖的制備方法，其特征在于，包括步驟:水提和堿提；所述水提是指用水提取金針菇中的多糖，所述堿提是指用堿溶液提取金針菇中的多糖。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK104231103SQ201410475031
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月17日
【發(fā)明者】敬璞, 宋立華, 趙淑娟, 陸漫漫, 蔡湛, 袁芳豪 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)