一種全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肺癌是導(dǎo)致全世界人群腫瘤相關(guān)的死亡最主要的原因，目前治療的有效性嚴重受 限，平均每10萬病患中就有30例死亡。其中，非小細胞型肺癌在所有類型的肺癌中占據(jù)了 80%的比例，而化學(xué)治療法仍然是現(xiàn)在治療的標準方法。雖然運些治療策略極大地改善了 患者們的癥狀和生活質(zhì)量，但是病患的總體存活率仍然很低。因此，尋找和開發(fā)新穎有效的 藥物來預(yù)防和治療肺癌的需求依舊非常迫切。
[0003] 血管生成是指從已有的毛細血管發(fā)展而形成新的血管的過程，其設(shè)及一系列相互 協(xié)調(diào)的內(nèi)皮細胞的活動，包括:血管內(nèi)皮細胞的激活、增殖、遷移、重排和管腔形成。目前已 證明血管生成是實體瘤生長的必備條件，因為腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移依賴于功能性的血管供給 系統(tǒng)的存在。因此，抗腫瘤血管生成成為了一種有廣闊前景的抗癌策略，并且許多抗血管生 成藥物已經(jīng)進入了臨床研究。但是目前大部分的抗腫瘤血管生成候選藥物通常并不是特異 性針對腫瘤細胞并且常常導(dǎo)致健康組織中的血管內(nèi)皮功能障礙W及腫瘤的抗性等一系列 副作用，因此對新穎高效的抗血管生成藥物的持續(xù)尋找仍然在繼續(xù)。
[0004] 海藻是生物活性物質(zhì)的重要來源之一，運些海藻活性物質(zhì)在醫(yī)藥、食品和生物醫(yī) 藥產(chǎn)業(yè)具有極大的發(fā)展?jié)摿?。按照含有的色素，海藻主要分為褐藻、綠藻和紅藻=大類，其 中褐藻因為含有包括多糖和多酪在內(nèi)的許多不同的生物活性物質(zhì)而著稱。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為
[0007] -種全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用，全緣馬尾藻多糖作為制備抗癌藥物或抗癌保健品中 的應(yīng)用;或，全緣馬尾藻多糖作為制備抗血管再生的藥物或抗血管再生成保健品中的應(yīng)用。
[0008] 所述全緣馬尾藻多糖作為制備抗非小細胞型肺癌藥物中的應(yīng)用。
[0009] 所述全緣馬尾藻多糖的獲得是W全緣馬尾藻原料采用熱水提取法提取，而后過 濾、濃縮，濃縮后經(jīng)醇沉、干燥，即得全緣馬尾藻多糖。
[0010] 具體是，w全緣馬尾藻原料采用11(TC、高壓O.lMPa熱水提取法提取，而后過濾、濃 縮，濃縮后經(jīng)醇沉、干燥，即得全緣馬尾藻多糖。
[0011] 所述全緣馬尾藻多糖分子量范圍為100~200W)a，主要組成單糖為巖藻糖和半乳 糖，兩者的摩爾比例為1~10:1，硫酸根含量為15%~50%。
[0012] 所述全緣馬尾藻來源于褐藻口，褐藻綱，墨角藻目，馬尾藻科的馬尾藻屬。
[0013] 本發(fā)明所具有的優(yōu)點為：
[0014] 本發(fā)明全緣馬尾藻多糖應(yīng)用抗癌和抗血管生成藥物和保健品，能夠誘導(dǎo)癌細胞調(diào) 亡，降低線粒體膜電位，阻滯G2/M細胞周期，抑制內(nèi)皮細胞增殖，抑制HUVEC細胞遷移，抑制 HUVEC細胞的小管擬態(tài)的形成，從而對惡性腫瘤有一定的預(yù)防和治療作用。
【附圖說明】
[0015] 圖1為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖的紅外譜圖。
[0016] 圖2為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對肺癌A549細胞增殖活性 影響的柱狀圖。
[0017] 圖3A為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對肺癌A549細胞核形態(tài)影 響圖。
[0018] 圖3B為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對肺癌A549細胞調(diào)亡的誘 導(dǎo)作用圖。
[0019] 圖3C為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對肺癌A549細胞各個調(diào)亡 時間細胞數(shù)的累積圖。
[0020] 圖4為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥誘導(dǎo)肺癌A549細胞線粒體 膜電位的降低圖。
[0021] 圖5A為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥誘導(dǎo)肺癌A549細胞活性氧 的產(chǎn)生圖；
[0022] 圖5B為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥誘導(dǎo)肺癌A549細胞活性氧 產(chǎn)生的定量分析圖。
[0023] 圖6A為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥誘導(dǎo)肺癌A549細胞G2/M細 胞周期阻滯圖；
[0024] 圖6B為本發(fā)明實施例1提供的各個細胞周期細胞數(shù)量的比例分析圖。
[0025] 圖7為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對肺癌A549細胞調(diào)亡相關(guān) 蛋白表達量的影響圖。
[0026] 圖8為為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對人廝靜脈內(nèi)皮細胞 HUVEC增殖活性影響的柱狀圖。
[0027] 圖9為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖的劃痕法(A)和Transwell法(B)檢測 全緣馬尾藻多糖體外給藥對人廝靜脈內(nèi)皮細胞冊VEC遷移活性的影響圖；圖9C劃痕法和圖 9D Transwell法實驗結(jié)果定量分析圖。
[0028] 圖10為為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對人廝靜脈內(nèi)皮細胞 HUVEC管腔形成活性的影響圖。
[0029] 圖11為本發(fā)明實施例1提供的全緣馬尾藻多糖體內(nèi)給藥對斑馬魚新生血管生成的 影響圖。
【具體實施方式】
[0030] 本發(fā)明松藻多糖具有抗癌活性和抗血管生成活性，所述全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用是 指具有抗癌活性和抗血管生成活性的全緣馬尾藻多糖在制備抗癌藥物或/和抗癌保健品中 的應(yīng)用，抗血管生成藥物藥物或/和抗血管生成保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)全緣馬尾 藻多糖對抗癌和抗血管具有顯著的抑制作用，并公開了將全緣馬尾藻多糖應(yīng)用于制備抗癌 和抗血管生成藥物和保健品，能夠誘導(dǎo)癌細胞調(diào)亡，降低線粒體膜電位，阻滯G2/M細胞周 期，抑制內(nèi)皮細胞增殖，抑制冊VEC細胞遷移，抑制冊VEC細胞的小管擬態(tài)的形成，從而對惡 性腫瘤有一定的預(yù)防和治療作用。
[0031] 實施例1，全緣馬尾藻多糖的制備
[0032] 取全緣馬尾藻干品lOOg，用2500ml自來水在高壓鍋中于110°C，0.1 MPa提取4h，篩 絹過濾分離藻渣，娃藻±過濾，過濾提取液，濾液濃縮至400ml，加入4g氯化儀和100ml無水 乙醇去除褐藻膠，離屯、（400化pm, 15min)，除去沉淀，取上清液濃縮至200ml，將濃縮液裝入 lOOODa的透析袋透析，而后經(jīng)自來水或蒸饋水分別透析24h，透析后再將透析液濃縮至 50ml，濃縮液冷凍干燥，即得水提取的全緣馬尾藻多糖(SPS)，產(chǎn)率為2.5 %。
[0033] 全緣馬尾藻多糖的化學(xué)組分分析顯示含有巖藻糖為29.44%，糖醒酸為4.88%，硫 酸根為37.26%;分子量顯示為122.91d)a;單糖摩爾比為鼠李糖，葡萄糖，半乳糖，木糖和巖 藻糖(0.06:0.19:0.58:0.17:1)。紅外譜圖（圖1)在1221畑1-1和818畑1-1出現(xiàn)硫酸基特征吸收 峰，說明全緣馬尾藻多糖為硫酸多糖。
[0034] 實施例2,全緣馬尾藻多糖的制備
[00巧]向1500ml熱水(70-80°C)中加入12.5ml優(yōu)級鹽酸，放入全緣馬尾藻干品lOOg，攬 拌，浸泡提取2小時，篩絹過濾分離藻渣，氨氧化鋼中和，娃藻±過濾，過濾提取液，濾液濃縮 至200ml，將濃縮液裝入1000化的透析袋透析，而后經(jīng)自來水或蒸饋水分別透析24h，透析后 再將透析液濃縮至50ml，濃縮液冷凍干燥，即得酸提取的全緣馬尾藻多糖(SPS-A)，產(chǎn)率為 2.89%。
[0036] 全緣馬尾藻多糖的化學(xué)組分分析顯示含有巖藻糖為26.14%，糖醒酸為11.23%， 硫酸根為37.67%;分子量顯示為115.化化;單糖摩爾比為鼠李糖，葡萄糖，半乳糖，木糖和 巖藻糖(0.04:0.09:0.60:0.16:1)。紅外譜圖（圖1)在1221cm-i和818cnfi出現(xiàn)硫酸基特征吸 收峰，也說明全緣馬尾藻多糖為硫酸多糖。
[0037] 實施例3
[0038] SPS和SPS-A體外給藥對肺癌A549細胞增殖活性的影響
[0039] MTT比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的 班巧酸脫氨酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瑣并沉積在細胞中，而死細 胞無此功能。二甲基亞諷能溶解細胞中的甲瑣，通過酶標儀測定其在540nm波長處光吸收 值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。該方 法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗W 及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟。
[0040] 實驗方法
[0041] 取對數(shù)生長期的A549細胞，膜蛋白酶消化成單細胞懸液，細胞計數(shù)后，按照4X103 個/孔的密度接種于96孔細胞培養(yǎng)板，放入5 % C〇2、37 °C的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);第二天，向96 孔板中加入終濃度為0,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9，1.0曰11(11.5111邑/1111的5口5，每組 濃度設(shè)6個復(fù)孔，放入培養(yǎng)箱中分別繼續(xù)培養(yǎng)1化和24h;SPS處理之后，每孔加入20μ1的MTT 溶液(濃度為5mg/ml)，放入培養(yǎng)箱中再接著培養(yǎng)4h，而后倒掉96孔板中的培養(yǎng)上清，每孔加 入15化1的二甲基亞諷，搖床上振蕩lOmin混勻，用酶標儀測定570皿處的吸光值;按照下方 的方法計算冊VEC細胞的增殖抑制率:增殖抑制率（％ ) = (0D娜貓一0D胃)/0D娜貓X 100%。 實驗重復(fù)Ξ次，數(shù)據(jù)WF+幻)表示，通過SPSS16,采