專利名稱：：功能性多糖茶及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及具有通便、調(diào)節(jié)胃腸功能的保健食品-功能性多糖茶及其制備方法，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：糖類藥物的研發(fā)目前被認(rèn)為是糖生物學(xué)研究的重要組成部分，國(guó)際上以美國(guó)、日本、歐洲研究進(jìn)展較快?，F(xiàn)已確認(rèn)糖鏈參與生物體受精、發(fā)育、分化、免疫、神經(jīng)系統(tǒng)的識(shí)別與調(diào)控，并在微生物與動(dòng)物、微生物與植物的相互作用中擔(dān)負(fù)重要作用；人體的衰老、癌癥過(guò)程也涉及糖鏈的參與。美國(guó)已利用其在生物學(xué)方面的優(yōu)勢(shì)，在特殊糖產(chǎn)品的開發(fā)上發(fā)展迅速。日本的科技策略是以產(chǎn)業(yè)應(yīng)用促進(jìn)基礎(chǔ)研究，糖生物工程技術(shù)已得到全面發(fā)展，在糖類藥物的應(yīng)用開發(fā)方面更是走在了世界的前列。目前我國(guó)糖產(chǎn)品的生產(chǎn)主要集中在一些大宗產(chǎn)品上，如異麥芽糖、果糖和大豆糖等，這類糖生產(chǎn)技術(shù)和市場(chǎng)相對(duì)成熟和穩(wěn)定。我國(guó)糖產(chǎn)品主要用于食品添加劑和功能性保健食品，在飼料、生物農(nóng)藥和藥物上也有一些應(yīng)用，應(yīng)用糖產(chǎn)品開發(fā)的終端產(chǎn)品市場(chǎng)規(guī)模達(dá)100億元以上。除此之外，目前正加緊研發(fā)的功能性更好、有效成分含量更高的糖品種有甘露糖(包括半乳甘露糖)、木糖以及殼聚糖等。"十五"期間，一些具有一定規(guī)模和實(shí)力的科研機(jī)構(gòu)和公司正紛紛涉足這些"新型"糖產(chǎn)品的深度研發(fā)和生產(chǎn)。隨著人們生活節(jié)奏的加快以及環(huán)境的不斷變化，越來(lái)越多的人受到便秘的困擾。宿便可以產(chǎn)生多種毒素并被腸道反復(fù)吸收，通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)人體的各個(gè)部位，導(dǎo)致面色晦暗、皮膚粗糙、毛孔擴(kuò)張、褐斑、痤瘡、細(xì)小皺紋、肥胖、乏力、煩躁，宿便中的毒素進(jìn)入血液，導(dǎo)致中老年人出現(xiàn)高血壓、心臟病等，同時(shí)還會(huì)加重中老年人的心腦血管疾病。目前，臨床上常使用的瀉藥有以下幾種①非吸收的鹽類瀉藥，如硫酸鎂、硫酸鈉等，其在腸道難以吸收，大量口服形成高滲透壓而阻止腸內(nèi)水分的吸收，擴(kuò)張腸道，刺激腸壁，促進(jìn)腸道蠕動(dòng)。但硫酸鎂、硫酸鈉下瀉作用較劇，可引起反射性盆腔充血和失水。②食物纖維素類瀉藥，包括蔬菜、水果中天然和半合成的多糖及纖維素衍生物如甲基纖維素、羧甲基纖維素等。其不被腸道吸收，通過(guò)增加腸內(nèi)容積并保持糞便濕軟而達(dá)到通便作用。但其起效較慢，且有時(shí)治療效果不明顯。③接觸性瀉藥，如酚酞。其口服后在腸道內(nèi)與堿性腸液相遇形成可溶性鈉鹽，能促進(jìn)結(jié)腸蠕動(dòng)。但其有過(guò)敏性反應(yīng)，發(fā)生腸炎、皮炎及出血傾向等不良反應(yīng)。④潤(rùn)滑性瀉藥，如開塞露。其主要成分為甘油、抑制菌等，是通過(guò)刺激腸壁引起排便反射來(lái)幫助排便，如果經(jīng)常使用，直腸被刺激次數(shù)越多，其敏感性就越差，一旦適應(yīng)了該藥物將不再有反應(yīng)，特別是那些大便干結(jié)且量少的患者，長(zhǎng)期依賴開塞露排便會(huì)更困難。此外開塞露還會(huì)造成腸壁干燥，經(jīng)常使用會(huì)引起習(xí)慣性便秘，并對(duì)其產(chǎn)生依賴性。市場(chǎng)上的通便保健品藥物大多含大黃、芝硝、決明子、番瀉葉等，因含大量刺激性成分，其產(chǎn)品副作用大，都不宜長(zhǎng)期服用。我們將植物提取多糖與人們?nèi)粘５牟栾嬃辖Y(jié)合起來(lái)，開發(fā)出了功能性多糖茶。
發(fā)明內(nèi)容為了克服現(xiàn)有通便產(chǎn)品含大量刺激性成分，副作用大，不宜長(zhǎng)期服用的不足，本發(fā)明提供了一種功能性多糖茶，有效地解決了問(wèn)題。本發(fā)明所說(shuō)的功能性多糖茶，是由下列重量份的成分組成生白術(shù)多糖580份，生白術(shù)580份、生何首烏515份及荷葉納米粉515份。本發(fā)明還提供了上述功能性多糖茶的制備方法。具體是將配方量的生白術(shù)、生何首烏及荷葉混合并超微粉碎，制得的納米中藥粉與生白術(shù)多糖混合造粒，干燥后得功能性多糖茶。本發(fā)明中所說(shuō)的生白術(shù)多糖可釆用常規(guī)方法制得，但最好是通過(guò)推薦的以下具體步驟制取生白術(shù)多糖的制備取生白術(shù)粗粉加20倍水(W/W)，浸泡一h后微沸煎煮2h，濾過(guò)，濾渣再加20倍水，微沸煎煮lh，濾過(guò)，合并兩次濾液，加10%(W/W)ZnS04溶液(0.4L左右)和飽和Ba(OH)2溶液(3L左右)，振搖靜置。上清液加幾滴Ba(OH)2溶液直至蛋白質(zhì)沉淀產(chǎn)生完全，傾注法過(guò)濾，濾液濃縮至2L左右，靜置過(guò)夜，離心除去沉淀，加4倍量的95%乙醇，靜置過(guò)夜，離心后傾注法過(guò)濾，沉淀用95%乙醇洗滌，減壓抽干，真空干燥即得白術(shù)多糖，收率在20%以上。本發(fā)明的功能性多糖茶具有潤(rùn)腸通便、提高機(jī)體免疫力、抗衰老、降血糖等功效。產(chǎn)品作用機(jī)理如下①增強(qiáng)腸蠕動(dòng)，加速腸內(nèi)容物在結(jié)腸內(nèi)的轉(zhuǎn)移，促進(jìn)人體胃腸道內(nèi)的糞便排出體外。②健脾補(bǔ)腎，潤(rùn)腸通便，使糞便松軟潤(rùn)滑，容易排出。中醫(yī)認(rèn)為"痛則不通，不通則痛"，中、老年人、病后產(chǎn)后等大便不通，多為脾虛腎虧，中醫(yī)稱"虛秘"。使用市場(chǎng)上的通便保健品大多含大黃、芒硝、決明子、番瀉葉等，因含大量刺激性成分，大便不通雖可短期緩解，但勉削正氣，日久脾虛腎虧更重，大便不通越來(lái)越嚴(yán)重，造成惡性循環(huán)。我們開發(fā)的功能性多糖茶健脾補(bǔ)腎，通便療效甚佳。白術(shù)是傳統(tǒng)中藥。白術(shù)中含有多糖、蒼術(shù)酮、蒼術(shù)醇、白術(shù)內(nèi)酯、含氧香豆素類、氨基酸及樹脂等成分，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗安胎等功效，是衛(wèi)生部審定的預(yù)防"非典"參考中藥處方中所用藥材之一。多糖和揮發(fā)油是白術(shù)發(fā)生藥效的重要物質(zhì)基礎(chǔ)之一。近年來(lái)，對(duì)于多糖在抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、降血糖等方面的作用，國(guó)內(nèi)外亦有報(bào)道。生何首烏具有補(bǔ)肝腎，益精血，烏須發(fā)，生發(fā)，強(qiáng)筋骨之功效。能促進(jìn)造血功能，提高機(jī)體免疫功能，降血脂，抗動(dòng)脈粥樣硬化，保肝，延緩衰老，潤(rùn)腸通便等。何首烏功效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)主要為磷脂、蒽醌類、葡萄糖苷類等成分。荷葉中國(guó)自古以來(lái)就把荷葉奉為瘦身的良藥。荷葉為多年水生草本植物蓮的葉片。其化學(xué)成分主要有荷葉堿、檸檬酸、蘋果酸、葡萄糖酸、草酸、琥珀酸及其它抗有絲分裂作用的堿性成分。藥理研究發(fā)現(xiàn)，荷葉具有解熱、抑菌、解痙作用。經(jīng)過(guò)炮制后的荷葉味苦澀、微咸，性辛涼，具有清暑利濕、升陽(yáng)發(fā)散、祛瘀止血等作用，對(duì)多種病癥均有一定療效。功能性多糖茶補(bǔ)中求通，恢復(fù)腸道的功能，使腸道菌相發(fā)生變化，抑制腐敗菌增多，促進(jìn)腸道的生態(tài)平衡使腸道的功能逐漸恢復(fù)。茶中不含瀉藥，無(wú)任何毒副反應(yīng)。圖1是小鼠近端結(jié)腸組織c-kit+和nNOS+表達(dá)照片A.正常對(duì)照組小鼠近端結(jié)腸c-kit+表達(dá)(x400)E.正常對(duì)照組小鼠近端結(jié)腸nNOS+"400)B.模型對(duì)照組小鼠近端結(jié)腸c-kit+表達(dá)(x400)F.模型對(duì)照組小鼠近端結(jié)腸nNOS+(x400)C.西藥尼為孚組小鼠近端結(jié)腸c-kit+表達(dá)(x400)0.西藥尼為孚組小鼠近端結(jié)腸1^03+(x400)D.功能性多糖茶中劑量組小鼠近端結(jié)腸c-kh+表達(dá)(x400)H.功能性多糖茶中劑量組小鼠近端結(jié)腸nNOS+"400)圖2是小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸組織c-kit+和nNOS+表達(dá)照片I.正常對(duì)照組小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸c-kit+表達(dá)(x400)M.正常對(duì)照組小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸nNOS+(x400)J.模型對(duì)照組小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸c-kit+表達(dá)(x400)N.模型對(duì)照組小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸nNOS+(x400)K.西藥尼為孚組小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸c-kit+表達(dá)(x400)0.西藥尼為孚組小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸1^03+(x400)L.功能性多糖茶中劑量小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸c-kit+表達(dá)(x400)P功能性多糖茶中劑量小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸nNOS+(x400)圖3是近端結(jié)腸c-kit+細(xì)胞與nNOS+細(xì)胞平均光密度值相關(guān)性分析圖4是各組近端結(jié)腸c-kit+細(xì)胞平均光密度值與小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)平均積分的相關(guān)性分析(散點(diǎn)圖)圖5是各組近端結(jié)腸nNOS+細(xì)胞平均光密度值與小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)平均積分的相關(guān)性分析(散點(diǎn)圖)具體實(shí)施例方式5以下實(shí)驗(yàn)中涉及溶液百分濃度，乙醇為體積分?jǐn)?shù)，其余為質(zhì)量分?jǐn)?shù)。實(shí)施例1:一、制備取生白術(shù)粗粉加20倍水(W/W)，浸泡一h后微沸煎煮2h，濾過(guò)，濾渣再加20倍水，微沸煎煮lh，濾過(guò)，合并兩次濾液，加10%ZnSO4(W/W)溶液(0.4L左右)和飽和Ba(OH)2溶液(3L左右)，振搖靜置。上清液加幾滴Ba(OH)2溶液直至蛋白質(zhì)沉淀產(chǎn)生完全，傾注法過(guò)濾，濾液濃縮至2L左右，靜置過(guò)夜，離心除去沉淀，加4倍量的95%乙醇，靜置過(guò)夜，離心后傾注法過(guò)濾，沉淀用95%乙醇洗滌，減壓抽干，真空干燥即得白術(shù)多糖，收率在20%以上。配方l;將生白術(shù)400g、生何首烏100g及荷葉100g混合并超微粉碎至納米級(jí)粒徑，制得的納米中藥粉與400g生白術(shù)多糖混合造粒，干燥后裝袋或壓制成片得功能性多糖茶。配方2:將生白術(shù)25g、生何首烏25g及荷葉25g混合并超微粉碎至納米級(jí)粒徑，制得的納米中藥粉與200g生白術(shù)多糖混合造粒，干燥后裝袋或壓制成片得功能性多糖茶。配方3:將生白術(shù)200g、生何首烏75g及荷葉75g混合并超微粉碎至納米級(jí)粒徑，制得的納米中藥粉與25g生白術(shù)多糖混合造粒，干燥后裝袋或壓制成片得功能性多糖茶。二、用法、用量每次一袋，(35g/袋)，熱水沖泡，一日三次，飯后服用。三、使用注意事項(xiàng)1.孕婦慎用。2.年青體壯者便秘時(shí)不宜用本藥。3J艮用本藥出現(xiàn)大便稀溏時(shí)應(yīng)立即停服。4對(duì)本品過(guò)敏者禁用，過(guò)敏體質(zhì)者慎用。5.大便溏泄者慎服。6.兒童必須在成人監(jiān)護(hù)下使用。四、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(一)鑒別取供試品三袋研成粉末并取0.5g，加正己烷2ml，超聲處理15min，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述新制備的兩種溶液各10pl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(609(TC):乙酸乙酯=50:1為展開劑，展開；取出，晾干；噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，6在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，并應(yīng)顯有一桃紅色主斑點(diǎn)(蒼術(shù)酮)。(二)多糖含量測(cè)定1、儀器與試藥儀器WFZ-26A型紫外分光光度計(jì)(天津拓普儀器有限公司)試劑75%乙醇、硫酸鋅、氫氧化鋇、硫酸、苯酚(均為分析純)；果糖標(biāo)準(zhǔn)品中國(guó)藥品生物制品檢定所供試品功能性多糖茶2、方法與結(jié)果1)水溶性糖的制備取供試品三袋研成粉末并取2.00g，置圓底燒瓶中，加水20ml，煮2h，濾過(guò)，然后在濾渣中加水15ml，回流煮沸30min，濾過(guò)，合并兩次濾液，加2ml5。/。硫酸鋅溶液和8ml飽和氫氧化鋇溶液，振搖靜置至蛋白質(zhì)沉淀完全，濾過(guò)，保留溶液，加水稀釋至50mL。2)還原性糖的制備取供試品三袋研成粉末并取2.00g，置圓底燒瓶中，加乙醇液30ml，放至85。C水浴中，回流提取lh，過(guò)濾，在濾渣中加乙醇液30ml，同法提取兩次，合并3次濾液，蒸發(fā)掉乙醇后，加水稀釋至100ml還原性糖溶液。3)檢測(cè)方法紫外分光光度法(1)線性關(guān)系考察精密稱取經(jīng)干燥至恒重的果糖標(biāo)準(zhǔn)品100mg，置1000ml量瓶中，加水至刻度，配成濃度為100[ig/ml的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用10ml量瓶8個(gè)，分別加入上述標(biāo)準(zhǔn)貯備液0，1.00，2.00，4.00，5.00，6.00，8.00，9.00ml加水至刻度，分別轉(zhuǎn)移至lOOml的干燥小燒杯中，各加入10ml5。/。苯酚水溶液，混勻，再各加入50ml濃硫酸振搖10min，在85。C的水浴中放置20min,于495nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算回歸方程。(2)精密度試驗(yàn)取果糖標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品溶液，按上述方法操作，重復(fù)測(cè)量6次，記錄測(cè)量值并計(jì)算RSD。(3)穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，按上述方法操作，于12h內(nèi)每隔lh測(cè)定l次吸光度，計(jì)算RSD。(4)回收率試驗(yàn)在水溶性糖溶液和還原性糖溶液中精密加入果糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液(n=6，高、中、低各兩個(gè)劑量)，按供試品溶液的制備方法處理并適當(dāng)稀釋，測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率及其RSD。7(5)樣品含量測(cè)定取水溶性糖溶液l.OOml、還原性糖溶液4.00ml，分別置100ml量瓶中，稀釋至刻度，分別取上述兩種溶液l.OOml，4.00ml，按上述方法操作，于495nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，代入回歸方程計(jì)算百分含量。功能性多糖茶總糖含量應(yīng)^40%。實(shí)施例2藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)(一)功能性多糖茶對(duì)DC所致小鼠STC的治療作用研究1、材料1)生白術(shù)各劑型及其有效成分的制備(1)藥材生白術(shù)飲片，產(chǎn)地浙江，批號(hào)070516，購(gòu)自安徽豐原銅陵中藥飲片有限公司。將其粉碎成粉末狀，過(guò)20目篩。(2)制備方法A.生白術(shù)揮發(fā)油制備采用C02超臨界流體萃取裝置萃取。用前先用95%酒精清洗儀器，直到流出的液體變?yōu)闊o(wú)色，并將其排盡，以排除其他藥材影響。加粉碎后的生白術(shù)粉末9kg，萃取溫度50'C，壓力為28Mpa，C02流量為120L/h。在分離溫度35°C，壓力為5Mpa條件下收集到揮發(fā)油316.8654g，得率2.11%。B.功能性多糖茶制備按實(shí)施例1的方法制備配方1的產(chǎn)品C.生白術(shù)水煎劑制備-取生O術(shù)粉末lkg，蒸餾水浸泡12小時(shí)后自動(dòng)煎藥鍋煎煮，煮沸后再保持微沸30分鐘，12層紗布過(guò)濾，重復(fù)兩次，合并三次濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀80'C加熱濃縮至500ml，每毫升相當(dāng)于原藥材2g。D.生白術(shù)結(jié)腸微丸由揚(yáng)州聯(lián)環(huán)制藥有限公司研制。2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，清潔級(jí)，140只，雌雄各半，18~25g，由揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房購(gòu)自南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。3)藥物復(fù)方地芬諾酯(每片含鹽酸地芬諾酯2.5mg，硫酸阿托品0.025mg),批號(hào)0707002,常州康普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，購(gòu)自蘇北人民醫(yī)院。尼為孚(馬來(lái)酸曲布美汀分散片)，國(guó)藥準(zhǔn)字HZ0040882，浙江昂立康制藥有限公司，購(gòu)自江蘇省蘇北人民醫(yī)院。硫酸鋇(I型)干混懸劑，批號(hào)060310，青島東風(fēng)化工有限公司生產(chǎn)，蘇北人民醫(yī)院放射科贈(zèng)。4)實(shí)驗(yàn)試劑配制(水為溶劑)按照體表系數(shù)折算人和小鼠的用藥量，人(70kg)和小鼠(20g)的換算系數(shù)為0.0026生白術(shù)水煎劑稀釋成濃度為780g(相當(dāng)生藥)/L，置-2(TC冰箱內(nèi)保存。生白術(shù)揮發(fā)油配制成濃度分別為390g(相當(dāng)生藥)/L、780g(相當(dāng)生藥)/L、1560g(相當(dāng)生藥)/L的低、中、高組，置-2(TC冰箱內(nèi)保存，用前搖勻。功能性多糖茶配制成濃度分別為390g(相當(dāng)生藥)/L、780g(相當(dāng)生藥)/L、1560g(相當(dāng)生藥)/L的低、中、高組，置-2(TC冰箱內(nèi)保存。尼為孚配制成濃度為7.80g/L的溶液，置-20'C冰箱內(nèi)保存。復(fù)方地芬諾酯片，研缽研成極細(xì)粉末，以鹽酸地芬諾酯計(jì)，配制成5g/L的懸濁液，置4'C冰箱備用。硫酸鋇混懸劑臨用前配制成200%糊狀液。5)實(shí)驗(yàn)儀器超臨界流體萃取裝置HA221-40(50)-25型南通市華安超臨界萃取有限公司(江蘇省中醫(yī)藥研究院.南京)；中藥煎藥機(jī)YFT20型北京東華原醫(yī)療設(shè)備有限責(zé)任公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器SENCOR203型上海申生科技有限公司產(chǎn)品；電子天平DT500:常熟市百靈天平儀器有限公司；電子天平MP200A:上海市第二天平儀器廠；微波爐WP800TL23-K1:順德市格蘭仕微波爐電器有限公司2、實(shí)驗(yàn)方法1)動(dòng)物分組A.空白對(duì)照組12只，不造模，給藥以蒸餾水10ml/kg*d灌胃。B.模型對(duì)照組12只，造模，給藥以蒸餾水10ml/kg*d灌胃。C.西藥尼為孚組12只，造模，給藥以尼為孚78mg/kg'd灌胃。D.生白術(shù)水煎劑組12只，造模，給藥以相當(dāng)于生藥7.8g/kg'd灌胃。E.生白術(shù)結(jié)腸微丸組12只，造模，給藥以相當(dāng)于生藥7.8g/kg'd灌胃。F.生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組12只，造模，給藥以相當(dāng)于生藥3.9g/kg'd灌胃。G.生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組12只，造模，給藥以相當(dāng)于生藥7.8g/kg"d灌胃。H.生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組12只，造模，給藥以相當(dāng)于生藥15.6g/kg*d灌胃。I.功能性多糖茶低劑量組12只，造模，給藥以相當(dāng)于生藥3.9g/kg，d灌胃。J.功能性多糖茶中劑量組12只，造模，給藥以相當(dāng)于生藥7.8g/kg.d灌胃。K.功能性多糖茶高劑量組12只，造模，給藥以相當(dāng)于生藥15.6g/kgd灌胃。2)造模方法及給藥方法小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)兩天。然后依照文獻(xiàn)[2方法加以改進(jìn)進(jìn)行造模，以復(fù)方地芬諾酯50mg/kg灌胃，連續(xù)14天。給藥14天劑量如上。生白術(shù)結(jié)腸微丸用自制灌胃針每日灌服。其余各組常規(guī)方法給小鼠灌胃。3)觀察指標(biāo)正常飼養(yǎng)期、便秘造模期和藥物治療期結(jié)束前日予200%硫酸鋇糊狀液0.3ml/只灌胃，記錄時(shí)刻，待其排出第一粒白色糞便時(shí)再記錄時(shí)刻，從而計(jì)算出口-肛傳輸時(shí)間。正常飼養(yǎng)期、便秘造模期和藥物治療期結(jié)束當(dāng)天10:OO將全部小鼠單籠飼養(yǎng)，下午13:00收集3h糞便放于紙上，稱重，電子天平稱其重量(糞便濕重)，微波爐高火烘烤5分鐘，稱得干重，含水量=(濕重干重)/濕重X100。/a。次日上午10:00收集324h糞便，如上得出324h糞便濕重及324h含水量。此外，分別按照口肛傳輸時(shí)間、3h糞便濕重及含水量、3~24h糞便濕重及含水量五個(gè)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，按照治療效果將各組從優(yōu)到差進(jìn)行排序，按照順序依次記為1~11分，并將各組的五個(gè)分值輸入統(tǒng)計(jì)軟件，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，綜合五個(gè)方面評(píng)價(jià)各組治療效果。4)統(tǒng)計(jì)處理所得數(shù)據(jù)輸入SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包及EXCEL軟件進(jìn)行處理，描述性資料以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(；士s)表示，多組間比較采用方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗(yàn)LSD法。而小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)積分的多組整體比較采用Kmskal-Wallis檢驗(yàn)，組間兩兩比較則采用Mann-Whitney檢驗(yàn)。以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，以P<0.01為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、結(jié)果1)小鼠一般情況和體重變化情況各組小鼠在三期均能正常飲水、進(jìn)食。造模期小鼠死亡三只，西藥尼為孚組及生白術(shù)低劑量組小鼠在給藥期各死亡一只。治療期功能性多糖茶中劑量組小鼠的活動(dòng)狀況及生長(zhǎng)情況均要好于其余各組。102)口-肛傳輸時(shí)間(1)模型期各組均明顯長(zhǎng)于正常對(duì)照組(P<0.01)。(2)給藥期A.與正常對(duì)照組相比模型對(duì)照組、生白術(shù)結(jié)腸微丸組、西藥尼為孚組、生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組均顯著長(zhǎng)于該組(P<0.01);B.與模型對(duì)照組相比西藥尼為孚組，生白術(shù)水煎劑組、多糖功能茶各劑量組均短于該組，前者(P<0.05)，后三者(P<0.01);C.與西藥尼為孚組相比生白術(shù)水煎劑組、多糖功能茶各劑量組均顯著短于該組(P〈0.01)，生白術(shù)結(jié)腸微丸組則長(zhǎng)于該組(P<0.05)。此外，生白術(shù)各組間比較水煎劑組及多糖功能茶各劑量組均短于結(jié)腸微丸組、揮發(fā)油各組(P〈0.01)。多糖功能茶中劑量組短于水煎劑組、多糖功能茶低、高劑量組(P〈0.01)。(見表l)表l小鼠口肛傳輸時(shí)間(min,;c±_g)_正常期模型期給藥期正常對(duì)照組119.58±23.60120.67±23.96119.92±21.14模型對(duì)照組123.25±27.79224.17±27.47180.67±26.95女西藥尼為孚組122.09±14.18223.00±29.03161.73±23.93*眾生白術(shù)水煎劑組120.17±16.56222.67±31.81132.00土22.36#厶生白術(shù)結(jié)腸微丸組121.33±11.37219.58±31.88跳00±21.生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組120.70±18.10218.82±32.07178.27±20.16女V生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組120.75±22.54220.92±28.21176.75±14.44★▽生A術(shù)揮發(fā)油高劑量組122.28±14.40218.00±28.25178.45±22.46功能性多糖茶低劑量組120.82±17.39228.45±38.89129.64±16.10#A*T功能性多糖茶中劑量組122.58±14.70221.25±30.23104.25±14.Ol共AV*功能性多糖茶高劑量組119.73±20.39227.09±36.36129.64±17.70#A*▼注VS正常對(duì)照組女P〈0.01;VS模型對(duì)照組弁P《0.01,眾P〈0.05;VS西藥尼為孚組AP<0.01，女P〈0.05;VS生白術(shù)水煎劑組VP〈0.01;VS生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組及生白術(shù)組*P<0.01;VS功能性多糖茶中劑量組TP〈0.01。3)3h糞便濕重(1)模型期各組均明顯輕于正常對(duì)照組(P<0.01)。(2)給藥期11A.與正常對(duì)照組相比模型對(duì)照組輕于該組(P<0.01)，而生白術(shù)水煎劑組、結(jié)腸微丸組、多糖功能茶低、中劑量組則重于該組(P<0.01);B.與模型對(duì)照組相比，各組均重于該組(P<0.01);C.與西藥尼為孚組相比，生白術(shù)水煎劑組、多糖功能茶中劑量組重于該組(P<0.01)，生白術(shù)結(jié)腸微丸組亦重于該組(P<0.05)。此外，生白術(shù)各組間比較，結(jié)腸微丸組重于揮發(fā)油中劑量組及多糖功能茶高劑量組(P<0.05)，同時(shí)重于揮發(fā)油高劑量組(P<0.01);水煎劑組均重于揮發(fā)油各組及多糖功能茶高劑量組(P<0.01);多糖功能茶中劑量組明顯重于各組(P<0.01)。(見表2)表23h糞便濕重(g，；±s)正常期模型期給藥期正常對(duì)照組0.3433±0.06740.3389±0.02700.3550±0.0325模型對(duì)照組0.3589±0.04270.1228土0.02610.1970±0.0433大西藥尼為孚組0.3747±0.03530.1157±0.01810.3781±0.0387#生白術(shù)水煎劑組0.3548土0.05620.1288±0.02620.4144±0.0224*#△生白術(shù)結(jié)腸微丸組0.3590±0.03600.1247土0.01900.艦l士O.0215*弁眾生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組0.3735±0.02990.1155±0.02770.3799±0.0360#VT生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組0.3719±0.03720.ino土o.01930.3694±0.0273#V*▼生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組0.3676±0.03040.1155±0.01880.3775±0.0291#W功能性多糖茶低劑量組0.3499±0.02720.1144±0.01650.3891±0.0261女#T功能性多糖茶中劑量組0.3694±0.03320.1303±0.02760.5333±0.0245*#△▽*▲功能性多糖茶高劑量組0.3455±0.03050.1146±0.02130.3746±0.0339弁V女T注VS正常對(duì)照組頭P〈0.01;VS模型對(duì)照組弁P〈0.01;VS西藥尼為孚組厶P〈0.01,眾P〈0.05;VS生白術(shù)水煎劑組VP〈0.01;VS生白術(shù)組*P<0.01,女P〈0.05;VS生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組AP〈0.01;VS功能性多糖茶中劑量組TP〈0.01。4)3h糞便含水量(1)模型期各組均明顯小于正常對(duì)照組(P<0.01)。(2)給藥期-A.與正常對(duì)照組相比模型對(duì)照組、生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組及功能性多糖茶低劑量組均小于該組(P<0.01),西藥尼為孚組亦小于該組(P<0.05)，而功能性多糖茶中、高劑量組則顯著大于該組(P<0.01);B.與模型對(duì)照組相比除生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組與之無(wú)顯著差異外，其余各組均大于該組(P<0.01);C.與西藥尼為孚組相比功能性多糖茶中、高劑量組及生白術(shù)水煎劑組均大于該組，前兩者(P<0.01)，后者(P<0.05)，而生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組均小于該組(P<0.01)。此外，生白術(shù)各組間比較水煎劑組及多糖功能茶各劑量組均顯著大于揮發(fā)油各組(P<0.01);水煎劑組均大于多糖功能茶低劑量組而小于多糖功能茶中、高劑量組(P<0.01);多糖功能茶中、高劑量組大于多糖功能茶低劑量組(P<0.01)。(見表3)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注VS正常對(duì)照組大P〈0.01，女P〈0.05;VS模型對(duì)照組弁P〈0.01;VS西藥尼為孚組AP<0.01，*P<0.05;VS生白術(shù)水煎劑及組VP〈0.01;vs生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組*P<0.01;VS功能性多糖茶中、髙劑量組VP〈0.01。5)324h糞便濕重(1)模型期各組均明顯輕于正常對(duì)照組(P<0.01)。(2)給藥期A.與正常對(duì)照組相比模型對(duì)照組、西藥尼為孚組及生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組均輕于該組(P<0.01)，而功能性多糖茶中劑量組重于該組(P<0.01);B.與模型對(duì)照組相比除生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組外，其余各組均重于該組(P<0.01);C.與西藥尼為孚組相比生白術(shù)結(jié)腸微丸組、功能性多糖茶中高劑量組重于該組(前者P<0.05，后兩者P〈0.01)，生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組均輕于該組(P<0.01)。此外，生白術(shù)各組間比較水煎劑組、結(jié)腸微丸組、多糖功能茶各組均重于揮發(fā)油各組(P<0.01)。多糖功能茶中劑量組大于水煎劑組、結(jié)腸微丸組及多糖功能茶低劑量組(P<0.01)，同時(shí)大于多糖功能茶高劑量組(P<0.05)。(見表4)表43-24h糞便濕重(g,;±s)正常期模型期給藥期正常對(duì)照組3.0048±0.49023.0512±0.23413.0591±0.3247模型對(duì)照組2.9542±0.34581.3689±0.18501.5057±0.2430★西藥尼為孚組3.0229±0.47511.3289±0.20062.7719士0.3400*#生白術(shù)水煎劑組2.9623±0.22301.3891±0.20472.9484±0.1479#生白術(shù)結(jié)腸微丸組2.9265±0.11381.3313±0.15572.9784±0.2312#眾生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組2.9234±0.16801.3350±0.35181.5405±0.1646*△▽生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組2.9017±0.18291.3756±0.18561.5273±0.1857*△▽生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組2.9334±0.18841.3832±0.07501.5408±0.0920*△▽功能性多糖茶低劑量組2.9973±0.21351.3757±0.25562.9336±0.1832弁*▼功能性多糖茶中劑量組2.9893±0.14151.3921±0.20763.3168±0.2483*#△▽*功能性多糖茶高劑量組2.9642±0.28271.3498±0.22403.0851±0.1608#厶*★注VS正常對(duì)照組女P〈0.01;VS模型對(duì)照組弁P〈0.01;VS西藥尼為孚組AP〈0.01,眾P〈0.05;VS生白術(shù)水煎劑及組VP〈0.01;VS生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組*P<0.01;VS功能性多糖茶中劑量組TP《0.01，女P〈0.05。6)324h糞便含水量〔1)模型期各組均明顯輕于正常對(duì)照組(P<0.01)。(2)給藥期A.與正常對(duì)照組相比模型對(duì)照組、生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組小于該組(P<0.01)，功能性多糖茶中劑量組則大于該組(P<0.05);B.與模型對(duì)照組相比除生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組外，其余各組均大于該組(P<0.01);C.與西藥尼為孚組相比生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組小于該組(P<0.01)，功能性多糖茶中劑量大于該組(P<0.01)。此外，生白術(shù)各組間比較水煎劑組、結(jié)腸微丸組、多糖功能茶各劑量組均重于揮發(fā)油各劑量組(P<0.01);多糖功能茶中劑量組大于水煎劑組、結(jié)腸i![丸組及多糖功能茶高劑量組(P<0.01)，同時(shí)大于多糖功能茶低劑量組(P<0.05)。(見表5)14表53-24h糞便含水量(％,x±s)正常期模型期給藥期正常對(duì)照組43.89±5.3643.44±5.2342.47±4.81模型對(duì)照組42.7±5.0026.19±2.5136.39±3.54★西藥尼為孚組43.68±4.5626.03±1.5842.42±4.86井生白術(shù)水煎劑組44.82±4.4827.54±4.7441.88±2.04#生白術(shù)結(jié)腸微丸組43.43±3.2327.37±1.4841.80±2.21#生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組43.51±2.4627.48±2.0536.16±3.生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組43.25±3.3827.44±2.7636.13±3.生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組44.65±3.3326.75±3.3936.48±2.功能性多糖茶低劑量組43.65±4.4126.41±5.4543.57±5.62#*★功能性多糖茶中劑量組44.06±4.1027.00±2.7347.34±2.61*#△▽*功能性多糖茶高劑量組43.93±1.6826.11±3.3642.78±6.47#*▼注VS正常對(duì)照組大P〈0.01;VS模型對(duì)照組井P〈0.01;VS西藥尼為孚組AP〈0.01，；VS生白術(shù)水煎劑及組VP〈0.01;VS生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組*P<0.01;VS功能性多糖茶中劑量組TP〈0.01，女P〈0.05。7)給藥期各指標(biāo)排序及分值(見表6、表7)表6排便評(píng)價(jià)指標(biāo)綜合積分(S±s)分組積分正常對(duì)照組4.60±3.13模型對(duì)照組10.60±0.89*西藥尼為孚組6.OO土O.71#生白術(shù)水煎劑組4.20±1.64#V生白術(shù)組5.80±2.77眾生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組8.00土1.87M生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組9.40±1.52*VA生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組8.20±0.84眾※A功能性多糖茶低劑量組4.40±2.07#令§功能性多糖茶中劑量組1.20土0.45T井※厶&女功能性多糖茶高劑量組3.60±2.()#注VS正常對(duì)照組TP〈0.01，*P<0.05;VS模型對(duì)照組弁P〈0.01，眾P〈0.05;VS西藥尼為孚組※P〈0.01,VP<0.05;VS生白術(shù)水煎劑組AP〈0.01，女P〈0.05:VS生白術(shù)結(jié)腸微丸釋放劑組&P〈0.01;VS生白術(shù)揮發(fā)油各組女P〈0.01,令P〈0.05;VS功能性多糖茶低劑量組§P<0.01,0P<0.05。表7排序及積分情況積分口-肛傳輸時(shí)間3h糞便濕重3h糞便含水量3-24h糞便濕重3-24h糞便含水量1功能性多糖茶中劑量組功能性多糖茶中劑量組功能性多糖茶高劑量組功能性多糖茶中劑量組功能性多糖茶中劑量組2正常對(duì)照組生白術(shù)水煎劑組功能性多糖茶中劑量組功能性多糖茶高劑量組功能性多糖茶低劑量組3功能性多糖茶低劑量組生白術(shù)緩釋劑組生白術(shù)水煎劑組正常對(duì)照組功能性多糖茶高劑量組4功能性多糖茶高劑量組功能性多糖茶低劑量組正常對(duì)照組生白術(shù)組正常對(duì)照組5生白術(shù)水煎劑組生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組生白術(shù)緩釋劑組生白術(shù)水煎劑組西藥尼為孚組6西藥尼為孚組西藥尼為孚組西藥尼為孚組功能性多糖茶低劑量組生白術(shù)水煎劑組7生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組功能性多糖茶低劑量組西藥尼為孚組生白術(shù)組8生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組功能性多糖茶高劑量組生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組9生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組模型對(duì)照組10生白術(shù)緩釋劑組正常對(duì)照組生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組11模型對(duì)照組模型對(duì)照組模型對(duì)照組模型對(duì)照組生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組(1)Kruskal-Wallis檢驗(yàn)比較11組的療效積分，得出x2=38.369，PO.001,具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)采用Ma皿-Whitney檢驗(yàn)，兩兩比較各組的小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)綜合積分得出A.與正常對(duì)照組相比模型對(duì)照組、生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組差于該組(P<0.05)，功能性多糖茶中劑量組均優(yōu)于該組(P<0.01);B.與模型對(duì)照組相比西藥尼為孚組、生白術(shù)水煎劑組、功能性多糖茶各劑量組均優(yōu)于該組(P<0.01)，而生白術(shù)結(jié)腸微丸組、揮發(fā)油低、高劑量組亦優(yōu)于該組(P<0.05);C.與西藥尼為孚組相比生白術(shù)水煎劑組、功能性多糖茶中劑量組均優(yōu)于該組(前者P〈160.05，后者P〈0.01);揮發(fā)油中、高劑量組差于該組(P<0.05)。此外，生白術(shù)各組間比較水煎劑組優(yōu)于揮發(fā)油中、高劑量組及低劑量組(前兩者P<0.01，后者P〈0.05);多糖功能茶低、高劑量組優(yōu)于揮發(fā)油各劑量組(P<0.05);多糖功能茶中劑量組優(yōu)于其余生白術(shù)各組(除多糖功能茶高劑量組P〈0.05夕卜，其余P〈0.01)。各組小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)綜合積分排序功能性多糖茶中劑量組〉功能性多糖茶高劑量組>生白術(shù)水煎劑組〉功能性多糖茶低劑量組>正常對(duì)照組〉生白術(shù)組>西藥尼為孚組>生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組〉生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組〉生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組>模型對(duì)照組4、結(jié)論白術(shù)(rhizomaatractylodismacrocephalae)，為菊禾斗植物白術(shù)(Atractylodesmacrocephalaekoedz)的干燥根莖，性溫，味甘、苦，歸脾、胃經(jīng)，具有補(bǔ)脾益胃，燥濕和中之功效。《別錄》中云"……土旺則能健運(yùn)，故食停滯者，有痞積不通者，皆用之(白術(shù))"。《全生指迷方》中載有寬中丸，其功效為通便利腸，組成為白術(shù)和橘皮。汪機(jī)《本草會(huì)編》有云"脾惡濕，濕勝則氣不得旋化，津何由生？用白術(shù)以除其濕，則氣得周流而津液生矣。"這些歷代文獻(xiàn)都清晰的表明白術(shù)具有健脾益氣、利濕運(yùn)腑的多種功效，《中華本草》亦指出脾虛不能為胃行其津液，腸道失潤(rùn)，可重用白術(shù)加味"運(yùn)化脾陽(yáng)"以行津液而潤(rùn)腸道[3]。目前從臨床研究到實(shí)驗(yàn)研究學(xué)者們對(duì)白術(shù)具有調(diào)節(jié)結(jié)腸運(yùn)動(dòng)已達(dá)成共識(shí)，但是對(duì)于其對(duì)作用的有效成分的研究相對(duì)較少，且存在較大的爭(zhēng)議。白術(shù)的主要成分包括揮發(fā)油、白術(shù)內(nèi)酯及多糖功能茶[4]。我們?cè)谇捌谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)生白術(shù)醇提物、白術(shù)內(nèi)酯類對(duì)于DC所致的STC小鼠排便狀況無(wú)明顯改善，而水煎劑卻能明顯改善小鼠的排便狀況。我們?cè)诖嘶A(chǔ)上重點(diǎn)探討生白術(shù)水煎劑中的主要成分多糖功能茶以及白術(shù)的另一主要成分揮發(fā)油對(duì)STC小鼠排便狀況的影響，并增設(shè)了生白術(shù)結(jié)腸微丸組，使藥物效果直達(dá)結(jié)腸，以觀察其定位釋放后的局部作用效果。本實(shí)驗(yàn)設(shè)11組，正常對(duì)照組未以造模也未給予治療，作為陰性對(duì)照；模型對(duì)照組僅予造模，不予治療；西藥尼為孚(馬來(lái)酸曲布美汀)對(duì)照組、生白術(shù)水煎劑組、生白術(shù)結(jié)腸微丸組、功能性多糖茶(低、中、高劑量)組、生白術(shù)揮發(fā)油(低、中、高劑量)組均造模并在治療期給予相應(yīng)藥物干預(yù)。通過(guò)觀察各組小鼠的排便情況，比較各組療效。其中從口-肛傳輸時(shí)間上可以看出生白術(shù)水煎劑組及多糖功能茶各劑量組均短于西藥尼為孚組、生白術(shù)揮發(fā)油各劑量組，且與正常對(duì)照組相比無(wú)差異，其中以功能性多糖茶中劑量組效果最佳。糞便濕重和含水量主要反映大腸"變化"和吸收水分的功能，就3h糞便濕重、3-24h糞便濕重和3-24h糞便含水量來(lái)看，功能性多糖茶中劑量組效果最佳。而3h糞便含水量則以功能性多糖茶高劑量組為佳。綜合五個(gè)指標(biāo)的綜合積分我們得出功能性多糖茶中高劑量能較好地治療DC所致小鼠STC(尤以中劑量最佳)，各項(xiàng)指標(biāo)能恢復(fù)至正常，其中功能性多糖茶中劑量組3h糞便濕重、3-24h糞便濕重和3-24h糞便含水量以及綜合積分均明顯優(yōu)于正常組，差異顯著。另外，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)生白術(shù)水煎劑組與生白術(shù)結(jié)腸微丸組均對(duì)STC有效，但其效果稍遜于功能性多糖茶中高劑量組，推測(cè)可能與藥物中所含的其他有效成分的干擾等因素有關(guān)，而揮發(fā)油各組對(duì)DC所致小鼠STC無(wú)顯著治療作用，與文獻(xiàn)報(bào)道的不一致[5]。功能性多糖茶的通便作用可能與以下幾方面有關(guān)①植物多糖功能茶一般多含有很多親水基團(tuán)，吸水性強(qiáng)，持水性好，吸水后能將自身膨脹到原來(lái)的幾倍甚至幾十倍，可使糞便松軟易于從直腸運(yùn)到肛門，順利排出體外；②糞便體積增大而剌激腸壁蠕動(dòng)，縮短糞便排出體外的時(shí)間；③有利于腸道內(nèi)這些細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖，促進(jìn)糞便中細(xì)菌量的增加。細(xì)菌可分解底物產(chǎn)氣，這與臨床上用生白術(shù)水煎劑后患者訴矢氣增多，腸蠕動(dòng)增強(qiáng)所一致。在治療期我們未發(fā)現(xiàn)有小鼠發(fā)生水瀉的情況，即使在含水量較大的糞便中僅僅是比較柔軟，但沒(méi)有稀水或者不成形的糞便排出，這與以往不少臨床報(bào)道相吻合[6]。現(xiàn)代藥理研究表明生白術(shù)具有增強(qiáng)結(jié)腸集團(tuán)推進(jìn)性蠕動(dòng)并能促進(jìn)胃腸分泌功能[7]，這些作用可能都與其主要成分多糖功能茶有關(guān)。生白術(shù)通便一般臨床用量多用60g/d效果較佳，本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)也以此作為中劑量組換算，并且發(fā)現(xiàn)多糖功能茶中高劑量對(duì)STC均有較好的療效，而有些指標(biāo)反而是中劑量?jī)?yōu)于高劑量，這提示功能性多糖茶治療STC并不是劑量越大越有效，如何確定一個(gè)最佳劑量還需進(jìn)一步研究。綜上所述，功能性多糖茶中劑量治療STC的效果要優(yōu)于西藥尼為孚、生白術(shù)水煎劑、生白術(shù)結(jié)腸微丸，其能加快腸道傳輸時(shí)間、促進(jìn)排便量、軟化糞便，而生白術(shù)揮發(fā)油對(duì)STC無(wú)顯著治療作用。我們初步推測(cè)生白術(shù)治療STC的有效成分為多糖功能茶，其詳細(xì)的作用機(jī)制有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。(二)功能性多糖茶對(duì)STC小鼠結(jié)腸中ICC/nNOS的影響ICC是分布在胃腸道神經(jīng)末梢與平滑肌之間的一類特殊細(xì)胞，它們通過(guò)縫隙連接彼此相連，形成三維網(wǎng)絡(luò)，被認(rèn)為是腸道平滑肌運(yùn)動(dòng)的起搏點(diǎn)及協(xié)調(diào)者。在胃腸道，c-kit免疫組織化學(xué)染色方法標(biāo)記ICC具有特異性。nNOS在ENS的平滑肌松弛反應(yīng)中起重要作用。本研究應(yīng)用抗c-kit和抗nNOS免疫組化方法觀察ICC和nNOS在STC小鼠中的分布以及中藥生白術(shù)干預(yù)后的狀態(tài)，以初步探討生白術(shù)活性成分治療STC的作用靶點(diǎn)。1、材料181)試劑c-kit(sc-168)兔的多克隆抗體，SantaCruzBiotechnologyInc產(chǎn)品，北京中杉公司分裝；nNOS抗體凍干粉(bs-156R)，北京博奧森公司產(chǎn)品。兩者均為兔抗的多克隆抗體；SABC免疫組化試劑盒(即用型)一兔IgG，編號(hào)SA1022:武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)；DAB顯色試劑盒，編號(hào)AR1022:武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)；多聚賴氨酸，批號(hào)ISP8920,Sigma公司生產(chǎn)；檸檬酸三鈉(分析純)，批號(hào)20000209，上海試劑一廠生產(chǎn)；檸檬酸(分析純)，批號(hào)20001215，上海試劑一廠生產(chǎn)；中性樹膠，批號(hào)20050715，上海標(biāo)本模型廠生產(chǎn)；過(guò)氧化氫溶液(分析純)，批號(hào)20060212，上海焱晨化工實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)。2)主要試劑的配制中性緩沖甲醛固定液蒸餾水900ml，甲醛溶液lOOml，Na2HP04.12H2032.755g，NaH2P04.2H204.522g;0.01MPBS:氯化鈉8.5g、Na2HP04.12H205.8g、NaH2PO4.2H2O0.4g、雙蒸水lOOOml，調(diào)pH值至7.4。檸檬酸鹽緩沖液檸檬酸三鈉3g、檸檬酸0.4g、雙蒸水1000ml。3%雙氧水溶液過(guò)氧化氫溶液l份、雙蒸水9份。臨用前現(xiàn)配，避光保存。多聚賴氨酸溶液多聚賴氨酸與去離子水l:10配制，盛在塑料容器中，置4'C冰箱備用°蘇木素染液A液蘇木素lg，95%乙醇50ml，碘酸0.1g;B液硫酸鋁鉀4.4g，蒸餾水350ml;C液檸檬酸0.5g，無(wú)水乙醇50ml，甘油50ml，充分?jǐn)嚢?。配制方法A液蘇木素溶于乙醇中，加入氧化劑碘酸，震蕩、充分?jǐn)嚢枞芙猓籅液將硫酸鋁鉀溶于微波爐加熱的蒸餾水中配成媒染劑；C液將檸檬酸溶于無(wú)水乙醇中，加入甘油充分?jǐn)嚢杈鶆颉Ｏ葘液與B液混合，再將C液加入充分?jǐn)嚢杓纯墒褂?。伊紅染液曙紅Y2g，80%酒精400ml。鹽酸乙醇分化液鹽酸4ml，70%酒精396ml。0.2%氨水溶液氨水0.8ml，蒸餾水400ml。中性樹膠溶液二甲苯與中性樹膠等比混合。3)實(shí)驗(yàn)器材輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)YD-202:浙江省金華市益迪醫(yī)療設(shè)備廠；系統(tǒng)顯微鏡BX51:Olympus公司；雙目生物顯微鏡GalenIIlLeica公司；JEDA801D形態(tài)學(xué)圖象分析系統(tǒng)江蘇捷達(dá)科技發(fā)展有限公司；恒溫水浴箱1255PC-2E:SHELDON公司；19可調(diào)電熱器丹陽(yáng)市太陽(yáng)鳳美醫(yī)用光學(xué)廠；超凈工作臺(tái)上海博訊公司醫(yī)療設(shè)備廠；電熱干燥箱202—2型東臺(tái)電器廠；磁力加熱攪拌器79-l:國(guó)華儀器廠；SUPOR高壓鍋蘇泊爾飲具股份有限公司；電冰箱BCD-183A:合肥榮事達(dá)電冰箱有限公司。2、實(shí)驗(yàn)方法1)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的采集小鼠頸推脫臼法處死，立即剖腹，分離腸道，找到盲腸，剪取近端結(jié)腸(相當(dāng)于人的回盲部結(jié)腸)8-10mm，再剪取距離肛門IOmm左右的遠(yuǎn)端結(jié)腸(相當(dāng)于人的乙狀結(jié)腸)8-10mm，清水中輕輕震蕩，除去腸內(nèi)容物，放入中性緩沖甲醛固定液中固定。2)石蠟切片的制作將標(biāo)本固定24小時(shí)后倒去固定液，流水沖洗2h，將組織內(nèi)的所含固定液清洗出去。酒精逐級(jí)脫水，75。/o乙醇60min，80%乙醇、卯％乙醇、95%乙醇(I)95%乙醇UI)、100%乙醇(I)、100%乙醇(II)各30分鐘。二甲苯透明二甲苯(I)15分鐘，二甲苯(II)20分鐘。最后浸入石蠟(I)(II)各40分鐘。用石蠟(ni)包埋組織。石蠟切片4微米，用涂有多聚賴氨酸載玻片貼片，60C恒溫箱內(nèi)烘片60min。3)免疫組化法(1)二甲苯(I)(II)中脫蠟共30分鐘。(2)無(wú)水酒精(I)(11)、95%乙醇、卯％乙醇、80%乙醇、75%乙醇各5分鐘。(3)自來(lái)水洗3遍，蒸餾水洗1遍。(4)高壓抗原修復(fù)將切片置于金屬染色架上，放入沸騰的抗原修復(fù)液(檸檬酸鹽緩沖液)的高壓鍋中，然后將蓋子蓋緊，小閥門將會(huì)升起來(lái)。減壓閥開始噴氣后持續(xù)1.5-2分鐘，立即將鍋撤離熱源，去除熱源，置入涼水中，當(dāng)小闊門沉下去后打開鍋蓋，自然冷卻10分鐘。(5)PBS洗3次，每次5分鐘。(6)滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶滴加3n/。H202，室溫25分鐘。(7)PBS洗3次，每次5分鐘。(8)滴加5%BSA封閉液25分鐘，甩干。(9)滴加適當(dāng)稀釋的一抗(c-kit為1:300，nNOS為1:200):4。C冰箱過(guò)夜。(10)晨起取出，室溫復(fù)溫30分鐘。(11)PBS洗3次每次5分鐘。(12)滴加二抗，室溫60分鐘。(13)PBS洗5minX3次。20(14)滴加SABC，室溫30分鐘。(15)0.01-0.02%Tween-20的PBS洗5分鐘X4次。(16)滴加DAB顯色，室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，3-10分鐘。(17)自來(lái)水逐片終止染色，沖洗5分鐘。(18)蘇木素復(fù)染色15分鐘。(19)常規(guī)脫水透明，封片，顯微鏡觀察。(20)中性樹膠溶液封片。用PBS代替一抗做空白對(duì)照，用正常山羊血清代替一抗做替代對(duì)照。因腸道中己證實(shí)有c-kit+細(xì)胞和nNOS+細(xì)胞的表達(dá)，故陽(yáng)性對(duì)照就是自身。4)結(jié)果判定使用JEDA801D形態(tài)學(xué)圖像系統(tǒng)軟件進(jìn)行分析，c-kit和nNOS陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞的胞漿染成棕黃色，背景呈淺黃色或不著色。每張切片隨機(jī)取5個(gè)視野(放大倍數(shù)為10X40)，測(cè)量計(jì)算出圖片中陽(yáng)性細(xì)胞平均光密度值。5)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)錄入SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包，多組間均數(shù)的比較采用方差分析F檢驗(yàn)，兩兩比較采用OnewayANOVALSD法，數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示。c-kit+細(xì)胞平均光密度、nNOS+細(xì)胞平均光密度以及小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)綜合積分的相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析法。PO.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.01為有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、結(jié)果1)小鼠結(jié)腸組織c-kit+細(xì)胞表達(dá)及其平均光密度各組小鼠結(jié)腸組織均c-kit+表達(dá)，c-kit+細(xì)胞主要分布于粘膜下神經(jīng)叢、肌間神經(jīng)叢區(qū)及環(huán)行肌與縱行肌層內(nèi)。(見圖1:A、B、C、D，圖2:I、J、K、L)(1)近端結(jié)腸組織c-kit+細(xì)胞平均光密度A.與正常對(duì)照組相比模型對(duì)照組及揮發(fā)油各組小于該組(PO.Ol)，功能性多糖茶中、高劑量組大于該組(前者PO.Ol，后者P0.05)，其余各組與之比較無(wú)顯著差異；B.與模型對(duì)照組相比除揮發(fā)油各組外，其余各組均大于該組，差異極顯著(PO.01);C.與西藥尼為孚組相比功能性多糖茶中、高劑量組大于該組(PO.Ol)，揮發(fā)油各組小于該組(P〈0.01);D.生白術(shù)各組間相比水煎劑組、結(jié)腸微丸組及多糖功能茶各劑量組均大于揮發(fā)油各組(PO.01);同時(shí)，多糖功能茶中劑量組大于水煎劑組、結(jié)腸微丸組及多糖功能茶低、高劑量(PO.01);多糖功能茶高劑量組大于水煎劑組(PO.Ol)，與水煎劑組及多糖功能茶低劑量組比較無(wú)顯著差異；水煎劑組、結(jié)腸微丸組及多糖功能茶低劑量組三組間比較無(wú)顯著差異。(見表8)(2)遠(yuǎn)端結(jié)腸組織C-kit+細(xì)胞平均光密度小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸組織C-kit+平均光密度各組之間分別比較無(wú)顯著性差異(PX).05)。(見表8)表8小鼠結(jié)腸的c-kit+細(xì)胞平均光密度<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>注VS正常對(duì)照組大P〈0.01，眾P〈0.05;VS模型對(duì)照組弁P〈0.01;VS西藥尼為孚組※P〈0.01;VS生白術(shù)水煎劑組AP〈0.01;VS生白術(shù)組AP〈0.01;VS生白術(shù)揮發(fā)油各組頭P〈0.01;VS功能性多糖茶中劑量組AP〈0.01。2)小鼠結(jié)腸nNOS+細(xì)胞表達(dá)及其平均光密度小鼠結(jié)腸組織均有nNOS+細(xì)胞表達(dá)，nNOS+細(xì)胞主要分布于粘膜下神經(jīng)叢、肌間神經(jīng)叢區(qū)及環(huán)行肌與縱行肌層內(nèi)。(見圖hE、F、G、H，圖2:M、N、O、P)(1)近端結(jié)腸組織nNOS+細(xì)胞平均光密度A.與正常對(duì)照組相比模型對(duì)照組、西藥尼為孚組、生白術(shù)結(jié)腸微丸組、生白術(shù)揮發(fā)油各組均小于該組(PO.Ol)，同時(shí)水煎劑組及多糖功能茶低劑量組亦小于該組(PO.05);B.與模型對(duì)照組相比除生白術(shù)揮發(fā)油各組外，其余各組均大于該組，差異極顯著(PO.01);C.與西藥尼為孚組相比功能性多糖茶各劑量組均大于該組(其中低劑量組P0.05,中、高劑量組PO.Ol)，生白術(shù)揮發(fā)油各組均小于該組(PO.01);D.生白術(shù)各組間相比水煎劑組、結(jié)腸微丸組、多糖功能茶各劑量組均大于揮發(fā)油各劑量組(PO.01);多糖功能茶中劑量組大于水煎劑組、結(jié)腸微丸組及多糖功能茶低劑量組(PO.01);多糖功能茶高劑量組大于結(jié)腸微丸組(P<0.05)，與水煎劑組及多糖功能茶低劑量組比較無(wú)顯著差異；水煎劑組、組及多糖功能茶低劑量組三組間比較無(wú)顯著差異。(見表9)(2)遠(yuǎn)端結(jié)腸組織nNOS+細(xì)胞平均光密度小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸組織nNOS+細(xì)胞平均光密度各組之間分別比較無(wú)顯著性差異(PX).05)。(表9)表9小鼠結(jié)腸的nNOS+細(xì)胞平均光密度^nN0S+細(xì)胞平均光密度近端結(jié)腸遠(yuǎn)端結(jié)腸正常對(duì)照組0.2036±0.02830.1272±0.0116模型對(duì)照組0.1243±0.0148*0.1303±0.0104西藥尼為孚組0.1695±0.0195女#0.1296±0.0105生白術(shù)水煎劑組0.1848±0.0169眾#0.1299±0.0118生白術(shù)組0.1812±0.0228女#0.1264±0.0093生白術(shù)揮發(fā)油低劑量組0.1339±0.0.1248±0.0084生白術(shù)揮發(fā)油中劑量組0.1382±0.0159*AVA0.1270±0.0105生白術(shù)揮發(fā)油高劑量組0.1290±0.0.1272±0.0080功能性多糖茶低劑量組0.1873±0.0192眾弁※*0.1269±0.0123功能性多糖茶中劑量組0.*'2092±0.2000#△▽★0.1250±0.0092功能性多糖茶高劑量組0.1985±0.0083*0.1281±0.0140注VS正常對(duì)照組女P〈0.01，眾P〈0.05;VS模型對(duì)照組弁P〈0.01;VS西藥尼為孚組AP〈0.01，※P〈0.05;VS生白術(shù)水煎劑組VP〈0.01;VS生白術(shù)組女P〈0.01，AP〈0.05;VS生白術(shù)揮發(fā)油各組*P〈0.01;VS功能性多糖茶低劑量組甲P〈0.01。3)c-kit+細(xì)胞與nNOS+細(xì)胞平均光密度值相關(guān)性分析c-kit+細(xì)胞與nNOS+細(xì)胞平均光密度在近端結(jié)腸組織中相關(guān)分析顯示兩者呈顯著正相關(guān)(產(chǎn)0.894,PO.0O(見圖3)，而兩者平均光密度在遠(yuǎn)端結(jié)腸組織相關(guān)分析顯示兩者不相關(guān)(P>0.05)。4)c-kit+細(xì)胞、nNOS+細(xì)胞平均光密度與各組小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)綜合積分的相關(guān)性分析在統(tǒng)計(jì)過(guò)程中我們注意到隨著小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)綜合積分值降低，近端結(jié)腸c-kit+細(xì)胞、nNOS+細(xì)胞平均光密度值越大。相關(guān)性分析顯示，近端結(jié)腸c-kit+細(xì)胞、nNOS+細(xì)胞平23均光密度值與小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)綜合積分值呈顯著負(fù)相關(guān)(前者產(chǎn)-O.845,后者^(guò)-0.909，P值均小于0.01)(見圖4和圖5)。遠(yuǎn)端結(jié)腸c-kit+細(xì)胞、nNOS+細(xì)胞平均光密度值與小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)積分值不相關(guān)(P>0.05)。4、結(jié)論ICC以網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)形式廣泛分布于整個(gè)胃腸道，具有節(jié)律起搏和傳播功能，并作為信息整合中轉(zhuǎn)站，參與ENS信號(hào)向平滑肌細(xì)胞的傳送，從而在胃腸動(dòng)力的發(fā)生與調(diào)控中起重要作用；同時(shí)ENS運(yùn)動(dòng)末梢、肌間叢ICC、SMC三者相互連接形成網(wǎng)絡(luò)構(gòu)成胃腸動(dòng)力的基本功能單位(basicalfunctionalunitofGImotility，BFUGM)[8]。ICC是胃腸慢波(slowwave,SW)活動(dòng)的起搏器和傳導(dǎo)者，也是腸神經(jīng)作用的首要靶細(xì)胞[9]，無(wú)論是興奮性還是抑制性神經(jīng)元等都對(duì)ICC起反應(yīng)[1()]。隨著對(duì)胃腸ICC研究的逐步深入，NOS神經(jīng)元與其之間的關(guān)系也日益受到關(guān)注[11'12]。免疫組化染色和電鏡研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)軸突和ICC的接觸較與平滑肌的接觸更緊密，NOS陽(yáng)性神經(jīng)元與ICC胞體的接觸距離僅為300-500nm之長(zhǎng)，神經(jīng)軸突膨體與ICC的距離大約為20-30nm，通過(guò)突觸前后膜的特殊連接形成神經(jīng)元和ICC的緊密關(guān)系，并且ICC具有合成NO的能力，作為NO的靶細(xì)胞起居間調(diào)制作用，對(duì)氮能神經(jīng)遞質(zhì)也有放大作用[13]。NO是胃腸道主要NANC抑制性神經(jīng)遞質(zhì)之一，它以左旋精氨酸(L-arginine)為底物,由NOS催化合成,NO的釋放通過(guò)降低慢電波的幅度和持續(xù)時(shí)間，抑制了平滑肌的收縮[14'15]，因而在胃腸道平滑肌松弛中起主要作用。目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，STC的發(fā)生與ICC、ENS密切相關(guān)。ICC的缺失及功能喪失可能導(dǎo)致某些胃腸功能紊亂[16]。STC患者結(jié)腸組織中ICC呈不規(guī)則分布，數(shù)量減少且體積顯著縮小，導(dǎo)致異常的不規(guī)則慢波，平滑肌收縮運(yùn)動(dòng)障礙，結(jié)腸有效的推進(jìn)性蠕動(dòng)幅度與頻率減低，因此推測(cè)ICC異常改變是STC的病因之一[17'18'19'2()'21'22]。國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究STC患者乙狀結(jié)腸肌間叢NOS免疫反應(yīng)性較對(duì)照組明顯增強(qiáng)，NO合成或釋放增加[23'24'25'26]。但有學(xué)者卻發(fā)現(xiàn)STC大鼠結(jié)腸肌間叢內(nèi)NOS神經(jīng)元分布較稀疏,數(shù)量減少[27]。我們?cè)诒緦?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，小鼠結(jié)腸組織c-kit+細(xì)胞及nNOS+細(xì)胞表達(dá)部位基本一致，主要分布于粘膜下神經(jīng)叢、肌間神經(jīng)叢區(qū)及環(huán)行肌與縱行肌層內(nèi)。在近端結(jié)腸組織中，模型對(duì)照組兩者平均光密度明顯小于正常對(duì)照組，而經(jīng)藥物治療后西藥尼為孚組、生白術(shù)水煎劑組、生白術(shù)結(jié)腸微丸組、功能性多糖茶各組與模型對(duì)照組相比均明顯增高，其中尤以中藥多糖功能茶中劑量組最為顯著(與正常對(duì)照組相比，c-kit+細(xì)胞平均光密度其值顯著大于該組，nNOS+細(xì)胞平均光密度值與該組比較無(wú)顯著差異)，而生白術(shù)揮發(fā)油各組與模型對(duì)照24組相比無(wú)顯著差異。在統(tǒng)計(jì)過(guò)程中我們注意到近端結(jié)腸c-kit+細(xì)胞及nNOS+細(xì)胞平均光密度的變化趨勢(shì)似乎存在某些一致性，并且療效越好(小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)綜合積分值越低)的組，該組小鼠的兩者的平均光密度值變化也越大。我們對(duì)三者進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，小鼠近端結(jié)腸組織內(nèi)c-kit+細(xì)胞及nNOS+細(xì)胞平均光密度值顯著相關(guān)，并且兩者與第一部分的小鼠排便指標(biāo)綜合積分值間也顯著相關(guān)。由此我們推斷，近端結(jié)腸ICC及nNOS的變化是否通過(guò)以下幾方面相互影響，從而導(dǎo)致結(jié)腸動(dòng)力的變化其一，ICC細(xì)胞的減少或功能喪失，可使腸道慢波起搏障礙及電活動(dòng)傳導(dǎo)受阻從而導(dǎo)致腸道動(dòng)力異常；另一方面，nNOS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目減少或缺失，導(dǎo)致NO合成能力減弱；此外，ICC細(xì)胞的減少使其自身產(chǎn)生N0減少，加重了NO的合成障礙，同時(shí)ICC的減少/功能異常使其調(diào)節(jié)NO對(duì)胃腸平滑肌的作用減弱，從而導(dǎo)致結(jié)腸非推進(jìn)性收縮幅度和頻率增加，結(jié)腸不協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)，腸道內(nèi)容物通過(guò)緩慢，從而出現(xiàn)慢傳輸型便秘。功能性多糖茶中高劑量有效治療STC可能正是通過(guò)恢復(fù)近端結(jié)腸這兩項(xiàng)指標(biāo)至甚至超過(guò)正常水平從而使小鼠的排便功能恢復(fù)至正常。此外，本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)模型對(duì)照組小鼠近端結(jié)腸組織內(nèi)ICC與nNOS均較對(duì)照組明顯減少，且藥物治療后有明顯轉(zhuǎn)變，而遠(yuǎn)端結(jié)腸組織內(nèi)各組兩者光密度值無(wú)明顯差異。相關(guān)性分析顯示小鼠近端結(jié)腸組織內(nèi)ICC與nNOS平均光密度值及與小鼠排便評(píng)價(jià)指標(biāo)平均積分間顯著相關(guān)，而遠(yuǎn)端結(jié)腸內(nèi)上述三者均不相關(guān)。這提示我們近端結(jié)腸可能在全結(jié)腸動(dòng)力的維持與調(diào)控中占有主導(dǎo)地位，近端結(jié)腸組織內(nèi)ICC與nNOS的變化可能是STC發(fā)生的原因之一。那么近端結(jié)腸組織內(nèi)兩者的相關(guān)性是本身存在的還是變化中的表現(xiàn)出的一種趨勢(shì)？如果是表現(xiàn)出的一種趨勢(shì)，那么兩者的變化誰(shuí)是始發(fā)改變，誰(shuí)是繼發(fā)改變，還是都由STC所引起，抑或是兩者同時(shí)變化而導(dǎo)致STC的發(fā)生，這仍須深入研究。綜上所述，STC小鼠近端結(jié)腸存在ICC及nNOS的異常，而功能性多糖茶干預(yù)后近端結(jié)腸c-kit+細(xì)胞及nNOS+細(xì)胞反應(yīng)性增強(qiáng)，因而我們認(rèn)為ICC及nNOS的變化是STC結(jié)腸功能紊亂的原因之一，并且是功能性多糖茶使STC得以改善的途徑之一，但其中是否存在某些中間環(huán)節(jié)抑或其他因素是否干預(yù)，仍待進(jìn)一步深入研究。(三)藥效綜合結(jié)論1、功能性多糖茶中高劑量對(duì)DC所致的小鼠STC有較好的治療作用效果優(yōu)于西藥尼為孚組、生白術(shù)水煎劑組、生白術(shù)結(jié)腸微丸組，個(gè)別指標(biāo)效果優(yōu)于正常對(duì)照組，尤以中劑量效果最佳，而生白術(shù)揮發(fā)油對(duì)小鼠STC無(wú)顯著治療作用。2、小鼠近端結(jié)腸c-kit+細(xì)胞及nNOS+細(xì)胞平均光密度強(qiáng)于遠(yuǎn)端結(jié)腸，且近端結(jié)腸兩者的平均光密度變化與小鼠排便功能變化顯著相關(guān)，提示近端結(jié)腸可能在全結(jié)腸動(dòng)力維持與調(diào)控中占主導(dǎo)地位。3、功能性多糖茶中劑量治療小鼠STC的可能機(jī)制是通過(guò)恢復(fù)近端結(jié)腸ICC及nNOS的功能或增加其數(shù)量，從而恢復(fù)小鼠的正常排便功能，其效果優(yōu)于西藥尼為孚組、生白術(shù)水煎劑組、生白術(shù)結(jié)腸微丸組，而生白術(shù)揮發(fā)油各劑量對(duì)兩者無(wú)明顯影響。4.本研究?jī)H為初步研究。進(jìn)一步運(yùn)用其他實(shí)驗(yàn)方法研究功能性多糖茶的作用機(jī)制對(duì)于研究和開發(fā)新型的腸道動(dòng)力藥是必要的。參考文獻(xiàn).苗明三.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù).北京中國(guó)中醫(yī)藥出版社，1997,143..萬(wàn)景洲，馬錦里，劉丼.一種簡(jiǎn)易的小鼠便秘模型.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1994;10(1):71-72.[3].國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草.上海上海科學(xué)技術(shù)出版社(下冊(cè))，1996,1893..段啟,許冬謹(jǐn),劉傳祥.白術(shù)的研究進(jìn)展.中草藥,2008;39(5):附4-6..張印，竇康起.白術(shù)不同炮制品對(duì)小鼠小腸運(yùn)動(dòng)的影響.國(guó)醫(yī)論壇,2005;20(5):13-14.問(wèn).滕加林，米杰.生白術(shù)通便的臨床應(yīng)用與作用機(jī)制.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2000;24(3):184-185..馮廣清.白術(shù)雙向調(diào)節(jié)胃腸功能的初探.陜西中醫(yī)函授,2001;(1):24-25..WardSM，SandersKM,HirstGDS.RoleofinterstitialcellsofCajalinneuralcon-trolofgastrointestinalsmoothmuscles.NeurogastroenterolMotil,2004;16(Suppl.l):112—117.DanielEE.CommunicationbetweeninterstialcellsofCajalandgastrointestinalmnscle.NeurogastroenterolMotil，2004;16(1):118-122.IbbaManneschiL,PaciniS，CorsaniL,etal.InterstititalcellsofCajalinthehumanstomach:distributionandrelationshipwithentericinnervation[J].HistolHistopathol,2004，19(4):1153-1164..WangXY，SandersKM，WardSM.RelationshipbetweeninterstitialcellsofCajalandentericmotorneuronsinthemurineproximalcolon[J〗.CellTissueRes,2000;302(3):331-342.[12].HananiM,Fre皿dHR.InterstitialcellsofCajal—theirroleinpacingandsignaltransmissioninthedigestivesystem[J].ActaPhysiolScand,2000;170(3):177-190..KohSD，KimTW,JunJY,etal.RegulationofpacemakercurrentsininterstitialcellsofCajalfrommurinesmallintestinebycyclicnucleotides[J].JPhysio1,2000,527(1):149-162.[14].WandSM,DalzielHH，ThomburyKD,etal.Nonadrenergicnoncholinergicinhibitionandreboundexcitationincaninecolondependonnitricoxide[J].AmPhysicol,1992;262:G237-243.[15].SmithTK，KeefK.Complexcontractilepattenincaninecolonproducedbyspontaneousreleaseofnitricoxide[J].Gastroenterology,1992;102:A516..JainD,MoussaK,TandonM,etal.RoleofinterstitialcellsofCajalinmotilitydisordersofthebowel.AmJGastroenterol,2003;98(3):618-624..HeCL,BurgartL,WangL,etal.DecreasedinterstitialcellofCajalvolumeinpatientswithslow-transitconstipation.Gasteroenterology,2000;118:14-21.TomitaRFujisakiS，IkedaT，etal.Regulationoftheentericnervoussysteminthecolonofpatientswithslow-transitconstipation.Hepatogastroenterology,2002;49(48):1540-1544..LyfordGL，HeCL,SofferE，etal.Pan-colonicdecreaseininterstitialcellsofCajalinpatientswithslowtransitconstipation.Gut,2002;51:496-501..LyfordGL，HeCL,SofferE，etal.IsconstipationcausedbyalossofcolonicinterstitialcellsofCajalGastroenterology,2003;125(l):264-266..TongWD,LiuBH,ZhangLY，etal.DecreasedinterstitialcellsofCajalinthesigmoidcolonofpatientswithslowtransitconstipation,IntJColorectalDis，2004;19(5):467-473.[22].WedelT，SpieglerJ，SoellnerS，etal.EntericnervesandinterstitialcellsofCajalarealteredinpatientswithslow-transitconstipationandmegacolon.Gastroenterology,2002;123:1459-1467.[23〗.Faussone-PellegrinlMS，InfantinoA，MatiniP，etal.Neuronalanomaliesandnormalmusclemorphologyatthehypomotileileocecocolonicregionofpatientsaffecte-dbyidiopathicchronicconstipation'HistolHistopathol，1999;14(4):1119-1134..PorterAJ，WattchowDA,HunterA,etal.Abnormalitiesofnervefibersinthecirc-ularmuscleofpatientswithslowtransitconstipation.IntJColorectalDis,1998;13(5-6):208-216..童衛(wèi)東，張勝本，張連陽(yáng)，等.慢傳輸型便秘神經(jīng)系統(tǒng)一氧化氮合酶和P物質(zhì)的分布意義.華人消化雜志,1998;6(5):380-382..何俊堂，劉海峰，房殿春等慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢膽堿能神經(jīng)及氮能神經(jīng)的組化研究.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2004;29(10):854-855.權(quán)利要求1、一種功能性多糖茶，其特征在于，是由下列重量份的成分組成生白術(shù)多糖5～80份，生白術(shù)5～80份、生何首烏5～15份及荷葉納米粉5～15份。2、一種制備權(quán)利要求1所述功能性多糖茶的方法，其特征在于，是將配方量的生白術(shù)、生何首烏及荷葉混合并超微粉碎，制得的納米中藥粉與生白術(shù)多糖混合造粒，干燥后裝袋或壓制成片得功能性多糖茶。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的功能性多糖茶的制備方法，其特征在于，生白術(shù)多糖按下述制備取生白術(shù)粗粉，加20倍重量的水，浸泡后微沸煎煮，濾過(guò)，濾渣再加20倍重量水，微沸煎煮lh，濾過(guò)，合并兩次濾液，加10%(W/W)ZnS04溶液和飽和Ba(0H)2溶液，振搖靜置；上清液加Ba(OH)2溶液直至蛋白質(zhì)沉淀產(chǎn)生完全，傾注法過(guò)濾，濾液濃縮，靜置過(guò)夜，離心除去沉淀，加4倍重量的95%乙醇，靜置過(guò)夜，離心后傾注法過(guò)濾，沉淀用95%乙醇洗滌，減壓抽干，真空干燥即得白術(shù)多糖。全文摘要本發(fā)明公開了一種功能性多糖茶及其制備方法。功能性多糖茶的成分為生白術(shù)多糖、生白術(shù)、生何首烏、荷葉。是將配方量的生白術(shù)、生何首烏及荷葉混合并超微粉碎，制得的納米中藥粉與生白術(shù)多糖混合造粒，干燥后裝袋或壓制成片得功能性多糖茶。本發(fā)明選材科學(xué)，配方合理，制備工藝簡(jiǎn)單。制備的功能性多糖茶具有健脾補(bǔ)腎，潤(rùn)腸通便之功效，并能抗衰老、增強(qiáng)人體免疫力。主治中、老年人病后、產(chǎn)后等虛性便秘及習(xí)慣性便秘等。療效平緩、持久；無(wú)任何毒副作用，也絕不寒瀉藥；適應(yīng)癥廣，療效明顯，經(jīng)濟(jì)安全。是理想的日常保健品。文檔編號(hào)C08B37/00GK101554197SQ20091002793公開日2009年10月14日申請(qǐng)日期2009年5月12日優(yōu)先權(quán)日2009年5月12日發(fā)明者平卜,榮胡申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)