專利名稱：新型交聯(lián)聚苯乙烯凝膠與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及固相合成載體及其合成方法，具體地說(shuō)是一類新型交聯(lián)聚苯乙烯凝膠與用途。
背景技術(shù)：
1963年Merrifield發(fā)明了固相多肽合成方法(R.B.Merrifield，J.Am.Chem.Soc.，1963，85，2149)，此后固相合成方法廣泛用于固相多肽合成、固相有機(jī)合成和組合化學(xué)中。固相合成的優(yōu)點(diǎn)包括(1)可以用過(guò)量的反應(yīng)試劑使反應(yīng)完全。(2)每步的產(chǎn)物都固定于不溶于任何溶劑的固相載體上，因此所需產(chǎn)物與其它過(guò)量試劑、催化劑等小分子試劑的分離可通過(guò)簡(jiǎn)單的過(guò)濾而實(shí)現(xiàn)。(3)在裂解前的所有操作步驟中，固相載體始終處于同一容器中，沒有任何機(jī)械損失。(4)可以用大過(guò)量的反應(yīng)試劑及催化劑，使每一步反應(yīng)趨于完全，提高產(chǎn)率，使最后的產(chǎn)物的純化更加容易。(5)容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化?，F(xiàn)已有自動(dòng)化程度很高的自動(dòng)固相合成儀。
但是，固相多肽合成法也存在一定的缺點(diǎn)，如存在著產(chǎn)物純度不如液相法合成高的缺點(diǎn)。如在固相多肽合成中如果把每聯(lián)接一個(gè)氨基酸叫做一個(gè)“循環(huán)”的話，每個(gè)“循環(huán)”都要經(jīng)過(guò)幾個(gè)步驟脫除保護(hù)基、中和、形成肽鍵的縮合反應(yīng)、洗滌和過(guò)濾。若合成含有100個(gè)氨基酸的肽的話，需要幾百個(gè)步驟，即使每一步收率都是99.5％，在反應(yīng)百步以后，收率僅為36.6％。除了由于洗滌過(guò)濾不徹底而殘留的反應(yīng)試劑和反應(yīng)副產(chǎn)物，以及其它外源性污染外，還積累了大量結(jié)構(gòu)類似的欠缺肽和空心肽，它們的性質(zhì)和目的肽非常接近，這給分離帶來(lái)了很大的困難。在合成某些含有較難縮合的氨基酸序列的多肽時(shí)，縮合率往往更低，問(wèn)題更嚴(yán)重，這不僅大大降低多肽合成的總收率，更嚴(yán)重的是，縮合率低時(shí)由最終的產(chǎn)物中很難分離得到目標(biāo)肽。因此，提高固相合成每一步反應(yīng)的反應(yīng)程度是非常重要的。
在固相合成中，載體起著關(guān)鍵的作用。Merrifield最初使用的載體，即用二乙烯苯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠至今仍是使用最廣泛的載體。二乙烯苯交聯(lián)的聚苯乙烯載體具有機(jī)械強(qiáng)度好、在許多固相合成所用的溶劑中有較好的溶脹性能和易引進(jìn)各種功能基的優(yōu)點(diǎn)。其缺點(diǎn)是，在某些固相合成中，反應(yīng)動(dòng)力學(xué)性能較差。這主要是由于其交聯(lián)劑二乙烯苯本身具有剛性結(jié)構(gòu)，這使得樹脂整體的柔性更差，整個(gè)體系的強(qiáng)親脂性本體降低了樹脂在極性溶劑中的溶劑化程度；第二是二乙烯苯的分子比較小，形成的交聯(lián)橋較短，使得交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)伸展性較差，在交聯(lián)橋附近的聚合物鏈的溶劑化程度必然較低，在這些位置進(jìn)行的反應(yīng)的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)性能很差。特別是在使用分子量較大的反應(yīng)物，如固相多肽合成中用到的用Boc或Fmoc保護(hù)α-氨基的氨基酸，甚至還帶有側(cè)鏈保護(hù)基的氨基酸，這樣的保護(hù)氨基酸的分子量很大，它們有很大的位阻效應(yīng)，向交聯(lián)橋附近的反應(yīng)位點(diǎn)靠近有一定困難，使得其反應(yīng)很難達(dá)到高的反應(yīng)程度。
通過(guò)改進(jìn)載體的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)性能是提高每一循環(huán)各步的反應(yīng)程度的有效方法之一。為了克服二乙烯苯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠作為載體的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)差的缺點(diǎn)，同時(shí)保留其高機(jī)械強(qiáng)度、以及在許多固相合成所用的溶劑中優(yōu)良的溶脹性能和易功能基化的優(yōu)點(diǎn)，合成了用雙苯乙烯-4-甲基-PEG醚用作交聯(lián)劑的低交聯(lián)的聚苯乙烯載體(K.Kamahori，K.Ito，S.Itsuno，J.Org.Chem.1996，61，8321；J.Buchardt，M.Meldal，Tetra.Lett.1998，39，8695)。此載體的缺點(diǎn)是，其交聯(lián)劑的芐基醚結(jié)構(gòu)對(duì)強(qiáng)酸和金屬有機(jī)化合物不穩(wěn)定，使其使用受到限制。Janda等合成了雙苯乙烯-4-丁二醇醚作為低交聯(lián)聚苯乙烯載體的交聯(lián)劑(P.H.Toy，K.D.Janda，Tetra.Lett.1999，40，6329)，此交聯(lián)劑的缺點(diǎn)是，合成步驟多，合成成本很高，所合成的載體價(jià)格昂貴，因此其在固相合成中的大規(guī)模推廣應(yīng)用受到限制。Krishnakumar等用雙甲基丙烯酸丁二醇酯作為交聯(lián)劑合成了交聯(lián)聚苯乙烯載體(I.M.Krishnakumar，B.Mathew，Europ.Polym.J.2002，38，1745)。此交聯(lián)劑兩個(gè)雙鍵之間的距離仍較小，且烷烴鏈在極性有機(jī)溶劑中處于卷曲狀態(tài)，用其合成的交聯(lián)聚苯乙烯載體的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)性能仍不很理想。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的正是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，采用雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯作為交聯(lián)劑，合成交聯(lián)聚苯乙烯凝膠或交聯(lián)取代苯乙烯凝膠；對(duì)交聯(lián)聚苯乙烯凝膠進(jìn)行功能基化得到帶功能基的聚苯乙烯凝膠；以及用交聯(lián)聚苯乙烯凝膠功能基化得到的帶功能基的聚苯乙烯凝膠和交聯(lián)取代苯乙烯凝膠作為固相合成的載體。
本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)；一種交聯(lián)聚苯乙烯凝膠，其特征在于它是雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯作為交聯(lián)劑與苯乙烯的共聚物凝膠。
一種交聯(lián)聚苯乙烯凝膠的功能基化衍生物，其特征在于對(duì)由雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯作為交聯(lián)劑與苯乙烯的共聚物凝膠進(jìn)行功能基化，功能基化的功能基包括但不限于如下的結(jié)構(gòu)式(R)所示的功能基 -R＝-CH2Cl，-CH2NH2，-CH2OH， 交聯(lián)聚苯乙烯凝膠的功能基化衍生物的用途，其特征在于作為固相多肽合成、固相有機(jī)合成和組合化學(xué)的固相載體或固相清除劑。
一種交聯(lián)的取代苯乙烯凝膠，其特征在于它是雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯作為交聯(lián)劑與苯乙烯和取代苯乙烯的三元共聚物(共聚中可以存在或不存在作為第三共聚單體的苯乙烯)。
交聯(lián)的取代苯乙烯凝膠的用途，其特征在于作為固相多肽合成、固相有機(jī)合成和組合化學(xué)的固相載體或固相清除劑。
本發(fā)明用雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯交聯(lián)劑交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠，具有化學(xué)穩(wěn)定性高(與雙苯乙烯-4-甲基-PEG醚相比)、交聯(lián)橋長(zhǎng)且柔順性好(與雙苯乙烯-4-丁二醇醚和雙甲基丙烯酸丁二醇酯相比)因而反應(yīng)動(dòng)力學(xué)好、廉價(jià)(與雙苯乙烯-4-丁二醇醚相比)等優(yōu)點(diǎn)。用雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠作為固相合成的載體，在保留了二乙烯苯交聯(lián)的聚苯乙烯載體的高機(jī)械強(qiáng)度、在許多固相合成所用的溶劑中的優(yōu)良的溶脹性能和易功能基化的優(yōu)點(diǎn)的同時(shí)，克服了二乙烯苯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)性能差的缺點(diǎn)，而且具有化學(xué)穩(wěn)定性好、易合成和合成成本低的優(yōu)點(diǎn)。即由本發(fā)明所用的兩種交聯(lián)劑合成的聚苯乙烯固相合成載體集中了用二乙烯苯或上述的文獻(xiàn)報(bào)道的幾種交聯(lián)劑合成的聚苯乙烯固相合成載體的優(yōu)點(diǎn)，并克服了它們各自存在的缺點(diǎn)。是一種理想的固相合成載體。
具體實(shí)施方式
以下將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)敘述。
本發(fā)明用雙甲基丙烯酸二乙二醇酯(結(jié)構(gòu)式1)或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯(結(jié)構(gòu)式2) 作為交聯(lián)劑，合成交聯(lián)聚苯乙烯凝膠或交聯(lián)取代苯乙烯凝膠；對(duì)交聯(lián)聚苯乙烯凝膠進(jìn)行功能基化得到帶有功能基的聚苯乙烯凝膠；以及用交聯(lián)聚苯乙烯凝膠功能基得到的帶有功能基的聚苯乙烯凝膠和交聯(lián)取代苯乙烯凝膠作為固相合成的載體。其中第一種方式是用雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯與苯乙烯進(jìn)行自由基共聚合，得到交聯(lián)聚苯乙烯凝膠，組成凝膠的兩種共聚單體雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯與苯乙烯的重量比范圍為0.5-10∶90-99.5。
然后通過(guò)共聚物凝膠的功能基化，可衍生出已報(bào)道的所有以二乙烯苯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠為基體的、功能基化的固相合成載體。功能基包括但不限于下列單體中的任何一種芐基氯、芐基氨、芐基醇、4-芐氧苯甲醇基、二苯基甲胺基、4-甲基二苯基甲胺基、2-氯三苯基甲基氯、Rink酸或Rink酰胺基等。在進(jìn)行這些功能基化反應(yīng)時(shí)，其反應(yīng)速度和反應(yīng)程度都高于以二乙烯苯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠的相應(yīng)的反應(yīng)。
第二種方式為用雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯與帶功能基的苯乙烯(取代苯乙烯)進(jìn)行自由基共聚合(可以包含第三共聚單體苯乙烯)，直接得到帶有功能基的固相合成載體。交聯(lián)劑雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯、取代苯乙烯和苯乙烯的重量比范圍為0.5-10∶1-99.5∶0-98.5。在雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯與帶功能基的苯乙烯的共聚中，以適當(dāng)比例的無(wú)功能基的苯乙烯作為第三共聚單體，來(lái)調(diào)節(jié)所合成的凝膠所需的交聯(lián)度和功能基負(fù)載量。帶功能基的苯乙烯包括但不限于下列單體中的任何一種氯甲基苯乙烯、溴甲基苯乙烯、羥甲基苯乙烯、羥甲基苯氧甲基苯乙烯、乙酰氧基苯乙烯、乙烯基苯甲酸。用這兩種方式得到的功能基載體在固相合成中都有比二乙烯苯交聯(lián)的相應(yīng)載體更好的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)性能。
上述自由基聚合的引發(fā)劑可以是任何可引發(fā)苯乙烯聚合的自由基引發(fā)劑如偶氮類引發(fā)劑、過(guò)氧化類引發(fā)劑，最常用的引發(fā)劑是過(guò)氧化苯甲?；蚺嫉惗‰妫痪酆戏椒梢允潜倔w聚合、溶液聚合或懸浮聚合；最后交聯(lián)聚合物的形態(tài)可以是珠狀、粒狀或薄膜狀；用懸浮聚合可直接得到珠狀聚合物；如果需要片狀或薄膜狀聚合物，則可通過(guò)本體或溶液聚合直接成型得到；粒狀聚合物可由本體聚合或溶液聚合后粉碎所得。
本發(fā)明所合成的交聯(lián)聚苯乙烯或帶有功能基的聚合物凝膠與二乙烯苯交聯(lián)的聚苯乙烯或帶有功能基的聚合物凝膠具有相同的反應(yīng)性，只是其反應(yīng)動(dòng)力學(xué)性能更好。
實(shí)施例1雙甲基丙烯酸二乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠的制備在1000ml三口瓶中加入450ml含0.5％聚乙烯醇的水溶液，加入由39.2g苯乙烯、0.8g雙甲基丙烯酸二乙二醇酯和0.2g過(guò)氧化苯甲酰組成的有機(jī)相溶液，調(diào)整攪拌速度，使水相中的有機(jī)相液珠直徑在100-200目之間，在此攪拌速度下升溫到80℃并維持8小時(shí)。將所得珠狀聚合物用熱水洗滌數(shù)次，晾干，篩分取100-200目的凝膠。
實(shí)施例2雙甲基丙烯酸三乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠的制備在1000ml三口瓶中加入450ml含0.5％聚乙烯醇的水溶液，加入由38g苯乙烯、2g雙甲基丙烯酸三乙二醇酯和0.2g過(guò)氧化苯甲酰組成的有機(jī)相溶液，調(diào)整攪拌速度，使水相中的有機(jī)相液珠直徑在200-400目之間，在此攪拌速度下升溫到80℃并維持8小時(shí)。將所得珠狀聚合物用熱水洗滌數(shù)次，晾干，篩分取200-400目的凝膠。
實(shí)施例3雙甲基丙烯酸二乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠的氯甲基化將10g 100-200目雙甲基丙烯酸二乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠(含雙甲基丙烯酸三乙二醇酯3％，重量百分比)加入到100ml二氯甲烷中溶脹1小時(shí)，冷卻到-4℃，加入10ml氯甲醚，于-4℃下滴加1.2ml無(wú)水四氯化錫，在0--4℃下反應(yīng)50分鐘。用四氫呋喃0.5mol/L HCl(體積比為1∶1)充分洗滌所得樹脂，然后用四氫呋喃和蒸餾水充分洗滌樹脂，直至用AgNO3檢測(cè)無(wú)氯離子，真空干燥所得樹脂。測(cè)得所得樹脂的氯含量為1.32mmol/g。
實(shí)施例4雙甲基丙烯酸三乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠的氯甲基化將10g 200-400目雙甲基丙烯酸三乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠(含雙甲基丙烯酸三乙二醇酯5％，重量百分比)加入到100ml二氯甲烷中溶脹1小時(shí)，冷卻到-4℃，加入10ml氯甲醚，于-4℃下滴加1.2ml無(wú)水四氯化錫，在0--4℃下反應(yīng)50分鐘。用四氫呋喃0.5mol/L HCl(體積比為1∶1)充分洗滌所得樹脂，然后用四氫呋喃和蒸餾水充分洗滌樹脂，直至用AgNO3檢測(cè)無(wú)氯離子，真空干燥所得樹脂。測(cè)得樹脂的氯含量為0.96mmol/g。
實(shí)施例5含4-芐氧苯甲醇基凝膠的制備將5g由實(shí)施例3得到的凝膠和25ml二甲基乙酰胺加入到100ml三口瓶中，攪拌1小時(shí)。然后將1.5g對(duì)羥基芐醇用15ml二甲基乙酰胺溶解，將其轉(zhuǎn)移到上述的三口瓶中，攪拌并在氮?dú)饬鞅Ｗo(hù)下將0.5g甲醇鈉加入三口瓶中。用水浴使反應(yīng)體系加熱到50℃并保持8小時(shí)。過(guò)濾，樹脂用水洗至中性，而后用水洗滌3次，二氧六環(huán)洗滌3次，無(wú)水乙醇洗滌3次，真空干燥。測(cè)得所得樹脂的氯含量為0，羥基含量為1.18mmol/g。
實(shí)施例6
含2-氯三苯基甲基氯凝膠的制備(1)2-氯二苯酮樹脂的制備將5.3g無(wú)水AlCl3和30ml二氯甲烷依次加入到50ml的反應(yīng)瓶中，20-30℃下攪拌30-40分鐘，滴加4.6g鄰氯苯甲酰氯，控制反應(yīng)體系溫度不高于30℃，滴加畢后，在20-30℃攪拌1小時(shí)，至AlCl3全部溶解，制備成混合液。
將10g200-400目雙甲基丙烯酸三乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠(含雙甲基丙烯酸三乙二醇酯3％，重量百分比)和80ml二氯甲烷加入到200ml反應(yīng)瓶中，20-30℃攪拌2小時(shí)。將上述的制備的混合液滴加入體系中，控制反應(yīng)體系溫度不高于30℃，滴加完畢，使反應(yīng)體系回流4小時(shí)后降至室溫。將反應(yīng)混合物在攪拌下加入已配好的315ml的二氧六環(huán)∶水∶鹽酸＝5∶1∶1的混合溶液中，在20-30℃下攪拌1小時(shí)。抽濾，然后，按下列次序和遍數(shù)進(jìn)行洗滌(二氧六環(huán)∶水＝5∶1)90ml×1，丙酮60ml×2，水50ml×3，二甲基甲酰胺70ml×4，丙酮60ml×2，甲醇60ml×2，洗滌干凈并抽濾，40-50℃真空干燥6小時(shí)。測(cè)得所得樹脂的氯含量為2.5mmol/g。
(2)2-氯二苯甲醇樹脂的制備將20ml四氫呋喃與3.5g鎂屑加入到反應(yīng)瓶中，18-22℃攪拌下滴加20ml溴苯和20ml四氫呋喃配成的混合溶液?？刂企w系溫度在40-45℃左右。滴加完成后，控溫55-60℃反應(yīng)1小時(shí)，然后降溫至0℃左右，攪拌下加入10g干燥的上述的2-氯二苯酮樹脂與100ml四氫呋喃的混合液，回流48小時(shí)。降溫后，將反應(yīng)混合物加入385ml二氧六環(huán)∶水∶鹽酸＝5∶1∶1的混合溶液中，攪拌2小時(shí)，抽干。然后，按下列次序和遍數(shù)進(jìn)行洗滌∶二氧六環(huán)∶H2O∶HCl＝5∶2∶1(×1)，丙酮(×2)，水(×1)，DMF(×1)甲醇(×2)。抽干，于40-50℃真空干燥6小時(shí)。測(cè)得所得樹脂的氯含量為2.0mmol/g。
(3)2-氯三苯基氯樹脂的制備在反應(yīng)瓶中，加入上述的2-氯二苯甲醇樹脂10g、甲苯120ml，在80℃攪拌1小時(shí)；然后滴加乙酰氯20ml，保溫反應(yīng)約4小時(shí)，降至室溫，抽濾，依次以甲苯×2，二氯甲烷×2，石油醚(30-60℃)×2洗滌，真空干燥，得到2-氯三苯基氯樹脂，測(cè)得所得樹脂的活潑氯含量為1.2mmol/g。
實(shí)施例7含4-甲基二苯基甲胺基凝膠的制備第一步反應(yīng)
將2.67g無(wú)水AlCl3和3.09g對(duì)甲苯甲酰氯依次加入到60ml二氯乙烷中，降溫到0℃以下攪拌30分鐘。將10g100-200目雙甲基丙烯酸二乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠(含雙甲基丙烯酸三乙二醇酯3％，重量百分比)加入到140ml二氯乙烷中室溫?cái)嚢?小時(shí)，降溫到-15℃。將上述溶液加入，保持-12℃左右1小時(shí)，然后自然升溫到20℃，反應(yīng)14小時(shí)。過(guò)濾，洗滌。洗滌順序二氯甲烷三遍，甲醇三遍，水二遍，甲醇一遍，晾干。
第二步反應(yīng)將10g第一步產(chǎn)品樹脂、100ml硝基苯、20g甲酸銨、20g甲酸溶液、30g甲酰胺加入反應(yīng)瓶中，通氮?dú)?，攪拌，加熱回流分水，反?yīng)40小時(shí)。降溫過(guò)濾。攪拌下，重復(fù)第一步洗滌過(guò)程，最后水洗結(jié)束。抽干。
第三步反應(yīng)10g第二步產(chǎn)品樹脂、20ml鹽酸、10ml乙醇加入反應(yīng)瓶中，攪拌升溫到75-80℃，反應(yīng)6小時(shí)，降溫過(guò)濾。洗滌甲醇二遍，二氯甲烷二遍，甲醇二遍，乙醇一遍，水洗3次。最后以水洗為結(jié)束，抽干，50℃干燥。測(cè)得所得樹脂的氨基含量為1.0mmol/g。
實(shí)施例8含Rink酸和Rink酰胺基凝膠的制備第一步反應(yīng)將6g100-200目氯甲基化(氯含量為1.46mmol/g)的由雙甲基丙烯酸三乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠(含雙甲基丙烯酸三乙二醇酯3％，重量百分比)加入到30ml的二甲基乙酰胺中攪拌1小時(shí)，然后加入2，4-二甲氧基-4’羥基二苯酮3.85g溶解于20ml二甲基乙酰胺的溶液，加入1.06g碳酸鉀并通氮?dú)猓訜嶂?0℃攪拌反應(yīng)。1小時(shí)后加入0.06g碘化鉀及0.33g甲醇鈉，繼續(xù)攪拌反應(yīng)10-16小時(shí)。降溫后，濾出母液，所得樹脂用二甲基乙酰胺洗滌2次，用約50℃水洗至中性；再用水洗；甲醇洗；二甲基甲酰胺洗三次；甲醇洗三次；晾干。
第二步反應(yīng)7.8g第一步得到的酮樹脂加入40ml四氫呋喃攪拌2小時(shí)；加入3.5g的NaBH4溶解于1N NaOH的溶液，通氮?dú)?，控制體系溫度＜8℃，攪拌下分批加入AlCl3，50℃攪拌反應(yīng)12小時(shí)，過(guò)濾，樹脂用水洗至中性，攪拌下加入0.5N的鹽酸20ml，反應(yīng)1小時(shí)，抽干，再用0.5N的鹽酸洗滌一次，抽干，水洗至中性，水洗三次，甲醇洗一次，THF洗三次，甲醇洗三次，40℃真空干燥。得到Rink酸樹脂，測(cè)得樹脂的羥基含量為1.0mmol/g。
第三步反應(yīng)7.8g第二步得到的Rink酸樹脂加入65ml二甲基甲酰胺攪拌1小時(shí)，15℃以下攪拌下加入9.2g的Fmoc-NH2溶于40ml DMF的溶液，加入0.24g苯磺酸，通氮?dú)猓?0℃反應(yīng)6小時(shí)，降溫，過(guò)濾，DMF洗三次，甲醇洗三次，二氯甲烷洗三次。晾干，40℃真空干燥。得Rink酰胺樹脂，測(cè)得Fmoc含量為0.69mmol/g。
實(shí)施例9雙甲基丙烯酸三乙二醇酯與氯甲基苯乙烯的共聚在1000ml三口瓶中加入450ml含有5％氯化鈉和0.5％聚乙烯醇的水溶液，加入由12g4-氯甲基苯乙烯、26.8g苯乙烯、1.2g雙甲基丙烯酸三乙二醇酯和0.2g過(guò)氧化苯甲酰組成的有機(jī)相溶液，調(diào)整攪拌速度，使水相中的有機(jī)相液珠直徑在200-400目之間，在此攪拌速度下升溫到80℃并維持8小時(shí)。將所得珠狀聚合物用熱水洗滌數(shù)次，晾干，篩分取200-400目樹脂。測(cè)得所得樹脂的氯含量為1.5mmol/g。
實(shí)施例10雙甲基丙烯酸二乙二醇酯與羥甲基苯氧甲基苯乙烯的共聚在1000ml三口瓶中加入450ml含有5％氯化鈉和0.5％聚乙烯醇的水溶液，加入由14.4g4-(4-羥甲基苯氧甲基)苯乙烯、24g苯乙烯、1.6g雙甲基丙烯酸二乙二醇酯和0.2g過(guò)氧化苯甲酰組成的有機(jī)相溶液，調(diào)整攪拌速度，使水相中的有機(jī)相液珠直徑在100-200目之間，在此攪拌速度下升溫到80℃并維持8小時(shí)。將所得珠狀聚合物用熱水洗滌數(shù)次，晾干，篩分取100-200目樹脂。測(cè)得所得樹脂的羥基含量為1.2mmol/g。
實(shí)施例11雙甲基丙烯酸二乙二醇酯與乙酰氧基苯乙烯的共聚在1000ml三口瓶中加入450ml含有5％氯化鈉和0.5％聚乙烯醇的水溶液，加入由37.6g 4-乙酰氧基苯乙烯和2.4g雙甲基丙烯酸二乙二醇酯和0.2g過(guò)氧化苯甲酰組成的有機(jī)相溶液，調(diào)整攪拌速度，使水相中的有機(jī)相液珠直徑在100-200目之間，在此攪拌速度下升溫到80℃并維持8小時(shí)。將所得珠狀聚合物用熱水洗滌數(shù)次，晾干，篩分取100-200目樹脂。測(cè)得所得樹脂的乙酰氧基含量為5.6mmol/g。
實(shí)施例12
雙甲基丙烯酸三乙二醇酯與乙烯基苯甲酸的共聚在1000ml三口瓶中加入450ml含有5％氯化鈉和0.5％聚乙烯醇的水溶液，加入由30g 4-乙烯基苯甲酸、6g苯乙烯和4g雙甲基丙烯酸三乙二醇酯和0.2g過(guò)氧化苯甲酰組成的有機(jī)相溶液，調(diào)整攪拌速度，使水相中的有機(jī)相液珠直徑在100-200目之間，在此攪拌速度下升溫到80℃并維持8小時(shí)。將所得珠狀聚合物用熱水洗滌數(shù)次，晾干，篩分取100-200目樹脂。測(cè)得所得樹脂的羧基含量為4.4mmol/g。
實(shí)施例13由雙甲基丙烯酸二乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯交聯(lián)的聚苯乙烯凝膠衍生的含有4-芐氧苯甲醇基的樹脂作為固相載體合成多肽，合成了文獻(xiàn)報(bào)道較難合成的肽段ACP(65-74)(W.S.Hancock，D.J.Prescott，P.R.Vagelos，G.Marshall，J.Org.Chem.1973，38，774)，ACP(65-74)的氨基酸序列為Val-Gln-Ala-Ala-Ile-Asp-Tyr-Ile-Asn-Gly。采用常規(guī)的Fmoc固相肽合成策略進(jìn)行合成。以DMF為溶劑，樹脂與相當(dāng)與樹脂功能基量3倍的保護(hù)氨基酸和3倍的苯并三氮唑-N，N，N′，N′，-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)/1-羥基苯駢三氮唑(HOBt)縮合2小時(shí)。樹脂用DMF充分洗滌后用20％哌啶/DMF處理30分鐘脫保護(hù)。然后進(jìn)行下一循環(huán)，直至合成所需的肽序列。最后樹脂用三氟乙酸/苯甲硫醚/水(95∶2.5∶2.5，體積比)處理4小時(shí)，將多肽從樹脂上裂解下來(lái)。
經(jīng)HPLC分析(柱ZORBAX SB-C18(Agilent)，流動(dòng)相0.05％TFA/18％乙腈/％82水，流速0.8毫升/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm)，采用雙甲基丙烯酸二乙二醇酯交聯(lián)(3％，重量比)的聚苯乙烯樹脂衍生的含有4-芐氧苯甲醇基的樹脂作為載體合成的ACP(65-74)的純度為85.7％；采用雙甲基丙烯酸三乙二醇酯交聯(lián)(3％，重量比)的聚苯乙烯樹脂衍生的含有4-芐氧苯甲醇基的樹脂作為載體合成的ACP(65-74)的純度為88.1％；而用Wang樹脂(1％DVB-St共聚物)在相同條件下合成的ACP(65-74)的純度為73.3％。
權(quán)利要求
1.一種新型交聯(lián)聚苯乙烯凝膠，其特征在于它是雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯作為交聯(lián)劑與苯乙烯的共聚物凝膠。
2.按照權(quán)利要求1所述的凝膠，其特征在于組成凝膠的兩種共聚單體雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯與苯乙烯的重量比范圍為0.5-10∶90-99.5。
3 一種交聯(lián)聚苯乙烯凝膠的功能基化的衍生物，其特征在于對(duì)由雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯作為交聯(lián)劑與苯乙烯的共聚物凝膠進(jìn)行功能基化，功能基化的功能基包括但不限于如下的結(jié)構(gòu)式(R)所示的功能基
4 交聯(lián)聚苯乙烯凝膠的功能基化衍生物的用途，其特征在于作為固相多肽合成、固相有機(jī)合成和組合化學(xué)的固相載體或固相清除劑。
5 一種交聯(lián)的取代苯乙烯凝膠，其特征在于它是雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯作為交聯(lián)劑與苯乙烯和取代苯乙烯的三元共聚物。
6 按照權(quán)利要求5所述的凝膠，其特征在于組成凝膠的三種共聚單體雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯、取代苯乙烯和苯乙烯的重量比范圍為0.5-10∶1-99.5∶0-98.5。
7 按照權(quán)利要求5或6所述的凝膠，其特征在于取代苯乙烯包括但不限于氯甲基苯乙烯、溴甲基苯乙烯、羥甲基苯乙烯、羥甲基苯氧甲基苯乙烯、乙酰氧基苯乙烯、或乙烯基苯甲酸。
8 交聯(lián)的取代苯乙烯凝膠的用途，其特征在于作為固相多肽合成、固相有機(jī)合成和組合化學(xué)的固相載體或固相清除劑。
9.按照權(quán)利要求1或4所述的凝膠，其特征在于所說(shuō)的凝膠可由自由基共聚合得到。
10.按照權(quán)利要求1或4、9所述的凝膠，其特征在于所說(shuō)的凝膠可由本體聚合、溶液聚合、或懸浮聚合得到。
全文摘要
本發(fā)明是新型交聯(lián)聚苯乙烯凝膠與用途。是由雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯作為交聯(lián)劑與苯乙烯或取代苯乙烯的共聚物凝膠，及其由雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯作為交聯(lián)劑與苯乙烯的共聚物凝膠的功能基化的衍生物，并作為固相合成的載體。由雙甲基丙烯酸二乙二醇酯或雙甲基丙烯酸三乙二醇酯作為交聯(lián)劑與苯乙烯或取代苯乙烯的共聚物凝膠可由自由基共聚合得到。帶有功能基的凝膠可以用于作為固相多肽合成、固相有機(jī)合成和組合化學(xué)的固相載體或固相清除劑。本發(fā)明固相合成載體集中了現(xiàn)有技術(shù)幾種交聯(lián)劑合成的聚苯乙烯固相合成載體的優(yōu)點(diǎn)，具有化學(xué)穩(wěn)定性好、易合成和合成成本低的優(yōu)點(diǎn)，是一種理想的固相合成載體。
文檔編號(hào)C08F2/00GK1670050SQ20051001625
公開日2005年9月21日 申請(qǐng)日期2005年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月28日
發(fā)明者閻虎生, 馬玉新, 王玉, 史作清, 路延齡, 張更輝, 范云鴿, 孫強(qiáng), 姜文花 申請(qǐng)人:天津南開和成科技有限公司, 南開大學(xué)