專(zhuān)利名稱(chēng)：用對(duì)稱(chēng)和不對(duì)稱(chēng)的取代二苯脲和抑制raf激酶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一組芳基脲在治療raf所介導(dǎo)疾病中的用途，以及用于上述治療的藥物組合物。
背景技術(shù)：
p21ras癌基因是人實(shí)質(zhì)癌發(fā)生與發(fā)展的主要原因之一，30％癌癥患者的該基因發(fā)生了突變(Bolton等，Ann．Rep．Med．Chem．1994，29，165-74；Bos．Cancer．Res．1989，49，4682-9)。非突變正常形式的ras蛋白是幾乎所有組織內(nèi)由生長(zhǎng)因子受體指向的信號(hào)轉(zhuǎn)道級(jí)聯(lián)中的關(guān)鍵元素(Avruch等，TrendsBiochem．Sci．1994，19，279-83)。生物化學(xué)上，ras是一種結(jié)合鳥(niǎo)嘌呤核苷酸的蛋白質(zhì)，活性結(jié)合GTP與靜息態(tài)結(jié)合GDP之間的環(huán)化受到ras內(nèi)源性GTP酶活性和其他調(diào)節(jié)蛋白的嚴(yán)格控制。癌細(xì)胞內(nèi)的突變r(jià)as的內(nèi)源性GTP酶活性提高，于是，細(xì)胞向下游效應(yīng)物，例如raf激酶，發(fā)出組成性生長(zhǎng)信號(hào)。因此造成帶有這些突變蛋白的細(xì)胞的癌性生長(zhǎng)(Magnuson等，Semin．Cancer Biol．1994，5，247-53)。已知，抑制活性ras的效應(yīng)，例如通過(guò)給予raf激酶的去活化抗體或共表達(dá)顯性失活raf激酶或作為raf激酶底物的顯性失活MEK，可使轉(zhuǎn)化細(xì)胞回復(fù)到正常的生長(zhǎng)表型(參見(jiàn)；Daum等，Trends Biochem．Sci．1994，19，474-80；Fridman等，J．Biol．Chem．1994，269，30105-8)。Kolch等，1991，349，426-28)進(jìn)一步指出，在膜相關(guān)癌基因中，以反義RNA抑制raf表達(dá)可抑制細(xì)胞增殖。與此類(lèi)似，在體外和體內(nèi)都發(fā)現(xiàn)raf激酶抑制(用反義寡脫氧核苷酸)與多種人腫瘤生長(zhǎng)抑制相關(guān)(Monia等，Nat．Med．1996，2，668-75)。
發(fā)明概述本發(fā)明提供作為raf激酶抑制劑的化合物。由于該酶是p21ras的下游效應(yīng)物，本發(fā)明抑制劑可用于藥物組合物，按指示用于人或獸的raf激酶路徑抑制，例如，用于治療由raf激酶介導(dǎo)的腫瘤或細(xì)胞癌性生長(zhǎng)。具體地說(shuō)，這些化合物可用于治療人或動(dòng)物的癌癥，例如鼠，實(shí)質(zhì)癌，因?yàn)檫@些癌癥的發(fā)展都依賴(lài)于ras蛋白信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)，因而易于通過(guò)中斷級(jí)聯(lián)(例如通過(guò)抑制raf激酶)得到治療。所以，本發(fā)明化合物可用于治療諸如惡性癌癥(例如肺癌、胰腺癌、甲狀腺癌、膀胱癌或結(jié)腸癌)，骨髓病(例如髓性白血病)或腺瘤(例如結(jié)腸絨毛腺瘤)等實(shí)質(zhì)癌。
所以，本發(fā)明提供抑制raf路徑的、統(tǒng)稱(chēng)芳基脲的化合物，包括芳基和雜芳基類(lèi)似物。本發(fā)明還提供治療人或動(dòng)物raf介導(dǎo)的疾病的方法。因此，本發(fā)明涉及治療raf所介導(dǎo)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的化合物和方法，所述方法包括給予通式Ⅰ化合物或其藥學(xué)上認(rèn)可的鹽。 其中，A是 R3，R4，R5和R6各自是H，鹵素，NO2，可被鹵代至全鹵代烷基的C1-10烷基，可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基，可被C1-10烷基或C1-10烷氧基取代的C6-12芳基，可被C1-10烷基或C1-10烷氧基取代的C5-12雜芳基，而且，R3-R6之一可以是-X-Y；兩相鄰R3-R6可一起是一5-12碳原子的芳基或雜芳基，所述芳基和雜芳基可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-10環(huán)烷基、C2-10烯基、C1-10烷酰基、C5-12芳基、C5-12雜芳基、C6-12芳烷基、C6-12烷芳基，鹵素所取代；NR1R1；-NO2；-CF3；-COOR1；-NHCOR1；-CN；-CONR1R1；-SO2R2；-SOR2；-SR2；其中的R1是H或C1-10烷基，R2是可被鹵代至全鹵代烷基的C1-10烷基，芳基或雜芳基的環(huán)內(nèi)可含-S(O2)-；R4’，R5’和R6’各自是H，鹵素，可被鹵代至全鹵代或被以下基團(tuán)取代的C1-10烷基， 可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基或-X-Y，任何R4’，R5’或R6’之一可以是-X-Y，或者，兩相鄰R4’，R5’或R6’可一起是一5-12碳原子的雜芳基，該雜芳基可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-10環(huán)烷基、C2-10烯基、C1-10烷?；6-12芳基、C5-12雜芳基或C6-12芳烷基所取代；R6’還可以是-NHCOR1，-NR1COR1或NO2；R1是可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基；R3’是H，鹵素，可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基，可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基；X是-CH2-，-S-，-N(CH3)-，-NHC(O)-，-CH2-S-，-S-CH2-，-C(O)-或-O-；當(dāng)Y是吡啶基時(shí)，X還可以是單鍵；Y是苯基，吡啶基，萘基，吡啶酮，吡嗪，嘧啶，苯并二噁烷，苯并吡啶，苯并噻唑，或者，如果Y是苯基，它們都可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、鹵素、OH，-SCH3，NO2所取代，條件是，如果X是-O-或-S-，R3’和R6’是H，Y是OH取代的苯基，R6則是烷氧基。
較好的是，R3是鹵素或可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基；R4是H，鹵素或NO2R5是H，鹵素或C1-10烷基；R6是H或C1-10烷氧基。更好的是，R3是C4-10烷基，Cl，F(xiàn)或CF3；R4是H，Cl，F(xiàn)或NO2；R5是H，Cl，F(xiàn)或C4-10烷基；R6是H或OCH3。還要好的是，R3或R4是叔丁基。X宜為-CH2-或-S-，Y是苯基或吡啶基，或者，X是-O-，Y以苯基、吡啶基或苯并噻唑?yàn)榧选?br> 本發(fā)明還涉及以下化合物 本發(fā)明還涉及治療raf所介導(dǎo)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，包括給予通式Ⅱ化合物或其藥學(xué)上認(rèn)可的鹽 其中的A是 B是取代或非取代、多至三環(huán)的、多至30個(gè)碳原子的、至少有一個(gè)6元芳香結(jié)構(gòu)的芳基或雜芳基，其中含0-4個(gè)氮、氧和硫，如果B是取代的，它被一個(gè)或多個(gè)鹵素(可至全鹵代)或Wn取代，n是0-3，每個(gè)W各選自-CN，-CO2R7，-C(O)NR7R7，-C(O)-R7，-NO2，-OR7-，-SR7，-NR7R7，-NR7C(O)OR7，-NR7C(O)R7，C1-10烷基，C2-10烯基，C1-10烷氧基，C3-10環(huán)烷基，C6-14芳基，C7-24烷芳基，C3-13雜芳基，C4-23烷基雜芳基，C1-10取代烷基，C3-10取代環(huán)烷基，C2-10取代烯基，C1-10取代烷氧基，C4-23取代烷基雜芳基和Q-Ar。
如果W是取代過(guò)的基團(tuán)，它被一個(gè)或多個(gè)選自-CN，-CO2R7，-C(O)R7，-C(O)NR7R7，-OR7，-SR7，-NR7R7，-NO2，-NR7C(O)R7，-NR7C(O)OR7所取代，或被鹵代至全鹵代；每個(gè)R7各選自H，C2-10烯基，C1-10烷基，C3-10環(huán)烷基，C6-14芳基，C3-13雜芳基，C7-24烷芳基，C4-23烷基雜芳基，至多全鹵代的C1-10烷基，至多全鹵代的C2-10烯基，至多全鹵代的C3-10環(huán)烷基，至多全鹵代的C6-14芳基，和鹵代至全鹵代的C3-13雜芳基，Q是-O-，-S-，-N(R7)-，-(CH2)m-，-C(O)-，-CH(OH)-，-(CH2)m-O-，-NR7C(O)OR7，-NR7C(O)-，-C(O)NR7-，-(CH2)mS-，-(CH2)mN(R7)-，-O(CH2)m-，-CHXa，-CXa2，-S-(CH2)m-，和-N(R7)(CH2)m-，m=1至3，Xa是鹵素；Ar是5-10元、含0-2個(gè)氮、氧和硫的芳香結(jié)構(gòu)，它可以是非取代的，或被鹵代至全鹵代，或被Zn1取代，n1是O至3，每個(gè)Z各自選自-CN，-CO2R7，-C(O)NR7R7，-C(O)-NR7，-NO2，-OR7，-SR7，-NR7R7，-NR7C(O)OR7，-C(O)R7，-NR7C(O)R7，C1-10烷基，C3-10環(huán)烷基，C6-14芳基，C3-13雜芳基，C7-24烷芳基，C4-23烷基雜芳基，C1-10取代烷基，C3-10取代環(huán)烷基，C7-24取代烷芳基和C4-23取代烷基雜芳基；其中一個(gè)或多個(gè)Z取代基選自-CN，-CO2R7，-C(O)NR7R7，-OR7，-SR7，-NO2，-NR7R7，-NR7C(O)R7和-NR7C(O)OR7，R4’，R5’和R6’各自是H，鹵素，可被鹵代至全鹵代或被以下基團(tuán)取代的C1-10烷基， 可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基或-X-Y，任何R4’，R5’或R6’之一可以是-X-Y，或者，兩相鄰R4’，R5’或R6’可一起是一5-12碳原子的雜芳基，該雜芳基可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-10環(huán)烷基、C2-10烯基、C1-10烷酰基、C6-12芳基、C5-12雜芳基或C6-12芳烷基所取代；R6’還可以是-NHCOR1，-NR1COR1或NO2；R1是可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基；R3’是H，鹵素，可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基，可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基；X是-CH2-，-S-，-N(CH3)-，-NHC(O)-，-CH2-S-，-S-CH2-，-C(O)-或-O-；當(dāng)Y是吡啶基時(shí)，X還可以是單鍵；Y是苯基，吡啶基，萘基，吡啶酮，吡嗪，嘧啶，苯并二噁烷，苯并吡啶，苯并噻唑，它們都可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、鹵素、OH，-SCH3，NO2所取代，或者，如果Y是苯基，則被以下基團(tuán)取代 較好的是，通式Ⅱ化合物為通式Ⅱa化合物 其中，R3，R4，R5和R6各自是H，鹵素，NO2，可被鹵代至全鹵代烷基的C1-10烷基，可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基，R3-R6之一可以是-X-Y；或者兩相鄰R3-R6可一起是一5-12碳原子的芳基或雜芳基，所述芳基和雜芳基可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-10環(huán)烷基、C2-10烯基、C1-10烷?；6-12芳基、C5-12雜芳基、C6-12烷芳基、鹵素所取代；NR1；-NO2；-CF3；-COOR1；-NHCOR1；-CN；-CONR1R1；-SO2R2；-SOR2；-SR2；其中的R1是H或可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基，R2是可被鹵代至全鹵代烷基的C1-10烷基。
通式Ⅰ中，合適的雜芳基B包括但不限于5-12個(gè)碳原子的芳香環(huán)或1-3環(huán)環(huán)系統(tǒng)，其中至少一個(gè)是芳香性的，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)，例如1-4個(gè)，碳原子可被氧、氮或硫原子取代。每個(gè)環(huán)一般含3-7個(gè)原子。例如，B可以是2-或3-呋喃基，2-或3-噻吩基，2-或4-三嗪基，1-、2-或3-吡咯基，1-、2-、4-或5-咪唑基，1-、3-、4-或5-吡唑基，2-、4-或5-噁唑基，3-、4-或5-異噁唑基，2-、4-或5-噻唑基，3-、4-或5-異噻唑基，2-、3-或-4吡啶基，2-、4-、5-或6-嘧啶基，1，2，3-三唑-1-、-4-或-5-基，1，2，4-三唑-1-、-3-或-5-基，1-或5-四唑基，1，2，3-噁二唑-4-或-5-基，1，2，4-噁二唑-3-或-5-基，1，3，4-噻二唑-2-或-5-基，1，2，3-噻二唑-4-或-5-基，2-、3-、4-、5-或6-2H-硫代吡喃基，2-、3-或4-4H-硫代吡喃基，3-或4-噠嗪基、吡嗪基，2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并呋喃基，2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并噻吩基，1-、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基，1-、2-、4-或5-苯并咪唑基，1-、3-、4-、5-、6-或7-苯并吡唑基，2-、4-、5-、6-或7-苯并噁唑基，3-、4-、5-、6-或7-苯并異噁唑基，1-、3-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基，2-、4-、5-、6-或7-苯并異噻唑基，2-、4-、5-、6-或7-苯并-1，3-噁二唑基，1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基，1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-異喹啉基，1-、2-、3-、4-或9-咔唑基1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-吖啶基，或2-、4-、5-、6-、7-或8-喹唑啉基，或者，B還可以是取代苯基、2-或3-噻吩基、1，3，4-噻二唑基、3-吡比咯基、3-吡唑基、2-噻唑基或5-噻唑基等。例如，B可以是4-甲基-苯基，5-甲基-2-噻吩基，4-甲基-2-噻吩基，1-甲基-3-吡咯基，1-甲基-3-吡唑基，5-甲基-2-噻唑基或5-甲基-1，2，4-噻二唑-2-基。
合適的烷基或烷氧基等基團(tuán)的烷基部分在本文中包括甲基，乙基，丙基，丁基等，包括所有直鏈和支鏈異構(gòu)體，例如異丙基，異丁基，仲丁基，叔丁基等。
合適的芳基例如苯基和1-和2-萘基。
合適的環(huán)烷基包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)己基等?！碍h(huán)烷基”在此表示有或沒(méi)有烷基取代基的環(huán)結(jié)構(gòu)，例如“C4環(huán)烷基”包括甲基取代的環(huán)丙基和環(huán)丁基?！碍h(huán)烷基”還包括飽和雜環(huán)基團(tuán)。
合適的鹵素包括F，Cl，Br和／或I，如果烷基被鹵素取代，則可能是一取代至全取代(即，所有H原子被鹵原子所取代)，還可能是不同種鹵原子的混取代。
本發(fā)明還涉及通式Ⅰ的藥學(xué)上認(rèn)可的鹽。合適的藥學(xué)上認(rèn)可的鹽是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的，包括無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸的堿式鹽，所述酸例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、磺酸、乙酸、三氟乙酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、苯甲酸、水楊酸、苯基乙酸和杏仁酸。此外，藥學(xué)上認(rèn)可的鹽還包括無(wú)機(jī)堿的酸式鹽，例如含有堿金屬陽(yáng)離子(例如Li+，Na+或K+)、堿土金屬陽(yáng)離子(例如Mg+2，Ca+2或Ba+2)和銨陽(yáng)離子的鹽，以及有機(jī)堿的酸式鹽，所述有機(jī)堿包括被脂肪族或芳香族取代的銨和季銨陽(yáng)離子，所述季銨陽(yáng)離子來(lái)自三乙胺、N，N-二乙基胺、N，N-二環(huán)己基胺、吡啶、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)，1，4-二氮雜雙環(huán)[2．2．2]辛烷(DABCO)，1，5-二氮雜雙環(huán)[4．3．0]壬-5-烯(DBN)和1，8-二氮雜雙環(huán)[5．4．0]十一-7-烯(DBU)。
許多通式Ⅰ化合物具有對(duì)稱(chēng)碳原子，因而能夠以消旋或光學(xué)活性形式存在。對(duì)映體和非對(duì)映體混合物的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的。本發(fā)明包括任何具有raf激酶抑制活性的、分離的消旋或光學(xué)活性形式的通式Ⅰ化合物。
通式Ⅰ化合物可由已知化學(xué)反應(yīng)或過(guò)程來(lái)制備。但是，仍提供以下一般制備方法，并在描述工作實(shí)例的實(shí)施例部分給出詳細(xì)的實(shí)施例，以幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員合成所述抑制劑。
一般制備方法通式Ⅰ化合物可用已知化學(xué)反應(yīng)或過(guò)程，由市售原料制備而成。但是，仍提供以下一般制備方法，并在描述工作實(shí)例的實(shí)施例部分給出詳細(xì)的實(shí)施例，以幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員合成所述抑制劑。
用標(biāo)準(zhǔn)方法產(chǎn)生取代苯胺(March，Advanced Organic Chemistry，3rd版；John WileyNew York(1985)．Larock，Comprehensive OrganicTransformations；VCH PublishdersNew York(1989))。如圖Ⅰ所示，芳基苯胺一般通過(guò)用Ni、Pd或Pt等金屬催化劑和H2或甲酸、環(huán)己二烯或硼氫化物等氫負(fù)離子轉(zhuǎn)移劑還原硝基芳基來(lái)合成(Rylander．Hydrogenation Methods；Academic PressLondon，UK(1985))。也可以用例如LiAlH4強(qiáng)氫負(fù)離子源(Seyden-Penne．Reductions by the Alumono-and Borohydrides in OrganicSynthesis；VCH PublishersNew York(1991))，或用例如Fe、Sn或Ca等零價(jià)金屬，通常在酸性介質(zhì)中，直接還原硝基芳基。有許多合成硝基芳基的方法(March．Advanced Organic Chemistry，3rd版；John WileyNew York(1985)．Larock，Comprehensive Organic Transformations；VCH PublishdersNewYork(1989))。 圖Ⅰ硝基芳基還原成芳基苯胺硝基芳基一般由HNO3或其他NO2+源的芳香族親電硝化形成。
還原前，可進(jìn)一步修飾硝基芳基。因此，被潛在離去基團(tuán)(例如F，Cl，Br等)取代的硝基芳基可與硫醇鹽(例如圖Ⅱ)或酚鹽等親核試劑發(fā)生取代反應(yīng)。硝基芳基也可以進(jìn)行Ullman型偶合反應(yīng)(圖Ⅱ)。 圖Ⅱ用硝基芳基進(jìn)行的親核芳香族取代硝基芳基還可以進(jìn)行由過(guò)渡金屬介導(dǎo)的交聯(lián)偶合反應(yīng)。例如，硝基芳基的溴化物、碘化物或三氟化物等硝基芳基親電試劑與芳基硼酸(Suzuki反應(yīng)，例如后文)、芳基錫(Stille反應(yīng))或芳基鋅(Negishi反應(yīng))等芳基親核試劑發(fā)生鈀介導(dǎo)的交聯(lián)偶合反應(yīng)，得到二芳基(5)。 硝基芳基或苯胺都可以通過(guò)氯磺酸處理轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的芳基磺酰氯(7)。然后，磺酰氯與氟源，例如KF，反應(yīng)生成磺酰氟(8)?；酋７?8)與三甲基甲硅烷基三氟甲烷在氟源，例如二氟三甲基硅酸三(二甲基氨基)锍(TASF)，存在下反應(yīng)產(chǎn)生相應(yīng)的三氟甲基砜(9)。或者，可用例如鋅汞齊將磺酰氯7還原成芳基硫醇(10)。硫醇10與CHCl2F在堿存在下反應(yīng)生成硫醇(11)，后者可用包括CrO3-乙酸酐在內(nèi)的多種氧化劑氧化成砜(12)(Sedova等，Zh．Org．Khim．1970，6，(568)．)。 圖3所選合成氟化芳基砜的方法如圖Ⅳ所示，異氰酸芳酯(14)與芳基胺(13)反應(yīng)形成不對(duì)稱(chēng)脲。異氰酸雜芳酯可通過(guò)雜芳胺與光氣或其對(duì)應(yīng)物例如氯甲酸三氯甲酯(二光氣)，碳酸二(三氯甲基碳酸酯(三光氣)或N，N’-羰基二咪唑(CDI)反應(yīng)合成。該異氰酸酯還可以通過(guò)雜環(huán)羧酸衍生物，例如酯、酰基鹵或酸酐，通過(guò)Curtius重排產(chǎn)生。因此，酸衍生物16與氮化合物反應(yīng)，然后重排，生成異氰酸酯。相應(yīng)的羧酸(17)還可以用二苯基磷?；?DPPA)或類(lèi)似試劑進(jìn)行Curtius重排。 圖Ⅳ所選形成不對(duì)稱(chēng)脲的方法最后，可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的方法進(jìn)一步處理所得的脲。
本發(fā)明還包括包含通式Ⅰ化合物和生理學(xué)上認(rèn)可的載體的藥物組合物。
本發(fā)明化合物可通過(guò)注射、吸入或噴灑經(jīng)口、皮膚、胃腸外給予，或以單位制劑劑型經(jīng)舌下、直腸或陰道給予?！白⑸浣o予”包括靜脈、動(dòng)脈、肌內(nèi)、皮下和胃腸外注射，以及應(yīng)用輸液技術(shù)。皮膚給藥包括外用或透皮給予。一種或多種化合物可與一種或多種藥學(xué)上認(rèn)可的無(wú)毒載體，以及視需要而定的其他活性成分共存。
口用組合物可按照任何藥物組合物制造領(lǐng)域已知的合適方法制備。為了改善制劑口感，所述組合物可含一種或多種以下試劑稀釋劑，甜味劑，香料，著色劑和防腐劑。片劑含有活性成分，它們與藥學(xué)上認(rèn)可的、適合片劑生產(chǎn)的無(wú)毒賦形劑混合。所述賦形劑例如惰性稀釋劑，例如碳酸鈣，碳酸鈉，乳糖，磷酸鈣或磷酸鈉；?；瘎┖捅澜鈩?，例如玉米淀粉或藻酸；黏合劑，例如硬脂酸鎂，硬脂酸或滑石粉。片劑可以沒(méi)有包衣，也可以用已知技術(shù)進(jìn)行包裹，以延遲其在胃腸道內(nèi)的崩解與吸收，提供長(zhǎng)期的持續(xù)作用。例如，可采用諸如一硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯之類(lèi)延時(shí)物質(zhì)。所述化合物也可以制成固體，快釋形式。
口服制劑還可以是硬明膠膠囊，其中的活性成分與例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土等惰性固體稀釋劑相混合，或者是軟明膠膠囊，其中的活性成分與水或例如花生油、液體石蠟或橄欖油等油混合。
也可使用含有活性物質(zhì)與適合制造水性懸浮液的賦形劑混合的水性懸浮液。所述賦形劑是懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，羥基丙基-甲基纖維素，藻酸鈉，聚乙烯吡咯烷酮，西黃蓍膠和阿拉伯樹(shù)膠；分散劑或潤(rùn)濕劑可以是天然磷脂，例如卵磷脂，或環(huán)氧乙烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如硬脂酸聚氧乙烯酯，或環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物，例如十七烯氧十六烷醇，或環(huán)氧乙烷與脂肪酸與己糖醇所成偏酯的縮合產(chǎn)物，例如單油酸聚乙烯山梨醇酯。水性懸浮液還可含有一種或多種防腐劑，例如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或正丙酯，一種或多種著色劑，一種或多種香料，和一一種或多種甜味劑，例如蔗糖或糖精。
適合加水成為水性懸浮液的可分散粉末或顆粒中，活性成分與分散劑或潤(rùn)濕劑，懸浮劑和一種或多種防腐劑混合。合適的分散劑或潤(rùn)濕劑和懸浮劑可以上文所述為例。還可以含其他賦形劑，例如甜味劑，香料和著色劑。
化合物的形式還可以是非水性液體制劑，例如油性懸浮液，這可以通過(guò)將活性成分懸浮在花生油、橄欖油、芝麻油或花生油等植物油或諸如液體石蠟等礦物油中來(lái)配制。該油性懸浮液可含增稠劑，例如蜂蠟、硬明膠或鯨蠟醇。為了改善口感，可加入上述甜味劑和香料。所述組合物可通過(guò)添加諸如抗壞血酸等抗氧化劑來(lái)保質(zhì)。
本發(fā)明藥物組合物的形式還可以是水包油乳液。油相可以是諸如橄欖油或花生油等植物油或例如液體蜂蠟等礦物油，或它們的混合物。合適的乳化劑可以是西黃蓍膠和阿拉伯樹(shù)膠等天然樹(shù)膠，或天然磷脂，例如大豆卵磷脂或卵磷脂；脂肪酸與脫水己糖醇形成的偏酯，例如但油酸脫水山梨醇酯；所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如單油酸聚氧乙烯脫水山梨醇酯。所述乳液還可含有甜味劑和香料。
也可用例如甘油、聚丙二醇、山梨醇或蔗糖等甜味劑配制糖漿和酏劑。這類(lèi)制劑還可含有潤(rùn)藥，防腐劑和香料及著色劑。
所述化合物還可以栓劑的形式用于直腸或陰道給藥。這類(lèi)組合物可通過(guò)將藥物與合適的無(wú)刺激賦形劑混合來(lái)制備，所述賦形劑常溫下是固態(tài)，但在直腸溫度或陰道溫度是液態(tài)，因此，它會(huì)在直腸或陰道內(nèi)融化而釋放出藥物。這樣的材料包括可可脂和聚乙二醇。
本發(fā)明化合物還可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法透皮給予(參見(jiàn)，例如Chien；“Transdermal Controlled Systemic Medications”；MarcelDekker，Inc．，1987．Lipp等，WO94／04157，3 Mar 94)。例如可將可以另含滲透增強(qiáng)劑的通式Ⅰ化合物在合適的揮發(fā)性溶劑中所成的溶液或懸浮液與本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他添加劑，例如基質(zhì)和抗菌素，混合。消毒后，可按照已知技術(shù)將所得混合物配制成劑量形式。此外，在用乳化劑和水處理后，通式Ⅰ化合物的溶液或懸浮液可配制成洗劑或藥膏。
加工透皮傳遞系統(tǒng)的合適溶劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的，包括諸如乙醇或異丙醇等低級(jí)醇，如丙酮等低級(jí)酮，如乙酸乙酯等低級(jí)羧酸酯，如四氫呋喃等極性醚，如己烷、環(huán)己烷或苯等低級(jí)烴，或諸如二氯甲烷、氯仿、三氯三氟乙烷或三氯一氟乙烷等鹵代烴。合適的溶劑包括一種或多種以下物質(zhì)的混合物低級(jí)醇、低級(jí)酮，低級(jí)羧酸酯，極性醚，低級(jí)烴，鹵代烴。
合適的透皮傳遞系統(tǒng)的滲透增強(qiáng)劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的，包括，例如，諸如乙醇、丙二醇或芐醇等單羥基或多羥基醇，如月桂酸或鯨蠟醇等飽和或不飽和C8-18脂肪醇，諸如硬脂酸的C8-18脂肪酸，諸如乙酸、己酸、月桂酸、肉豆蔻酸、硬脂酸或棕櫚酸的甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基或單甘油酯等24個(gè)碳原子以下的飽和或不飽和脂肪酯，或諸如己二酸二異丙酯、己二酸二異丁酯、癸二酸二異丙酯、蘋(píng)果酸二異丙酯或富馬酸二異丙酯等24碳以下飽和或不飽和二羧酸的二酯。其他滲透增強(qiáng)劑包括磷脂?；苌铮缏蚜字蚰X磷脂，萜烯，酰胺，酮，脲及其衍生物，和二甲基異山梨醇醚和二乙二醇單甲基醚等醚。合適的增強(qiáng)滲透制劑還包括一種或多種以下物質(zhì)的混合物單羥基或多羥基醇，飽和或不飽和C8-18脂肪醇，飽和或不飽和C8-18脂肪酸，24個(gè)以下碳原子的飽和或不飽和脂肪醚，24個(gè)以下碳原子的飽和或不飽和二羧酸的二酯，磷脂?；苌?，萜烯，酰胺，酮，脲及其衍生物，和醚。
合適的透皮傳遞系統(tǒng)的黏合劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的，包括聚丙烯酸酯，硅酮，聚氨基甲酸酯，嵌段聚合物，苯乙烯丁二烯共聚物和天然及合成橡膠。還可以纖維素醚，衍生聚乙烯和硅酸酯作為基質(zhì)成分。還可加入諸如粘性樹(shù)脂或油等其他添加劑提高基質(zhì)的黏度。
在本文中所有使用通式Ⅰ化合物的治療方案中，每日口服劑量以0．01-200mg／kg體重為佳。注射，包括靜脈、肌內(nèi)、皮下和胃腸外注射和應(yīng)用輸入技術(shù)，的每日劑量以0．01-200mg／kg體重為佳。陰道給藥的日劑量以0．01-200mg／kg體重為佳。外用的每日劑量以每日1至4次，沒(méi)每次0．1-200mg為佳。透皮濃度以滿足維持0．01-200mg／kg的每日劑量所需為佳。吸入的每日劑量以0．01-10mg／kg體重為佳。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將看出，具體的給藥方式取決于多種因素，這些都是在常規(guī)給藥時(shí)常考慮的。然而，還可以看出，特定患者的具體劑量取決于包括所用具體化合物的活性、患者年齡、患者體重、患者總體健康狀況、患者性別、患者飲食、給藥時(shí)間、給藥途徑、排出速度、藥物組合和當(dāng)前所治病情的嚴(yán)重程度等多種因素。本領(lǐng)域技術(shù)人員還將發(fā)現(xiàn)，最佳治療程式，即一定天數(shù)內(nèi)的治療方式和通式Ⅰ化合物或其藥學(xué)上認(rèn)可的鹽的日給藥次數(shù)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可用常規(guī)治療試驗(yàn)來(lái)確定。
圖Ⅰ化合物可通過(guò)例如前文所述的一般制備方法，由已知化合物(或由其他已知化合物制成的起始化合物)產(chǎn)生?？砂闯Ｒ?guī)，例如按照后文所述的過(guò)程，測(cè)定給定化合物抑制raf激酶的活性。以下實(shí)施例僅使用于說(shuō)明本發(fā)明，不應(yīng)將其理解為對(duì)本發(fā)明范圍的限定。
本位全面參考了文中引用的所有專(zhuān)利申請(qǐng)、專(zhuān)利和出版物，包括1997年12月22日提交的臨時(shí)申請(qǐng)(Attorney卷宗號(hào)Bayer 6 V1)SN08／996，344，修改于1998年12月22日。
實(shí)施例除非另作說(shuō)明，所有反應(yīng)均在經(jīng)火焰干燥或烘箱干燥的玻璃器皿中，在干燥氬氣或干燥氮?dú)庹龎合逻M(jìn)行，并進(jìn)行磁力攪拌。敏感液體或溶液用針筒或?qū)Ч苻D(zhuǎn)移，并經(jīng)橡膠隔片引入反應(yīng)容器。除非另作說(shuō)明，“減壓濃縮”指用Buchi旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在約15mmHg進(jìn)行濃縮。在此報(bào)道的所有溫度都是未校正過(guò)的℃。除非另作說(shuō)明，所有份數(shù)和百分比都按重量計(jì)算。
直接使用商品級(jí)的試劑，不再進(jìn)一步純化。用Whatman_預(yù)涂玻璃襯硅膠60A F-254μm板進(jìn)行薄層層析(TLC)。用一種或多種以下技術(shù)觀察薄板(a)紫外發(fā)光，(b)暴露于碘蒸汽，(c)將薄板浸在10％磷鉬酸乙醇溶液中，(d)將薄板浸在硫酸鈰溶液中，然后加熱，和／或(e)將薄板浸在2，4-二硝基苯基肼的酸性乙醇溶液中，然后加熱。用230-400目的EM Science_硅膠進(jìn)行柱層析(快速層析)。
用Thomas-Hoover熔點(diǎn)儀或Mettler FP66自動(dòng)熔點(diǎn)儀測(cè)定熔點(diǎn)，不進(jìn)行校正。用Mattson 4020 Galaxy Series分光光度計(jì)獲取傅立葉(Fourier)轉(zhuǎn)化紅外光譜。用General Electric GN-Omega 300(300MHz)分光計(jì)，以Me4Si(d0．00)或殘余質(zhì)子化溶劑(CHCl3，δ7．26；MeOH，δ3．30；DMSO，δ2．49)作為標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定質(zhì)子(H1)核磁共振(NMR)譜。用General Electric GN-Omega300(75MHz)分光計(jì)，以溶劑(CDCl3，δ77．0；MeOD-d3；δ49．0；MeOD-d3；δ39．5)作為標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定碳(13C)NMR譜。測(cè)定電子沖擊(EI)質(zhì)譜或快速原子轟擊質(zhì)譜(FAB)，作為低分辨率質(zhì)譜(MS)和高分辨率質(zhì)譜(HRMS)。用Hewlett Packard5989A質(zhì)譜儀獲得電子沖擊質(zhì)譜(EI-MS)，該裝置配有一個(gè)Vaccumetics解吸化學(xué)離子化探針用于引入樣品。離子源維持于250℃。用70eV電子能，300μA捕捉電流進(jìn)行電子沖擊離子化。用Kratos Concept 1-H分光計(jì)獲得快速原子轟擊的升級(jí)型版，即液體-鈰次級(jí)離子質(zhì)譜(FAB-MS)。用Hewlett PackardMS-Engine(5989A)，以甲烷或氨氣作為反應(yīng)氣體(1×10-4至2．5×10-4torr)，獲得化學(xué)離子化質(zhì)譜(CI-MS)。直接插入解吸離子化(DCI)探針(Vaccumetics，Inc．)從0安培在10秒內(nèi)升至1．5安培，在10安培保持至所有微量樣品都消失(約1-2分鐘)。2秒／輻，從120-800amu進(jìn)行質(zhì)譜掃描。用配有四級(jí)泵，可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，C-18柱的Hewlett Packard 1100 HPLC和具有電子噴射離子化的Finnigan LCQ離子捕捉質(zhì)量分光計(jì)獲得HPLC-電子噴射質(zhì)譜(HPLC ES-MS)。根據(jù)離子源中的離子數(shù)量，用相應(yīng)的可變離子時(shí)間從120-800amu掃描質(zhì)譜。用配有HP-1甲基硅膠柱(0．33mM涂層；25m×0．2mm)的Hewlett Packard5890層析儀和Hewlett Packard 5971質(zhì)量選擇檢測(cè)器(70eV離子化能量)獲得氣象層析-離子選擇質(zhì)譜(GC-MS)。由Roberston Microlit Labs，MadisonNJ進(jìn)行元素分析。
所有化合物的NMR，LRMS和元素分析或HRMS都表現(xiàn)為與要求的結(jié)構(gòu)一致。
簡(jiǎn)寫(xiě)和首字母縮寫(xiě)列表
A．合成取代苯胺的一般方法A1．2，5-二氧吡咯烷基苯胺的合成
第1步4-叔丁基-1-(2，5-二氧-1-吡咯烷基)-2-硝基苯在4-叔丁基-2-硝基苯胺(1．04g，5．35mol)的二甲苯(25ml)溶液中加入琥珀酸酐(0．0535g，5．35mmol)和三乙胺(0．75ml，5．35mmol)。該反應(yīng)混合物在回流溫度加熱24小時(shí)，冷卻至室溫，以Et2O(25ml)稀釋。然后用10％HCl溶液(50ml)，飽和NH4Cl溶液(50ml)和飽和NaCl溶液(50ml)洗滌所得的混合物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。殘留物經(jīng)快速層析(60％ EtOAc／40％己烷)得到琥珀酰胺黃色固體(1．2g，86％)mp135-138℃；1H NMR(CHCl3)δ1．38(s，9H)，2．94-2．96(m，4H)，7．29-7．31(m，1H)，7．74-7．78(m，1H)，8．18-8．19(m，1H)。 第2步5-叔丁基-2-(2，5-二氧-1-吡比咯烷基)苯胺向4-叔丁基-1-(2，5-二氧-1-吡咯烷基)苯胺(1．1g，4．2mmol)的EtOAc(25ml)溶液中加入10％Pd／C(0．1g)。將所得的漿料置于H2氣氛下，使用3輪排空-猝滅循環(huán)方案，并在H2氣氛下攪拌8小時(shí)。以Celite_片過(guò)濾反應(yīng)混合物，用CHCl3洗滌殘留物。減壓濃縮合并濾液，得到所需的苯胺米黃色固體(0．75g，78％)mp208-211℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1．23(s，9H)，2．62-2．76(m，4H)，5．10(br s，2H)，6．25-6．56(m，1H)，6．67-6．70(m，2H)。
A2．合成四氫呋喃基氧基苯胺的一般方法 第1步4-叔丁基-1-(3-四氫呋喃基氧基)-2-硝基苯向4-叔丁基-2-硝基苯酚(1．05g，5．4mmol)的無(wú)水THF(25ml)溶液中加入3-羥基四氫呋喃(0．47g，5．4mmol)和三苯基膦(1．55g，5．9mmol)，接著加入偶氮二羧酸二乙酯(0．93ml，5．9mmol)，混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。所得混合物以Et2O(50ml)洗滌，以飽和NH4Cl溶液(50ml)和飽和NaCl溶液(50ml)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。殘留物經(jīng)快速層析(30％EtOAc／70％己烷)得到所需醚的黃色固體(1．3g，91％)1H NMR(CHCl3)δ1．30(s，9H)，2．18-2．24(m，2H)，3．91-4．09(m，4H)，5．00-5．02(m，1H)，6．93(d，J=8．8Hz，1H)，7．25(dd，J=2．6，8．8Hz，1H)，7．81(d，J=2．6Hz，1H)。 第2步2，5-叔丁基-2-(3-四氫呋喃基氧基)苯胺向4-叔丁基-1-(3-四氫呋喃基氧基)-2-硝基苯(1．17g，4．4mmol)的EtOAc(25ml)溶液中加入10％Pd／C(0．1g)。將所得漿料置于H2氣氛下，使用3輪排空-猝滅循環(huán)方案，并在H2氣氛下攪拌8小時(shí)。以Celite_片過(guò)濾反應(yīng)混合物，用CHCl3洗滌殘留物。減壓濃縮合并濾液，得到所需苯胺的黃色固體(0．89g，86％)mp79-82℃；1HNMR(CHCl3)δ1．30(s，9H)，2．16-2．20(m，2H)，3．78(br s，2H)，3．85-4．10(m，4H)，4．90(m，1H)，6．65-6．82(m，3H)。
A3．合成三氟甲烷磺酰基苯胺的一般方法 第一步2-甲氧基-5-(氟磺?；?乙酰苯胺向4-甲氧基間胺酰氟(1．0g，4．8mmol)的吡啶(15ml)溶液中加入乙酸酐(0．90ml，9．6mmol)。室溫下攪拌4小時(shí)后，減壓濃縮反應(yīng)混合物。將所得殘留物溶于CH2Cl2(25ml)，用飽和NaHCO3溶液(25ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，減壓濃縮形成泡沫體，Et2O／己烷溶液研磨得到標(biāo)題化合物(0．85g)1H NMR(CDCl3)δ2．13(s，3H)，7．36(d，J=8．5Hz，1H)，7．82(dd，J=2．6，8．8，1H)，8．79(d，J=2．2Hz，1H)，9．62(br s，1H)。 第二步2-甲氧基-5-(三氟甲烷磺?；?乙酰苯胺向冰冷卻的二氟三甲基硅酸三(二甲基氨基)锍(0．094g，0．34mmol)的THF(4ml)溶液中加入(三氟甲基)三甲基硅烷(1．0ml，6．88mmol)的THF(3ml)溶液。該反應(yīng)混合物在冰浴上攪拌2小時(shí)，然后升溫至室溫，然后減壓濃縮。將所得殘留物溶于CH2Cl2(25ml)，用水(25ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，減壓濃縮?？焖賹游?3％MeOH／97％CH2Cl2)化產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物白色固體(0．62g)1H-NMR(CDCl3)δ2．13(s，3H)，4．00(s，3H)，7．42(d，J=8．5Hz，1H)，7．81(dd，J=2．6，8．8，1H)，8．80(d，J=2．2Hz，1H)，9．64(br s，1H)；FAB-MS m／z 298((M+1)+)。 第三步2-甲氧基-5-(三氟甲烷磺?；?苯胺2-甲氧基-5-(三氟甲烷磺?；?乙酰苯胺(0．517g，1．74mmol)的EtOH(5ml)溶液和1N HCl溶液(5ml)在回流溫度加熱4小時(shí)，減壓濃縮所得混合物。將所得殘留物溶于CH2Cl2(30ml)，用水(30ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，減壓濃縮，得到膠狀標(biāo)題化合物(0．33g)1H-NMR(CDCl3)δ3．90(s，3H)，5．57(br s，2H)，7．11-7．27(m，3H)；FAB-MS m／z256((M+1)+)。該物質(zhì)直接用于形成脲，不進(jìn)一步純化。
A4．形成芳基胺的一般方法酚硝化，然后形成醚和還原 第一步2-硝基-5-叔丁基酚在0℃將發(fā)煙硝酸(3．24g，77．1mmol)在冰醋酸(10ml)中所成混合物滴加入間叔丁基苯酚(11．58g，77．1mmol)在冰醋酸(15ml)所成的溶液。該混合物在0℃攪拌15分鐘，然后升溫至室溫。1小時(shí)后，將混合物倒入冰水(100ml)中，用Et2O萃取(2×50ml)。用飽和NaCl溶液(100ml)洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)，真空濃縮。殘留物經(jīng)快速層析(30％EtOAc／70％己烷)得到所需酚(4．60g，31％)1H-NMR(DMSO-d6)δ1．23(s，9H)，7．00(dd，J=1．84，8．83Hz，1H)，7．07(d，J=1．84Hz，1H)；7．82(d，J=8．83Hz，1H)，10．74(s，1H)。 第二步2-硝基-5-叔丁基苯甲醚2-硝基-5-叔丁基苯酚(3．68g，18．9mmol)和K2CO3(3．26g，23．6mmol)在無(wú)水DMF(100ml)所成的漿料在室溫下攪拌15分鐘，然后用針筒加入碘代甲烷(2．80g，19．8mmol)。室溫下攪拌反應(yīng)18小時(shí)，然后加入水(100ml)，用乙酸萃取(2×100ml)。合并有機(jī)層，用飽和NaCl溶液(50ml)洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到所需的醚(3．95g，100％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ1．29(s，9H)，3．92(s，3H)，7．10(dd，J=1．84，8．46Hz，1H)，7．22(d，J=1．84Hz，1H)；7．79(d，J=8．46Hz，1H)。該物質(zhì)直接用于下一步反應(yīng)，不進(jìn)一步純化。 第三步4-叔丁基-2-甲氧基苯胺將2-硝基-5-叔丁基苯甲醚(3．95g，18．9mmol)的MeOH(65ml)溶液加入含10％Pd／C于MeOH(0．400g)中的燒杯，然后置于H2氣氛下(球形瓶)。室溫下攪拌反應(yīng)18小時(shí)，然后用Celite_片過(guò)濾，真空濃縮得到所需產(chǎn)物的黑色粘性固體(3．40g，99％)1H-NMR(DMSO-d6)δ1．20(s，9H)，3．72(s，3H)，4．43(br s，2H)，6．51(d，J=8．09Hz，1H)，6．64(dd，J=2．21，8．09Hz，1H)，6．76(d，J=2．21Hz，1H)。
A5．制備芳基胺的一般方法羧酸酯化，然后還原 第一步2-硝基-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯室溫下，向2-硝基-4-(三氟甲基)苯甲酸(4．0g，17．0mmol)的MeOH(150ml)溶液中加入濃硫酸(2．5ml)?；旌衔镌诨亓鳒囟燃訜?4小時(shí)，冷卻至室溫，真空蒸發(fā)。殘留物以水(100ml)稀釋?zhuān)砸宜彷腿?2×100ml)。合并有機(jī)層，以飽和NaCl溶液洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮。殘留物經(jīng)快速層析(14％EtAOc／86％己烷)得淺黃色油狀所需酯(4．17g，98％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ3．87(s，3H)，8．09(d，J=7．72Hz，1H)，8．25(dd，J=1．11，8．09Hz，1H)，8．48(d，J=1．11Hz，1H)。 第二步2-氨基-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯將2-硝基-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(3．90g，15．7mmol)的EtOAc(100ml)溶液加入含10％Pd／C(0．400g)于EtOAc(10ml)中的燒杯，然后置于H2氣氛下(球形瓶)。室溫下攪拌反應(yīng)18小時(shí)，然后用Celite_片過(guò)濾，真空濃縮得到所需產(chǎn)物的白色晶體(3．20g，93％)1H-NMR(DMSO-d6)δ3．97(s，3H)，6．75(dd，J=1．84，8．46Hz，1H)，6．96(brs，2H)，7．11(d，J=0．73Hz，1H)，7．83(d，J=8．09Hz，1H)。
A6．形成芳基胺的一般方法先形成醚，然后造化，然后Curtius重排，氨基甲酸鹽去保護(hù) 第一步3-甲氧基-2-萘酸甲酯3-羥基-2-萘酸甲酯(10．1g，50．1mmol)和K2CO3(7．96g，57．6mmol)在DMF(200ml)中所成的漿料在室溫下攪拌15分鐘，然后加入碘代甲烷(3．43ml，55．1mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^(guò)夜，然后加入水(200ml)。以EtOAc(2×200ml)萃取所得混合物。合并有機(jī)層，以飽和NaCl溶液(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮(約0．4mmHg，進(jìn)行過(guò)夜)，得到琥珀色油狀所需醚(10．30g)。1H-NMR(DMSO-d6)δ2．70(s，3H)，2．85(s，3H)，7．38(app t，J=8．09Hz，1H)，7．44(s，1H)，7．53(app t，J=8．09Hz，1H)，7．84(d，J=8．09Hz，1H)，7．90(s，1H)，8．21(s，1H)。 第二步3-甲氧基-2-萘酸3-甲氧基-2-萘酸甲酯(6．28g，29．10mmol)和水(10ml)在MeOH(100ml)中所成的溶液在室溫下以1N NaOH溶液(33．4ml，33．4mmol)處理?；旌衔镌诨亓鳒囟燃訜?小時(shí)，冷卻至室溫，以10％檸檬酸溶液調(diào)節(jié)至酸性。以EtOAc(2×100ml)萃取所得溶液。合并有機(jī)層，以飽和NaCl溶液(100ml)洗滌，干燥)(MSO4)，真空濃縮。以己烷研磨殘留物，然后用己烷洗滌數(shù)次，得到白色晶體狀的所需羧酸(5．40g，92％)1H-NMR(DMSO-d6)δ3．88(s，3H)，7．34-7．41(m，2H)，7．498-7．54(m，1H)，7．83(app t，J=8．09Hz，1H)，7．91(app t，J=8．09Hz，1H)，8．19(s，1H)，12．83(br s，1H)。 第三步2-(N-(芐甲酸基)氨基-3-甲氧基萘3-甲氧基-2-萘酸(3．36g，16．6mmol)和Et3N(2．59ml，18．6mmol)在無(wú)水甲苯中所成的溶液在室溫下攪拌15分鐘，然后通過(guò)移液管加入二苯基磷?；B氮化物(5．12g，18．6mmol)的甲苯(10ml)溶液。所得混合物在80℃加熱2小時(shí)。冷卻至室溫后，用針筒加入芐醇(2．06ml，20mmol)。然后，混合物經(jīng)一晝夜升溫至80℃。將所得混合物冷卻至室溫，以10％檸檬酸溶液猝滅反應(yīng)，以EtOAc(2×100ml)萃取。合并有機(jī)層，以飽和NaCl溶液洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮。殘留物經(jīng)快速層析(14％EtAOc／86％己烷)得淺黃色油狀的所需氨基甲酸芐酯(5．1g，100％)1H-NMR(DMSO-d6)δ3．89(s，3H)，5．17(s，2H)，7．27-7．44(m，8H)，7．72-7．75(m，2H)，8．20(s，1H)，8．76(s，1H)。 第四步2-氨基-3-甲氧基萘2-(N-芐甲酸基)氨基-3-甲氧基萘(5．0g，16．3mmol)和10％Pd／C(0．5g)在EtOAc(70ml)中所成的溶液室溫下，H2氣氛下放置通宵。以Celite_過(guò)濾所得混合物，真空濃縮，得到淺粉紅色粉末狀的所需胺(2．40g，85％)1H-NMR(DMSO-d6)δ3．86(s，3H)，6．86(s，2H)，7．04-7．16(m，2H)，7．43(d，J=8．0Hz，1H)，7．56(d，J=8．0Hz，1H)EI-MS m／z 173(M+)。
A7．合成芳基胺的一般方法金屬介導(dǎo)的交聯(lián)反應(yīng)，然后還原來(lái) 第一步5-叔丁基-2-(三氟甲烷磺?；?氧基-1-硝基苯向冰冷卻的4-叔丁基-2-硝基苯酚(6．14g，31．5mmol)和吡啶(10ml，125mmol)的CH2Cl2(50ml)溶液中用針筒緩慢加入三氟甲烷磺酸酐(10g，35．5mmol)。反應(yīng)混合物攪拌15分鐘，然后升溫至室溫，以CH2Cl2(100ml)稀釋。然后，以1M NaOH溶液(3×100ml)和1M HCl溶液(×100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(8．68g，84％)1H-NMR(CDCl3)δ1．39((s，9H)，7．30-8．20(m，3H)。 第二步5-叔丁基-2-(3-氟代苯基)-1-硝基苯向5-叔丁基-2-(三氟甲烷磺?；?氧基-1-硝基苯(6．0g，18．4mmol)的二噁烷(100ml)溶液中加入3-氟代苯硼酸(3．80g，27．5mmol)，KBr(2．43g，20．4mmol)，K3PO4(6．1g，28．8mmol)和Pd(PPh2)4(1．0g，0．9mmol)的混合物中。該反應(yīng)混合物在80℃加熱24小時(shí)，此時(shí)，TLC顯示反應(yīng)完全。然后以飽和NH4Cl溶液(50ml)處理反應(yīng)混合物，用EtOAc(3×100ml)萃取。合并有機(jī)層，干燥(MgSO4)，真空濃縮?？焖賹游?3％EtOAc／97％己烷)純化殘留物，得標(biāo)題化合物(4．07g，81％)1H-NMR(CDCl3)δ1．40(s，9H)，6．90-7．90(m，3H)。 第三步5-叔丁基-2-(3-氟代苯基)苯胺向5-叔丁基-2-(3-氟代苯基)-1-硝基苯(3．5g，12．8mmol)和EtOH(24ml)的EtOAc(96ml)溶液中加入5％Pd／C(0．350g)，所得混合物在H2氣氛下攪拌24小時(shí)，至TLC顯示器始物質(zhì)完全消失。Celite_過(guò)濾反應(yīng)混合物得到所需產(chǎn)物(2．2g，72％)1H-NMR(CDCl3)δ1．35(s，9H)，3．80(br s，2H)，6．90-7．50(m，7H)。
A8．合成硝基苯胺的一般方法 第一步4-(4-(2-丙氧基羰基氨基)苯基)甲基苯胺二碳酸二叔丁酯(2．0g，9．2mmol)與4，4’-亞甲基二苯胺(1．8g，9．2mmol)的DMF(100ml)溶液在回流溫度加熱2小時(shí)，然后冷卻至室溫。以EtOAc(200ml)稀釋混合物，然后以飽和NH4Cl溶液(200ml)和飽和NaCl溶液(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮?？焖賹游?30％EtOAc／70％己烷)純化殘留物，得所需的氨基甲酸酯(1．3g，48％)1H-NMR(CDCl3)δ1．51(s，9H)，3．82(s，2H)，6．60-7．20(m，8H)。 第二步4-(4-(2-丙氧基羰基氨基)苯基)甲基-1-硝基苯向冰冷卻的4-(4-(2-丙氧基羰基氨基)苯基)甲基苯胺(1．05g，3．5mmol)的CH2Cl2(15ml)溶液中加入m-CPBA(1．2g，7．0mmol)。讓反應(yīng)混合物緩慢升至室溫，攪拌45分鐘，至TLC顯示起始物消失。以EtOAc(50ml)稀釋混合物，然后以1M NaOH溶液(50ml)和飽和NaCl溶液(50ml)洗滌，干燥(MgSO4)。快速層析(20％EtOAc／80％己烷)純化殘留物，得所需的硝基苯(0．920g)FAB-MS m／z 328(M+)。 第三步4-(4-硝基苯)甲基苯胺向4-(4-(2-丙氧基羰基氨基)苯基)甲基-1-硝基苯(0．920g，2．8mmol)的二噁烷(10ml)溶液中加入濃鹽酸(4．0ml)，所得混合物在80℃加熱1小時(shí)，至TLC顯示起始物消失。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫。以EtOAc(50ml)稀釋混合物，然后以1M NaOH溶液洗滌(3×50ml)，干燥(MgSO4)，得到所需的苯胺1H-NMR(CDCl3)δ3．70(br s，2H)，3．97(s，2H)，6．65(d，J=8．5Hz，2H)，6．95(d，J=8．5Hz，2H)，7．32(d，J=8．8Hz，2H)，8．10(d，J=8．8Hz，2H)。
A9．合成芳基苯胺的一般方法將硝基苯酚烷基化后還原 第一步4-(α-溴乙?；?嗎啉向冰冷卻的嗎啉(2．17g，24．9mmol)和二異丙基乙基胺(3．21g，24．9mmol)的CH2Cl2溶液(70ml)中用針筒加入溴乙酰溴(5．05g，25mmol)的CH2Cl2溶液(8ml)。所得溶液在0℃保溫45分鐘，然后升至室溫。以EtOAc(500ml)稀釋反應(yīng)混合物，然后以1M HCl溶液(250ml)和飽和NaCl溶液(250ml)洗滌，干燥(MgSO4)，得到所需產(chǎn)物(3．2g，62％)1H-NMR(DMSO-d6)δ3．40-3．50(m，4H)，3．50-3．60(m，4H)，4．11(s，2H)。 第二步2-(N-嗎啉基羰基)甲氧基-5-叔丁基-1-硝基苯4-叔丁基-2-硝基苯酚(3．9g，20mmol)和K2CO3(3．31g，24mmol)在DMF(75ml)中所成漿料室溫下攪拌15分鐘，然后加入4-(α-溴乙?；?嗎啉(4．16g，20mmol)的DMF(10ml)溶液。反應(yīng)混合物室溫下攪拌通宵，然后以EtOAc(500ml)稀釋?zhuān)缓笠燥柡蚇aCl溶液(250ml)(4×200ml)和1M NaOH溶液(400ml)洗滌?？焖賹游?75％EtOAc／25％己烷)純化殘留物，得到所述硝基苯(2．13g，33％)1H-NMR(DMSO-d6)δ1．25(s，9H)，3．35-3．45(m，4H)，3．50-3．58(m，4H)，5．00(s，2H)，7．12(d，J=8．8Hz，1H)，7．50-7．80(m，2H)。 第三步2-(N-嗎啉基羰基)甲氧基-5-叔丁基苯胺向2-(N-嗎啉基羰基)甲氧基-5-叔丁-1-硝基苯(2．13g，6．6mmol)和EtOH(10ml)的EtOAc(40ml)溶液中加入5％Pd／C(0．215g)。所得漿料在H2氣氛下攪拌6小時(shí)，至TLC顯示起始物完全消失。Celite_過(guò)濾反應(yīng)混合物，得所需產(chǎn)物(1．9g，98％)1H-NMR(DMSO-d6)δ1．18(s，9H)，3．40-3．50(m，4H)，3．50-3．60(m，4H)，4．67(br s，2H)，4．69(s，2H)，6．40-6．70(m，3H)。
A10．形成芳基苯胺的一般方法將硝基苯酚烷基化后還原 第一步5-叔丁基-2-(2-羥基乙氧基)-1-硝基苯4-叔丁基-2-硝基苯酚(30g，0．15mol)和氟化四-n-丁基銨(0．771g，3．0mmol)的碳酸乙烯酯(10．24ml，0．15mol)溶液在150℃加熱18小時(shí)，然后冷卻至室溫，分配在水(50ml)和CH2Cl2(50ml)之間。干燥(MgSO4)有機(jī)層，減壓濃縮。柱層析(20％EtOAc／80％己烷)純化殘留物，得到棕色油狀所需產(chǎn)物(35．1g，90％)1H-NMR(DMSO-d6)δ1．25(s，9H)，3．66-3．69(m，2H)，4．10-4．14(t，J=5．0Hz，2H)，4．85(t，J=5．0Hz，1H)，7．27(d，J=8．8Hz，1H)，7．60-7．64(m，1H)，7．75(d，J=2．6Hz，1H)。 第二步5-叔丁基-2-(2-叔丁氧基羰基氧基)乙氧基)-1-硝基苯5-叔丁基-2-(2-羥基氧基)-1-硝基苯(0．401g，1．68mmol)，二碳酸二叔丁酯(0．46ml，2．0mmol)和二甲基氨基吡啶(0．006g，0．05mmol)的CH2Cl2(15mo)溶液室溫下攪拌30分鐘，至TLC顯示起始物消失。以水(20ml)洗滌反應(yīng)混合物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。柱層析(3％MeOH／97％CH2Cl2)純化殘留物，得到黃色油狀產(chǎn)物(0．291g，51％)1H-NMR(DMSO-d6)δ1．25(s，9H)，1．38(s，9H)，4．31(br s，4H)，7．27(d，J=9．2Hz，1H)，7．64(dd，J=2．6，8．8Hz，1H)，7．77(d，J=2．6Hz，1H)。 第三步5-叔丁基-2-(2-叔丁氧基羰基氧基)乙氧基)苯胺向5-叔丁基-2-(2-叔丁氧基羰基氧基)乙氧基)-1-硝基苯(0．290g，0．86mmol)和5％Pd／C(0．058g)在MeOH(2ml)中所成的混合物中加入甲酸銨(0．216g，3．42mmol)，所得混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后以EtOH為助劑用Celite_過(guò)濾。減壓濃縮濾液，柱層析(2％MeOH／98％CH2Cl2)純化殘留物，得到淺黃色油狀產(chǎn)物(0．232g，87％)TLC(20％EtOAc／80％己烷)Rf0．630；1H-NMR(DMSO-d6)δ1．17(s，9H)，1．39(s，9H)，4．03-4．06(m，2H)，4．30-4．31(m，2H)，4．54(brs，2H)，6．47(dd，J=8．1Hz，1H)，6．64-6．67(m，2H)。
A11．形成取代苯胺的一般方法硝基芳烴的氫化 4-(4-吡啶基甲基)苯胺向4-(4-硝基芐基)吡啶(7．0g，32．68mmol)的EtOH(200ml)溶液這加入7％Pd／C(0．7g)，用Parr振蕩器在H2氣氛下振蕩所得漿料。1小時(shí)后，對(duì)樣品的TLC和1H-NMR顯示反應(yīng)完全。用Celite_過(guò)濾混合物。真空濃縮濾液，得到白色固體(5．4g，90％)1H-NMR(DMSO-d6)δ3．74(s，2H)，4．91(br s，2H)，6．48(d，J=8．46Hz，2H)，6．86(d，J=8．09Hz，2H)，7．16(d，J=5．88Hz，2H)，8．40(d，J=5．88Hz，2H)；EI-MS m／z 184(M+)。該物質(zhì)不再純化而直接用于制備脲。
A12．制備取代苯胺的一般方法溶解金屬還原硝基芳烴 4-(2-吡啶基硫)苯胺向4-(2-吡啶基硫)-1-硝基苯(Menai ST3355A；0．220g，0．95mmol)和H2O(0．5ml)的AcOH(5ml)溶液中加入鐵粉(0．317g，5．68mmol)，所得將來(lái)在室溫下攪拌16小時(shí)。以EtOAc(75ml)和H2O(50ml)稀釋反應(yīng)混合物，分批加入K2CO3(小心發(fā)泡)堿化至pH10。用飽和NaCl溶液洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。MPLC(30％EtOAc／70％己烷)純化殘留固體，得到粘稠粘稠油狀產(chǎn)物(0．135g，70％)TLC(30％EtOAc／70％己烷)Rf0．0．20。
A13a．制備取代苯胺的一般方法通過(guò)芳香族親核取代形成硝基芳烴，然后還原 第一步1-甲氧基-4-(4-硝基苯氧基)苯室溫下向NaH(95％，1．50g，59mmol)的DFM(100ml)懸浮液中滴加4-甲氧基苯酚(7．39g，59mmol)的DMF(50ml)溶液。攪拌反應(yīng)1小時(shí)，然后滴加1-氟-4-硝基苯(7．0g，49mmol)的DMF(50ml)溶液，形成暗綠色溶液。反應(yīng)在95℃加熱一晝夜，然后冷卻至室溫，以H2O終止反應(yīng)，真空濃縮。將殘留物分配在EtOAc(200ml)和H2O(200ml)之間。然后用H2O(2×200ml)，飽和NaHCO3溶液(200ml)和飽和NaCl溶液(200ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，真空濃縮。研磨(Et2O／己烷)研磨殘留物，得1-甲氧基-4-(4-硝基苯氧基)苯(12．2g，100％)1H-NMR(CDCl3)δ3．83(s，3H)，6．93-7．04(m，6H)，8．18(d，J=9．2Hz，2H)；EI-MS m／z 245(M+)。 第二步4-(4-甲氧基苯氧基)苯胺向1-甲氧基-4-(4-硝基苯氧基)苯(12．0g，49mmol)的EtOAc(250ml)溶液中加入5％Pd／C(1．5g)，所得漿料氫氣氛(50psi)下振蕩18小時(shí)。以EtOAc為助劑用Celite_過(guò)濾反應(yīng)混合物，真空濃縮，得到緩慢固化的油狀產(chǎn)物(10．6g，100％)1H-NMR(CDCl3)δ3．54(br s，2H)，3．78(s，3H)，6．65(d，J=8．8Hz，2H)，6．79-6．92(m，6H)；EI-MS m／z 215(M+)。
A13b．制備取代苯胺的一般方法通過(guò)芳香族親核取代形成硝基芳香烴，然后還原 第一步3-(三氟甲基)-4-(4-吡啶基硫)硝基苯4-巰基吡啶(2．8g，24mmol)，2-氟-5-硝基苯并三氟甲烷(5g，23．5mmol)和碳酸鉀(6．1g，44．3mmol)的無(wú)水DMF(80ml)溶液室溫下攪拌通宵。TLC顯示反應(yīng)完全。以Et2O和水(100ml)稀釋混合物，以Et2O反萃取水相(2×100ml)。以飽和NaCl溶液(100ml)洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。Et2O研磨固體殘留物，得棕色產(chǎn)物(3．8g，54％)TLC(30％EtOAc／70％己烷)Rf0．06；1H-NMR(DMSO-d6)δ7．33(dd，J=1．2，4．2Hz，2H)，7．78(d，J=8．7Hz，1H)，8．46(dd，J=2．4，8．7Hz，1H)，8．45-8．56(m，3H)。 第二步3-(三氟甲基)-4-(4-吡啶基硫)苯胺3-三氟甲基-4-(4-吡啶基硫)硝基苯(3．8g，12．7mmol)，鐵粉(4．0g，71．6mmol)，乙酸(100ml)和水(1ml)形成的漿料室溫下攪拌4小時(shí)。以Et2O(100ml)和水(100ml)稀釋該混合物。用4N的NaOH溶液將水相調(diào)節(jié)至pH4。合并有機(jī)層，以飽和NaCl溶液(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。硅膠過(guò)濾(梯度50％EtOAc／50％己烷至60％EtOAc／40己烷)殘留物，得到產(chǎn)物(3．3g)TLC(50％EtOAc／50％己烷)Rf0．10；；1H-NMR(DMSO-d6)δ6．21(s，2H)，6．84-6．87(m，3H)，7．10(d，J=2．4Hz，1H)，7．39(d，J=8．4Hz，1H)，8．29(d，J=6．3Hz，2H)。
A13c．制備取代苯胺的一般方法通過(guò)芳香族親核取代形成硝基芳烴，然后還原 第一步4-(2-(4-苯基)噻唑基)硫-1-硝基苯2-巰基-4-苯基噻唑(4．0g，20．7mmol)的DMF(40ml)溶液中加入1-氟-4-硝基苯(2．3ml，21．7mmol)，然后加入K2CO3(3．18g，23mmol)，該混合物65℃通宵加熱。然后以EtOAc(100ml)稀釋反應(yīng)混合物，然后用水(100ml)和飽和NaCl溶液(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。用Et2O／己烷溶液研磨固體殘留物，得到產(chǎn)物(6．1g)TLC(25％EtOAc／75％己烷)Rf0．18；1H-NMR(CDCl3)δ7．35-7．47(m，3H)，7．58-7．63(m，3H)，7．90(d，J=6．9Hz，2H)，8．19(d，J=9．0Hz，2H)。 第二步4-(2-(4-苯基)噻唑基)硫苯胺用制備3-(三氟甲基)-4-(4-吡啶基硫)苯胺的方法還原4-(2-(4-苯基)噻唑基)硫-1-硝基苯TLC(25％EtOAc／75％己烷)Rf0．18；1H-NMR(CDCl3)δ3．89(br s，2H)，6．72-6．77(m，2H)，7．26-7．53(m，6H)，7．85-7．89(m，2H)。
A13d．制備取代苯胺的一般方法通過(guò)芳香族親核取代形成芳香烴，然后還原 第一步4-(6-甲基-3-吡比啶基氧基)-1-硝基苯向5-羥基-2-甲基吡啶(5．0g，45．8mmol)和1-氟-4-硝基苯(6．5g，45．8mmol)的DMF(50ml)溶液中一次性加入K2CO3(13．0g，91．6mmol)。該混合物在回流溫度攪拌加熱18小時(shí)，然后冷卻至室溫。將所得混合物倒入水中(200ml)，用3．89(br s，2H)，6．72-6．77(m，6H)，7．85-7．89(m，2H)。EtOAc(3×150ml)萃取。合并有機(jī)層，用水(3×l00ml)和飽和NaCl溶液(2×100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得所需產(chǎn)物(8．7g，83％)。該物質(zhì)不再進(jìn)一步純化而直接用于下一步驟。 第二步4-(6-甲基-3-吡啶基氧基)苯胺向4-(6-甲基-3-吡啶基氧基)-1-硝基苯(4．0g，17．3mmol)的EtOAc(150ml)溶液中加入10％Pd／C(0．500g，0．47mmol)，所得混合物在氫氣氛(球形瓶)下室溫?cái)嚢?8小時(shí)。然后，Celite_過(guò)濾混合物，真空濃縮，得到棕色產(chǎn)物(3．2g，92％)EI-MS m／z 200(M+)。
A13e．制備取代苯胺的一般方法通過(guò)芳香族親核取代形成芳香烴，然后還原 第一步4-(3，4-二甲氧基苯氧基)-1-硝基苯向3，4-二甲氧基苯酚(1．0g，6．4mmol)和1-氟-4-硝基苯(700μl，6．4mmol)的無(wú)水DMF(20ml)溶液中一次性加入K2CO3(1．8g，12．9mmol)。該混合物在回流溫度攪拌加熱18小時(shí)，然后冷卻至室溫。然后將混合物倒入水(100ml)中，用EtOAc(3×100ml)萃取。合并有機(jī)層，用水(3×50ml)和飽和NaCl溶液(2×50ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，真空濃縮，得到所需產(chǎn)物(0．8g，54％)。此粗產(chǎn)物不再純化而直接用于下一步。 第二步4-(3，4-二甲氧基苯氧基)苯胺將4-(3，4-二甲氧基苯氧基)-1-硝基苯(0．8g，3．2mmol)的EtOAc(50ml)溶液加入10％Pd／C(0．100g)，所得混合物在氫氣氛(球形瓶)下室溫下攪拌18小時(shí)。然后用Celite_過(guò)濾混合物，真空濃縮，得到白色固體狀的所需產(chǎn)物(0．6g，75％)EI-MS m／z 245(M+)。
A13f．制備取代苯胺的一般方法通過(guò)芳香族親核取代形成芳香烴，然后還原 第一步3-(3-吡啶基氧基)-1-硝基苯向3-羥基吡啶(2．8g，29．0mmol)，1-溴-3-硝基苯(5．9g，29．0mmol)和溴化銅(Ⅰ)(5．0g，34．8mmol)的無(wú)水DMF(50ml)溶液中一次性加入K2CO3(8．0g，58．1mmol)。所得混合物在回流溫度攪拌加熱18小時(shí)后冷卻至室溫。然后將混合物倒入水(200ml)中用EtOAc(3×150ml)萃取。合并有機(jī)層，用水(3×50ml)和飽和NaCl溶液(2×50ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，真空濃縮?？焖賹游?30％EtOAc／70％己烷)純化所得油狀物，得到所需產(chǎn)物(2．0g；32％)。該物質(zhì)不再純化直接用于下一步。 第二步3-(3-吡啶基氧基)苯胺將3-(3-吡啶基氧基)-1-硝基苯(2．0g，9．2mmol)的EtOAc(100ml)溶液加入10％Pd／C(0．200g)，所得混合物在氫氣氛(球形瓶)下室溫下攪拌18小時(shí)。然后用Celite_過(guò)濾混合物，真空濃縮，得到紅色油狀的所需產(chǎn)物(1．6g，94％)EI-MS m／z 186(M+)。
A13g．制備取代苯胺的一般方法通過(guò)芳香族親核取代形成芳香烴，然后還原 第一步3-(5-甲基-3-吡比啶基氧基)-1-硝基苯向3-羥基-5-甲基吡啶(5．0g，45．8mmol)，1-溴-3-硝基苯(12．0g，59．6mmol)和溴化銅(Ⅰ)(10．0g，73．3mmol)的無(wú)水DMF(50ml)溶液中一次性加入K2CO3(13．0g，91．6mmol)。所得混合物在回流溫度攪拌加熱18小時(shí)后冷卻至室溫。然后將混合物倒入水(200ml)中用EtOAc(3×150ml)萃取。合并有機(jī)層，用水(3×50ml)和飽和NaCl溶液(2×100ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，真空濃縮。快速層析(30％EtOAc／70％己烷)純化所得油狀物，得到所需產(chǎn)物(1．2g，13％)。 第二步3-(5-甲基-3-吡比啶基氧基)-1-硝基苯將3-(5-甲基-3-吡啶基氧基)-1-硝基苯(1．2g，5．2mmol)的EtOAc(50ml)溶液加入10％Pd／C(0．100g)，所得混合物在氫氣氛(球形瓶)下室溫下攪拌18小時(shí)。然后用Celite_過(guò)濾混合物，真空濃縮，得到紅色油狀的所需產(chǎn)物(0．9g，86％)EI-MS m／z 201(M+H+)。
A13h．制備取代苯胺的一般方法通過(guò)芳香族親核取代形成芳香烴，然后還原 第一步5-硝基-2-(4-甲基苯氧基)吡啶向2-氯-5-硝基吡啶(6．34g，40mmol)的DFM(200ml)溶液中加入4-甲基苯酚(5．4g，50mmol，1．25當(dāng)量)和K2CO3(8．28g，60mmol，1．5當(dāng)量)。該混合物室溫下攪拌通宵。所得混合物加水(600ml)產(chǎn)生沉淀?；旌衔飻嚢?小時(shí)，分離出固體，然后以1N NaOH溶液(25ml)，水(25ml)和pet．醚(25ml)洗滌，得所需產(chǎn)物(7．05g，76％)mp80-82℃；TLC(30％EtOAc／70％pet．醚)Rf0．79；1H-NMR(DMSO-d6)δ2．31(s，3H)，7．08(d，J=8．46Hz，2H)，7．19(d，J=9．20Hz，1H)，7．24(d，J=8．09Hz，1H)，8．58(dd，J=2．94，8．82Hz，1H)，8．99(d，J=2．95Hz，1H)；FAB-MS m／z(rel豐度)231((M+H)+)，100％)。 第二步二鹽酸5-氨基-2-(4-甲基苯氧基)吡啶在5-硝基-2-(4-甲基苯氧基)吡啶(6．49g，30mmol，1當(dāng)量)和EtOH(10ml)的EtOAc(190ml)溶液中通入氬氣，然后加入10％Pd／C(0．60g)。反應(yīng)混合物然后在氫氣氛下劇烈攪拌2．5小時(shí)。用Celite_過(guò)濾反應(yīng)混合物。向?yàn)V液中滴加HCl的Et2O溶液。分離出產(chǎn)生的沉淀，用EtOAc洗滌，得到所需產(chǎn)物(7．56g，92％)mp208-210℃；TLC(50％EtOAc／50％pet．醚)Rf0．42；1H-NMR(DMSO-d6)δ2．25(s，3H)，6．89(d，J=8．45Hz，2H)，7．04(d，J=8．82Hz，1H)，7．19(d，J=8．09Hz，2H)，8．46(dd，J=2．57，8．462Hz，1H)，8．99(d，J=2．75Hz，1H)；EI-MSm／z(rel豐度)231(M+)，100％)。
A13i．制備取代苯胺的一般方法通過(guò)芳香族親核取代形成芳香烴，然后還原 第一步4-(3-噻吩基硫)-1-硝基苯向4-硝基硫苯酚(純度80％；1．2g，6．1mmol)，3-溴噻吩(1．0g，6．1mmol)和氧化銅(Ⅱ)(0．5g，3．7mmol)的無(wú)水DMF(20ml)中進(jìn)入KOH(0．3g，6．1mmol)，所得混合物在130℃攪拌加熱42小時(shí)，然后冷卻至室溫。然后將反應(yīng)混合物倒入冰與6N HCl(200ml)混合物中，用EtOAc(3×100ml)萃取所得水性混合物。合并有機(jī)層后用1M NaOH溶液(2×100ml)和飽和NaCl溶液(2×100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮MPLC(硅膠柱；梯度10％EtOAc／90％己烷至5％EtOAc／95己烷)純化殘留油狀物，得到所需產(chǎn)物(0．5g，34％)。GC-MS m／z 237(M+)。 第二步4-3(-噻吩基硫)苯胺以方法B1將4-(3-噻吩基硫)-1-硝基苯還原成苯胺。
A13j．制備取代苯胺的一般方法通過(guò)芳香族親核取代形成芳香烴，然后還原 4-(5-嘧啶基氧基)苯胺將4-氨基苯酚(1．0g，9．2mmol)溶于DMF(20ml)，然后加入5-溴嘧啶(1．46g，9．2mmol)和K2CO3(1．9g，13．7mmol)。該混合物在100℃加熱18小時(shí)，在130℃加熱48小時(shí)，此時(shí)GC-MS分析顯示仍有少量起始物。讓反應(yīng)混合物冷卻至室溫，以水(50ml稀釋)。以EtOAc(100ml)萃取所得溶液。以飽和NaCl(2×50ml)洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)，真空濃縮。MPLC(50％EtOAc／50％己烷)純化固體殘留，得所需的胺(0．650g，38％)。
A13k．制備取代苯胺的一般方法通過(guò)芳香族親核取代形成芳香烴，然后還原 第-步5-溴-2-甲氧基吡啶2，5-二溴吡啶(5．5g，23．2mmol)和NaOMe(3．76g，69．6mmol)的MeOH(60ml)溶液在在密封容器內(nèi)于70℃加熱42小時(shí)，然后冷卻至室溫。反應(yīng)混合物以水(50ml)處理并用EtOAc(2×100ml)萃取。合并有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，減壓濃縮，得到淺黃色揮發(fā)性油(4．1g，得率95％)TLC(10％EtOAc／90％己烷)Rf0．57。 第二步5-羥基-2-甲氧基吡啶在-78℃攪拌5-溴-2-甲氧基吡啶(8．9g，47．9mmol)的THF(175ml)溶液并滴加正丁基鋰溶液(2．5M的己烷溶液；28．7ml，71．8mmol)，所得混合物在-78℃攪拌45分鐘。用針筒加入硼酸，三甲酯(7．06ml，62．2mmol)，所得混合物再攪拌2小時(shí)。將亮橙色反應(yīng)混合物升至0℃，用3N NaOH溶液(25ml，71．77mmol)于過(guò)氧化氫溶液(30％；約50ml)的混合物進(jìn)行處理。將所得黃色略微渾濁混合物升至室溫，30分鐘后加熱至回流溫度，1小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫。用1N HCl中和水層，然后以Et2O(2×100ml)萃取。合并有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，減壓濃縮，得到粘稠的黃色油狀物(3．5g，60％)。 第三步4-(5-(2-甲氧基)吡啶基)氧基-1-硝基苯攪拌NaH(97％，1．0g，42mmol)在DMF(100ml)中所成的漿料，加入5-羥基-2-甲氧基吡啶(3．5g，28mmol)的DMF(100ml)溶液。所得混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)，用針筒加入4-氟硝基苯(3ml，28mmol)。反應(yīng)混合物加熱至95℃過(guò)一晝夜，然后以水(25ml)處理，用EtOAc(2×75ml)萃取。合并有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，減壓濃縮。殘留的棕色油狀物在EtOAc／己烷中結(jié)晶，得黃色晶體(5．23g，75％)。 第四步以類(lèi)似于方法B3d第二步的方法將4-(5-(2-甲氧基)吡啶基)氧基苯胺4-(5-(2-甲氧基)吡啶基)氧基-1-硝基苯還原成苯胺。
A14a．合成取代苯胺的一般方法用鹵代吡啶進(jìn)行芳香族親核取代 3-(4-吡啶基硫)苯胺向3-氨基硫苯酚(3．8ml，34mmol)的無(wú)水DMF(90ml)溶液中加入鹽酸4-氯吡啶(5．4g，35．6mmol)，然后加入K2CO3(16．7g，121mmol)。反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?．5小時(shí)后以EtOAc(100ml)和水(100ml)稀釋。用EtOAc(2×100ml)反萃取水層。合并有機(jī)層，用飽和NaCl溶液(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。硅膠過(guò)濾殘留物(梯度50％EtOAc／50％己烷至70％EtOAc／30己烷)，以Et2O／己烷溶液研磨產(chǎn)物，得到所需產(chǎn)物(4．6g，66％)TLC(100％乙酸乙酯)Rf0．269；1H-NMR(DMSO-d6)δ5．41(s，2H)，6．64-6．74(m，3H)，7．01(d，J=4．8，2H)，7．14(d，J=7．8，1H)，8．32(d，J=4．8，2H)。
A14b．合成取代苯胺的一般方法用鹵代吡啶進(jìn)行芳香族親核取代
4-(2-甲基-4-吡啶基氧基)苯胺向4-氨基苯酚(3．6g，32．8mmol)和4-氯甲基吡啶(5．0g，39．3mmol)的無(wú)水DMPU(50ml)溶液中一次性加入叔丁醇鉀(7．4g，65．6mmol)。反應(yīng)混合物在100℃攪拌加熱18小時(shí)，然后冷卻至室溫。將所得混合物倒入水(200ml)中，用EtOAc(3×150ml)萃取。合并萃取液后用水(3×100ml)和飽和NaCl溶液(2×100ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，真空濃縮?？焖賹游?50％EtOAc／50％己烷)純化所得的油，得到黃色油狀所需產(chǎn)物(0．7g，9％)CI-MS m／z 201((M+H)+)。
A14c．合成取代苯胺的一般方法用鹵代吡啶進(jìn)行芳香族親核取代 第一步甲基(4-硝基苯基)-4-吡啶胺向N-甲基-4-硝基苯胺(2．0g，13．2mmol)和K2CO3(7．2g，52．2mmol)的DMPU(30ml)溶液中加入鹽酸4-氯吡啶(2．36g，15．77mmol)。反應(yīng)混合物90℃加熱20小時(shí)，然后冷卻至室溫。以水(100ml)稀釋所得混合物，并用EtOAc(100ml)萃取。用水(100ml)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，真空濃縮。柱層析(硅膠柱，梯度為80％EtOAc／20％己烷至100％EtOAc)純化殘留物，得到甲基(4-硝基苯基)-4-吡啶胺(0．42g)。 第二步甲基(4-氨基苯基)-4-吡啶基半以類(lèi)似于方法B1所述還原甲基(4-硝基苯基)-4-吡比啶胺。
A15．合成取代苯胺的一般方法苯酚烷基化，然后還原硝基芳烴 第一步4-(4-丁氧基苯基)硫-1-硝基苯；在0℃，向4-(4-硝基苯基-1-硫)苯酚(1．50g，6．07mmol)的無(wú)水DMF(75ml)中加入NaH(60％，礦物油中，0．267g，6．67mmol)。在0℃攪拌該棕色懸浮液，直至停止產(chǎn)氣(l5分鐘)，然后在0℃滴加15分鐘碘代丁烷(1．12g，0．690ml，6．07mmol)的無(wú)水DMF(20ml)溶液。室溫下攪拌反應(yīng)18小時(shí)，此時(shí)，TLC顯示有未反應(yīng)的酚存在，再次加入碘代丁烷(56mg，0．035ml，0．303mmol，0．05當(dāng)量)和NaH(13mg，0．334mmol)。繼續(xù)在室溫下攪拌反應(yīng)6小時(shí)，然后加水(400ml)終止反應(yīng)。以Et2O(2×500ml)萃取所得混合物。合并有機(jī)層，用水(2×400ml)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮得澄清的黃色油狀物，經(jīng)硅膠層析(梯度20％EtOAc／80％己烷至50％EtOAc／50％己烷)純化，得黃色固體產(chǎn)物(1．24g，67％)TLC(20％EtOAc／80％己烷)Rf0．75；1H-NMR(DMSO-d6)δ0．92(t，J=7．5Hz，3H)，1．42(app．hex．，J=7．5Hz，2H)，1．70(m，2H)，4．01(t，J=6．6Hz，2H)，7．08(t，J=8．7Hz，2H)，7．17(d，J=9Hz，2H)，7．51(d，J=8．7Hz，2H)，8．09(d，J=9Hz，2H)。 第二步4-(4-丁氧基苯基)硫苯胺以類(lèi)似于制備3-(三氟甲基)-4-(4-吡啶基硫)苯胺所用方法(方法B3b，第二步)將4-(4-丁氧基苯基)硫-1-硝基苯還原成苯胺TLC(33％EtOAc／70％己烷)Rf0．38。
A16．合成取代苯胺的一般方法二氨基芳烴的?；?4-(4-叔氧丁基氨基甲酰基芐基)苯胺室溫下向4，4’-亞甲基二苯胺(3．00g，15．1mmol)的無(wú)水THF(50ml)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(3．30g，15．1mmol)的無(wú)水THF(10ml)溶液。反應(yīng)混合物在回流溫度加熱3小時(shí)，此時(shí)，TLC顯示有未反應(yīng)的亞甲基二苯胺存在。再次加入二碳酸二叔丁酯(0．664g，3．03mmol，0．02當(dāng)量)，然后繼續(xù)在回流溫度反應(yīng)16小時(shí)。以Et2O(200ml)稀釋所得混合物，然后用飽和NaHCO3溶液(100ml)，水(100ml)和飽和NaCl溶液(50ml)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。硅膠柱層析(梯度30％EtOAc／70％己烷至50％EtOAc／50％己烷)純化所得白色固體，得到白色固體狀所需產(chǎn)物(2．09g，46％)TLC(50％EtOAc／50％己烷)Rf0．45；1H-NMR(DMSO-d6)δ1．43(s，9H)，3．63(s，2H)，4．85(br s，2H)，6．44(d，J=8．4Hz，2H)，6．80(d，J=8．1Hz，2H)，7．00(d，J=8．4Hz，2H)，7．28(d，J=8．1Hz，2H)，9．18(br s，1H)；FAV-MS m／z 298(M+)。
A17．合成芳基胺的一般方法親電硝化，然后還原 第一步3-(4-硝基芐基)吡啶3-芐基吡啶(4．0g，23．6mmol)和70％硝酸(30ml)所成溶液在50℃加熱一晝夜。在所得混合物冷卻至室溫后倒入冰水(350ml)中。用1N NaOH溶液將所得的水性混合物調(diào)節(jié)至堿性，然后用Et2O(4×100ml)萃取。合并萃取液，然后用水(3×100ml)和飽和NaCl溶液(2×100ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，真空濃縮。MPLC(硅膠柱；50％EtOAc／50％己烷)純化殘留油，然后結(jié)晶(EtOAc／己烷)，得所需產(chǎn)物(1．0g，22％)GC-MS m／z214(M+)。 第二步3-(4-吡啶基)甲基苯胺用類(lèi)似于方法B1所述將3-(4-硝基芐基)吡啶還原成苯胺。
A18．合成芳基胺的一般方法用硝基芐基鹵化物進(jìn)行取代，然后還原 第一步4-(1-咪唑基甲基)-1-硝基苯向咪唑(0．5g，7．3mmol)和4-硝基芐基溴(1．6g，7．3mmol)的無(wú)水乙腈(30ml)溶液中加入K2CO3(1．0g，7．3mmol)。所得混合物室溫下攪拌18小時(shí)，然后倒入水(200ml)中，用EtOAc(3×50ml)萃取所得水溶液。合并有機(jī)層，然后用水(3×50ml)和飽和NaCl溶液(2×50ml)洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮。MPLC(硅膠柱；25％EtOAc／75％己烷)純化殘留油，得所需產(chǎn)物(1．0g，91％)EI-MS m／z 203(M+)。 第二步4-(1-咪唑基甲基)苯胺用方法B2所述方法將4-(1-咪唑基甲基)-1-硝基苯還原成苯胺。
A19．取代羥基甲基苯胺的形成氧化硝基芐基混合物，然后還原 第一步4-(1-羥基-1-(4-吡啶基)甲基-1-硝基苯)攪拌3-(4-硝基芐基)吡啶(6．0g，28mmol)的CH2Cl2(90ml)溶液，在10℃，加入m-CPBA(5．80g，33．6mmol)，混合物在室溫下攪拌通宵。依次以10％NaHSO4溶液(50ml)，飽和K2CO3溶液(50ml)和飽和NaCl溶液(50ml)洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮。將所得黃色固體(2．68g)溶于乙酸酐(30ml)，在回流溫度加熱通宵。減壓濃縮混合物。將殘留物溶于MeOH(25ml)，以20％NH3水溶液(30ml)處理?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時(shí)，然后減壓濃縮。將殘留物倒入水(50ml)于CH2Cl2(50ml)的混合物。干燥(MgSO4)有機(jī)層，減壓濃縮，柱層析(80％EtOAc／20％己烷)純化，得到白色固體狀所需產(chǎn)物(0．53g，8％)mp110-118℃；TLC(80％EtOAc／20％己烷)Rf0．12；FAB-MS m／z 367((M+H)+，100％)。 第二步4-(1-羥基-1-(4-吡啶基)甲基苯胺用方法B3d，第二步將4-(1-羥基-1-(4-吡啶基)-甲基-1-硝基苯還原成苯胺。
A20．通過(guò)Menisci反應(yīng)形成2-(N-甲基氨基甲酰基)吡啶
第一步2-(N-甲基氨基甲?；?-4-氯吡啶(注意這是一個(gè)高危險(xiǎn)，有爆炸可能的反應(yīng))。在氬氣氛下，常溫下，向4-氯吡啶(10．0g)的N-甲基甲酰胺(250ml)溶液中加入濃硫酸(3．55ml)(放熱)。向其中加入H2O2(17ml，30wt％水溶液)，然后加入FeSO4·7H2O(0．55g)，放熱。常溫下，黑暗中攪拌反應(yīng)1小時(shí)，然后在45℃緩慢加熱小時(shí)。當(dāng)氣泡減少時(shí)，在60℃加熱反應(yīng)16小時(shí)。用H2O(700ml)稀釋半透明棕色溶液，然后加入10％NaOH溶液(205ml)。用EtOAc(3×500ml)萃取該水性混合物，分離出有機(jī)層，用飽和NaCl溶液(3×150ml)洗滌。合并有機(jī)層干燥(MgSO4)，以硅膠片過(guò)濾，以EtOAc洗脫。真空去除溶劑，硅膠柱層析(梯度50％EtOAc／50％己烷至80％EtOAc／20％己烷)純化棕色殘留物。所得黃色油狀物在0℃結(jié)晶72小時(shí)，得到2-(N-甲基氨基甲?；?-4-氯吡啶(0．61g，5．3％)TLC(50％EtOAc／50％己烷)Rf0．50；MS；1H-NMR(CDCl3)d8．44(d，1H，J=5．1Hz，CHN)，8．21(s，1H，CHCCO)，7．96(b s，1H，NH)，7．43(dd，1H，J=2．4，5．4Hz，ClCHCN)，3．01(d，3H，J=5．1Hz，甲基)；CI-MS m／z 171((M+H)+)。
A21．合成ω磺?；交桨返囊话惴椒?第一步4-(4-甲基磺?；窖趸?-1-硝基苯在0℃向4-(4-甲基硫苯氧基)-1-硝基苯(2g，7．66mmol)的CH2Cl2(75ml)溶液中緩慢加入mCPBA(57-86％，4g)，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。用1N NaOH溶液(25ml)處理反應(yīng)混合物。依次用1N NaOH溶液(25ml)，水(25ml)和飽和NaCl(25ml)洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到4-(4-甲基磺酰基苯氧基)-1-硝基苯固體(2．1g)。
第二步4-(4-甲基磺?；窖趸?-1-苯胺用方法B3d，第二步的方法將4-(4-甲基磺?；窖趸?-1-硝基苯還原成苯胺。
A22．合成ω-烷氧基-ω-羧基苯基苯胺的一般方法 第一步4-(3-甲氧基羰基-4-甲氧基苯氧基)-1-硝基苯向4-(3-羧基-4-羥基苯氧基)-1-硝基苯(以方法B3a第一步的方法制備，12mmol)的丙酮(50ml)溶液中加入K2CO3(5g)和硫酸二甲酯(3．5ml)。所得混合物在回流溫度加熱通宵，然后冷卻至室溫，以Celite_過(guò)濾。減壓濃縮所得溶液，吸附到硅膠上，經(jīng)柱層析(50％EtOAc／50％己烷)純化，得黃色粉末狀4-(3-甲氧基羰基-4-甲氧基苯氧基)-1-硝基苯(3g)mp115-118℃。 第二步4-(3-羧基-4-甲氧基苯氧基)-1-硝基苯4-(3-甲氧基羰基-4-甲氧基苯氧基)-1-硝基苯(1．2g)，KOH(0．33g)和水(5ml)的混合物在室溫下攪拌通宵，然后在回流溫度加熱4小時(shí)。將所得混合物冷卻至室溫，然后減壓濃縮。將殘留物溶于水(50ml)，用1N HCl溶液將該水性混合物調(diào)節(jié)至酸性。用EtOAc-(50ml)萃取所得混合物。干燥(MgSO4)有機(jī)層，減壓濃縮，得4-(3-羧基-4-甲氧基苯氧基)-1-硝基苯(1．04g)。
B．形成脲一般方法B1a．芳基胺與異氰酸芳酯反應(yīng)的一般方法 N-(5-叔丁基-2-(3-四氫呋喃基氧基)苯基)-N’-(4-甲基苯基)脲向5-叔丁基-2-(3-四氫呋喃基氧基)苯胺(0．078g，0．33mmol)的甲苯(2．0ml)溶液中加入異氰酸對(duì)甲苯酯(0．048g，0．36mmol)，所得混合物室溫下攪拌8小時(shí)以形成沉淀。過(guò)濾反應(yīng)混合物，用甲苯和己烷洗滌殘留物，得到白色固體狀所需脲(0．091g，75％)mp229-231℃；1H-NMR(DMSO-d6)δ1．30(s，9H)，1．99-2．03(m，1H)，2．19-2．23(m，2H)，7．06(d，J=8．09Hz，2H)，7．32(d，J=8．09Hz，2H)，7．84(s，1H)，8．22(d，J=2．21Hz，1H)，9．26(s，1H)。
B1b．芳基胺與異氰酸芳酯反應(yīng)的一般方法 N-(2-甲氧基-5-(三氟甲烷磺?；?苯基)-N’-(4-甲基苯基)脲將異氰酸對(duì)甲苯酯(0．19ml，1．55mmol)加入2-甲氧基-5-(三氟甲烷磺?；?苯胺(0．330g，1．29mmol)的EtOAc(5ml)溶液，所得反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。過(guò)濾收集所得沉淀，用Et2O洗滌，得到白色固體(0．28g)。HPLC(C-18柱，50％CH3CN／50％H2O)純化該物質(zhì)，用Et2O研磨所得固體，得標(biāo)題化合物(0．198g)1H-NMR(CDCl3)δ7．08(d，J=8．5Hz，2H)，7．33(d，J=8．5Hz，2H)，7．40(d，J=8．8Hz，1H)，7．71(d，J=2．6，8．8Hz，1H)，8．66(d，J=2．6 Hz，1H)，9．36(s，1H)；FAB-MS m／z 389((M+H)+)。
B1c．芳基胺與異氰酸芳酯反應(yīng)的一般方法 N-(2-甲氧基-5-(二氟甲烷磺?；?苯基)-N’-(4-甲基苯基)脲將異氰酸對(duì)甲苯酯(0．058ml，0．46mmol)加入2-甲氧基-5-(二氟甲烷磺?；?苯胺(0．100g，0．42mmol)的EtOAc(0．5ml)溶液，所得反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3天。過(guò)濾收集所得沉淀，用Et2O洗滌，得到白色固體(0．092g)1H-NMR(CDCl3)δ2．22(s，3H)，4．01(s，3H)，7．02-7．36(m，6H)，7．54(dd，J=2．4，8．6Hz，1H)，8．57(s，1H)，8．79(d，J=2．6Hz，1H)，9．33(s，1H)；EI-MS m／z370(M+)。
B1d．芳基胺與異氰酸芳酯反應(yīng)的一般方法 N-(2，4-二甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-N’-(4-甲基苯基)脲將異氰酸對(duì)甲苯酯(0．16ml，1．24mmol)加入2，4-二甲氧基-5-(三氟甲基)苯胺(0．25g，1．13mmol)的EtOAc(3ml)溶液，所得反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。用Et2O洗滌所得沉淀，得到白色固體(0．36g)1H-NMR(CDCl3)δ2．21(s，3H)，3．97(s，3H)，3．86(s，3H)，6．88(s，1H)，7．05(d，J=8．5Hz，2H)，7．29(d，J=8．5Hz，2H)，8．13(s，1H)，8．33(s，1H)，9．09(s，1H)；FAB-MS m／z 355(M+1+)。
B1e．芳基胺與異氰酸芳酯反應(yīng)的一般方法 N-(3-甲氧基-2-萘基)-N’-(1-萘基)脲室溫下向2-氨基-3-甲氧基萘(0．253g，1．50mmol)的CH2Cl2(3ml)異氰酸1-萘酯(0．247g，1．50mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液，所得化合物攪拌通宵。分離出所得沉淀，用CH2Cl2洗滌，得到白色粉末狀所需脲(0．450g，90％)mp235-236℃；1H-NMR(DMSO-d6)δ4．04(s，3H)，7．28-7．32(m，2H)，7．38(s，1H)，7．44-7．72(m，6H)，7．90-7．93(m，1H)，8．05-8．08(m，1H)，8．21-8．24(m，1H)，8．64(s，1H)，9．03(s，1H)，9．44(s，1H)；FAB-MS m／z 343((M+H+))。
B1f．芳基胺與異氰酸芳酯反應(yīng)的一般方法 N-(5-叔丁基-2-(2-叔丁氧基羰基氧基)乙氧基)苯基)-N’-(4-甲基苯基)脲5-叔丁基-2-(2-叔丁氧基羰基氧基)乙氧基)苯胺(方法A10，0．232g，0．75mmol)和異氰酸對(duì)甲苯酯(0．099ml，0．79mmol)在EtOAc(1ml)中所成的混合物室溫下攪拌3天，分離出所得固體。柱層析(100％CH2Cl2)純化濾液，研磨(Et2O／己烷)殘留物，得所需產(chǎn)物(0．262g，79％)mp155-156℃；TLC(20％EtOAc／80％己烷)Rf0．49；1H-NMR(DMSO-d6)δ1．22(s，9H)，1．37(s，9H)，2．21(s，3H)，4．22-4．23(m，2H)，4．33-4．35(m，2H)，6．89-7．00(m，4H)，7．06(d，8．5Hz，2H)，7．32(d，8．1Hz，2H)，7．96(s，1H)，8．22(d，1．5Hz，1H)，9．22(s，1H)；FAB-MS m／z(rel豐度)443((M+H+)，60％)。
B2a．芳基胺與碳酰氯反應(yīng)然后加入第二芳基胺的一般方法 N-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-N’-(3-(4-吡啶基硫)苯基)脲在0℃向吡啶(0．61ml，7．5mmol，3．0當(dāng)量)和碳酰氯(20％的甲苯溶液，2．65ml，5．0mmol，2．0當(dāng)量)的CH2Cl2(20ml)溶液中加入2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯胺(0．48g，2．5mmol)。所得混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，然后用無(wú)水甲苯(100ml)處理，減壓濃縮。將殘留物懸浮在CH2Cl2(10ml)與無(wú)水吡啶(10ml)的混合物中，以3-(4-吡啶基硫)苯胺(0．61g，2．5mmol，1．0當(dāng)量)處理?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柰ㄏ?，然后倒入水(50ml)中，用CH2Cl2(3×25ml)萃取。合并有機(jī)層，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。將殘留物溶解在最少量的CH2Cl2中，用pet．醚處理，得到所需產(chǎn)物的白色沉淀(0．74g，70％)mp202℃；TLC(5％丙酮95％CH2Cl2)Rf0．09；1H-NMR(DMSO-d6)δ7．06(d，J=5．5Hz，2H)，7．18(dd，J=2．4，4．6Hz，2H)，7．31(dd，J=2．2，9．2Hz，2H)，7．44(d，J=5．7Hz，1H)，7．45(s，1H)，7．79(d，J=2．2Hz，1H)，8．37(s，2H)，8．50(dd，J=2．2，9．2Hz，2H)，9．63(s，1H)，9．84(s，1H)；FAB--MS m／z 420((M+H+)，70％)。
B2b．芳基胺與碳酰氯反應(yīng)然后加入第二芳基胺的一般方法 N-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-N’-(4-(4-吡啶基硫)苯基)脲在0℃向吡啶(0．61ml，7．5mmol，3．0當(dāng)量)和碳酰氯(20％的甲苯溶液，2．65ml，5．0mmol，2．0當(dāng)量)的CH2Cl2(20ml)溶液中加入4-(4-吡啶基硫)苯胺(0．506g，2．5mmol)。所得混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，然后用無(wú)水甲苯(100ml)處理，減壓濃縮。將殘留物懸浮在CH2Cl2(10ml)與無(wú)水吡啶(10ml)的混合物中，以2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯胺(0．50g，2．5mmol，1．0當(dāng)量)處理。混合物在室溫下攪拌通宵，然后倒入1N NaOH溶液(50ml)中，用CH2Cl2(3×25ml)萃取。合并有機(jī)層，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。將殘留物溶解在最少量的CH2Cl2中，得到所需脲(0．74g，71％)mp215℃；TLC(5％丙酮95％CH2Cl2)Rf0．08；1H-NMR(DMSO-d6)δ3．96(s，3H)，6．94(dd，J=1．1，4．8Hz，2H)，7．19(d，J=8．4Hz，1H)，7．32(dd，J=2；2，9．3Hz，1H)，7．50(d，J=8．8Hz，2H)，8．32(d，J=5．1Hz，2H)，8．53(d，J=0．7Hz，1H)，8．58(s，1H)，9．70(s，1H)；FAB--MS m／z 420((M+H+))。
B3a．芳基胺與碳酰氯反應(yīng)，分離異氰酸酯，然后加入第二芳基胺的一般方法 第一步異氰酸5-(二氟甲烷磺?；?-2-甲氧基苯基酯在0℃向碳酰氯(1．95M甲苯溶液；3．0ml，5．9mmol)的CH2Cl2溶液(40ml)中滴加5-(二氟甲烷磺?；?-2-甲氧基苯胺(0．70g，2．95mmol)和吡啶在CH2Cl2(1ml)中所成的溶液。在0℃攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌30分鐘后，用甲苯(50ml)處理。減壓濃縮所得混合物，然后用Et2O(50ml)處理，生成沉淀(鹽酸吡啶鎓)。減壓濃縮所得濾液，得到標(biāo)題混合物的白色固體(0．33g)。該物質(zhì)直接用于下一步，不再純化。 第二步N-(2-甲氧基-5-(二氟甲烷磺?；?苯基)-N’-(2-氟-4-甲基苯基)脲將2-氟-4-甲基苯胺(0．022ml，0．19mmol)加入異氰酸5-(二氟甲烷磺?；?-2-甲氧基苯酯(0．046g，0．17mmol)的EtOAc(1ml)溶液。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3天。所得沉淀用Et2O洗滌，得到標(biāo)題混合物的白色固體(0．055g)；1H-NMR(DMSO-d6)δ2．24(s，3H)，4．01(s，3H)，6．93(d，J=8．5Hz，1H)，7．01-7．36(m，3H)，7．56(dd，J=2．4，8．6Hz，1H)，7．98(app．t，J=8．6Hz，1H)，8．79(d，J=2．2Hz，1H)，9．07(s，1H)，9．26(s，1H)；FAB-MS m／z 389(M+1)+)。
B3b．芳基胺與碳酰氯反應(yīng)，分離異氰酸酯，然后加入第二芳基胺的一般方法 第一步異氰酸2-甲氧基-5-三氟甲基苯酯在0℃向碳酰氯(1．93M甲苯溶液；16ml，31．4mmol)的CH2Cl2(120ml)溶液中滴加2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯胺(3．0g，15．7mmol)和吡啶(2．3ml，47．1mmol)的CH2Cl2(3ml)溶液。所得混合物在0℃攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌30分鐘，減壓濃縮，用Et2O處理。揮手所得沉淀(鹽酸吡啶鎓)。減壓濃縮所得濾液，得到黃色油狀標(biāo)題混合物(3．0g)，室溫下靜置數(shù)天后結(jié)晶。
第二步N-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-N’-(4-氟苯基)脲將4-氟苯胺(0．24ml，2．53mmol)加入異氰酸2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯酯(0．50g，2．30mmol0的EtOAc(6ml)溶液，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3天。所得沉淀用Et2O洗滌，得到標(biāo)題混合物的白色固體(0．60g)NMR3．94(s，3H)，7．13-7．18(m，3H)，7．30(dd，J=1．5，8．4Hz，1H)，7．44(m，2H)，8．45(s，1H)，8．52(d，J=2．2Hz，1H)，9．42(s，1H)；FAB-MS m／z 329(M+1)+)。
B4．形成脲的一般方法通過(guò)Curtius重排，然后用胺吸收 第二步N-(3-甲氧基-2-萘基)-N’-(4-甲基苯基)脲在室溫下向3-甲氧基-2-萘酸(方法A40．762g，3．80mmol)和Et3N(0．588ml，4．2mmol)在甲苯(20ml)中所成的溶液中加入二苯基磷?；?1．16g，4．2mmol)的甲苯(5ml)溶液。所得混合物在80℃加熱2小時(shí)，冷卻至室溫，加入對(duì)甲苯胺(0．455g，4．1mmol)。混合物在80℃加熱一晝夜，冷卻至室溫，用10％檸檬酸溶液猝滅反應(yīng)，用EtOAc(2×25ml)萃取。合并有機(jī)層，用飽和NaCl溶液(25ml)洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮。用CH2Cl2研磨殘留物得到白色粉末狀所需脲(0．700g，61％)mp171-172℃；1H-NMR(DMSO-d6)δ2．22(s，3H)，3．99(s，3H)，7．07(d，J=8．49Hz，2H)，7．27-7．36(m，5H)，7．67-7．72(m，2H)，8．43(s，1H)，8．57(s，1H)，9．33(s，1H)；FAB-MS m／z 307(M+H)+)。
B5．取代苯胺與N，N’-羰基二咪唑反應(yīng)，然后與第二胺反應(yīng)的一般方法 N-(5-氯-2-羥基-4-硝基苯基)-N’-(4-(4-吡啶基甲基)苯基)脲4-(4-吡啶基甲基)苯胺(0．300g，1．63mmol)和N，N’-羰基二咪唑(0．268g，1．65mmol)的CH2Cl2(10ml)中所成的溶液在室溫下攪拌1小時(shí)，直至TLC顯示無(wú)起始苯胺。然后用2-氨基-4-氯-5-硝基苯酚(0．318g，1．65mmol)處理反應(yīng)混合物，并在40-45℃攪拌48小時(shí)。將所得沉淀冷卻至室溫，用EtOAc(25ml)稀釋。分離所得沉淀得所需產(chǎn)物(0．416g，64％)TLC(50％丙酮／50％CH2Cl2)Rf0．40；1H-NMR(DMSO-d6)δ3．90(s，2H)，7．18(d，J=8．4Hz，2H)，7．21(d，J=6Hz，2H)，7．38(d，J=8．4Hz，2H)，7．54(s，1H)，8．43-8．45(m，3H)，8．78(s，1H)，9．56(s，1H)，11．8(br s，1H)；FAB-MS m／z(rel豐度)399(M+H)+，10％)。
B6．作為脲形成反應(yīng)的副產(chǎn)物合成對(duì)稱(chēng)二苯基脲的一般方法 二(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲向5-氨基-3-叔丁基異噁唑(0．100g)的無(wú)水甲苯(5ml)溶液中加入異氰酸4-氯-3-(三氟甲基)苯酯(0．395g)。將反應(yīng)容器密封，在85℃加熱72小時(shí)。過(guò)濾反應(yīng)混合物，減壓濃縮濾液。柱層析(100％CH2Cl2至5％MeOH／95％CH2Cl2)純化殘留物，先得到二(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲，然后得到N-(3-叔丁基-5-異噁唑)-N’-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。來(lái)自對(duì)稱(chēng)脲組分的殘留物經(jīng)研磨(Et2O／己烷)后得到白色固體狀的脲(0．110g)TLC(3％MeOH／97％CH2Cl2)Rf0．55；FAB-MS m／z 417(M+H)+)。
B．用三光氣合成二苯基脲的組合方法將待偶合苯胺之一溶解于二氯甲烷(0．10M)。將給溶液(0．5ml)加入裝有二氯甲烷(1ml)的8ml試劑瓶。向其中加入三光氣溶液(0．12M的二氯甲烷溶液，0．2ml，0．4當(dāng)量)，然后加入二異丙基乙基胺(0．35M的二氯甲烷溶液，0．2ml，1．2當(dāng)量)。蓋上試劑瓶在80℃加熱5小時(shí)，然后冷卻至室溫，約10小時(shí)。加入第二種苯胺(0．10M的二氯甲烷溶液，0．5ml，1．0當(dāng)量)，然后加入二異丙基乙基胺(0．35M的二氯甲烷溶液，0．2ml，1．2當(dāng)量)。所得混合物在80℃加熱4小時(shí)，然后冷卻至室溫，用MeOH(0．5ml)處理。減壓濃縮所得混合物，反相HPLC純化產(chǎn)物。
C．脲的相互轉(zhuǎn)化和Misc．反應(yīng)C1．羥基苯基脲烷基化的一般方法 第一步N-(2-羥基-5-(三氟甲基硫)苯基)-N’-(4-甲基苯基)脲將異氰酸對(duì)甲苯酯(0．066ml，0．52mmol)加入2-羥基-5-(三氟甲基硫)苯胺(0．100g，0．48mmol)的EtOAc(2ml)溶液中，該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天。所得沉淀用EtOAc洗滌，得到標(biāo)題混合物(0．13g)1H-NMR(CDCl3)δ2．24(s，3H)，7．44-7．03(m，6H)，8．46(s，1H)，8．60(d，J=1．8Hz，1H)，9．16(s，1H)，10．41(s，1H)；FAB-MS m／z 343((M+1)+)。該物質(zhì)不再純化而直接用于下一步。 第二步N-(2-甲氧基-5-(三氟甲基硫)苯基)-N’-(4-甲基苯基)脲N-(2-羥基-5-(三氟甲基硫)苯基)-N’-(4-甲基苯基)脲(0．125g，0．36mmol)，碘代甲烷(0．045ml，0．73mmol)和K2CO3(100mg，0．73mmol)在丙酮(2ml)中所成乳液在回流溫度加熱6小時(shí)，然后冷卻至室溫，減壓濃縮。將殘留物溶解在最少量的MeOH中，吸附到硅膠上，然后快速層析(3％EtOAc／97％CH2Cl2)純化，得到白色固體狀標(biāo)題化合物(68g)1H-NMR(CDCl3)δ2．22(s，3H)，3．92(s，3H)，7．05-7．32(m，6H)，8．37(s，1H)，8．52(d，J=2．2Hz，1H)，9．27(s，1H)；FAB-MSm／z 357((M+1)+)。
C2．還原含硝基脲的一般方法 N-(5-叔丁基-2-甲氧基苯基)-N’-(2-氨基-4-甲基苯基)脲向N-(5-叔丁基-2-甲氧基苯基)-N’-(2-硝基-4-甲基苯基)脲(制備方法同方法B1a；4．0g，11．2mmol)的EtOH(100ml)溶液中加入10％Pd／C(0．40g)的EtOH(10ml)漿料，所的混合物在氫氣氛下室溫?cái)嚢?8小時(shí)。Celite_過(guò)濾混合物，真空濃縮，得到粉末狀所需產(chǎn)物(3．42g，94％)mp165-166℃；1H-NMR(CDCl3)δ1．30(s，9H)，2．26(s，3H)，3．50(br s，2H)，3．71(s，3H)，6．39(br s，1H)，6．62(s，1H)，6．73(d，J=8．46Hz，1H)，6．99(dd，J=2．21，8．46Hz，1H)，7．05(d，J=8．46Hz，1H)，7．29(s，1H)，8．22(d，J=2．57Hz，1H)；FAB-MS m／z 328((M+H)+)。
C3．與硫異氰酸酯反應(yīng)形成硫脲的一般方法 N-(5-叔丁基-2-甲氧基苯基)-N’-(1-萘基)硫脲向5-叔丁基-2-甲氧基苯胺(0．372g，2．07mmol)的甲苯(5ml)溶液中加入硫異氰酸1-萘酯(0．384g，2．07mmol)，所的混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)生成沉淀。分離出的固體用甲苯和己烷洗滌，得米色粉末狀所需產(chǎn)物(0．364g，48％)mp158-160℃；1H-NMR(DMSO-d6)δ1．31(s，9H)，3．59(s，3H)，6．74(d，J=8．46Hz，1H)，7．13(dd，J=2．21，8．46Hz，1H)，7．53-7．62(m，4H)，7．88-7．95(m，4H)，8．06-8．08(m，1H)，8．09(br s，1H)；FAB-MSm／z 365((M+H)+)。
C4．含碳酸叔丁酯的脲去保護(hù)的一般方法 N-(5-叔丁基-2-(2-羥基乙氧基)苯基)-N’-(4-甲基苯基)脲N-(5-叔丁基-2-(2-叔丁氧基羰基氧基)乙氧基)苯基-N’-(4-甲基苯基)脲(方法B1f；0．237g，0．54mmol)和TFA(0．21ml，2．7mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液室溫下攪拌18小時(shí)，然后用飽和NaHCO3溶液(2ml)洗滌。有機(jī)層通過(guò)1PS濾紙(Whatman_)干燥，減壓濃縮。研磨(Et2O／己烷)所的白色泡沫，然后(Et2O)結(jié)晶，得所需產(chǎn)物(3．7mg)TLC(50％EtOAc／50％己烷)Rf0．62；1H-NMR(DMSO-d6)δ1．22(s，9H)，3．75-3．76(m，2H)，4．80(t，J=5．0Hz，1H)，6．88-6．89(m，4H)，7．06(d，J=8．5Hz，2H)，7．33(d，J=8．1Hz，2H)，7．97(s，1H)，8．20(br s，1H)，9．14(s，1H)；FAB-MS m／z(rel豐度)343((M+H)+，100％)。
按照以上一般方法合成了以下化合物
表12-取代-5-苯基脲
表2 2-取代-5-(三氟甲基)苯基脲
表32-取代-5-(三氟甲基)苯基脲
表4 3-取代-2-萘基脲
表5 其他脲 生物學(xué)實(shí)施例raf激酶體外試驗(yàn)在raf激酶體外試驗(yàn)中，raf與MEK一起培養(yǎng)在含2mM 2-巰基乙醇和100mMNaCl的20mM Tris-HCl，pH8．2中。將該蛋白溶液(20μl)與水(5μl)混合，或與用水稀釋的10mM化合物DMSO儲(chǔ)備液混合。加入25μl[γ-33P]ATP(1000-3000dpm／pmol)的80mM Tris-HCl溶液開(kāi)始反應(yīng)，pH7．5，120nmM NaCl，1．6mMDTT，16mM MgCl2中。反應(yīng)混合物一般在32℃保溫22分鐘。如下分析蛋白質(zhì)內(nèi)的33P摻入將反應(yīng)物收集到磷酸纖維素板上，用1％磷酸溶液洗去游離物質(zhì)，通過(guò)液體閃爍計(jì)數(shù)定量磷酰化作用。大規(guī)模篩選使用10μM ATP和0．4μM MEK。有些試驗(yàn)中，通過(guò)加入等量Laemmli樣品緩沖液終止激酶反應(yīng)。將樣品煮沸3分鐘，在7．5％Laemmli凝膠上電泳分離蛋白質(zhì)。固定凝膠，干燥，放在顯影板(Fuji)下。用Fujix生物顯影分析儀系統(tǒng)分析磷?；饔?。
全部例舉化合物的IC50都在1nM至10μM之間。
細(xì)胞試驗(yàn)為了研究體外生長(zhǎng)，使用含突變K-ras基因的人腫瘤細(xì)胞系，包括但不限于HCT116和DLD-1，進(jìn)行樹(shù)脂上的依賴(lài)貼壁生長(zhǎng)或軟瓊脂內(nèi)的非依賴(lài)貼壁生長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)增殖試驗(yàn)。人腫瘤細(xì)胞系來(lái)自ATCC(Rockville MD)，維持在含10％熱滅活胎牛血清和200mM谷氨酰胺的RPMI中。除胎牛血清之外的細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)和添加劑來(lái)自Gibco／BRL(Gaithersburg，MD)，胎牛血清來(lái)自(JRH，Biosciences，Lenexa，KS)。依賴(lài)性貼壁生長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)中，將3×103細(xì)胞接種在96孔組織培養(yǎng)板內(nèi)，在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)固定通宵。在培養(yǎng)基中系列稀釋化合物，加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)。讓細(xì)胞生長(zhǎng)5天，一般在第3天添加含化合物的新鮮培養(yǎng)基。如下監(jiān)測(cè)增殖情況用標(biāo)準(zhǔn)ELISA板讀數(shù)儀測(cè)定OD490／560，用標(biāo)準(zhǔn)XTT比色試驗(yàn)(Boehringer Mannheim)測(cè)定代謝活性；或者，與1μCu3H-胸腺嘧啶一起培養(yǎng)8小時(shí)，用細(xì)胞收獲儀將細(xì)胞收獲到玻璃纖維板上，通過(guò)液體閃爍計(jì)數(shù)測(cè)定DNA內(nèi)3H-胸腺嘧啶的摻入。
在非依賴(lài)性貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)中，將1×103至3×103細(xì)胞接種在RPMI完全培養(yǎng)基的0．4％Sealaque瓊脂糖培養(yǎng)板上，在24孔組織培養(yǎng)板上面覆蓋一層RPMI完全培養(yǎng)基0．64％瓊脂層。在孔中加入添加了化合物系列稀釋液的完全培養(yǎng)基，在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)10-14天，每隔3-4天添加含化合物的新鮮培養(yǎng)基。用圖象記錄技術(shù)和圖象分析軟件(Image Pro Plus，media Cybernetics)監(jiān)測(cè)菌落的形成，并定量總細(xì)胞質(zhì)量、平均菌落大小和菌落數(shù)量。
以上實(shí)驗(yàn)確認(rèn)，通式Ⅰ混合物具有抑制raf激酶的活象，并能抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。
體內(nèi)試驗(yàn)可如下進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)，分析化合物對(duì)由raf激酶介導(dǎo)的腫瘤(例如實(shí)質(zhì)癌)的抑制作用給CDI nu／nu小鼠(6-8周齡)脅腹靜脈注射1×106人結(jié)腸腺癌細(xì)胞。從約第10天開(kāi)始，通過(guò)腹膜、靜脈或口服給予小鼠10、30、100或300mg／kg化合物，此時(shí)的腫瘤大小為50-100mg。連續(xù)給藥14天，每天1次；每周兩次用卡鉗測(cè)量腫瘤大小。
還可以用Monia等的技術(shù)(Nat．Med．1996，2，668-75)通過(guò)體內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)一步證明化合物對(duì)raf激酶，及因此具有的對(duì)由raf激酶介導(dǎo)的腫瘤的抑制作用。
即使改變以上實(shí)施例中泛指或具體說(shuō)明的本分明所用反應(yīng)物和／或操作條件，重復(fù)以上實(shí)施例仍可得到相近的結(jié)果。
通過(guò)以上所述，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定本分明的特征，并且可在本分明宗旨和范圍內(nèi)進(jìn)行多種修改，使之適合不同的用途和情況。
權(quán)利要求
1．一種通式Ⅰ化合物或其藥學(xué)上認(rèn)可的鹽 其中，A是 R3，R4，R5和R6各自是H，鹵素，NO2，可被鹵代至全鹵代烷基的C1-10烷基，可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基，可被C1-10烷基或C1-10烷氧基取代的C6-12芳基，可被C1-10烷基或C1-10烷氧基取代的C5-12雜芳基，而且，R3-R6之一可以是-X-Y；兩相鄰R3-R6可一起是一5-12碳原子的芳基或雜芳基，所述芳基和雜芳基可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-10環(huán)烷基、C2-10烯基、C1-10烷酰基、C6-12芳基、C5-12雜芳基、C6-12芳烷基、C6-12烷芳基，鹵素所取代；NR1R1；-NO2；-CF3；-COOR1；-NHCOR1；-CN；-CONR1R1；-SO2R2；-SOR2；-SR2；其中的R1是H或C1-10烷基，R2是可被鹵代至全鹵代烷基的C1-10烷基，芳基或雜芳基的環(huán)內(nèi)可含-S(O2)-；R4’，R5’和R6’各自是H，鹵素，可被鹵代至全鹵代或被以下基團(tuán)取代的C1-10烷基， 可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基或-X-Y，任何R4’，R5’或R6’之一可以是-X-Y，或者，兩相鄰R4’，R5’或R6’可一起是一5-12碳原子的雜芳基，該雜芳基可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-10環(huán)烷基、C2-10烯基、C1-10烷酰基、C6- 12芳基、C5-12雜芳基或C6-12芳烷基所取代；R6’還可以是-NHCOR1，-NR1COR1或NO2；R1是可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基；R3’是H，鹵素，可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基，可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基；X是-CH2-，-S-，-N(CH3)-，-NHC(O)-，-CH2-S-，-S-CH2-，-C(O)-或-O-；Y是苯基，吡啶基，萘基，吡啶酮，吡嗪，嘧啶，苯并二噁烷，苯并吡啶，苯并噻唑，它們都可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、鹵素、OH，-SCH3，NO2所取代，或者，如果Y是苯基，則被以下基團(tuán)取代
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物，它的pKa大于10。
3．根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物，其中R3是H，或可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基；R4是H，鹵素或NO2；R5是H，鹵素或C1-10烷基；R6是H，C1-10烷氧基，噻吩，吡咯或甲基取代的吡咯，R3’是H，鹵素，CH3，或CF3；R6是H，鹵素，CH3，CF3或-OCF3。
4．根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物，其中R3是C4-10烷基，Cl，F(xiàn)或CF3；R4是H，Cl，F(xiàn)或NO2；R5是H，Cl，F(xiàn)或C4-10烷基；R6是H或-OCH3。
5．根據(jù)權(quán)利要求4所述化合物，其中的R3或R5是叔丁基。
6．根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物，其中的X是-CH2-，-N(CH3)-或-NHC(O)-。
7．根據(jù)權(quán)利要求6所述化合物，其中的Y是苯基或吡啶基。
8．根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物，其中的X是-O-。
9．根據(jù)權(quán)利要求8所述化合物，其中的Y是苯基，吡啶基，吡啶酮，或苯并噻唑。
10．根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物，其中的X是-S-。
11．根據(jù)權(quán)利要求10所述化合物，其中的Y是苯基或吡啶基。
12．一種通式如下的化合物
13．一種藥物組合物，含有權(quán)利要求1所述化合物和生理學(xué)上認(rèn)可的載體。
14．一種藥物組合物，含有權(quán)利要求12所述化合物和生理學(xué)上認(rèn)可的載體。
15．一種治療由raf激酶介導(dǎo)的癌細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，包括給予通式Ⅱ化合物或其藥學(xué)上認(rèn)可的鹽 其中的A是 B是取代或非取代、多至三環(huán)的、多至30個(gè)碳原子的、至少有一個(gè)6元芳香結(jié)構(gòu)的芳基或雜芳基，其中含0-4個(gè)氮、氧和硫，如果B是取代的，它被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代，可鹵代至全鹵代，或被Wn取代，n是0-3，每個(gè)W各選自-CN，-CO2R7，-C(O)NR7R7，-C(O)-R7，-NO2，-OR7-，-SR7，-NR7R7，-NR7C(O)OR7，-NR7C(O)R7，C1-10烷基，C2-10烯基，C1-10烷氧基，C3-10環(huán)烷基，C6-14芳基，C7-24烷芳基，C3-13雜芳基，C4-13烷基雜芳基，C1-10取代烷基，C2-10取代烯基，C1-10取代烷氧基，C3-10取代環(huán)烷基，C4-23取代烷基雜芳基和Q-Ar；如果W是取代過(guò)的基團(tuán)，它被一個(gè)或多個(gè)選自-CN，-CO2R7，-C(O)R7，-C(O)NR7R7，-OR7，-SR7，-NR7R7，-NO2，-NR7C(O)R7，-NR7C(O)OR7所取代，或被鹵代至全鹵代；每個(gè)R7各選自H，C1-10烷基，C2-10烯基，C3-10環(huán)烷基，C6-14芳基，C3-13雜芳基，C7-24烷芳基，C4-23烷基雜芳基，至多全鹵代的C1-10烷基，至多全鹵代的C2- 10烯基，至多全鹵代的C3-10環(huán)烷基，至多全鹵代的C6-14芳基，和鹵代至全鹵代的C3-13雜芳基，Q是-O-，-S-，-N(R7)-，-(CH2)m-，-C(O)-，-CH(OH)-，-(CH2)m-O-，-NR7C(O)OR7，-NR7C(O)-，-C(O)NR7-，-(CH2)mS-，-(CH2)mN(R7)-，-O(CH2)m-，-CHXa，-CXa2，-S-(CH2)m-，和-N(R7)(CH2)m-，m=1至3，Xa是鹵素；Ar是5-10元、含0-2個(gè)氮、氧和硫的芳香結(jié)構(gòu)，它可以是非取代的，或被鹵代至全鹵代，或被Zn1取代，n1是0至3，每個(gè)Z各自選自-CN，-CO2R7，-C(O)NR7R7，-C(O)-NR7，-NO2，-OR7，-SR7，-NR7R7，-NR7C(O)OR7，-C(O)R7，-NR7C(O)R7，C1-10烷基，C3-10環(huán)烷基，C6-14芳基，C3-13雜芳基，C7-24烷芳基，C4-23烷基雜芳基，C1-10取代烷基，C3-10取代環(huán)烷基，C7-24取代烷芳基和C4-23取代烷基雜芳基；其中一個(gè)或多個(gè)Z取代基選自-CN，-CO2R7，-C(O)NR7R7，-OR7，-SR7，-NO2，-NR7R7，-NR7C(O)R7和-NR7C(O)OR7，R4’，R5’和R6’各自是H，鹵素，可被鹵代至全鹵代或被以下基團(tuán)取代的C1-10烷基， 可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基或-X-Y，任何R4’，R5’或R6’之一可以是-X-Y，或者，兩相鄰R4’，R5’或R6’可一起是一5-12碳原子的雜芳基，該雜芳基可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-10環(huán)烷基、C2-10烯基、C1-10烷酰基、C6- 12芳基、C5-12雜芳基或C6-12芳烷基所取代；R6’還可以是-NHCOR1，-NR1COR1或NO2；R1是可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基；R3’是H，鹵素，可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基，可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基；X是-CH2-，-S-，-N(CH3)-，-NHC(O)-，-CH2-S-，-S-CH2-，-C(O)-或-O-；當(dāng)Y是吡啶基時(shí)，X還可以是單鍵；Y是苯基，吡啶基，萘基，吡啶酮，吡嗪，嘧啶，苯并二噁烷，苯并吡啶，苯并噻唑，它們都可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、鹵素、OH，-SCH3，NO2所取代，或者，如果Y是苯基，則被以下基團(tuán)取代
16．根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，包括給予通式Ⅱa化合物 其中A是， R3，R4，R5和R6各自是H，鹵素，NO2，可被鹵代至全鹵代烷基的C1-10烷基，可被鹵代至全鹵代烷氧基的C1-10烷氧基，可被C1-10烷基或C1-10烷氧基取代的C6-12芳基，可被C1-10烷基或C1-10烷氧基取代的C5-12芳基，R3-R6之一可以是-X-Y；或者兩相鄰R3-R6可一起是一5-12碳原子的芳基或雜芳基，所述芳基和雜芳基可被C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-10環(huán)烷基、C2-10烯基、C1-10烷?；?、C6-12芳基、C5-12雜芳基、C6-12烷芳基、鹵素所取代；NR1R1；-NO2；-CF3-COOR1；-NHCOR1；-CN；-CONR1R1；-SO2R2；-SOR2；-SR2；其中的R1是H或可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基，R2是可被鹵代至全鹵代烷基的C1-10烷基，芳環(huán)或雜芳環(huán)內(nèi)可含有-SO2-，R3’-R6’的定義與權(quán)利要求15中的相同。
17．根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中R3是鹵素或可被鹵代至全鹵代的C1-10烷基；R4是H，鹵素或NO2；R5是H，鹵素或C1-10烷基；R6是H或C1-10烷氧基，噻吩，吡咯，或甲基取代的吡咯；R3’是H，鹵素，-CH3或-CF3；R6’是H，鹵素，-CH3，-CF3或OCH3。
18．根據(jù)權(quán)利要求16所述方法，其中的X是-CH2-或-S-，N(CH3)-或-NHC(O)-，Y是苯基或吡啶基。
19．根據(jù)權(quán)利要求16所述方法，其中的X是-O-，Y是苯基，吡啶酮，嘧啶，吡啶基或苯并噻唑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一組芳基脲在治療raf所介導(dǎo)疾病中的用途,以及用于上述治療的藥物組合物。
文檔編號(hào)C07D277/68GK1283180SQ98812503
公開(kāi)日2001年2月7日 申請(qǐng)日期1998年12月22日 優(yōu)先權(quán)日1997年12月22日
發(fā)明者S·米勒, M·奧斯特豪特, J·迪馬, U·基海爾, T·B·洛因格, B·里德, W·J·斯科特, R·A·史密斯, J·E·伍德, D·岡恩, M·羅德里格斯, M·王, C·布倫南, T·特納 申請(qǐng)人:拜爾有限公司