蠶蛹多肽及其制備方法、應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及蠶蛹多肽2，能預(yù)防或治療糖尿病。所述的多肽2序列為PYERQADEPETKVTKKI。所述多肽2的制備方法，步驟包括（1）煎煮，（2）酶解，（3）蛋白質(zhì)分離，（4）半制備RP-HPLC分離純化，（5）凍干。所述的酶解采用中性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶酶解。所述的蛋白質(zhì)分離采用大孔樹脂、葡聚糖凝膠。所述多肽2在治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥中的應(yīng)用。所述的糖尿病并發(fā)癥是糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經(jīng)性病變。本發(fā)明中的蠶蛹多肽2，是從蠶蛹中提取多肽，安全性好，而且能有效的預(yù)防或治療糖尿病。
【專利說明】蠶蛹多肽及其制備方法、應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及用于治療糖尿病的多肽提取物。

【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病，是由于胰島素不足或胰島素的細(xì)胞 代謝作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)代謝紊亂的一種綜合癥。近年來，糖尿病患者 的人數(shù)逐漸增多，分為I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人數(shù)占糖尿病 總?cè)藬?shù)的85-90%，嚴(yán)重威脅著病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引 起很多并發(fā)癥，例如：糖尿病腎病、視網(wǎng)膜病變、高血壓等。
[0003] 目前，大多數(shù)患者通過注射胰島素或者口服降糖藥物來幫助控制體內(nèi)血糖，或調(diào) 節(jié)胰島素分泌等方法治療糖尿病。但是這些藥物副作用較大，臨床上不能長(zhǎng)期使用，不能滿 足糖尿病患者的臨床需要。如果能夠從自然產(chǎn)物中提取的安全、有效的治療糖尿病的藥物， 將為廣大糖尿病患者帶來福音。
[0004] 蠶蛹作為"普通食品管理的食品新資源名單"中唯一的昆蟲類食品，具有很高的藥 用價(jià)值，藥理作用也很廣泛，除了可以促進(jìn)生長(zhǎng)、提高免疫力，還具有降血糖的作用。然而， 蠶蛹是蠶絲的主要副產(chǎn)品，我國(guó)每年可產(chǎn)鮮蠶蛹五十萬(wàn)噸以上。但是因?yàn)榧夹g(shù)欠缺，相當(dāng)一 段時(shí)期內(nèi)蠶蛹基本上都被用作詞料，導(dǎo)致了一定的資源浪費(fèi)。因此，如果能從蠶蛹中提取出 治療糖尿病的化合物成為藥物開發(fā)的熱點(diǎn)。盡管如此，并沒有成熟開發(fā)的從蠶蛹中提取化 合物問世，用于預(yù)防或治療糖尿病。


【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0005] 本發(fā)明目的是針對(duì)現(xiàn)有降血糖的藥物的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一種蠶蛹多肽2,能安全、有效 治療糖尿病。
[0006] 技術(shù)方案
[0007] -種蠶蛹多肽2,其序列為PYERQADEPETKVTKKI。所述多肽2的制備方法，其特征 在于：步驟包括（1)煎煮，（2)酶解，（3)蛋白質(zhì)分離，（4)半制備RP-HPLC分離純化，（5)凍 干。所述的酶解采用中性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶酶解。所述的蛋白質(zhì)分離采用大孔樹脂、葡聚 糖凝膠。所述多肽2在治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥中的應(yīng)用。所述的糖尿病并發(fā)癥是糖尿 病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經(jīng)性病變。
[0008] 有益結(jié)果：
[0009] 本發(fā)明中的蠶蛹多肽2,是從蠶蛹中提取多肽，安全性好，而且能有效的預(yù)防或治 療糖尿病。更優(yōu)選是治療糖尿病和/或糖尿病并發(fā)癥藥物中的用途。所述的糖尿病包括I 型糖尿病和Π型糖尿?。凰龅奶悄虿〔l(fā)癥包括但不限于：糖尿病腎病、糖尿病高血壓、 糖尿病眼疾、糖尿病神經(jīng)性病變等。

【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例I
[0011] 多肽的制備方法
[0012] 將蠶蛹加水煎煮I. 5h后，冷卻至室溫；加入0. 5%中性蛋白酶和1%復(fù)合蛋白 酶酶解2h;采用大孔樹脂按照分子量分離蛋白質(zhì)，再用半制備RP-HPLC分離純化，得到的 產(chǎn)物凍干后，即為蠶蛹多肽2。應(yīng)用上述方法提取的蠶蛹多肽2,經(jīng)過質(zhì)譜鑒定，序列為 PYERQADEPETKVTKKI，該序列為全新序列。也可以由上海生工委托合成。
[0013] 實(shí)施例2
[0014] 蠶蛹多肽2的體外細(xì)胞活性測(cè)定
[0015] 采用MTT比色法。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的胰島瘤細(xì)胞（INS-1細(xì)胞），以I.OX105加入96 孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽(yáng)性藥物對(duì)照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物蠶蛹多肽2 ; 空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入 DMS0,孵育30min，在酶標(biāo)儀570nm處測(cè)定吸光度A值，按公式細(xì)胞生長(zhǎng)增殖率=(實(shí)驗(yàn)組吸 光值/對(duì)照組吸光值-I)X100%。計(jì)算出實(shí)驗(yàn)藥物的EC50為25. 76nmol/L。
[0016] 實(shí)施例3
[0017] 蠶蛹多肽2的體內(nèi)降糖實(shí)驗(yàn)
[0018] 昆明小鼠，高脂高糖喂養(yǎng)至體重18?22g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水24h，腹腔 一次性注射鏈脲佐菌素（STZ) 50mg/kg(1 %的檸檬酸鹽緩沖液溶解配制）。1周后小鼠尾靜 脈采血測(cè)血糖（BS)，BS高于16mmol/L為造模成功。造模后將小鼠分為3組，每組10只，糖 尿病模型組（DM組）：給予等量的PBS緩沖液皮下注射；對(duì)照組（拜糖平）：20μg/kg皮下 注射給藥（溶于〇·lmol/LPBS緩沖液），一天兩次，連續(xù)15d;樣品組（蠶蛹多肽2):同對(duì) 照組；另取10只正常小鼠做為空白組。用藥后第15d于尾靜脈取血快速測(cè)量血糖。15d之 后，在停藥1周后，禁食不禁水16小時(shí)進(jìn)行葡萄糖耐量試驗(yàn)。用25%葡萄糖溶液（2g/kg) 灌胃，灌胃后0、120分鐘尾靜脈取血檢測(cè)血糖。
[0019] 結(jié)果：葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白多肽2具有降低糖尿病模型小鼠血糖的作用（P〈0. 05,表 1);同時(shí)，可以緩解糖尿病模型小鼠的糖耐量（表2)。其多肽2的作用與對(duì)照組拜糖平作 用相當(dāng)。
[0020] 表1蠶蛹多肽2對(duì)小鼠降血糖作用

【權(quán)利要求】
1. 一種蠶蛹多肽，其特征在于：其序列為PYERQADEPETKVTKKI。
2. -種權(quán)利要求1所述多肽的制備方法，其特征在于：步驟包括（1)煎煮，（2)酶解， (3)蛋白質(zhì)分離，（4)半制備RP-HPLC分離純化，（5)凍干。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的多肽的制備方法，其特征在于：步驟（2)所述的酶解采用中性 蛋白酶、復(fù)合蛋白酶酶解。
4. 根據(jù)權(quán)利要求所述的多肽2的制備方法，其特征在于：步驟（3)所述的蛋白質(zhì)分離采 用大孔樹脂、葡聚糖凝膠。
5. 權(quán)利要求1所述的多肽2在制備治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其特征在于所述的糖尿病并發(fā)癥是糖尿病腎病、糖尿病高 血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經(jīng)性病變。
【文檔編號(hào)】C07K7/08GK104262463SQ201410509346
【公開日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月28日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請(qǐng)人:蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司