流產(chǎn)嗜性衣原體巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)因子的單克隆抗體及其雜交瘤細(xì)胞的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了流產(chǎn)嗜性衣原體巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)因子(即MIP蛋白)的單克隆抗體，由流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白作為抗原免疫小鼠分泌獲得，其中流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白具有序列表1所示氨基酸序列。進(jìn)一步的，本發(fā)明還公開了能夠分泌上述流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。本發(fā)明公開的單克隆抗體能針對流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白進(jìn)行有效檢測，這種檢測方式具有很強(qiáng)的特異性，檢測準(zhǔn)確率高，適宜建立間接免疫熒光技術(shù)用于檢測流產(chǎn)嗜性衣原體。
【專利說明】流產(chǎn)嗜性衣原體巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)因子的單克隆抗體及其雜交瘤細(xì)胞

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白的單克隆抗體和能分泌該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，屬于生物檢測領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]流產(chǎn)嗜性衣原體(Chlamydophila abortus)是革蘭氏陰性專性細(xì)胞內(nèi)寄生性原核生物，屬于衣原體科(Chlamydiaceae)嗜性衣原體屬(Chlamydophila)成員，具有廣泛的宿主嗜性，主要寄生于動物的生殖道黏膜上皮細(xì)胞，能感染牛、綿羊、山羊和豬等多種動物，可引起懷孕母畜流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、木乃伊胎或弱胎，公畜生殖系統(tǒng)炎癥等多種慢性接觸性傳染病；并且流產(chǎn)嗜性衣原體也能夠感染人類，導(dǎo)致孕婦流產(chǎn)，是一種重要的人畜共患病病原。
[0003]近年來，流產(chǎn)嗜性衣原體在我國各省區(qū)的豬群、牛群和羊群中普遍感染，由此導(dǎo)致的流產(chǎn)率最高達(dá)50%以上，成為目前畜牧業(yè)最嚴(yán)重的疾病病原之一，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
[0004]為了有效防治流產(chǎn)嗜性衣原體，及時、準(zhǔn)確、盡早的發(fā)現(xiàn)衣原體并進(jìn)行有效的診斷是確定動物患衣原體的基礎(chǔ)。目前針對流產(chǎn)嗜性衣原體，主要的檢測方法是采用主要外膜蛋白(Μ0ΜΡ)、 多型外膜蛋白(POMP)和脂多糖(LPS)等作為目的抗原，采用特異性檢測LPS的直接免疫熒光檢測技術(shù)，以MOMP，POMP為包被抗原的酶聯(lián)免疫吸附試劑盒以及根據(jù)其編碼基因ompA建立的PCR和real-time PCR技術(shù)等,具體表現(xiàn)成型的產(chǎn)品為衣原體間接血凝試驗(IHA)試劑盒。
[0005]上述方法中，采用PCR技術(shù)診斷周期長、適用范圍窄，不利于臨床推廣，無法用于大規(guī)模養(yǎng)殖的牛、綿羊、山羊和豬等多種動物的衣原體檢測診斷。
[0006]IHA試劑盒雖然實現(xiàn)了規(guī)模生產(chǎn)和普及應(yīng)用，但是存在靈敏度低，特異性較差的缺點，該類試劑盒的部分改進(jìn)產(chǎn)品雖然靈敏度有所提高，但是生產(chǎn)成本過高，無法普及應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明公開了流產(chǎn)嗜性衣原體巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)因子(Macrophage Infectivity Potentiator, MIP)的單克隆抗體以及能夠用于分泌生產(chǎn)該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，本發(fā)明的流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白單克隆抗體能針對流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白進(jìn)行有效檢測，具有很強(qiáng)的特異性，用于檢測流產(chǎn)嗜性衣原體能提供高效及時、準(zhǔn)確的防治信息。
[0008]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0009]流產(chǎn)嗜性衣原體巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)因子(即MIP蛋白，以下均采用該縮寫)的單克隆抗體，由流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白作為抗原免疫小鼠分泌獲得，所述流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白具有序列表1所不氣基酸序列。
[0010]上述的流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白既可以通過人工合成，也可以通過大腸桿菌等原核生物對流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白的編碼基因進(jìn)行表達(dá)獲得。
[0011 ] 優(yōu)選的，為了便于流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白質(zhì)的純化，在流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白的氨基末端或羧基末端連接有6 X Hi s標(biāo)簽。
[0012]為了大量富集和生產(chǎn)上述流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白的單克隆抗體，本發(fā)明還公開了一種雜交瘤細(xì)胞，用于分泌流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白的單克隆抗體，該雜交瘤細(xì)胞采用下述方法制備:
[0013]I)通過人工合成或者原核表達(dá)獲得流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白，其具有序列表1所示的氨基酸序列；
[0014]2)注射流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白免疫小鼠，免疫完成后從小鼠采集血樣檢測抗體效價，選擇效價數(shù)量級不低于17的小鼠注射加強(qiáng)免疫；
[0015]3)在無菌條件下取上述免疫后的小鼠脾臟，制備脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞的懸液，在融合劑作用下進(jìn)行融合；
[0016]4)將融合細(xì)胞用HAT選擇性培養(yǎng)基懸浮均勻并加入到鋪有飼養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞板中，在5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；
[0017]5)融合細(xì)胞克隆生長完成后，對所有有克隆生長的培養(yǎng)上清進(jìn)行檢測，多次篩選和克隆化培養(yǎng)后得到分泌流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。
[0018]優(yōu)選的，所述MIP 蛋白的氨基末端或梭基末端連接有6 X Hi s標(biāo)簽。
[0019]在上述中，所用小鼠為BALB/c小鼠。
[0020]在上述中，飼養(yǎng)細(xì)胞是小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞。
[0021]在上述中，步驟2)免疫注射方式為腹部多點皮下注射或抗原液腹腔注射。
[0022]其中，注射的劑量、次數(shù)、周期等可根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)整，通常是以1-2周的間隔周期進(jìn)行5-10次免疫注射，注射劑量為每只小鼠每次100-200 μ g，前期采用腹部多點皮下注射，后期采用抗原液腹腔注射進(jìn)行加強(qiáng)免疫。
[0023]在上述中，步驟3)小鼠免疫后的脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞個數(shù)比為5: 1，融合劑為 PEG4000。
[0024]在上述中，檢測的時間點是融合后的細(xì)胞克隆生長到覆蓋細(xì)胞孔底部40%~60%左右時，采用間接ELISA方法對所有有克隆生長的培養(yǎng)上清進(jìn)行檢測，其中檢測為強(qiáng)陽性的孔采用有限稀釋法進(jìn)行亞克隆，檢測為陰性的孔3天后再檢測一次，依舊為陰性則放棄。
[0025]進(jìn)一步的，本發(fā)明還公開了所述流產(chǎn)嗜性衣原體巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)因子的單克隆抗體在檢測流產(chǎn)嗜性衣原體中的應(yīng)用，主要是通過間接熒光方法檢測流產(chǎn)嗜性衣原體，以上述流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白單克隆抗體為一抗，以熒光標(biāo)記的羊抗鼠IgG為二抗，通過間接免疫熒光染色法檢測流產(chǎn)嗜性衣原體。
[0026]為了保證檢測的準(zhǔn)確性，上述檢測方法中還可添加小鼠陽性血清為陽性對照，以未感染的McCoy細(xì)胞為陰性對照。
[0027]在上述檢測方法的基礎(chǔ)上，為了便于商業(yè)應(yīng)用，還可以將其做成檢測試劑盒。
[0028]本發(fā)明通過純化獲得的原核表達(dá)流產(chǎn)嗜性衣原體MIP重組蛋白作為抗原免疫小鼠，通過間接ELISA方法篩選陽性克隆，獲得了分泌流產(chǎn)嗜性衣原體MIP重組蛋白的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，對雜交瘤細(xì)胞染色體數(shù)目、經(jīng)連續(xù)傳代培養(yǎng)和凍存后的生物學(xué)特性，以及單克隆抗體的類型、亞類及效價等方面，對所獲得的單克隆抗體生物學(xué)特性進(jìn)行了系統(tǒng)鑒定，結(jié)果表明所獲得的雜交瘤細(xì)胞分泌抗體的能力強(qiáng)而且穩(wěn)定，單克隆抗體效價高。間接熒光檢測實驗結(jié)果表明所獲得的單克隆抗體均能針對流產(chǎn)嗜性衣原體的MIP蛋白進(jìn)行檢測，具有很強(qiáng)的特異性和熒光特性。

【具體實施方式】
[0029]在下述實施例中所用各種原料試劑均可從市場采購，主要的原料包括如下:
[0030]流產(chǎn)嗜性衣原體菌株，市場購買；BALB/c小鼠由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供。
[0031 ] HAT培養(yǎng)基、HT培養(yǎng)基、胎牛血清、DMEM高糖培養(yǎng)基、RPMI1640培養(yǎng)基、辣根過氧化物酶(HRP)或HRP標(biāo)記的兔抗鼠IgG、熒光素(FITC)標(biāo)記羊抗鼠IgG均購自Sigma公司。
[0032]pET-30a(+)載體，購自Novagen公司，表達(dá)菌BL21 (DE3)購自北京全式金生物技術(shù)有限公司。
[0033]所用引物由上海生工生物工程有限公司合成，限制性內(nèi)切酶Ndel、Xhol，T4 DNA連接酶和2 X Power Taq PCR MasterMix均購自大連寶生物有限公司；IPTG、SDS (十二烷基磺酸鈉)、核酸Marker、Agarose DNA extract1n kit、DNA快速純化回收試劑盒、質(zhì)?？焖偬崛≡噭┖芯徸源筮B寶生物工程公司；細(xì)菌基因組提取試劑盒購自上海生工生物工程有限公司合成；瓊脂糖購自Invitrogen公司；預(yù)染蛋白Marker購自Fermentas公司。
[0034]實施例1:流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白的制備
[0035](I)流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白的編碼基因序列擴(kuò)增
[0036]挑取C.abortus菌株培養(yǎng)物(為便于追蹤，為其編號為SX5，該菌株從普通菌種公司購買即可)，利用革蘭氏陰性細(xì)菌基因組提取試劑盒提取SX5的基因組DNA，以SX5的基因組DNA為PCR模版擴(kuò)增出各個目的基因。
[0037]PCR過程的擴(kuò)增引物序列如下:
[0038]正向引物(劃線部分為NdeI 酶切位點):5’ ~AACCATATGAAAAAACAATGGTATTTAA~3/.
[0039]反向弓丨物(劃線部分為Xhol酶切位點):5’ -GGACTCGAGTGAAGCTGTGTTTTTGTC-3;。
[0040]PCR反應(yīng)體系包括:25μ L的2XPower Taq PCR MasterMix，相應(yīng)的上下游引物各2 μ L, 2 μ L的DNA模版,去離子水補(bǔ)足50 μ L。
[0041]PCR產(chǎn)物用DNA膠回收試劑盒回收得到流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白的編碼基因。
[0042](2)流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白的表達(dá)純化
[0043]PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物經(jīng)Ndel和Xhol酶切，與同樣酶切的ρΕΤ_30 (+)表達(dá)載體進(jìn)行連接獲得重組表達(dá)載體ρΕΤ-ΜΙΡ。重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21 (DE3)(其它大腸桿菌例如BL21、BL21(DE3)PLySs等也可)，在IPTG誘導(dǎo)下表達(dá)重組蛋白。
[0044] 申請人:多次進(jìn)行的實驗表明，在誘導(dǎo)溫度為37°C，誘導(dǎo)劑IPTG終濃度為0.8mM時，目的蛋白大量表達(dá)，并在誘導(dǎo)5小時時表達(dá)量最大，目的蛋白大小為27kD(含載體pET-30a(+)上的6XHis標(biāo)簽)。流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白在BL21 (DE3)呈可溶性表達(dá)，收集菌體，超聲裂解之后，離心取上清，上清經(jīng)N1-NTA純化柱(Invitrogen)純化目的蛋白。
[0045]實施例2:動物免疫
[0046]用純化流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白作為抗原免疫6周齡的BALB/c小鼠，共免疫6次，每次間隔I~2周。
[0047]其中第一次用抗原與等量弗氏完全佐劑乳化成油包水后進(jìn)行免疫，免疫劑量為200 yg/只，共2只，免疫途徑為腹部多點皮下注射。
[0048]兩周后進(jìn)行第二次免疫，間隔一周進(jìn)行第三次免疫，兩次均用與抗原等量弗氏不完全佐劑，免疫劑量為100 μ g/只，免疫途徑為腹部多點皮下注射。
[0049]然后間隔一周進(jìn)行第四次免疫和第五次免疫,采用抗原液免疫,劑量為10yg/只，免疫途徑為腹腔注射。
[0050]在第五次免疫后一周，小鼠尾部小量采血，檢測抗體效價，選擇效價高數(shù)量級在17以上的小鼠，在融合前三天做加強(qiáng)免疫，再次用抗原液腹腔注射，劑量為10yg/只。
[0051]其中，抗原液的濃度不受到特別限制，通常濃度為5mg/ml。
[0052]實施例3:免疫抗體細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的細(xì)胞融合
[0053]融合前3天，復(fù)蘇保存的SP2/0骨髓瘤細(xì)胞。在無菌條件下取上述免疫后的小鼠脾臟，制備脾細(xì)胞，分別吸取I X 18個脾細(xì)胞和2 X 17個骨髓瘤細(xì)胞的懸液，在融合劑PEG4000作用下，進(jìn)行融合。
[0054]將融合細(xì)胞用HAT選擇培養(yǎng)懸浮均勻，并加入鋪有飼養(yǎng)細(xì)胞的96孔細(xì)胞板中，每孔100 μ L，置于5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。每天觀察記錄細(xì)胞生長情況。
[0055]實施例4:雜交瘤細(xì)胞的篩選和亞克隆
[0056]在融合后的細(xì)胞克隆生長到覆蓋細(xì)胞孔底部40%~60%左右時，用建立好的間接ELISA方法對所有具有克隆生長的培養(yǎng)上清進(jìn)行檢測。
[0057]檢測為強(qiáng)陽性孔采用有限稀釋法進(jìn)行亞克??；陰性孔3天后再檢測一次，若仍為陰性則棄之。
[0058]經(jīng)過3次的篩選和克隆化培養(yǎng)，得到分泌流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白單克隆抗體且效價高的雜交瘤細(xì)胞。
[0059]對上述得到的雜交瘤細(xì)胞的連續(xù)傳代穩(wěn)定性進(jìn)行檢測，將雜交瘤細(xì)胞加0.1mLI %秋水仙素，過夜培養(yǎng)，收集細(xì)胞，2000r/min離心10min，棄上清，沉淀中加入0.075mol/LKCl 10mL，用吸管吹吸均勻，置37°C水浴20min，使細(xì)胞腫脹。離心棄上清后，細(xì)胞沉淀用甲醇3份、冰醋酸1份的混合液1mL固定20min,以2000r/min,離心1min,棄上清后取細(xì)胞沉淀涂片，自然干燥后用Giemsa染色，油鏡檢查。雜交瘤細(xì)胞染色體為95~103條，表明傳代培養(yǎng)的細(xì)胞未發(fā)生變異。
[0060]實施例5:單抗腹水的制備及抗體類型鑒定
[0061]將所得的雜交瘤細(xì)胞，接種于10周齡預(yù)先用誘導(dǎo)劑硅膠H(或滅菌液體石蠟，
0.5mL/只)處理1d的健康BALB/c小鼠腹腔，用量為0.5mL/只(含5 X 15~I X 16個雜交瘤細(xì)胞)，經(jīng)14d，可見小鼠腹部明顯增大，此時采集腹水并將收集到的腹水3000r/min，離心10min，去除油脂和沉淀后即為單抗腹水。
[0062]采用Sigma公司小鼠單克隆抗體分型試劑盒，應(yīng)用瓊脂擴(kuò)散試驗測定，實驗結(jié)果顯示獲得的雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體是IgGl型。應(yīng)用間接ELISA方法檢測腹水中單抗效價為1:1O6。
[0063]實施例6:單克隆抗體特異性檢測
[0064]對小鼠腹水單克隆抗體進(jìn)行western blot試驗，純化的流產(chǎn)嗜性衣原體SX5毒株用IXSDS loading buffer煮沸1min制備流產(chǎn)嗜性衣原體蛋白樣品，制備表達(dá)載體pET-30 (+)自身表達(dá)標(biāo)簽蛋白，與純化的重組MIP同時進(jìn)行SDS-PAGE，并轉(zhuǎn)印至PVDF膜上，依次用腹水單克隆抗體、HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG或者鼠抗6XHis單克隆抗體、HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG孵育，將混合好的ECL化學(xué)發(fā)光試劑滴加至PVDF膜上，在暗室中用X-膠片曝光，顯影，定影。
[0065]實驗結(jié)果顯示，以本發(fā)明制備的流產(chǎn)嗜性衣原體MIP單抗作為一抗孵育的PVDF膜，在純化的流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白和流產(chǎn)嗜性衣原體蛋白樣品的27KDa處各有一特異條帶，而在表達(dá)載體pET-30 (+)自身表達(dá)標(biāo)簽蛋白樣品中沒有條帶；以6XHis單抗作為一抗孵育的PVDF膜，在純化的MIP蛋白和表達(dá)載體pET-30 (+)自身表達(dá)標(biāo)簽蛋白樣品中均有特異條帶，這表明所制備的單克隆抗體只與流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)，而不與表達(dá)載體pET-30 (+)自身表達(dá)標(biāo)簽蛋白發(fā)生反應(yīng)。
[0066]實施例7:流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白單克隆抗體間接免疫熒光檢測方法
[0067]采取疑似流產(chǎn)嗜性衣原體感染的病料，切取適量肺臟、脾臟、子宮粘膜、陰道粘膜，4%多聚甲醛固定，制成4μπι厚度的組織切片；同樣切取部分上述組織，4°C條件下研磨后，加入終濃度為lmg/mL的鏈霉素和卡那霉素，作用30min, 2000r/min,離心20min,取上清，感染生長在蓋玻片上的McCoy細(xì)胞，感染48h，取出感染的蓋玻片，用預(yù)冷的甲醇/丙酮(I: D固定lOmin。在制備好的組織切片和細(xì)胞爬片上滴加50 μ L的濃度為100 μ g/mL的MIP蛋白單克隆抗體，置于濕盒中，37°C孵育lh，PBST洗滌3次，每次lOmin，然后滴加50 μ L ^ 10 μ g/ml的FITC標(biāo)記的羊抗鼠IgG，置于濕盒中，37°C孵育lh，PBST洗滌3次，每次lOmin，甘油封片，熒光顯微鏡觀察。同時以小鼠陽性血清為陽性對照，以未感染的McCoy細(xì)胞為陰性對照。若是陽性樣品，則能觀察到橢圓形、亮綠色、規(guī)則性的發(fā)光顆粒，而陰性則沒有。
[0068]以本發(fā)明制備的流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白單克隆抗體作為一抗，采用間接免疫熒光法檢測了臨床送檢的58份流產(chǎn)衣原體病料,并與real-time PCR檢測方法(AlexandraPantchev， Reinhard Sting, Rolf Bauerfeind， Judith Tyczka, Konrad Sachse， Newreal-time PCR tests for species-specific detect1n of Chlamydophila psittaciand Chlamydophila abortus from tissue samples， The Veterinary Journal，181(2009) 145-150)進(jìn)行比較，結(jié)果的陽性符合率為96%，與PCR結(jié)果陰性符合率為100%(表 I)。
[0069]表1:流產(chǎn)衣原體病料檢測結(jié)果

【權(quán)利要求】
1.流產(chǎn)嗜性衣原體巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)因子的單克隆抗體，其特征在于由流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白作為抗原免疫小鼠分泌獲得，其中流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白具有序列表1所示氨基酸序列。
2.一種以流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白免疫小鼠獲得的分泌流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，其特征在于采用下述方法制備:1)通過人工合成或者原核表達(dá)獲得流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白；2)注射流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白免疫小鼠，免疫完成后從小鼠采集血樣檢測抗體效價，選擇效價數(shù)量級不低于17的小鼠注射加強(qiáng)免疫；3)在無菌條件下取上述免疫后小鼠的脾臟制備脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞的懸液，在融合劑作用下進(jìn)行融合；4)將融合細(xì)胞用HAT選擇性培養(yǎng)基懸浮均勻并加入到鋪有飼養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞板中，在5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；5)融合細(xì)胞克隆生長完成后對所有有克隆生長的培養(yǎng)上清進(jìn)行檢測，多次篩選和克隆化培養(yǎng)后得到分泌流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雜交瘤細(xì)胞，其特征在于步驟2)免疫注射的方式為腹部多點皮下注射或抗原液腹腔注射。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雜交瘤細(xì)胞，其特征在于步驟3)小鼠免疫后的脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞個數(shù)比為5: 1，融合劑為PEG4000。
5.權(quán)利要求1的流產(chǎn)嗜性衣原體巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)因子的單克隆抗體在檢測流產(chǎn)嗜性衣原體中的 應(yīng)用。
【文檔編號】C07K16/12GK104130326SQ201410374977
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年8月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月1日
【發(fā)明者】周繼章, 李兆才, 曹小安 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所