一種從發(fā)酵液中提取純化人類松弛素-2的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從發(fā)酵液中提取純化人類松弛素-2的方法，將發(fā)酵液離心后過(guò)截流分子量3000的醋酸纖維素超濾膜過(guò)濾，依次上SephadexG-50柱和Synchropak?RP-P?C18反相HPLC層析柱進(jìn)行層析純化，然后通過(guò)低溫旋蒸濃縮，冷凍干燥，得純化的人類松弛素-2。本發(fā)明的從發(fā)酵液中提取純化人類松弛素-2的方法，大大簡(jiǎn)化了人類松弛素-2的提取純化步驟，縮短了提取純化時(shí)間，工藝條件易控制，適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說(shuō)明】一種從發(fā)酵液中提取純化人類松弛素-2的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種多肽藥物的提取純化方法，特別涉及一種從發(fā)酵液中提取純化人類松弛素-2的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]人類松弛素-2,又名松弛肽,英文名為Relaxin,藥物通用名為Serelaxin,是一種采用基因重組方法制備的多肽藥物。其結(jié)構(gòu)由兩條肽鏈組成，A鏈含24個(gè)氨基酸且存在鏈內(nèi)二硫鍵，B鏈含29個(gè)氨基酸，A鏈與B鏈通過(guò)兩個(gè)二硫鍵相連，其結(jié)構(gòu)式如下所示:
【權(quán)利要求】
1.一種從發(fā)酵液中提取純化人類松弛素-2的方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)取發(fā)酵液，5000~7000rmp離心10~60分鐘，收集上清液； 2)步驟I)的上清液，加入4倍體積的70%丙酮，用乙酸-乙酸鈉緩沖溶液調(diào)pH為5.0，加入尿素，使溶液中尿素的濃度為5~15mol/L,2°C~8°C靜置過(guò)夜； 3)步驟2)的溶液，12000~16000rmp離心10~60分鐘，過(guò)截流分子量3000的醋酸纖維素超濾膜，收集濃縮液； 4)步驟3)的濃縮液上S印hadexG-50柱，柱長(zhǎng)22厘米，洗脫溶劑為含0.15mol/L氯化鈉的lmol/L乙酸，流速為15mL /小時(shí)，收集洗脫液，真空低溫濃縮；5)步驟4)的濃縮液上SynchropakRP-P C18反相HPLC層析柱，柱長(zhǎng)50厘米，用含0.1%的三氟乙酸平衡和洗滌，用含50%乙腈的0.1%三氟乙酸溶液洗脫25分鐘，洗脫速度為90mL/小時(shí)，再用含80%乙腈的0.1%三氟乙酸溶液洗脫30分鐘，洗脫速度為90mL/小時(shí)，收集洗脫液； 6)步驟5)的洗脫液，低溫旋蒸濃縮，冷凍干燥，得純化的人類松弛素_2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取純化人類松弛素-2的方法，其特征在于，所述步驟I)離心速度為6000rmp，離心時(shí)間為15分鐘。
3.根據(jù)權(quán) 利要求1所述的提取純化人類松弛素-2的方法，其特征在于，所述步驟3)離心速度為14000rmp，離心時(shí)間為30分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取純化人類松弛素-2的方法，其特征在于，所述步驟4)中尿素的濃度為7mol/L。
【文檔編號(hào)】C07K1/34GK103788207SQ201410046069
【公開(kāi)日】2014年5月14日 申請(qǐng)日期:2014年2月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月10日
【發(fā)明者】厲保秋, 房世紅, 袁強(qiáng) 申請(qǐng)人:濟(jì)南環(huán)肽醫(yī)藥科技有限公司