專(zhuān)利名稱(chēng)：毛木耳降血脂功能蛋白質(zhì)提取物制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及毛木耳蛋白質(zhì)提取物制備方法及其應(yīng)用，特別涉及毛木耳降血脂功能蛋白質(zhì)提取物制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著人們生活水平的不斷提高，高能高脂食物的大量攝入、飲酒量的增加以及運(yùn)動(dòng)量的減少致使高脂血癥的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，高血脂癥是誘發(fā)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)、動(dòng)脈硬化、脂肪肝、糖尿病、肥胖癥等的重要因素。因此尋找高效無(wú)毒的降血脂藥物有重要的現(xiàn)實(shí)意義。近些年來(lái)，在治療高脂血癥方面，中醫(yī)采用天然藥食兩用藥材研制成的降脂中藥，因其具有降脂作用確切，毒副作用小，材料容易獲得且價(jià)格便宜等優(yōu)勢(shì)得到了較大的發(fā)展。到目前為止，研究表明，具有降脂作用的單味中藥大約有七十多種，但是食用菌來(lái)源的材料比較少。食用菌被認(rèn)為是臨床效果較為確切的一類(lèi)低毒而免疫活性強(qiáng)的生物類(lèi)物質(zhì)，具有豐富的營(yíng)養(yǎng)和保健作用。毛木耳隸屬于擔(dān)子菌門(mén)、層菌綱、木耳目、木耳科、木耳屬。學(xué)名Auriculariapolytricha,又名構(gòu)耳、粗木耳，又稱(chēng)黃背木耳、白背木耳。據(jù)中國(guó)科學(xué)院成都生物所分析，毛木耳干品含氨基酸的總量為41.68%。有人體必需氨基酸7種，占總量的42.31%，有其它氨基酸9種，占總量的57.69%。從中醫(yī)角度上分析，毛木耳入藥有益氣強(qiáng)身、活血、止血、止痛之功效?？芍魏疂裥匝忍弁础a(chǎn)后虛弱、抽筋麻木、外傷引起的疼痛、血脈不通、麻木不仁、手足抽搐、白帶過(guò)多、便血、痔瘡出血、子宮出血、反胃多痰、年老生瘡久不封口等病癥。毛木耳是一種食藥同源的真菌，具有潛在開(kāi)發(fā)應(yīng)用的前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供毛木耳蛋白質(zhì)提取物。本發(fā)明所提供的毛木耳蛋白質(zhì)提取物，按照包括如下步驟的方法制備:1)將毛木耳子實(shí)體粉碎后用水浸提，收集水溶性物質(zhì)得到毛木耳水溶性提取物；2)對(duì)所述毛木耳水溶性提取物進(jìn)行飽和度為30%的硫酸銨沉淀，收集水溶性物質(zhì)；對(duì)所述水溶性物質(zhì)進(jìn)行飽和度為80%的硫酸銨沉淀，收集沉淀，對(duì)所述沉淀用去離子水透析后，得到所述毛木耳蛋白質(zhì)提取物。上述步驟1)中，所述用水浸提可為在2_6°C用水浸提10-14小時(shí)。所述水可為去離子水。所述毛木耳子實(shí)體可粉碎至50-100目，如100目。所述毛木耳子實(shí)體和水的質(zhì)量比可為1:40-60，如1:40，所述毛木耳子實(shí)體的質(zhì)
量為干重。所述毛木耳子實(shí)體可為新鮮的子實(shí)體也可為干燥的子實(shí)體。所述干燥的子實(shí)體是將新鮮的毛木耳子實(shí)體在常溫(如20_25°C)下干燥得到的。上述步驟2)中，所述飽和度均為硫酸銨在4°C的飽和度。
上述步驟2)中，可采用離心收集所述水溶性物質(zhì)。所述離心采用的離心力可為6000-15000g (如12000g)，離心時(shí)間可為10-20分鐘(如15分鐘)。也可采用離心收集所述沉淀。所述離心采用的離心力可為6000-15000g(如12000g)，離心時(shí)間可為10-20分鐘(如15分鐘)。上述方法中，所述透析采用的半透膜的截留分子量為3kDa。上述制備方法還包括將透析后的半透膜內(nèi)的液體在7000_14000g (如8500g)，離心10-20分鐘(如15分鐘)，收集上清液，將該上清液進(jìn)行冷凍干燥，制備成毛木耳蛋白質(zhì)提取物干粉的步驟。制備上述毛木耳蛋白質(zhì)提取物的方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供上述毛木耳蛋白質(zhì)提取物的用途。本發(fā)明所提供的上述毛木耳蛋白質(zhì)提取物的用途，為下述A或B:A、一種降血脂的產(chǎn)品，其活性成分為上述毛木耳蛋白質(zhì)提取物；B、上述毛木耳蛋白質(zhì)提取物在制備降血脂產(chǎn)品(如藥物或食品)中的應(yīng)用。其中，所述降血脂可為下述I) -3)中的至少一種:I)降低血清中總膽固醇含量；2)降低血清中甘油三酯含量；3)降低血清中低密度脂蛋白膽固醇含量。本發(fā)明的毛木耳蛋白質(zhì)提取物在降低血脂中各項(xiàng)指標(biāo)中，對(duì)總膽固醇含量、甘油三酯含量和低密度脂蛋白膽固醇含量都有降低的作用，可以綜合緩解高血脂癥的情況，在降脂初期明顯降低三種指標(biāo)在血液中的濃度，可以應(yīng)用到降脂保健食品和藥物的研發(fā)領(lǐng)域。


圖1為毛木耳蛋白提取物降低血脂中各項(xiàng)指標(biāo)圖。圖中，低表示低劑量降血脂藥物組，高表示高劑量降血脂藥物組。
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實(shí)施例中的毛木耳(Auriculariapolytricha (Mont.) Sacc.) 3 號(hào)(趙爽等.毛木耳菌絲體產(chǎn)多糖發(fā)酵條件的優(yōu)化.食品科技.2012年第37卷第4期)公眾可從北京市農(nóng)林科學(xué)院獲得該菌種，以重復(fù)本申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例1、毛木耳蛋白質(zhì)提取物的制備1、制備毛木耳子實(shí)體將毛木耳(Auricularia polytricha (Mont.) Sacc.)3號(hào)斜面菌種接種到一級(jí)種培養(yǎng)基中進(jìn)行活化，25°C恒溫培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)試管后將其接種到二級(jí)種培養(yǎng)基中，25°C恒溫培養(yǎng)室培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)，將二級(jí)種接種到裝有栽培培養(yǎng)基的栽培袋中25°C的條件下進(jìn)行發(fā)菌，菌種長(zhǎng)滿(mǎn)栽培袋后進(jìn)行搔 菌并移入溫室大棚，出菇條件保持濕度在90%以上，溫度約為20-25°C,收集第一潮子實(shí)體，得到毛木耳(Auriculariapolytricha (Mont.) Sacc.) 3 號(hào)子實(shí)體。其中，該實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基如下:一級(jí)種培養(yǎng)基:200g馬鈴薯，20g葡萄糖，20g瓊脂粉，3g KH2PO4, IOmg維生素BI，5g蛋白胨，1.5g MgSO4, IOOOmL蒸懼水，經(jīng)121°C,30min高壓滅菌。二級(jí)種培養(yǎng)基:棉籽殼80%，麩皮18%，石膏1%，糖1%，料水比為1:1，經(jīng)121°C，30min高壓滅菌。栽培培養(yǎng)基:木屑50%，棉籽殼28%，麩皮20%，糖1%，石膏1%，料水比為1:1-1.2。經(jīng)121 °C, 30min高壓滅菌。2、制備毛木耳水溶性提取物I)收集毛木耳(Auricularia polytricha (Mont.) Sacc.) 3 號(hào)子實(shí)體,在 20_25°C晾曬得到干品后，粉碎研磨制成100目的均一毛木耳粉；2)用40質(zhì)量份的去離子水浸泡I質(zhì)量份的毛木耳粉，浸泡12小時(shí)，12000g離心15min,收集上清液，該上清液即為毛木耳水溶性提取物。3、制備毛木耳蛋白質(zhì)提取物對(duì)步驟2的毛木耳水溶性提取物首先在4°C進(jìn)行飽和度為30%的硫酸銨沉淀(即向步驟2的毛木耳水溶性提取物中加入硫酸銨至硫酸銨的飽和度為30%)，沉淀4h后，12000g離心15min，收集上清液，對(duì)該上清液在4°C進(jìn)行飽和度為80%的硫酸銨沉淀(即向該上清液中加入硫酸銨至硫酸銨的飽和度為80%)，沉淀4h后，12000g離心15min，收集沉淀，對(duì)該沉淀進(jìn)行透析。其中，透析采用的半透膜的截留分子量為3kDa，沉淀在半透膜中在流動(dòng)的自來(lái)水中透析5h，再在去離子水中透析12h。將透析后的半透膜內(nèi)的液體在8500g離心15min，收集上清液，將該上清液液氮冷凍后，進(jìn)行冷凍干燥，制備成毛木耳蛋白質(zhì)提取物干粉。實(shí)施例2、毛木耳蛋白質(zhì)提取物降血脂實(shí)驗(yàn)1、降血脂藥物的制備用去離子水溶解實(shí)施例1制備的毛木耳蛋白質(zhì)提取物干粉，得到蛋白質(zhì)含量為
6.67mg/ml毛木耳蛋白質(zhì)提取物水溶液作為降血脂藥物。其中，毛木耳蛋白質(zhì)提取物水溶液的蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法如下:I)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:利用標(biāo)準(zhǔn)樣品小牛血清蛋白(BSA)配置成不同濃度的蛋白溶液，采用BCA (北京博邁德科技公司)蛋白定量試劑盒制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。2)采用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定毛木耳蛋白質(zhì)提取物水溶液中蛋白質(zhì)含量。2、高血脂模型的構(gòu)建雄性SD大鼠共80只，隨機(jī)分為2組，第I組10只為正常組，喂以基礎(chǔ)飼料 ’第2組70只為高脂組，喂以高脂飼料。采取大鼠自由取食的方式，飲水不限，實(shí)驗(yàn)前記錄大鼠體重。60天后，全部大鼠禁食12h，取血，采用血脂儀(7100全自動(dòng)生化分析儀，日本日立公司)測(cè)定血脂各項(xiàng)生理指標(biāo):血清總膽固醇(TC)，血清甘油三酯(TG)，血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，并測(cè)量大鼠體重。試驗(yàn)所有數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0 (SPSS Inc.，USA)統(tǒng)計(jì)軟件的獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)處理統(tǒng)計(jì)。結(jié)果如表I所示，表明高 脂組的血清總膽固醇含量、血清甘油三酯(TG)含量和血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量均顯著高于正常組(p < 0.05)，高脂組的血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量與正常組無(wú)顯著差異(p>0.05)。說(shuō)明得到高血脂模型。表1、正常組和高脂組的血脂含量
權(quán)利要求
1.毛木耳蛋白質(zhì)提取物的制備方法，包括: 1)將毛木耳子實(shí)體粉碎后用水浸提，收集水溶性物質(zhì)得到毛木耳水溶性提取物； 2)對(duì)所述毛木耳水溶性提取物進(jìn)行飽和度為30%的硫酸銨沉淀，收集水溶性物質(zhì)；對(duì)所述水溶性物質(zhì)進(jìn)行飽和度為80%的硫酸銨沉淀，收集沉淀，對(duì)所述沉淀用去離子水透析后，得到所述毛木耳蛋白質(zhì)提取物。
2.權(quán)利要求1所述的制備方法制備的毛木耳蛋白質(zhì)提取物。
3.—種降血脂的產(chǎn)品，其活性成分為權(quán)利要求2所述的毛木耳蛋白質(zhì)提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的產(chǎn)品，其特征在于:所述降血脂為下述1)-3)中的至少一種: 1)降低血清中總膽固醇含量； 2)降低血清中甘油三酯含量； 3)降低血清中低密度脂蛋白膽固醇含量。
5.權(quán)利要求2所述的毛木耳蛋白質(zhì)提取物在制備降血脂產(chǎn)品中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于:所述降血脂為下述1)-3)中的至少一種: 1)降低血清中總膽固醇含量； 2)降低血清中甘油三酯含量； 3)降低血清中低密度脂蛋白膽固醇 含量。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了毛木耳降血脂功能蛋白質(zhì)提取物制備方法及其應(yīng)用。該毛木耳降血脂功能蛋白質(zhì)提取物的制備方法包括1)將毛木耳子實(shí)體粉碎后用水浸提，收集水溶性物質(zhì)得到毛木耳水溶性提取物；2)對(duì)所述毛木耳水溶性提取物進(jìn)行飽和度為30%的硫酸銨沉淀，收集水溶性物質(zhì)；對(duì)所述水溶性物質(zhì)進(jìn)行飽和度為80%的硫酸銨沉淀，收集沉淀，對(duì)所述沉淀用去離子水透析后，得到所述毛木耳蛋白質(zhì)提取物。本發(fā)明的毛木耳蛋白質(zhì)提取物在降低血脂中各項(xiàng)指標(biāo)中，對(duì)總膽固醇含量、甘油三酯含量和低密度脂蛋白膽固醇含量都有降低的作用，可以綜合緩解高血脂癥的情況，在降脂初期明顯降低三種指標(biāo)在血液中的濃度，可以應(yīng)用到降脂保健食品和藥物的研發(fā)領(lǐng)域。
文檔編號(hào)C07K1/30GK103214551SQ20131000703
公開(kāi)日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2013年1月8日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月8日
發(fā)明者趙爽, 劉宇, 許峰, 王守現(xiàn), 王蘭青, 耿小麗, 殷貝貝, 陳杰, 孟莉莉 申請(qǐng)人:北京市農(nóng)林科學(xué)院