專(zhuān)利名稱(chēng)：一種從淫羊藿屬植物制備高含量(98％)淫羊藿甙的技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從淫羊藿屬植物中制備含量大于98%的淫羊藿甙的方法。
背景技術(shù)：
淫羊藿屬小檗科植物心葉淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim·)、箭葉淫羊藿(Epimedium sagittatum Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim·)、或車(chē)月鮮淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥莖葉。淫羊藿主要含有主要含黃酮類(lèi)化合物、木脂素、生物堿、揮發(fā)油等，其中黃酮類(lèi)主要包括淫羊藿甙(icariin)、淫羊藿次甙(icarisoside)等，；朝鮮淫羊藿含淫羊藿式、淫羊藿新式(epimedoside)A、B、C、D、E等；箭葉淫羊藿含淫羊藿甙、脫水淫羊藿甙元-3-0-α-鼠李糖甙，淫羊藿甙元-3-0-α-鼠李糖甙，槲皮素等。目前主要研究?jī)?nèi)容是分離純化淫羊藿甙的工藝，淫羊藿甙主要用于改善心腦血管系統(tǒng)功能、增強(qiáng)機(jī)體免疫能力、促進(jìn)DNA合成及預(yù)防和治療性功能障礙等，淫羊藿甙還有抗衰老和抗腫瘤作用。 目前，淫羊藿甙提取方法主要有水提醇沉、醇提水沉、酶法提取、超聲波提取、微波助提等，純化方法有絮凝劑純化法、大孔樹(shù)脂聯(lián)合純化法、硅膠層析柱純化法、聚酰胺層析純化法等。但是現(xiàn)有工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品存在以下幾個(gè)問(wèn)題產(chǎn)品含量普遍偏低、產(chǎn)品生產(chǎn)成本較高、產(chǎn)品有毒有機(jī)溶劑殘留量較高、提純步驟冗長(zhǎng)、生產(chǎn)周期長(zhǎng)、生產(chǎn)工藝對(duì)環(huán)境污染較嚴(yán)重。中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)公開(kāi)的“一種制備高純度淫羊藿甙的方法”(申請(qǐng)?zhí)?1120115)，其特征在于它是采用高速逆流色譜(HSCCC)法從淫羊藿粗提物中制備高純度的淫羊藿甙，其溶劑體系由A、B、C三個(gè)組分組成，A組分可以為氯仿，二氯甲烷，四氯化碳，1，2- 二氯乙烷等氯代物；B組分可以為甲醇，乙醇，乙腈，丙酮等；C組分為水，體積比依次為2-6 1-5 1-4?！皬囊蜣街刑崛》蛛x淫羊藿苷及總黃酮的方法”(申請(qǐng)?zhí)?00810196890)，其特征在于包括如下步驟a.將淫羊藿藥材加至逆流提取罐內(nèi)，再將20-40%乙醇緩慢倒入提取罐中，乙醇用量為淫羊藿重量的10-30倍，提取2-4次，每次1-1. 5小時(shí)；每次按5L/kg藥材量添加新的溶劑；b.合并上述數(shù)次提取液，以離心機(jī)分離；收集上清液；c.以孔徑為O. 02-0. I μ m的微濾膜除沉過(guò)濾，跨膜壓力為O. 1-0. 3Mpa，料液溫度為30-60度，得透過(guò)液；d.將所得透過(guò)液通過(guò)截留分子量為1000-50000的超濾膜分離，跨膜壓力O. 5-lMpa，料液溫度30-50°C，得超濾液；e.將所得超濾液以截留分子量為200-500的納濾膜處理，跨膜壓力為l-2Mpa，料液溫度30-50°C，得截留液；f.將截留液干燥，干燥溫度60°C以下，干燥物水份(5.0%，干燥物即為淫羊藿有效成分富集物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為從淫羊藿屬植物中制備高含量(98% )淫羊藿甙開(kāi)發(fā)一種新工藝，以便解決目前市場(chǎng)上生產(chǎn)該產(chǎn)品的技術(shù)中所存在的問(wèn)題，以便得到高回收率和高含量的淫羊藿甙產(chǎn)品。本發(fā)明的目的主要通過(guò)以下技術(shù)過(guò)程來(lái)實(shí)現(xiàn)具體步驟如下I)從淫羊藿中提取淫羊藿甙將淫羊藿葉子粉碎過(guò)10目，加其重量12-15倍量的含水有機(jī)溶劑(I )加熱回流提取三次，每次提取I. 5小時(shí)，過(guò)濾提取液，用含水有機(jī)溶劑(I )洗滌提取渣，合并提取液及洗滌液，減壓濃縮至一定的比重，就得到淫羊藿甙的粗提液；上述含水有機(jī)溶劑(I )中有機(jī)溶劑的含量為40-95v% ;上述有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、甘油、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯；2)粗分離淫羊藿甙利用極性或者弱極性的大孔樹(shù)脂進(jìn)行初分離。將非離子型的極性或者弱極性大孔網(wǎng)狀吸附樹(shù)脂置于乙醇中浸泡24小時(shí)，然后用乙醇、去離子水依次沖 洗樹(shù)脂；將經(jīng)過(guò)上述過(guò)程活化過(guò)的樹(shù)脂，用重力沉降法裝柱；將過(guò)程I)中得到的粗提液經(jīng)過(guò)濾后，清夜上樣，在采用含水有機(jī)溶劑(II )對(duì)大孔樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，分段收集，用HPLC法檢測(cè)洗脫過(guò)程，在270nm直到檢測(cè)不出淫羊藿甙；減壓濃縮收集的各部分洗脫液，就得到粗分離的淫羊藿甙產(chǎn)物；上述含水有機(jī)溶劑(II )中有機(jī)溶劑的含量為20-90v% ;上述含水有機(jī)溶劑(II )中的有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇；3)純化粗分離淫羊藿甙利用溶劑處理法對(duì)粗分離淫羊藿甙進(jìn)行純化。將過(guò)程2)得到的粗分離的淫羊藿甙產(chǎn)物，用含水有機(jī)溶劑(III)加熱溶解，過(guò)濾，不溶物再用含水有機(jī)溶劑(III)加熱溶解一次，合并兩次過(guò)濾液，減壓濃縮至含有機(jī)溶劑至一定濃度，靜置，放涼，析晶，過(guò)濾結(jié)晶物，用有機(jī)溶劑(IV)洗滌結(jié)晶物；上述含水有機(jī)溶劑(III)中有機(jī)溶劑的含量為30-90v% ;上述含水有機(jī)溶劑(III)中有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇；上述有機(jī)溶劑(IV)包括甲醇、乙醇、丙酮；4)重結(jié)晶處理利用溶劑處理法對(duì)初結(jié)晶物進(jìn)行重結(jié)晶處理。將過(guò)程3)得到的初結(jié)晶物，用含水有機(jī)溶劑(V )加熱回流溶解，過(guò)濾，清夜?jié)饪s至一定的濃度，靜置，結(jié)晶，過(guò)濾結(jié)晶物，再用含水有機(jī)溶劑(VI)對(duì)結(jié)晶物加熱溶解，過(guò)濾，過(guò)濾液靜置，結(jié)晶，過(guò)濾結(jié)晶物，就得到含量大于98%的淫羊藿甙產(chǎn)物；上述含水有機(jī)溶劑(V )中有機(jī)溶劑含量為50-90v% ;上述含水有機(jī)溶劑(V )中有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇；上述含水有機(jī)溶劑(VI)中有機(jī)溶劑含量為70-95v% ;上述含水有機(jī)溶劑(VI)中有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇；所述步驟I)中淫羊藿屬植物包括心葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鮮淫羊藿和巫山淫
牛隹ο所述步驟2)中所用的大孔網(wǎng)狀吸附樹(shù)脂包括聚丙乙烯樹(shù)脂、聚苯乙烯樹(shù)脂、聚甲基丙烯酸酯樹(shù)脂、丙烯酰胺與苯乙烯共聚物樹(shù)脂。所述步驟3)、過(guò)程4)中有機(jī)溶劑的用量為15-30倍量；所述步驟3)、過(guò)程4)中靜置，析晶時(shí)間為24_48小時(shí)。該發(fā)明所述說(shuō)的一種從淫羊藿屬植物制備高含量(98% )淫羊藿甙的技術(shù)優(yōu)勢(shì)在于a)聯(lián)合使用大孔樹(shù)脂和有機(jī)溶劑純化法相結(jié)合，使產(chǎn)品的回收率和純度都有明顯的提聞。b)簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝，縮短生產(chǎn)周期，使生產(chǎn)成本有所降低。
c)使用了無(wú)毒無(wú)害的有機(jī)溶劑，大大降低了產(chǎn)品中有毒有害溶劑的殘留量，提高了廣品的品質(zhì)。


圖I為粗分離淫羊藿甙產(chǎn)物的HPLC分析圖譜圖2為初結(jié)晶淫羊藿甙產(chǎn)物的HPLC分析圖譜圖3為重結(jié)晶淫羊藿甙產(chǎn)物(98% )的HPLC分析圖譜具體實(shí)施實(shí)例實(shí)例I :I)提取將200g淫羊藿甙含量為O. 6%原料經(jīng)過(guò)粉碎，放入3000ml三角瓶中，·加入2000ml、70%含水乙醇溶液，提取三次，一次I. 5H/次，合并三次提取液，減壓濃縮至d=1.08(比重)，約300ml，加去離子水稀釋至500ml，靜置、放涼、過(guò)濾，清夜490ml待用，經(jīng)HPLC檢測(cè)，清夜中淫羊藿甙的濃度為2. 4mg/ml，有效成分回收率為98%。2)粗分離將I)中待用的490ml清夜上樣于經(jīng)過(guò)處理的200g大孔樹(shù)脂HPD-100 (滄州寶恩)，HPLC檢測(cè)上樣過(guò)程，上樣結(jié)束后，用去離子水洗脫雜質(zhì)，再用梯度洗脫淫羊藿甙，收集50%含水乙醇洗脫部分，減壓濃縮，得到粗分離產(chǎn)物3. Og,經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量為38%，有效成分回收率為94. 8% .3)初結(jié)晶將2)中得到的粗分離產(chǎn)物3. Ogj 65%含水丙加熱溶解，回流兩次，合并兩次清夜，濃縮至d = I. 05 (比重)，加丙酮調(diào)節(jié)濃縮液中丙酮含量為50 %，靜置、結(jié)晶、過(guò)濾，得到初結(jié)晶粉末I. 65g J^HPLC檢測(cè)含量為65. 4%，有效成分回收率為90%。4)重結(jié)晶將3)中得到的I. 65g初結(jié)晶用不含水丙酮熱回流溶解兩次，每次30min，合并兩次清夜，濃縮至1/3體積，冷卻結(jié)晶，結(jié)晶再用不含水丙酮重結(jié)晶一次，得到最終結(jié)晶產(chǎn)物O. 98g J^HPLC檢測(cè)含量為98. 23%，有效成分回收率為80%。實(shí)例2 I)提取將200g淫羊藿甙含量為O. 6%原料經(jīng)過(guò)粉碎，放入3000ml三角瓶中，加入2000ml、70%含水乙醇溶液，提取三次，一次I. 5H/次，合并三次提取液，減壓濃縮至d=1.06(比重)，約350ml，加去離子水稀釋至600ml，靜置、放涼、過(guò)濾，清夜580ml待用，經(jīng)HPLC檢測(cè)，清夜中淫羊藿甙的濃度為2. 07mg/ml，有效成分回收率為100%。2)粗分離將I)中待用的580ml清夜上樣于經(jīng)過(guò)處理的200g大孔樹(shù)脂DM-130 (山東魯抗)，HPLC檢測(cè)上樣過(guò)程，上樣結(jié)束后，用去離子水洗脫雜質(zhì)，再用梯度洗脫淫羊藿甙，收集40 %含水乙醇洗脫部分，減壓濃縮，得到粗分離產(chǎn)物2. 45g，經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量為47. 2 %，有效成分回收率為96% .3)初結(jié)晶將2)中得到的粗分離產(chǎn)物2. 45g，用80%含水丙加熱溶解，回流兩次，合并兩次清夜，濃縮至d= 1.08(比重)，加丙酮調(diào)節(jié)濃縮液中丙酮含量為70%，靜置、結(jié)晶、過(guò)濾，得到初結(jié)晶粉末I. 58g J^HPLC檢測(cè)含量為70. 2%，有效成分回收率為92%。4)重結(jié)晶將3)中得到的I. 58g初結(jié)晶用乙醇熱回流溶解兩次，每次30min，合并兩次清夜，濃縮至1/4體積，冷卻結(jié)晶，結(jié)晶再用無(wú)水乙醇重結(jié)晶一次，得到最終結(jié)晶產(chǎn)物1.05g，經(jīng)HPLC檢測(cè)含量為98. 86%，有效成分回收率為87%。實(shí)例3
I)提取將200g淫羊藿甙含量為O. 6%原料經(jīng)過(guò)粉碎，放入3000ml三角瓶中，加入2000ml、70%含水乙醇溶液，提取三次，一次I. 5H/次，合并三次提取液，減壓濃縮至d=1.08(比重)，約300ml，加去離子水稀釋至500ml，靜置、放涼、過(guò)濾，清夜500ml待用，經(jīng)HPLC檢測(cè)，清夜中淫羊藿甙的濃度為2. 3mg/ml，有效成分回收率為95. 8%。2)粗分離將I)中待用的500ml清夜上樣于經(jīng)過(guò)處理的200g大孔樹(shù)脂LX-Il (西安藍(lán)曉)，HPLC檢測(cè)上樣過(guò)程，上樣結(jié)束后，用去離子水洗脫雜質(zhì)，再用梯度洗脫淫羊藿甙，收集50 %含水乙醇洗脫部分，減壓濃縮，得到粗分離產(chǎn)物3. 2g，經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量為35. 7 %，有效成分回收率為95% .3)初結(jié)晶將2)中得到的粗分離產(chǎn)物3. 2g，用80%含水丙加熱溶解，回流兩次，合并兩次清夜，濃縮至d = I. 08 (比重)，加丙酮調(diào)節(jié)濃縮液中丙酮含量為60 %，靜置、結(jié)晶、過(guò)濾，得到初結(jié)晶粉末I. 7g J^HPLC檢測(cè)含量為63. 9%，有效成分回收率為91%。4)重結(jié)晶將3)中得到的I. 7g初結(jié)晶用80%熱回流溶解兩次，每次30min，合并兩次清夜，濃縮至1/4體積，調(diào)節(jié)乙醇含量至50%，冷卻結(jié)晶，結(jié)晶再用不含水丙酮重結(jié)晶 一次，得到最終結(jié)晶產(chǎn)物I. 02g J^HPLC檢測(cè)含量為98. 67%，有效成分回收率為84%。
權(quán)利要求
1.一種從淫羊藿屬植物制備高含量(98% )淫羊藿甙的技術(shù)，其特征在于 1)從淫羊藿中提取淫羊藿甙將淫羊藿葉子粉碎過(guò)10目，加其重量12-15倍量的含水有機(jī)溶劑(I )加熱回流提取三次，每次提取I. 5小時(shí)，過(guò)濾提取液，用含水有機(jī)溶劑(I )洗滌提取渣，合并提取液及洗滌液，減壓濃縮至一定的比重，就得到淫羊藿甙的粗提液；上述含水有機(jī)溶劑(I )中有機(jī)溶劑的含量為40-95v% ;上述有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、甘油、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯； 2)粗分離淫羊藿甙利用極性或者弱極性的大孔樹(shù)脂進(jìn)行初分離；將非離子型的極性或者弱極性大孔網(wǎng)狀吸附樹(shù)脂置于乙醇中浸泡24小時(shí)，然后用乙醇、去離子水依次沖洗樹(shù)脂；將經(jīng)過(guò)上述過(guò)程活化過(guò)的樹(shù)脂，用重力沉降法裝柱；將過(guò)程I)中得到的粗提液經(jīng)過(guò)濾后，清夜上樣，在采用含水有機(jī)溶劑(II )對(duì)大孔樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，分段收集，用HPLC法檢測(cè)洗脫過(guò)程，在270nm直到檢測(cè)不出淫羊藿甙；減壓濃縮收集的各部分洗脫液，就得到粗分離的淫羊藿甙產(chǎn)物；上述含水有機(jī)溶劑(II )中有機(jī)溶劑的含量為20-90v% ;上述含水有機(jī)溶劑(II )中的有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇； 3)純化粗分離淫羊藿甙利用溶劑處理法對(duì)粗分離淫羊藿甙進(jìn)行純化；將過(guò)程2)得到的粗分離的淫羊藿甙產(chǎn)物，用含水有機(jī)溶劑(III)加熱溶解，過(guò)濾，不溶物再用含水有機(jī)溶劑(III)加熱溶解一次，合并兩次過(guò)濾液，減壓濃縮至含有機(jī)溶劑至一定濃度，靜置，放涼，析晶，過(guò)濾結(jié)晶物，用有機(jī)溶劑(IV)洗滌結(jié)晶物；上述含水有機(jī)溶劑(III)中有機(jī)溶劑的含量為30-90v% ;上述含水有機(jī)溶劑(III)中有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇；上述有機(jī)溶劑(IV)包括甲醇、乙醇、丙酮； 4)重結(jié)晶處理利用溶劑處理法對(duì)初結(jié)晶物進(jìn)行重結(jié)晶處理；將過(guò)程3)得到的初結(jié)晶物，用含水有機(jī)溶劑(V )加熱回流溶解，過(guò)濾，清夜?jié)饪s至一定的濃度，靜置，結(jié)晶，過(guò)濾結(jié)晶物，再用含水有機(jī)溶劑(VI)對(duì)結(jié)晶物加熱溶解，過(guò)濾，過(guò)濾液靜置，結(jié)晶，過(guò)濾結(jié)晶物，就得到含量大于98%的淫羊藿甙產(chǎn)物；上述含水有機(jī)溶劑(V)中有機(jī)溶劑含量為50-90v%;上述含水有機(jī)溶劑(V )中有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇中的一種或者更多；上述含水有機(jī)溶劑(VI)中有機(jī)溶劑含量為70-95v%;上述含水有機(jī)溶劑(VI)中有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇。
2.按權(quán)利要求I所述的一種從淫羊藿屬植物制備高含量(98%)淫羊藿甙的技術(shù)，其特征在于所述步驟I)中淫羊藿屬植物包括心葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鮮淫羊藿和巫山淫羊藿。
3.按權(quán)利要求I所述的一種從淫羊藿屬植物制備高含量(98%)淫羊藿甙的技術(shù)，其特征在于所述步驟2)中所用的大孔網(wǎng)狀吸附樹(shù)脂包括聚丙乙烯樹(shù)脂、聚苯乙烯樹(shù)脂、聚甲基丙烯酸酯樹(shù)脂、丙烯酰胺與苯乙烯共聚物樹(shù)脂。
4.按權(quán)利要求I所述的一種從淫羊藿屬植物制備高含量(98%)淫羊藿甙的技術(shù)，其特征在于所述步驟3)、過(guò)程4)中有機(jī)溶劑的用量為15-30倍量；所述步驟3)、過(guò)程4)中靜置，析晶時(shí)間為24-48小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從淫羊藿屬植物中制備含量大于98％的淫羊藿甙的方法。它是將淫羊藿葉子粉碎過(guò)目，從淫羊藿中提取淫羊藿甙，利用極性或者弱極性的大孔樹(shù)脂進(jìn)行初分離，利用溶劑處理法對(duì)粗分離淫羊藿甙進(jìn)行純化，利用溶劑處理法對(duì)初結(jié)晶物進(jìn)行重結(jié)晶處理；該發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢(shì)在于a)聯(lián)合使用大孔樹(shù)脂和有機(jī)溶劑純化法相結(jié)合，使產(chǎn)品的回收率和純度都有明顯的提高。b)簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝，縮短生產(chǎn)周期，使生產(chǎn)成本有所降低。c)使用了無(wú)毒無(wú)害的有機(jī)溶劑，大大降低了產(chǎn)品中有毒有害溶劑的殘留量，提高了產(chǎn)品的品質(zhì)。
文檔編號(hào)C07H1/08GK102807595SQ20111015294
公開(kāi)日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2011年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月2日
發(fā)明者王平, 李雪松, 任曉峰, 李建, 盧義德, 苗志宏 申請(qǐng)人:漢中天然谷生物科技有限公司