專利名稱：一種抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及ー種抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體，具體涉及一種能夠特異性結(jié)合并抑制Aap蛋白功能的具有抑制表皮葡萄球菌生物膜形成作用的單克隆抗體并鑒定該抗體識別的B細胞抗原表位。
背景技術(shù)：
表皮葡萄球菌是ー種導致人體生物膜感染性疾病的重要病原體，其致病力主要在于它可以在植入性醫(yī)療材料表面形成生物膜，從而使表皮葡萄球菌感染在這些植入病人體內(nèi)慢性化和持續(xù)化。由于形成生物膜的表皮葡萄球菌可以抵抗多種抗生素和宿主免疫系統(tǒng)的清除作用，所以一旦發(fā)生表皮葡萄球菌生物膜感染，治療的最終方法只能是摘除或更換植入性醫(yī)療材料。因此，具有抑制細菌生物膜形成作用的單克隆抗體在發(fā)揮治療生物膜感染性疾病方面具有廣泛的應(yīng)用前景。研究表明，在表皮葡萄球菌形成生物膜的過程中，細菌可以通過向細胞外釋放多糖、核酸、蛋白質(zhì)等多種物質(zhì)促使細菌間發(fā)生相互粘附聚集，從而輔助和加強細菌菌落的聚集和細菌生物膜的形成；在這些輔助細菌生物膜形成的物質(zhì)當中，Aap蛋白是介導表皮葡萄球菌相互粘附聚集和生物膜形成的ー種重要細胞外蛋白；所述的Aap蛋白主要由A、B兩個結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，通過蛋白C端的特殊基序錨連在表皮葡萄球菌的細胞壁上發(fā)揮介導表皮葡萄球菌形成細菌生物膜的作用?，F(xiàn)有文獻證明針對Aap蛋白的動物免疫血清或抗體可明顯抑制表皮葡萄球菌生物膜的形成。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體；具體涉及ー種能夠特異性結(jié)合并抑制Aap蛋白功能的具有抑制表皮葡萄球菌生物膜形成作用的單克隆抗體并鑒定該抗體識別的B細胞抗原表位。具體而言，本發(fā)明的ー種抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體以表皮葡萄球菌聚集相關(guān)蛋白(Aap)的截短體為抗原制備而成；所述的單克隆抗體能識別位于Aap蛋白中的特異表位并抑制Aap蛋白的功能，從而發(fā)揮抑制表皮葡萄球菌生物膜形成的作用。更具體的說，本發(fā)明的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體，其特征在于，以表皮葡萄球菌Aap蛋白B結(jié)構(gòu)域的蛋白截短體AapBrptl. 5(位于表皮葡萄球菌ATCC 12228株Aap蛋白氨基酸序列中第1088位至1296位)為抗原，免疫Bal b/c小鼠制備而成；經(jīng)測定，所述的單克隆抗體為小鼠IgG，其針對的B細胞抗原表位位于抗原蛋白氨基酸序列的103位至122位之間，所述的抗原蛋白氨基酸序列具有序列I的結(jié)構(gòu)(PGKPGVKNPDTGEVVTPPVD)。本發(fā)明中，所述的細菌是革蘭氏陽性球菌，尤其涉及表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌或化膿性鏈球菌。 本發(fā)明中，所述的單克隆抗體通過下述技術(shù)方案制備
采用表皮葡萄球菌ATCC 12228株的基因組DNA，克隆Aap蛋白編碼序列中第3262位至3888位堿基的DNA片段，并采用原核表達載體pMAL和大腸桿菌BL21 (DE3)表達所述的DNA片段所編碼的蛋白AapBrptl. 5 ；
采用Ni2+親和層祈、TEV蛋白酶水解蛋白標簽、分子篩等方法對AapBrptl. 5蛋白進行純化，制得免疫小鼠所用的抗原蛋白。本發(fā)明采用酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)、蛋白免疫印跡試驗(Western blot)檢測AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體與表皮葡萄球菌Aap蛋白結(jié)合的親和カ與特異性；采用微量細菌生物膜檢測試驗、激光共聚焦顯微鏡檢測試驗，檢測AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體對表皮葡萄球菌生物膜形成的影響；同時還采用大腸桿菌表達截短AapBrptl. 5蛋白以及免疫共沉淀試驗，測定AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體識別的B細胞抗原表位。如圖I所示,ELISA和Western blot檢測表明，所述的單克隆抗體在被稀釋到lng/mL以下時,仍然能特異性結(jié)合表皮葡萄球菌Aap蛋白。如圖2A和圖2B所示，微量細菌生物膜檢測表明，所述AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體對表皮葡萄球菌RP62A株生物膜的形成有明顯的抑制作用，使得生物膜形成被抑制40%左右(如圖2A所述);所述的單克隆抗體在培養(yǎng)基中的濃度大于I μ g/mL時能發(fā)揮抑制生物膜形成的作用，并且抑制作用隨抗體濃度増大而增大；但當抗體濃度大于20μ g/mL后，抑制作用不再隨抗體濃度増大而增大(如圖2B所示)。如表I所示，所述的單克隆抗體除能抑制表皮葡萄球菌RP62A株生物膜形成外，還能抑制多種表皮葡萄球菌臨床菌株生物膜的形成。表I AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體對表皮葡萄球菌生物膜形成的影響
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#臨床菌株均來自中國上海的中山醫(yī)院及瑞金醫(yī)院，
*各菌株的生物膜形成能力用“++”和“+”表示，其中“++”表示生物膜形成能力較強，“+”表示生物膜形成能力較弱。如圖3所示，激光共聚焦顯微鏡檢測表明，表皮葡萄球菌RP62A株在所述的AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體存在的條件下形成的生物膜中存在大量微小孔洞，并且生物膜中的很多部位明顯變薄，同時生物膜中的死亡細菌數(shù)量増大。如圖4所示,大腸桿菌表達截短抗原蛋白以及免疫共沉淀試驗表明，AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體結(jié)合Aap蛋白的B細胞抗原表位位于AapBrptl. 5蛋白中氨基酸序列的103位至122位之間，即位于如下序列之中PGKPGVKNPDTGEVVTPPVD。
本發(fā)明的AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體可進ー步進行人源化改造,改造后的抗體可作為抗表皮葡萄球菌的抗體藥物使用；本發(fā)明的AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體針對的B細胞抗原表位多肽能用于制備抗表皮葡萄球菌生物膜疫苗。本發(fā)明的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體及其B細胞表位具有以下優(yōu)點
(O所述AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體能特異性結(jié)合表皮葡萄球菌生物膜形成過程中的關(guān)鍵蛋白Aap，并發(fā)揮抑制生物膜形成的作用；
(2)所述AapBrptl.5蛋白單克隆抗體能較為廣譜的抑制多種菌株的表皮葡萄球菌的生物膜形成；
(3)所述AapBrptl.5蛋白單克隆抗體的B細胞抗原表位為ー個線性的氨基酸序列表位，提示相應(yīng)的表位多肽有可能誘導動物或人體產(chǎn)生與本發(fā)明單克隆抗體功能相似的具有 抑制表皮葡萄球菌生物膜形成能力的抗體，即該抗體的表位多肽能用于制備抗表皮葡萄球菌生物膜疫苗。本發(fā)明的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體可用于制備抗革蘭氏陽性球菌生物膜形成的藥物，和用于制備治療由革蘭氏陽性球菌引起的疾病的藥物；所述的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體所針對的B細胞抗原表位區(qū)域可用于制備抗革蘭氏陽性球菌生物膜形成疫苗。


圖I是AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體同表皮葡萄球菌RP62A株以及ATCC 12228株細菌裂解液上清蛋白的Western blot,
其中，圖中所示的印跡條帶對應(yīng)的蛋白經(jīng)質(zhì)譜鑒定為Aap蛋白及其蛋白水解片段。圖2是AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體對表皮葡萄球菌RP62A株生物膜形成的影響， 其中，A表明以不做任何處理的細菌生物膜(RP62A)以及10 μ g/mL的正常小鼠IgG處
理(Mock)為對照，10 μ g/mL的AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體(MAb)加入培養(yǎng)基中同表皮葡萄球菌RP62A株共同培養(yǎng)14小時后，利用結(jié)晶紫染色觀察發(fā)現(xiàn)，單克隆抗體可明顯抑制細菌生物膜的形成；B表明不同濃度的AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體對表皮葡萄球菌RP62A株生物膜形成的影響。圖3是激光共聚焦顯微鏡觀察單克隆抗體對表皮葡萄球菌RP62A株生物膜形成的影響，以不做任何處理的細菌生物膜(RP62A)以及10 μ g/mL的正常小鼠IgG處理(Mock)為對照，將10 μ g/mL的AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體(MAb)加入培養(yǎng)基中同表皮葡萄球菌RP62A株共同培養(yǎng)14小時,再利用Live-Dead染色試劑盒(美國Invitrogen公司)染色后并在激光共聚焦顯微鏡(德國Leica公司，型號TCS SP5)下觀察生物膜的三維結(jié)構(gòu)，
其中，綠色熒光顯示為活細菌，紅色熒光顯示為死細菌，深色箭頭標記生物膜中存在的微小孔洞，白色箭頭標記生物膜中變薄的部位。圖4是AapBrptl. 5蛋白單克隆抗的B細胞抗原表位鑒定，
其中，A表明將AapBrptl. 5蛋白截短為ト160、ト102、ト53后，分別同AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體進行免疫共沉淀實驗檢測抗體同抗原的相互作用，初步確定抗體識別的抗原表位；B表明通過A圖中的表位確定了 AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體識別抗原表位的大致區(qū)域后，再將Aapfcptl. 5蛋白截短為1-132、1-122、1-112、1-102，并分別同Aapfcptl. 5蛋白單克隆抗體進行免疫共沉淀實驗檢測抗體同抗原的相互作用，精確檢測抗體識別的抗原表位；圖中，“ IP”表示共沉樣品的Western blot檢測，“Mock”表示用正常小鼠IgG進行的對照共沉樣品的Western blot 檢測，“Input”表示共沉前單克隆抗體同各截短體混合物的Western blot 檢測。
具體實施例方式下面結(jié)合實驗例對本發(fā)明進一步詳細描述但不限制本發(fā)明。實施例1，制備單克隆抗體
采用表皮葡萄球菌ATCC 12228株的基因組DNA，克隆Aap蛋白編碼序列中第3262位至3888位堿基的DNA片段，并采用原核表達載體pMAL和大腸桿菌BL21 (DE3)表達所述的DNA片段所編碼的蛋白AapBrptl. 5 ；
采用Ni2+親和層祈、TEV蛋白酶水解蛋白標簽、分子篩等方法對AapBrptl. 5蛋白進行純化，制得免疫小鼠所用的抗原蛋白。本發(fā)明以表皮葡萄球菌Aap蛋白B結(jié)構(gòu)域的蛋白截短體AapBrptl. 5(位于表皮葡萄球菌ATCC 12228株Aap蛋白氨基酸序列中第1088位至1296位)為抗原，免疫Bal b/c小鼠制得單克隆抗體，測定結(jié)果顯示，所述的單克隆抗體為小鼠IgG，其針對的B細胞抗原表位位于抗原蛋白氨基酸序列的103位至122位之間，所述的抗原蛋白氨基酸序列具有序列 I 的結(jié)構(gòu)(PGKPGVKNPDTGEVVTPPVD)。實施例2利用酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)和蛋白免疫印跡(Western blot)試驗檢測AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體對AapBprtl. 5及Aap蛋白的結(jié)合親和力和識別特異性
ELISA檢測單克隆抗體對AapBprtl. 5蛋白的結(jié)合親和力的實驗方法如下
將儲存液濃度為0. 4 mg/mL的單克隆抗體系列稀釋(起始稀釋濃度為1:10000，每次稀釋一倍)，然后分別加入包被好AapBrptl. 5蛋白的96孔酶標板中37° C孵育I小時。經(jīng)過反復洗板后再加入HRP標記的羊抗小鼠ニ抗37° C孵育I小時。反復洗板后加入顯色底物孵育顯色并終止反應(yīng)后，讀取各孔在450 nm和630 nm處的吸光值。區(qū)分陰性和陽性讀數(shù)的Cut-off值定為0. 20 (A450/A630)。終點稀釋度的選取定為當A450/A630數(shù)值正好大于
0.20時的抗體稀釋度。ELISA結(jié)果如下表
表2
杭體稀釋度 Ι0Κ 丨20K [40K I80K I160K ]320Κ 640Κ [1280Κ 1°° *
Α450/Α630 12. 79]2. 505 [2· 108 lj. 49 10. 914 ]θ. 526 Jo. 309 [o. 203 10. 074
*表示單克隆抗體被無限稀釋，即未加入單克隆抗體的陰性對照。結(jié)果說明，AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體的ELISA效價大于1:1280000/0. 4 mg/mL,該單克隆抗體對AapBrptl. 5蛋白具有較高的親和力。Western blot檢測AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體對Aap蛋白的識別特異性實驗方法如下
I.將2mL過夜生長的表皮葡萄球菌RP62A株及ATCC 12228株細菌離心收集并重懸后，加入溶葡萄球菌酶IOyg在37° C處理半小吋。20000g高速離心后取上清蛋白行7%SDS-PAGE電泳。電泳后將凝膠中的蛋白電轉(zhuǎn)運至0. 45 μ m的PVDF膜上。在4° C中將轉(zhuǎn)有蛋白的PVDF膜置于5%的脫脂牛奶中封閉過夜。
2.利用5%的脫脂牛奶將儲存液濃度為O. 4 mg/mL的AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體稀釋至I ng/mL后，與轉(zhuǎn)有蛋白的PVDF膜于室溫孵育2小吋。反復洗膜后再將膜與HRP標記的羊抗小鼠ニ抗室溫孵育I小吋。反復洗膜后將膜至于ECL底物中反應(yīng)，并將蛋白印跡情況反映在X光片上。3.將位于PAGE膠中對應(yīng)于Western blot中出現(xiàn)的印跡條帶相對應(yīng)的蛋白條帶挖出，并對膠中的蛋白進行質(zhì)譜分析。如圖I所示,結(jié)果表明，所述的AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體在被稀釋到Ing/mL以下時，仍然可以結(jié)合表皮葡萄球菌Aap蛋白，并且結(jié)合特異性較高。實施例3 Aap蛋白單克隆抗體抑制表皮葡萄球菌生物膜的形成
采用微量細菌生物膜檢測試驗(96孔板生物膜形成試驗)，將表皮葡萄球菌生物膜形成陽性株RP62A、1457、C408、C328、C847分別與單克隆抗體混合(終濃度10 μ g/mL)，接種于96孔板上，4° C孵育2小時后37° C培養(yǎng)14小吋。細菌在孔內(nèi)形成的生物膜采用結(jié)晶紫染 色法檢測，結(jié)晶紫染色水洗后，根據(jù)A570讀數(shù)判斷細菌生物膜形成的強弱。實驗方法如下I.表皮葡萄球菌接種于新鮮的TSB培養(yǎng)基中，37° C培養(yǎng)過夜。2.細菌1:200用新鮮的TSB培養(yǎng)基稀釋接種于96孔板，每孔200 μ I。加入Aap蛋白單克隆抗體(終濃度為10yg/mL)，4° C孵育2小時后37° C靜置培養(yǎng)14小時，每個樣品采用三復孔上樣。因單克隆抗體屬于小鼠IgG，因此設(shè)置相同濃度的正常小鼠IgG處理表皮葡萄球菌生物膜為陰性對照。3.棄菌液，用PBS洗板3次，晾干，每孔加200 μ L 2%結(jié)晶紫室溫染色5分鐘。4.棄染液，用水洗板，將板晾干,酶標儀Α570讀數(shù)，每個樣品讀數(shù)取三復孔的均值。5.應(yīng)用如下公式計算AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體對表皮葡萄球菌生物膜形成的抑制率
陰性對照Α570均值ー樣品Α570均值
_ X100%
陰性對照Α570均值
如表I所示，結(jié)果表明，所述的AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體在體外能明顯抑制表皮葡萄球菌生物膜的形成，與加入正常小鼠IgG的陰性對照相比，能顯著降低表皮葡萄球菌生物膜的形成。實施例4表皮葡萄球菌在Aap蛋白單克隆抗體存在的條件下形成的生物膜結(jié)構(gòu)的改變
采用激光共聚焦顯微鏡觀察在AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體存在的條件下表皮葡萄球菌形成生物膜的結(jié)構(gòu)。將表皮葡萄球菌RP62A株與AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體混合(終濃度10 μ g/mL)后接種于FluoroDishes中，4° C孵育2小時后37° C靜置培養(yǎng)14小時，細菌在Dish底部形成的生物膜用Live-Dead染色試劑盒染色,并將Dish中的生物膜至于激光共聚焦顯微鏡下觀察。實驗方法如下
I.表皮葡萄球菌RP62A接種于新鮮的TSB培養(yǎng)基中，37° C培養(yǎng)過夜。2.細菌用新鮮的TSB培養(yǎng)基1:200稀釋接種于FluoroDishes中，每Dish2 mL。加入AapBrptl.5蛋白單克隆抗體(終濃度為lOyg/mL)，" C孵育2小時后37° C靜置培養(yǎng)14小吋。因單克隆抗體屬于小鼠IgG，因此設(shè)置相同濃度的正常小鼠IgG處理表皮葡萄球菌生物膜為陰性對照，同時設(shè)置未處理生物膜對照。3.棄菌液，用PBS洗板3次，加入Live-Dead染色液(含有SYT09和PI各I μ Μ)染色15分鐘。4.將Dish置于Leica TCS SP5激光共聚焦顯微鏡下，用63倍物鏡予以觀察，并拍攝軸距0.5 μ m步進的生物膜斷層掃描照片。利用Imaris軟件處理生物膜的激光共聚焦數(shù)據(jù)，并得到三維重建的生物膜立體結(jié)構(gòu)。如圖3所述，結(jié)果表明，相比未處理生物膜和陰性對照生物膜的三維結(jié)構(gòu)，表皮葡萄球菌RP62A株在該單克隆抗體存在的條件下形成的生物膜中存在大量微小孔洞，并且生物膜中的很多部位明顯變薄，同時生物膜中的死亡細菌數(shù)量增多。實施例5利用大腸桿菌表達截短抗原蛋白以及免疫共沉淀測定單克隆抗體識別的B細胞抗原表位
利用大腸桿菌表達AapBrptl. 5蛋白截短體，并運用免疫共沉淀測定單克隆抗體同各截短蛋白之間的相互作用情況測定AapBrptI. 5蛋白單克隆抗體識別的B細胞抗原表位。試驗方法如下
I.將AapBrptl.5蛋白的編碼DNA片段PCR擴增并插入帶有GBl-His-tag的蛋白表達載體pETMG中，構(gòu)建表達GBl-His-AapBrptl. 5 (GB-Aap)融合蛋白的載體pETMG-AapBrp11. 5。2.以pETMG-Aapfcpt 1. 5質(zhì)粒中GB-Aap的DNA編碼區(qū)為模板，設(shè)計弓I物PCR擴增GB-Aap蛋白的C末端系列蛋白截短體編碼DNA片段(毎次截短約150個堿基)，并插入蛋白表達載體pET28a中用以在大腸桿菌BL21 (DE3)中表達下列蛋白截短體GB_Aap FL, GB-Aap
aa 1-160 GB-Aap aa:1-102 GB-Aap aa:卜53。3.利用Ni2+親和層析純化上述大腸桿菌表達的截短蛋白。將純化所得的蛋白20yg與IOyg Aap蛋白單克隆抗體在共沉淀緩沖液(20 mMTris-HCl (pH 8.0), 137mMNaCl, I mM EDTA, 1% (vol/vol) Triton X-100 )中 4。C 混合孵育 I 小時，然后加入protein G-coupled Sepharose樹脂50 μ L繼續(xù)在4° C混合孵育I小時。在利用共沉淀緩沖液反復洗滌樹脂后，將樹脂在2Χ上樣緩沖液中煮沸5分鐘，并進行15% SDS-PAGE電泳。將PAGE凝膠上的蛋白電轉(zhuǎn)運至0. 22 μ m的PVDF膜上之后，將膜至于5%的脫脂牛奶中4° C封閉過夜。再用小鼠抗His-tag抗體檢測相應(yīng)的蛋白截短體是否結(jié)合了 AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體并由該抗體介導結(jié)合于protein G-coupled Sepharose上。4.初步確定了 AapBrptl. 5蛋白單克隆抗體B細胞抗原表位位于AapBrptl. 5蛋白中的大致位置之后，再次利用pETMG-AapBrptL 5質(zhì)粒中GB-Aap的DNA編碼區(qū)為模板，設(shè)計引物PCR擴增GB-Aap蛋白的C末端系列蛋白截短體編碼DNA片段(毎次截短約30個堿基)，并插入蛋白表達載體pET28a中用以在大腸桿菌BL21 (DE3)中表達更為精確的蛋白截短體(GB-Aap aa: 1-132，GB-Aap aa: 1-122，GB-Aap aa: 1-112,GB-Aap aa: 1-102),并用免疫共沉淀精確確定單克隆抗體的B細胞抗原表位。
如圖4所示,結(jié)果表明，所述的AapBrptL 5蛋白單克隆抗體結(jié)合與AapBrptL 5蛋白的B細胞抗原表位位于蛋白氨基酸序列的103位至122位之間，具有如SEQ ID NO I所示的氨基酸序列。
權(quán)利要求
1.ー種抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體，其特征在干，以表皮葡萄球菌聚集相關(guān)蛋白Aap的截短體為抗原,免疫Bal b/c小鼠制成。
2.按權(quán)利要求I所述的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體，其特征在于，所述的抗原為表皮葡萄球菌Aap蛋白B結(jié)構(gòu)域的蛋白截短體AapBrptl. 5，其位于表皮葡萄球菌ATCC12228株Aap蛋白氨基酸序列中第1088位至1296位。
3.—種權(quán)利要求I的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體針對的B細胞表位，其特征在于，所述的B細胞抗原表位位于抗原蛋白氨基酸序列的103位至122位之間。
4.按權(quán)利要求3所述的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體針對的B細胞表位，其特征在于，所述的抗原蛋白氨基酸序列具有序列I的結(jié)構(gòu)。
5.按權(quán)利要求I所述的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體，其特征在于，所述的細菌是革蘭氏陽性球菌。
6.按權(quán)利要求5所述的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體，其特征在于，所述的細菌是表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌或化膿性鏈球菌。
7.權(quán)利要求I所述的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體在制備抗革蘭氏陽性球菌生物膜形成的藥物中的用途。
8.權(quán)利要求I所述的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體在制備治療由革蘭氏陽性球菌引起的疾病的藥物中應(yīng)用。
9.權(quán)利要求3的抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體針對的B細胞表位區(qū)域在制備抗革蘭氏陽性球菌生物膜形成的疫苗中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種抑制細菌生物膜形成的單克隆抗體及其針對的B細胞表位；本發(fā)明的單克隆抗體以表皮葡萄球菌聚集Aap蛋白B結(jié)構(gòu)域的蛋白截短體AapBrpt1.5為抗原，免疫Balb/c小鼠制成；所述的單克隆抗體能識別位于Aap蛋白中的特異表位并抑制Aap蛋白的功能，從而發(fā)揮抑制表皮葡萄球菌生物膜形成的作用。本發(fā)明的單克隆抗體可用于制備治療由革蘭氏陽性球菌引起的生物膜相關(guān)疾病的藥物，所述單克隆抗體針對的B細胞抗原表位多肽可用于制備抗革蘭氏陽性球菌生物膜形成的疫苗。
文檔編號C07K7/08GK102649817SQ201110044708
公開日2012年8月29日 申請日期2011年2月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月24日
發(fā)明者瞿滌, 胡健 申請人:復旦大學