專利名稱：L27e家族蛋白抗原表位、其抗體及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)和免疫學(xué)，具體涉及一種核糖體蛋白、特別是一種60S核 糖體蛋白L27e家族蛋白的抗原表位、其抗體及其用途。
背景技術(shù)：
核糖體是一切活細胞中(除成熟哺乳動物血細胞外)一個重要的細胞器，主要由 RNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成(核糖體RNA稱為rRNA，蛋白質(zhì)稱r蛋白)。在真核細胞中(線粒體與 葉綠體的核糖體除外)，核糖體為80S，相對分子量為4800 X 103，由60S大亞基和40S小亞 基構(gòu)成。大亞基由28SrRNA、5. 8SrRNA、5SrRNA和49種r蛋白構(gòu)成，小亞基則由18SrRNA和 33種r蛋白構(gòu)成。核糖體會按照mRNA的指令由氨基酸高效且精確地合成多肽鏈。越來越多的證據(jù)表明，許多種r蛋白除組成核糖體、參與蛋白質(zhì)生物合成之外，還 具有其他功能，如參與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄加工、翻譯調(diào)控、DNA修復(fù)、耐藥的形成、自體翻譯、細胞凋 亡調(diào)控、以及正常細胞的惡性轉(zhuǎn)化及發(fā)育調(diào)控等(Wool I G. Trends. Biochem. Sci,1996, 21(5) 164-165 ；Clemens M J, Oncagene，2004，23 3180-3188 ；Stoneley M 等，Curr. Mol. Med，2003，3 :597-603)。陳宏等(國際病理科學(xué)與臨床雜志，2005，25 (5) :393_396)發(fā)現(xiàn)腫 瘤中核糖體蛋白可以調(diào)節(jié)癌基因和抑癌基因而參與轉(zhuǎn)錄、翻譯及凋亡等諸多方面。李沐陽 等(中國科學(xué)C，2002，32 (5) 405-411)發(fā)現(xiàn)大腸桿菌核糖體蛋白L24 (RPL24)突變體中， B半乳糖苷酶和谷光苷肽巰基轉(zhuǎn)移酶的活性分別下降至野生型菌株的1/4和1/2，并認為 RPL24與λ N的基因表達可能存在相關(guān)，RPL24在翻譯的起始和終止過程中以及抵抗病毒方 面起至Ij重要作用。Guo 等(Proceedings of the National Academy ofSciences, 2002,99 7786-7791)在研究一個抗低溫的基因CspA過程中發(fā)現(xiàn)，此基因能夠與核糖體蛋白60S相 互作用，并且能夠同上游的CBF/DREB1響應(yīng)因子相互作用。Robe等(Gene, 2003, 320 (27) 41-48)發(fā)現(xiàn)用RNA干擾沉默果蠅中的核糖體蛋白L14基因會引起體細胞的異常。但目前有 關(guān)核糖體和核糖體蛋白的研究主要集中在昆蟲、哺乳動物、真菌和細菌，植物方面尤其是水 稻方面的研究很少。水稻是世界上最重要的糧食作物之一，也是植物生長發(fā)育、逆境反應(yīng)等基礎(chǔ)研究 的模式植物。在水稻中，0sl0g0564300基因位于10號染色體，編碼136個氨基酸，該蛋白 類似大亞基r蛋白L27，屬于L27e家族，定義為一個L27e家族蛋白。r蛋白在不同物種之 間存在著高度的同源性。在大腸桿菌中，L27是一個核糖體大亞基中r蛋白，對于大亞基 的組裝有重要作用，它是大亞基單位上P(肽酰位)位點的組成成分，在細胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物 合成中發(fā)揮重要作用(Iwona K. ffower, TheJournal of Biological Chemistry, 273 (31) 19847-19852)。L27e家族蛋白作為核糖體大亞基的構(gòu)成成分，其表達能夠反映出細胞中蛋 白合成的情況，也能反映出細胞的生化合成活力，對研究生命活動具有指導(dǎo)意義。研究L27e 家族蛋白對揭示水稻蛋白質(zhì)合成機制和實際生產(chǎn)將具有重要作用。目前關(guān)于水稻中L27e 家族蛋白的研究很少，而且，目前對水稻L27e家族蛋白的抗體的研究仍為空白?？贵w技術(shù)是研究蛋白質(zhì)功能的有效技術(shù)?？梢酝ㄟ^制備一個蛋白的抗體來研究該蛋白的表達和功能。傳統(tǒng)的抗體制備方法是將抗原注入動物體內(nèi)，動物體內(nèi)B淋巴細胞針 對抗原產(chǎn)生抗體。由于抗原分子具有多種抗原決定簇(即抗原表位)，每一種決定簇可激活 相應(yīng)抗原受體的B淋巴細胞產(chǎn)生針對某一抗原決定簇的抗體。因此將抗原注入機體所產(chǎn)生 的抗體是針對多種抗原決定簇的混合抗體，故稱為多克隆抗體。也可以利用抗原決定簇直接免疫動物獲得多克隆抗體。所用抗原決定簇可以利用 軟件來預(yù)測，但有研究表明軟件預(yù)測抗原決定簇的錯誤概率較高(Chang HT, Liu CH, Pai Tff. Estimation and extraction ofB-cell linear epitopes predicted by mathematical morphologyapproaches. J Mol Recognit. 2008 Nov-Dec ；21 (6) :431_41)，而且軟件對全長 抗原的抗原決定簇預(yù)測存在著特異性問題，還需要實驗驗證。

發(fā)明內(nèi)容
為了更好地研究L27e家族蛋白，發(fā)明人利用ΒΕΡΙΤ0ΡΕ抗原分析預(yù)測軟件對水 稻0sl0g0564300基因(該基因的GenBank登錄號為NP001065410. 1)編碼的蛋白質(zhì)(水 稻L27e家族蛋白)進行抗原決定簇的預(yù)測，選出數(shù)條抗原決定簇峰值較高的片段，然后用 BLASTP對選出的數(shù)條片段在水稻蛋白質(zhì)庫中進行唯一性檢測，選取在水稻蛋白質(zhì)庫中唯一 存在的序列為目標序列，其選出的多肽序列為RFKTGKNRWFFTK(SEQID NO 3)，并用實驗證 明該表位具有良好的免疫原性和抗原特異性。具體地，本發(fā)明包括以下幾個方面本發(fā)明的一個方面涉及一種L27e家族蛋白的抗原表位，其由SEQID NO 3所示的 氨基酸序列組成。在本發(fā)明的一個實施方案中，為了增加與載體蛋白的交聯(lián)性，在上述抗原表位 的C末端添加了 一個半胱氨酸(半胱氨酸提供二硫鍵與載體蛋白交聯(lián))，得到序列為 RFKTGKNRffFFTKC(SEQ ID NO 4)的抗原表位變體。半胱氨酸也可以加在多肽的N末端，得到序列為CRFKTGKNRWFFTK(SEQ ID NO 5) 的抗原表位變體。因此本發(fā)明同時涉及序列為RFKTGKNRWFFTKC (SEQ ID NO 4)和 CRFKTGKNRffFFTK(SEQ ID NO 5)的抗原表位變體。本發(fā)明的抗原表位或其變體可以通過常規(guī)的肽合成技術(shù)化學(xué)合成得到，也可以在 適當(dāng)?shù)乃拗髦斜磉_得到；優(yōu)選的是化學(xué)合成方法。本發(fā)明的另一方面涉及一種組合物，其包含SEQ ID NO :3、SEQ IDNO 4或SEQ ID NO :5所示的L27e家族蛋白抗原表位或其變體，任選地，可以含有免疫佐劑，例如氫氧化鋁、 弗氏完全佐劑、或者弗氏不完全佐劑等。本發(fā)明的還一方面涉及一種L27e家族蛋白抗原表位-載體蛋白復(fù)合物；其中，所 述L27e家族蛋白抗原表位為本發(fā)明的L27e家族蛋白抗原表位或其變體，所述載體蛋白可 以例如是鑰孔戚血藍素(KLH)、BSA、或酪蛋白等。本發(fā)明的還一方面涉及一種抗L27e家族蛋白抗體，其能夠特異地結(jié)合SEQ ID N0 3、SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :5所示的抗原表位或其變體。所述抗L27e家族蛋白抗體可 以是單克隆抗體，也可以是多克隆抗體。本發(fā)明的抗L27e家族蛋白抗體可以得自各種常規(guī)制備多克隆抗體的動物，例如 山羊，兔子，大鼠，小鼠等。
對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，可以根據(jù)SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或SEQ ID NO: 5所示的L27e家族蛋白抗原表位或其變體制備單克隆抗體，具體操作可以參見本領(lǐng)域的技 術(shù)手冊，也可以參考文獻例如 Nature 1975 Kohler & Milstein Vol256，p495。本發(fā)明的還一方面涉及一種含有抗L27e家族蛋白多克隆抗體的多抗血清，其由 SEQ ID N0:3、SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :5所示的抗原表位或其變體免疫動物制得。本發(fā)明的還一方面涉及一種抗L27e家族蛋白多克隆抗體的制備方法，包括使用 SEQ ID N0:3、SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :5所示的抗原表位或其變體作為抗原免疫動物的 步驟，任選地，可以含有免疫佐劑，例如氫氧化鋁、弗氏完全佐劑、或者弗氏不完全佐劑等。 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述制備方法包括如下步驟1)將SEQ ID NO 4所示的L27e家族蛋白的抗原表位變體與KLH載體蛋白交聯(lián)作 為抗原免疫動物，得到的血樣進行離心，得到多抗血清；和2)純化步驟1)中的多抗血清，得到抗L27e家族蛋白多克隆抗體。多抗血清的效價可以根據(jù)抗體的不同性質(zhì)，采用環(huán)狀沉淀試驗、瓊脂雙向擴散、單 向免疫擴散、溶血實驗、凝集反應(yīng)、酶聯(lián)反應(yīng)吸附實驗和放射免疫分析等方法進行測定。在 本發(fā)明的一個實施方案中，采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)測定多抗血清效價。本發(fā)明的還一方面涉及一種組合物，其包含本發(fā)明的抗L27e家族蛋白抗體。本發(fā)明的還一方面涉及一種L27e家族蛋白檢測劑，其包含本發(fā)明的抗L27e家族 蛋白抗體。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述L27e家族蛋白為水稻L27e家族蛋白。本發(fā)明的還一方面涉及本發(fā)明的抗L27e家族蛋白抗體用于檢測L27e家族蛋白的 用途。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述L27e家族蛋白為水稻L27e家族蛋白。本發(fā)明的還一方面涉及一種檢測L27e家族蛋白的方法，所述方法包括使用本發(fā) 明的抗L27e家族蛋白抗體的步驟。具體地，包括如下步驟1)將待測樣品與本發(fā)明的抗L27e家族蛋白抗體孵育，使所述的抗L27e家族蛋白 抗體與待測樣品中的L27e家族蛋白特異性結(jié)合，由此形成免疫復(fù)合物；和2)檢測是否存在免疫復(fù)合物。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述L27e家族蛋白為水稻L27e家族蛋白。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述抗L27e家族蛋白抗體為多克隆抗體。上述檢測L27e家族蛋白的方法可以檢測L27e家族蛋白的有無、對其進行半定量 (例如western blot方法)；在有L27e家族蛋白標準品的情況下，還可以通過ELISA方法 對L27e家族蛋白進行定量檢測。因為L27e家族蛋白在不同物種間存在著高度同源性，本發(fā)明制備的L27e家 族蛋白多克隆抗體還可以用來檢測其它物種的L27e家族蛋白，這些物種包括擬南芥 (Pisum sativum)、玉米(zea)、高梁(Sorghum)、大豆(Glycinemax)、毛果楊(Populus trichocarpa)、油掠(Elaeis guineensis)、小立碗蘚(Physcomitrella)、葡萄(Vitis vinifera) >(Pisum sativum)、馬鈴暮(Solanumtuberosum) > A^ (Panax ginseng) >
(Ricinus communis) > ^ ^ W H (Medicago truncatula) ># ^ (Brugia
malayi)和琴葉鼠耳芥(Arabidopsis lyrata)等。利用本發(fā)明制備的抗L27e家族蛋白多克隆抗體，對水稻不同部位不同時期L27e 家族蛋白的表達情況進行檢測。檢測結(jié)果表明，本發(fā)明的多克隆抗體特異性較高，westernblot方法檢測條帶清晰；檢測結(jié)果顯示，水稻L27e家族蛋白在水稻不同生長時期的葉子中 有較高的表達，而在根、莖和穗子表達量很少。發(fā)明的有益效果1)本發(fā)明利用抗原表位預(yù)測軟件發(fā)現(xiàn)了水稻60S核糖體蛋白L27e家族蛋白的一 個新的抗原表位，其在水稻蛋白質(zhì)庫中具有序列唯一性。2)本發(fā)明利用抗原表位制備抗體，由于抗原表位片段小，可以采用化學(xué)方法合成， 而如果利用全蛋白制備抗體，則需要通過重組技術(shù)制備蛋白，過程繁瑣，而化學(xué)合成方法更 簡便、高效。3)本發(fā)明制備了針對該抗原表位的多克隆抗體，該抗體能夠與水稻60S核糖體蛋 白L27e家族蛋白結(jié)合，血清效價較高，特異性好。4)本發(fā)明制備的多克隆抗體能夠用于檢測水稻不同部位不同時期60S核糖體蛋 白L27e家族蛋白的表達情況，為該抗體檢測與60S核糖體蛋白L27e家族蛋白相關(guān)的其它 代謝途徑的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。


圖1水稻不同部位不同時期60S核糖體蛋白L27e家族蛋白的表達情況
具體實施例方式下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會 理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體 條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為 可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。實施例1 一種水稻60S核糖體蛋白L27e家族蛋白抗原表位的選取及合成水稻60S核糖體蛋白L27e家族蛋白對應(yīng)的的基因在NCBI中的基因號為 0sl0g0564300，該基因位于水稻10號染色體，其cDNA序列如下ATGGTGAAGTTTCTCAAGCCCGGGAAGGCGGTGATCCTGCTGCAGGGGAGGTTCGCGGGGCGGAAGGCG GTGATCGTGCGGGTGTTCGAGGAGGGCACCCGCGACCGCCCCTACGGCCACTGCCTCGTCGCCGGCCTCGCCAAGTA CCCCAAGAAGGTGATCCGCAAGGACTCGGCGAAGAAGACGGCGAAGAAGTCGCGCGTCAAGTGCTTCCTCAAGCTCG TCAACTTCACCCACCTCATGCCCACCCGCTACACCCTCGACGTCGACCTCAAGGAGGTCGCCGCGGGGCCCGACGCG CTCGCCACCAGGGACAAGAAGGTCGCCGCCTGCAAGTCCGCCAAGGCGCGCCTCGAGGACCGCTTCAAGACCGGCAA GAACAGGTGGTTCTTCACCAAGCTCCGCTTCTGA(SEQ ID NO :1)。其編碼的氨基酸序列如下MVKFLKPGKA VILLQGRFAG RKAVIVRVFE EGTRDRPYGH CLVAGLAKYPKKVIRKDSAK KTAKKSRVKC FLKLVNFTHL MPTRYTLDVD LKEVAAGPDALATRDKKVAA CKSAKARLED RFKTGKNRffF FTKLRF(SEQ ID NO :2)。1)用ΒΕΡΙΤ0ΡΕ軟件對水稻L27e家族蛋白基因編碼的蛋白質(zhì)(SEQID NO 2)進行 抗原決定簇的預(yù)測，選出數(shù)條抗原決定簇峰值較高的片段，然后用BLASTP對水稻蛋白質(zhì)庫 (http://rapdb. dna. affrc. go. jp/)進行唯一性檢測，選取在水稻蛋白質(zhì)庫中唯一存在的 序列為目標序列，其選出的多肽序列為RFKTGKNRffFFTK (SEQ ID NO 3)。
2)將1)中選出的多肽序列與大分子蛋白連接。為了實現(xiàn)與大分子蛋白的交聯(lián)，在目標序列RFKTGKNRWFFTK的C端加上半胱氨酸， 即要合成的序列為RFKTGKNRWFFTKC(SEQ ID NO :4)。用化學(xué)合成法合成該多肽序列。也可 以選擇在目標序列的N端加上半胱氨酸，即序列CRFKTGKNRWFFTK(SEQ ID NO 5)。將合成的多肽序列RFKTGKNRWFFTKC的C端與交聯(lián)載體蛋白-鑰孔戚血藍素(KLH) 交聯(lián)，得到抗原表位-KLH復(fù)合物。具體實施步驟是將5mg合成多肽加入7mgKLH中，邊震蕩邊緩慢加入新鮮配制的 3g/L戊二醛溶液1ml，室溫孵育2h。與pH8. 5的硼酸緩沖液透析24h，得到抗原表位-KLH 復(fù)合物。實施例2水稻L27e家族蛋白多克隆抗體的制備1)水稻L27e家族蛋白多抗血清的制備取l-2mg實施例1中制備得到的抗原表位-KLH復(fù)合物與等量的完全福氏佐劑充 分乳化，形成油包水，于6-8周新西蘭大白兔的頸部和背部皮下多點注射，每點約100 μ g。 2周后加強免疫，劑量同前，用不完全福氏佐劑充分乳化后，于兔背部皮下多點注射；以后 每2周加強免疫1次；同時設(shè)立直接用抗原表位免疫(即裸肽免疫)的對照。從第2次加 強免疫開始，每次免疫后7天，經(jīng)耳靜脈取血測定抗體的效價，經(jīng)過4次加強免疫后，抗原表 位-KLH復(fù)合物免疫效價為1 25600，裸肽免疫效價為1 12800，以上效價已符合要求， 遂于末次加強免疫7天后頸動脈放血，將收集的血3-4°C靜置3-4h，5000rpm離心lOmin，收 集血清。無菌分裝保存于-80°C備用。其中測定抗體效價的方法為在96孔板上，每孔加入50 μ g/ml抗原表位-KLH復(fù)合物100 μ 1，4°C過夜包被， 包被后進行洗滌。將免疫前兔血清和得到的兔免疫血清分別稀釋為1 100，1 500， 1 2500,1 3200,1 12800，1 25600，每孔各加 100 μ 1，37°C保溫 30min，洗滌。各加 入1 100稀釋的羊抗兔Ig酶酶結(jié)合物100 μ 1，37°C保溫30min，洗滌。每孔加入TMB (3，3， 5，5-四甲基聯(lián)苯胺)100 μ 1，20min后，加2mol/l的H2SO4終止反應(yīng)。使用酶標儀測定A49(1nm 值，高于免疫前血清10倍的為陽性，其中為陽性的血清最大稀釋倍數(shù)即為抗血清效價。2)抗水稻L27e家族蛋白多克隆抗體的純化將抗原表位RFKTGKNRWFFTKC多肽與溴化氰活化的的S印harose 4B偶聯(lián)，制備多 肽親和層析柱。將制備的多抗血清加入到以上制備的層析柱中，放置于4°C孵育過夜后，洗 脫抗體，即得到純化的水稻L27e家族蛋白多克隆抗體。實施例3水稻不同發(fā)育時期L27e家族蛋白的表達分析選取水稻93-11苗期地上部、分蘗期葉片、孕穗期劍葉、開花期劍葉、成熟期劍葉、 苗期地下部、分蘗期莖、開花期穗子、成熟期穗子(共9個部位)等不同發(fā)育階段和不同部 位的組織，提取總蛋白質(zhì)，用Bradford法測定各樣品總蛋白含量。其中，提取總蛋白的方法為用液氮研磨新鮮水稻(品種93_11，獲自國家雜交水 稻工程技術(shù)中心)各部位組織至粉末狀，分裝到預(yù)冷離心管中，每300 μ 1粉末加入800 μ 1 蛋白質(zhì)裂解液，迅速混勻并置于冰上，冰水混合物中孵育lOmin，約每2min震蕩混勻1次。 4°C，12000r/min離心15min。取上清，轉(zhuǎn)移到新的離心管中，-70°C保存。得到水稻各部位 組織總蛋白。
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取各蛋白樣品進行12% SDS-PAGE電泳，每個樣品上樣5 μ g。電泳結(jié)束后，小心 取膠，按膠的大小裁剪硝酸纖維素膜(NC膜)或PVDF膜和濾紙，并浸泡于電轉(zhuǎn)緩沖液中 15min, (PVDF膜需要用甲醇溶液泡l-2min)；安裝轉(zhuǎn)移裝置，4°C、70V轉(zhuǎn)膜2小時，轉(zhuǎn)移結(jié)束 后，取出NC膜，用麗春紅染色(麗春紅S (ponceauS) 2g/l、三氯乙酸30g/l、磺基水楊酸30g/ 1) l-2min，蒸餾水沖洗至條帶清晰可見，做好分子量標記；5%脫脂粉封閉4°C過夜或室溫1 小時；用0. 5% Tween20-PBS洗滌后加實施例2制備的純化的水稻L27e家族蛋白多克隆抗 體(1 500或1 1000稀釋)4°C過夜或37°C 1小時；用0. 5% Tween20-PBS洗3次，時 間分別為15min、5min和5min，加入辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG抗體(購自北京中 山生物公司)，室溫作用1小時；用0. 5% 0. 5% Tween20-PBS洗3次后，按ECLTM(Western blotting detectionreagents,購自 amersham pharmacia biotech)說明書方法進行化學(xué) 發(fā)光、X光片曝光、洗片。通過Western blotting可檢測到與預(yù)期的核糖體蛋白分子量(15. 5kDa)接近的 條帶(圖1)，該蛋白質(zhì)在水稻不同生長時期的葉子中有較高的表達，而在根、莖和穗子表達 量很少。同時可以看出，Westernblotting結(jié)果中的條帶清晰，主要條帶為一條，表明所用 抗原表位及其制備的多克隆抗體具有很好的特異性。盡管本發(fā)明的具體實施方式
已經(jīng)得到詳細的描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解。根 據(jù)已經(jīng)公開的所有教導(dǎo)，可以對那些細節(jié)進行各種修改和替換，這些改變均在本發(fā)明的保 護范圍之內(nèi)。本發(fā)明的全部范圍由所附權(quán)利要求及其任何等同物給出。
權(quán)利要求
一種L27e家族蛋白抗原表位或其變體，其由SEQ ID NO3或SEQ ID NO4或SEQ ID NO5所示的氨基酸序列組成。
2.一種組合物，其中含有權(quán)利要求1所述的抗原表位或其變體，任選地，還含有用于免 疫的佐劑。
3.—種L27e家族蛋白抗原表位-載體蛋白復(fù)合物，其中所述L27e家族蛋白抗原表位 為權(quán)利要求1所述的L27e家族蛋白抗原表位或其變體，所述載體蛋白選自鑰孔戚血藍素、 BSA、以及酪蛋白。
4.一種抗L27e家族蛋白抗體的制備方法，包括使用權(quán)利要求1的抗原表位或其變體或 者權(quán)利要求2的組合物或者權(quán)利要求3的復(fù)合物作為抗原免疫動物的步驟；任選地，所述抗 L27e家族蛋白抗體是單克隆抗體或者多克隆抗體；具體地，所述制備方法包括如下步驟1)將權(quán)利要求1所述的抗原表位或其變體或者權(quán)利要求2的組合物或者權(quán)利要求3的 復(fù)合物免疫動物得到的血樣進行離心，得到多抗血清；和2)純化步驟1)中的多抗血清，得到抗L27e家族蛋白多克隆抗體。
5.一種多抗血清，其由權(quán)利要求1的抗原表位或其變體或者權(quán)利要求2的組合物或者 權(quán)利要求3的復(fù)合物免疫動物制得。
6.一種抗L27e家族蛋白抗體，其能夠特異地結(jié)合權(quán)利要求1所述的抗原表位或其變 體，任選地，其為多克隆抗體或者單克隆抗體。
7.一種組合物，其包含權(quán)利要求6所述的抗L27e家族蛋白抗體。
8.—種L27e家族蛋白檢測劑，其包含權(quán)利要求6所述的抗L27e家族蛋白抗體；具體 地，所述L27e家族蛋白為水稻L27e家族蛋白。
9.權(quán)利要求6所述的抗L27e家族蛋白抗體用于檢測L27e家族蛋白的用途；具體地， 所述L27e家族蛋白為水稻L27e家族蛋白。
10.一種檢測L27e家族蛋白的方法，所述方法包括使用權(quán)利要求6所述的抗L27e家族 蛋白抗體的步驟；具體地，所述L27e家族蛋白為水稻L27e家族蛋白。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種L27e家族蛋白的抗原表位或其變體，其由SEQ IDNO3、SEQ ID NO4或SEQ ID NO5所示的氨基酸序列組成，以及含有該抗原表位或其變體的組合物。本發(fā)明還涉及一種抗L27e家族蛋白的多克隆抗體及其制備方法。本發(fā)明還涉及所述抗體用于檢測L27e家族蛋白的用途及方法。
文檔編號C07K14/47GK101948513SQ20101051251
公開日2011年1月19日 申請日期2010年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月8日
發(fā)明者蘭金蘋, 劉國振, 周寶津, 李啟沅, 李曉明 申請人:深圳華大基因科技有限公司