專利名稱：一種葫蘆巴堿的提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物提取領(lǐng)域，涉及一種胡蘆巴堿的提取工藝。
背景技術(shù)：
胡蘆巴堿(trigonelline，TRG)，分子式=C7H7NO2；分子量137. 14 ；分子結(jié)構(gòu)式
iafe胡蘆巴為豆科植物胡蘆巴Trigonella foenum-graecum L.的干燥成熟種子。具 有溫腎，祛寒，止痛的功用，性味苦，溫，歸腎經(jīng)。用于腎臟虛冷，小腹冷痛，小腸疝氣，寒濕腳 氣?，F(xiàn)代藥理研究表明，胡蘆巴具有抗糖尿病、降膽固醇及對急性化學(xué)性肝損傷的保 護作用。胡蘆巴堿為胡蘆巴中的主要成分，具有抗腫瘤作用，在12.5mg/kg水平上能使白 血病P-388小鼠聲明延長31%。對動植物的細胞和組織有促使停止生長的作用。同時可 治療某些皮膚病，例如牛皮癬等。目前對胡蘆巴的研究僅限于其胡蘆巴堿含量測定方法及 初步藥理研究，胡蘆巴藥材的提取方法研究較少，劉廣學(xué)等發(fā)表的“胡蘆巴藥材中胡蘆巴堿 的提取方法及其含量測定”文獻中，考察以水、甲醇、無水乙醇及三種比例的甲醇-水為溶 齊U，用超聲等方法的提取率，但考慮到大量甲醇對操作工人神經(jīng)系統(tǒng)和血液系統(tǒng)的毒性影 響，本發(fā)明人認為該方法不宜工業(yè)化。徐雅琴等發(fā)表的“超聲波法提取南瓜果肉中胡蘆巴堿 最佳工藝的研究”，用50%乙醇在600W條件下超聲提取15min，液料比為20ml/g，提取率較 低，僅359.6yg/g。且從南瓜中提取胡蘆巴堿成本較高，因南瓜粉中胡蘆巴堿含量較低，為 0. 1219 0. 4836mg/g(張英春，楊鑫，張華，等.高效液相色譜法測定南瓜粉中胡蘆巴堿的 含量·食品科學(xué).2008，29(1) :280-282)，約為胡蘆巴種子中胡蘆巴堿含量的1/10。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種胡蘆巴堿的提取工藝，本發(fā)明在浸泡過程同時采用超聲 波處理，利用氧化鋁柱對胡蘆巴堿吸附，使胡蘆巴堿的提取率大大增加。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種胡蘆巴堿的提取工藝，其特征在于包括以下步驟(1)將胡蘆巴種子粉碎，放在氨醇溶液或含水乙醇中混合浸泡并同時進行超聲波 處理，浸泡后的混合溶液加熱回流提取；(2)將提取液濃縮至小體積后加入等體積的石油醚萃取，分2-6次萃取，棄去萃取液；(3)將萃余液與2-5倍氧化鋁拌樣，烘干，通過氧化鋁柱層析，用異丙醇或乙醇溶 液洗脫，收集洗脫液，洗脫液減壓濃縮，干燥；(4)將干燥后的提取物用乙醇復(fù)溶，抽濾或離心，濾液或上清液減壓回收乙醇，干 燥即得胡蘆巴堿。步驟(1)所述粉碎設(shè)備是FWS350型風(fēng)選式微粉碎機、BFM-6超低溫超細高頻振動 式超微粉碎機或GZM型高頻共振研磨機。步驟(1)所述粉碎為原料粉碎粒度< 350目。步驟(1)使用的氨醇溶液濃度為5-25%，含水醇溶液濃度為35-95%，加入量為原 料按重量比計為1 3-1 16。步驟(1)所述浸泡時間為0. 5-5小時，使用的超聲波頻率為20_35kHz。步驟(1)中回流提取時提取時間為1-3小時，提取次數(shù)2-4次。步驟(2)中所述氧化鋁為100-200目的中性氧化鋁，所述氧化鋁柱為常壓短粗氧 化鋁柱，拌樣、攪拌均勻于40-60°C烘干粉碎，過150-200目篩后裝入層析柱。本發(fā)明的提取方法先將原料微粉碎或超微粉碎，可將原料的大多數(shù)細胞壁打破， 使細胞內(nèi)的有效成分充分暴露，提高了得率；在浸泡過程中用超聲波處理，直接影響藥材的 浸潤速度和程度，進而影響成分的提取效果，并縮短提取時間，溶出雜質(zhì)少，提高生產(chǎn)效率; 氧化鋁柱層析可以很好的分離純化；乙醇復(fù)溶可進一步除雜，從而使胡蘆巴堿的含量大幅 度增加。高效液相色譜法定量分析(參照趙懷清等發(fā)表的文獻“高效液相色譜法測定 胡蘆巴中胡蘆巴堿的含量”中的方法)采用L-7110型高效液相色譜儀(日本日立公 司)，L-7400型紫外檢測器(日本日立公司)，江申色譜工作站。色譜柱為Asahipak NH-P-50 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；流動相為乙腈-水(75 25)；流速 0. 8mL/min ；檢測波長 265nm ；柱溫室溫。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例1 取胡蘆巴藥材去雜，用BFM-6超低溫超細高頻振動式超微粉碎機粉碎，稱取10kg， 投入提取罐中，加入6倍量氨醇溶液浸泡同時進行25kHz超聲波處理，浸泡時間為45分鐘， 浸泡后的胡蘆巴藥材用回流提取法提取3次(6倍，3倍，3倍)，每次2小時，合并提取液， 濾除藥渣，濾液回收乙醇至15kg，用等體積的石油醚分4次萃取，棄去萃取液，將萃余液與3 倍量160-200目的氧化鋁混合拌樣，于40-60°C烘干粉碎，過150-200目篩后裝入層析柱，異 丙醇洗脫，TLC檢測，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮干燥，用乙醇復(fù)溶干燥提取物，抽濾，回 收乙醇，將濾出物于60°C真空干燥即得胡蘆巴堿56g，含量為87%。實施例2 取胡蘆巴藥材去雜，用FWS350型風(fēng)選式微粉碎機粉碎，稱取10kg，投入提取罐中， 加入5倍量氨醇溶液浸泡同時進行30kHz超聲波處理，浸泡時間為60分鐘，浸泡后的胡蘆 巴藥材用回流提取法提取3次(5倍，4倍，3倍)，每次3小時，合并提取液，濾除藥渣，濾液回收乙醇至15kg，用等體積的石油醚分5次萃取，棄去萃取液，將萃余液與4倍量160-200 目的氧化鋁混合拌樣，于40-60°C烘干粉碎，過150-200目篩后裝入層析柱，95%乙醇洗脫， TLC檢測，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮干燥，用乙醇復(fù)溶干燥提取物，離心，上清液回收 乙醇，于60°C真空干燥即得胡蘆巴堿59g，含量為84%。實施例3 取胡蘆巴藥材去雜，用GZM型高頻共振研磨機粉碎，稱取10kg，投入提取罐中，加 入4倍量90%乙醇溶液浸泡同時進行25kHz超聲波處理，浸泡時間為45分鐘，浸泡后的胡 蘆巴藥材用回流提取法提取3次(4倍，4倍，4倍)，每次4小時，合并提取液，濾除藥渣，濾液 回收乙醇至15kg，用等體積的石油醚分4次萃取，棄去萃取液，將萃余液與3倍量160-200 目的氧化鋁混合拌樣，于40-60°C烘干粉碎，過150-200目篩后裝入層析柱，異丙醇洗脫， TLC檢測，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮干燥，用乙醇復(fù)溶干燥提取物，離心，上清液回收 乙醇，于60°C真空干燥即得胡蘆巴堿54g，含量為86%。實施例4 取胡蘆巴藥材去雜，用FWS350型風(fēng)選式微粉碎機粉碎，稱取20kg，投入提取罐中， 加入10倍量氨醇溶液浸泡同時進行20kHz超聲波處理，浸泡時間為90分鐘，浸泡后的胡蘆 巴藥材用回流提取法提取3次(10倍，3倍，2倍)，每次2小時，合并提取液，濾除藥渣，濾液 回收乙醇至27kg，用等體積的石油醚分6次萃取，棄去萃取液，將萃余液與5倍量160-200 目的氧化鋁混合拌樣，于40-60°C烘干粉碎，過150-200目篩后裝入層析柱，異丙醇洗脫， TLC檢測，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮干燥，用乙醇復(fù)溶干燥提取物，抽濾，回收乙醇，將 濾出物于60°C真空干燥即得胡蘆巴堿121g，含量為82%。實施例5 取胡蘆巴藥材去雜，用BFM-6超低溫超細高頻振動式超微粉碎機粉碎，稱取20kg， 投入提取罐中，加入4倍量氨醇溶液浸泡同時進行35kHz超聲波處理，浸泡時間為45分鐘， 浸泡后的胡蘆巴藥材用回流提取法提取3次(4倍，3倍，3倍)，每次2小時，合并提取液， 濾除藥渣，濾液回收乙醇至25kg，用等體積的石油醚分4次萃取，棄去萃取液，將萃余液與3 倍量160-200目的氧化鋁混合拌樣，于40-60°C烘干粉碎，過150-200目篩后裝入層析柱，異 丙醇洗脫，TLC檢測，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮干燥，用乙醇復(fù)溶干燥提取物，離心，上 清液回收乙醇，于60°C真空干燥即得胡蘆巴堿112g，含量為83%。實施例6 取胡蘆巴藥材去雜，用GZM型高頻共振研磨機粉碎，稱取50kg，投入提取罐中，加 入6倍量氨醇溶液浸泡同時進行30kHz超聲波處理，浸泡時間為120分鐘，浸泡后的胡蘆 巴藥材用回流提取法提取3次(6倍，3倍，3倍)，每次4小時，合并提取液，濾除藥渣，濾液 回收乙醇至原體積的1/15，用等體積的石油醚分4次萃取，棄去萃取液，將萃余液與4倍量 160-200目的氧化鋁混合拌樣，于40-60°C烘干粉碎，過150-200目篩后裝入層析柱，異丙醇 洗脫，TLC檢測，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮干燥，用乙醇復(fù)溶干燥提取物，抽濾，回收乙 醇，將濾出物于60°C真空干燥即得胡蘆巴堿302g，含量為86%。
權(quán)利要求
一種胡蘆巴堿的提取工藝，其特征在于包括以下步驟(1)將胡蘆巴種子粉碎，放在氨醇溶液或含水乙醇中混合浸泡并同時進行超聲波處理，浸泡后的混合溶液加熱回流提?。?2)將提取液濃縮至小體積后加入等體積的石油醚萃取，分2 6次萃取，棄去萃取液；(3)將萃余液與2 5倍氧化鋁拌樣，烘干，通過氧化鋁柱層析，用異丙醇或乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，洗脫液減壓濃縮，干燥；(4)將干燥后的提取物用乙醇復(fù)溶，抽濾或離心，濾液或上清液減壓回收乙醇，干燥即得胡蘆巴堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胡蘆巴堿的提取工藝，其特征在于步驟(1)所述粉碎 設(shè)備是FWS350型風(fēng)選式微粉碎機、BFM-6超低溫超細高頻振動式超微粉碎機或GZM型高頻 共振研磨機。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胡蘆巴堿的提取工藝，其特征在于步驟(1)所述粉碎 為原料粉碎粒度< 350目。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胡蘆巴堿的提取工藝，其特征在于步驟(1)使用 的氨醇溶液濃度為5-25%，含水醇溶液濃度為35-95 %，加入量為原料按重量比計為 1:3-1: 16。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胡蘆巴堿的提取工藝，其特征在于步驟(1)所述浸泡 時間為0. 5-5小時，使用的超聲波頻率為20-35kHz。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胡蘆巴堿的提取工藝，其特征在于步驟(1)中回流提 取時提取時間為1-3小時，提取次數(shù)2-4次。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胡蘆巴堿的提取工藝，其特征在于步驟(2)中所述氧 化鋁為100-200目的中性氧化鋁，所述氧化鋁柱為常壓短粗氧化鋁柱，拌樣、攪拌均勻于 40-60°C烘干粉碎，過150-200目篩后裝入層析柱。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種葫蘆巴堿的提取工藝，工藝包括將原料粉碎，用氨醇溶液或含水乙醇經(jīng)浸漬、加熱回流提取，將提取液濃縮至小體積，石油醚萃取，棄去萃取液，萃余液上氧化鋁柱層析，以異丙醇或乙醇為洗脫劑洗脫，洗脫液濃縮干燥。該方法生產(chǎn)產(chǎn)品的雜質(zhì)含量少，有效成分得率高，且操作簡單便于掌握。
文檔編號C07D213/80GK101967121SQ201010210259
公開日2011年2月9日 申請日期2010年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月28日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司