專利名稱：定向于cd105的抗體及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對抗⑶105的靶向結(jié)合劑以及這種試劑的用途。更具體而言，本發(fā)明涉及定向于CD105的全人源單克隆抗體。所述的靶向結(jié)合劑可用于治療與CD105的活性和/或過量產(chǎn)生有關(guān)的疾病，并且可用作診斷工具。
背景技術(shù)：
⑶105，或者稱為內(nèi)皮因子，是在激活的血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的跨膜糖蛋白(Letamendia A,Lastres P,Botella LM,et al. J Biol Chem 1998;273:33011-9)。CD105也已經(jīng)報道腫瘤血管上高度表達(dá)，并且在有限數(shù)量的其他細(xì)胞類型上表達(dá)較弱，這些細(xì)胞包括巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和合胞體滋養(yǎng)層(Fonsatti E et al.，Oncogene 2003 :22 6557-6563)。⑶105由兩種均為95kDa的二硫鍵亞基構(gòu)成，從而形成180_kDa同型二聚體蛋白(Barbara NP, Wrana JL, Letarte M.J Biol Chem 1999;274:584-94·)。CD105 基因長度為 40kb，并且定位在人染色體 9q34 上(Fonsatti E, Sigalotti L, Arslan P, Altomonte M,Maio M. Curr Cancer Drug Targets 2003 ；3 :427-32 ；Rius C, Smith JD, Almendro N, etal. Blood 1998;92:4677-90·)。mRNA轉(zhuǎn)錄物長度為3. 4kb，并且由14個外顯子構(gòu)成。外顯子1至12編碼胞外結(jié)構(gòu)域，而跨膜結(jié)構(gòu)域由外顯子13編碼，并且胞漿結(jié)構(gòu)域由外顯子14編碼。已經(jīng)鑒定⑶105的兩種不同亞型，表示為長型(L-⑶105/內(nèi)皮因子)和短型(S-⑶105/內(nèi)皮因子)。上述亞型在細(xì)胞質(zhì)尾端內(nèi)的氨基酸組成不同。更具體而言，在胞漿結(jié)構(gòu)域中L亞型占主導(dǎo)地位并且含有47個殘基，而S亞型僅含14個氨基酸(Gougos A，Letarte M. JBiol Chem 1990 ；265 :8361-8364 ；Lastres P et al. Biochem J, 1990 ； 301 :765-768) ⑶105是轉(zhuǎn)化生長因子- β (TGF-β)受體的共受體；其和TGF-β的信號傳導(dǎo)類型I與類型II受體形成異二聚體，并且可調(diào)制對于TGF-β的應(yīng)答(Yamashita H et al.，J Biol Chem, 1994 ；269 :1995-2001 ；Guerrero-Esteo M et al.，J Biol Chem 2002 ；277 四197-四209)。TGF-β是細(xì)胞因子，該細(xì)胞因子是包括激活素和骨形成蛋白(BMP)的較大超家族的一部分(Piek E et al.，F(xiàn)ASEB J，1999 ；13 :2105-2124)。TGF-β 超家族的成員通過類型I與II絲氨酸/蘇氨酸激酶受體和它們下游核效應(yīng)子(稱為Smads)來介導(dǎo)細(xì)胞應(yīng)答(Heldin C-H et al.，Nature，1997 ;390 :465-471)。在內(nèi)皮細(xì)胞中，TGF-β 已經(jīng)顯示激活類型I受體的兩種途徑激活素受體樣激酶ALK5和ALKl。ALKl的激活促進(jìn)Smadl/5磷酸化，并且刺激細(xì)胞增殖和遷移。相反，ALK5的激活誘導(dǎo)Smad2/3磷酸化并且抑制細(xì)胞增殖和遷移(Goumans M-J et al.，EMBO J 2002 ；21 :1743-1753)。因此，在靜態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞中，ALK5是TGF-β信號傳導(dǎo)的主要調(diào)制物。然而，在血管生成的過程中，ALKl優(yōu)選被激活(Lebrin F,Deckers Μ,Bertolino P,ten Dijke P.Cardiovasc Res 2005;65:599-608)。CD105的突變導(dǎo)致I型遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥(或Osler-Rendu-Weber綜合征 1) (Bobik A. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2006;26:1712-20·)。該綜合征是遺傳性常染色體顯性疾病，并且表征為多系統(tǒng)血管發(fā)育不良、復(fù)發(fā)性鼻出血、皮膚粘膜毛細(xì)血管擴(kuò)張以及肺、腦、肝和胃腸道的動靜脈畸形(Bertolino P，Deckers Μ, LebrinF, ten Dijke P. Chest 2005 ； 128 :585-90S ；Bobik A. Arterioscler Thromb Vasc Biol2006 ；26 :1712-20)。已經(jīng)描述了疾病的兩種基因型遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥1，表征為⑶105中的突變；以及遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥2，表征為ALKl中的突變(BobikA. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2006 ；26 :1712-20 ；Lebrin F, Deckers Μ, BertolinoP, ten Dijke P. Cardiovasc Res 2005;65:599-608)。在具有用于 CD105 (CD105+勺的雜合基因型遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥的轉(zhuǎn)基因嚙齒動物模型中，相比于野生型動物，小鼠表現(xiàn)出無規(guī)則、擴(kuò)大和薄壁的血管，同時和血管平滑肌細(xì)胞相關(guān)性較差。令人感興趣地，CD105雜合小鼠存活至成年期，而顯示出無效突變純合(CD105+)的小鼠無法發(fā)育，從而導(dǎo)致由于卵黃囊血管缺陷、心臟瓣膜異常和不規(guī)則的心室發(fā)育而在第11. 5天胚胎致死(Arthur HM, Ure J, Smith AJ, et al. ，Dev Biol 2000 ；217 :42-53 ；Li DY, Sorensen LK,Brooke BS, et al. Science 1999 ；284 :1534-7) 因此，上述發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了 CD105 在血管內(nèi)平衡中的重要性。近年來，⑶105也已經(jīng)暗指調(diào)制內(nèi)皮細(xì)胞遷移和細(xì)胞骨架的形成(Conley BAet al.，J Biol Chem 2004 ；279 :27440-27449 ；Sanz-Rodriguez F et al.，J Biol Chem,
2004；279 :32858-32868)。⑶105表達(dá)已經(jīng)報道和癌癥患者的較差預(yù)后有關(guān)聯(lián)。更具體地，⑶105表達(dá)相關(guān)于乳腺癌、肺癌和結(jié)腸直腸癌患者的較差總存活率(Kumar S et al.，Cancer Res 1999 ；59 :856-861 ；Tanaka F et al.，Clin Cancer Res 2001 ；7 :3410-3415 ；Li C et al. ,Br JCancer 2003 ；88 :1424-1431)。此外，如上所述，在胃腸道、乳房、前列腺以及頭頸部惡性腫瘤中，CD105表達(dá)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移病灶的存在有關(guān)聯(lián)(Ding S，Li C，Lin S，et al. Hum Pathol2006 ；37 :861-6 ；Saad RS, El-Gohary Y, Memari Ε, Liu YL, Silverman JF. Hum Pathol
2005；36 :955-61 ；Saad RS,Liu YL,Nathan G,Celebrezze J,Medich D,Silverman J F. ModPathol 2004 ；17 :197-203 ；Li C, Guo B, Wilson PB, et al. Int J Cancer 2000 ；89 :122-6 ；Yang LY,Lu WQ,Huang Gff,ffang W. BMC Cancer 2006 ；6 :110 ；El-Gohary YM,Silverman JF,Olson PR，et al. Am J Clin Pathol 2007 ；127 :572-9 ；Chien CY,Su CY,Hwang CF,ChuangHC, Chen CM, Huang CC. J Surg Oncol 2006 ；94 :413-7)。近年來，已經(jīng)報道了增加⑶105表達(dá)水平具有下列VEGF途徑的抑制。在胰腺癌移植瘤模型中，CD105轉(zhuǎn)錄水平的上調(diào)為用抗-VEGF中和抗體處理的小鼠中的水平的2倍多(Bockhorn M et al. ,Clin Cancer Res. 2003 ;9 :4221-4226)。在膀胱癌移植瘤模型中，通過免疫組織化學(xué)法測定的CD105水平在用抗-VEGF中和抗體處理的小鼠的腫瘤核心內(nèi)提高(Davis D et al.，Cancer Res. 2004；64 :4601-4610)。另外，⑶105表達(dá)通過組織缺氧而增強(qiáng)，并且已經(jīng)報道保護(hù)低氧細(xì)胞避免細(xì)胞凋亡；在缺氧負(fù)荷下抑制CD105增強(qiáng)的細(xì)胞凋亡(Li C，Issa R，Kumar P, et al. J Cell Sci2003 ；116 :2677-85.) CD105mRNA和啟動子活性在缺氧條件下也顯著地提高(Li C，IssaR,Kumar P，et al. J Cell Sci 2003;116:2677-85.)。因此，缺氧被認(rèn)為是在血管內(nèi)皮細(xì)胞中⑶105基因表達(dá)的有效刺激。因此，需要開發(fā)新的抑制⑶105信號傳導(dǎo)的方式。發(fā)明概述本發(fā)明涉及特異性地與⑶105結(jié)合并抑制⑶105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的實(shí)施方案涉及特異性地與CD105結(jié)合并抑制CD105依賴性TGF-β信號傳導(dǎo)的靶向結(jié)合劑。例如，本發(fā)明的⑶105結(jié)合劑抑制⑶105配體(例如TGF-β 136 -0 3、激活素-八、ΒΜΡ-2和/或ΒΜΡ-7)與TGF-β 1受體絡(luò)合物的⑶105部分的結(jié)合。本發(fā)明的實(shí)施方案涉及特異性地與⑶105結(jié)合并抑制⑶105配體與⑶105結(jié)合的靶向結(jié)合劑。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑特異性地與CD105結(jié)合并抑制CD105配體(TGF-β 1、TGF-β 3、激活素-A、ΒΜΡ-2和/或ΒΜΡ-7)與CD105結(jié)合。在一個實(shí)施方案中，與缺少靶向結(jié)合劑的條件下所發(fā)生的結(jié)合情況相比，所述的靶向結(jié)合劑抑制了至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%的⑶105配體與⑶105的結(jié)合。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于5納摩爾(ηΜ)的結(jié)合親和性(Kd)與⑶105結(jié)合。在其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于4ηΜ、3ηΜ、2ηΜ或InM的Kd進(jìn)行結(jié)合。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于950兆摩爾(ρΜ)的Kd與CD105結(jié)合。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于900ρΜ的Kd與⑶105結(jié)合。在其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于800ρΜ、700ρΜ或600ρΜ的Kd進(jìn)行結(jié)合。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于500ρΜ的Kd與CD105結(jié)合。在其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于400ρΜ的Kd進(jìn)行結(jié)合。在其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于300ρΜ的Kd進(jìn)行結(jié)合。在一些其他的實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于200ρΜ的Kd進(jìn)行結(jié)合。在一些其他的實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于IOOpM的Kd進(jìn)行結(jié)合。在一個特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可以以低于IOpM的親和性Kd與人源CD105相結(jié)合。在另一個特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可以以低于IpM的親和性Kd與人源CD105相結(jié)合?？梢圆捎帽疚乃龅姆椒ɑ虮绢I(lǐng)域的任一技術(shù)人員已知的方法來估測 Kd(例如 BIAcore 測試，ELISA，F(xiàn)ACS) (Biacore International AB,Uppsala, Sweden)。本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體的結(jié)合性質(zhì)還可以通過參照解離速率或結(jié)合速率(分別為k。ff* k。n)來測定。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以具有至少IO4M4s—1、至少5X104M-1 s-1、至少 IO5IVr1S-1、至少 ZXlO5IVr1S-1、至少 5X105IVr1 s-1、至少 106IVr1 s-1、至少 5X106IVr1 s-1、至少IOW1、至少5X107M-1 S-1、或者至少KfM-V1的k。n速率(抗體(Ab) +抗原(Ag)kon — Ab-Ag)。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以具有低于切川、—1、低于KT1S入低于 δχΙΟ—Υ1、低于 ΙΟ、—1、低于 δχ ο—、—1、低于 IOW低于 δχΙΟΥ1、低于 ΙΟΛΓ1、低于δχΙΟ、-1、低于ΙΟ、—1、低于δχΙΟΥ1、低于ΙΟ、—1、低于δχΙΟ、—1、低于ΙΟ、—1、低于δΚ1、低于 ΙΟ、—1、低于 δχΙΟ—Υ1、低于 ΙΟ、—1、或者低于 IO-10S-1 的 k。ff 速率((Ab-Ag)koff—抗體(Ab) +抗原(Ag))。在一些實(shí)例中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對得自其他物種的其他CD105蛋白質(zhì)具有交叉反應(yīng)性。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑(例如4. 120，6B1，9H10，10C9，4D4，11H2，4. 37，6B10，3C1和6A6)對獼猴⑶105具有交叉反應(yīng)性。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對小鼠CD105(，例如6B1)具有交叉反應(yīng)性。
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本發(fā)明的靶向結(jié)合劑還可具有抗增殖活性。在特定實(shí)例中，本發(fā)明的抗體可使增殖抑制至少 5%，6%，7%，8%，9%，10%，11%，12% 13%，14%，15%，20%，25%，30%，40%, 50%,60%, 70%,80%,90%或更多。在一個實(shí)施方案中，當(dāng)抗體濃度為50 μ g/ml時，本發(fā)明的抗體可使HUVEC細(xì)胞的增殖抑制在2-30%，4-25%或8-20%的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可調(diào)制血管形成。在一個例子中，本發(fā)明的抗體可抑制血管增長和/或分叉數(shù)量。在一個特定實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體可使血管增長抑制至少 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%,40%, 50%,60%, 70%,80%,90%或更多。例如，在實(shí)施例6中所述的全細(xì)胞圖像分析法中，抗體6B10可使血管增長抑制至少20%例如20-30%，并且可使分叉數(shù)量抑制至少40%例如40-60%。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體可調(diào)制細(xì)胞的肌動蛋白細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)。在一個特定實(shí)施方案中，3C. 1，6B1，6B10，10C9，4. 120或4. 37的靶向抗體可因此內(nèi)皮細(xì)胞的肌動蛋白細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的顯著調(diào)制。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑干擾TGFii信號傳導(dǎo)。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑(例如4D4，6A6，6B10，9H10，4. 120或4. 37)介導(dǎo)pSMAD2
磷酸化。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑交叉競爭SN6抗體，例如6A6，6B10，9H10或 3C1。在一些實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑可治療和血管生成有關(guān)的病癥。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑抑制哺乳動物中腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移。特別地，靶向結(jié)合劑可用于治療實(shí)體瘤。靶向結(jié)合劑可聯(lián)合使用其他抗癌療法例如化療方案，或單獨(dú)抑制腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移。當(dāng)用作單獨(dú)療法時，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可于其他療法例如抗VEGF療法都無效的患者。在另一實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑可治療眼部疾病，例如糖尿病視網(wǎng)膜病和新生血管性黃斑變性。在又一實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑可用于治療慢性炎癥性疾病，例如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、哮喘、Crohn’ s疾病、潰瘍性結(jié)腸炎和炎癥性腸病。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為抗體。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為IgGl、IgG2、IgG3或IgG4同種型的全人源單克隆抗體。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為IgG2同種型的全人源單克隆抗體。與其他同種型相比，所述的IgG2同種型具有降低的引發(fā)效應(yīng)器功能的潛力，這可以使得毒性降低。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為IgGl同種型的全人源單克隆抗體。與其他同種型相比，所述的IgGl同種型具有升高的引發(fā)ADCC和/或CDC的潛力，這可以使得效力得到改善。與其他同種型(例如IgG4)相比，IgGl同種型具有改善的穩(wěn)定性，這可以使得生物利用率得到改善，或者使制造的方便程度得到改善或者得到更長的半衰期。在一個實(shí)施方案中，IgGl同種型的全人源單克隆抗體為z、za或f同種異型。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，特異性結(jié)合CD105的靶向結(jié)合劑可表現(xiàn)出一種或多種以下所述的性質(zhì)，包括以小于InM的Kd與人源⑶105相結(jié)合；使HUVEC細(xì)胞的細(xì)胞增殖的抑制大于5%，例如5_20% ；
增強(qiáng)SMAD2磷酸化；表現(xiàn)為抗血管原活性；以及表現(xiàn)為ADCC活性。另一個實(shí)施方案為特異性地與⑶105結(jié)合并包含以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列包含表2所示的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)的序列。本發(fā)明的實(shí)施方案包含具有以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列包含如表2所示，得自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的⑶R1、⑶R2或⑶R3序列中的任何一者。另一個實(shí)施方案為特異性地與⑶105結(jié)合并包含以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列包含表2所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR序列中的兩個。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表2所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR1、CDR2和CDR3序列。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表2所示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR序列中的一者。本發(fā)明的實(shí)施方案包含具有以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列包含表2所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR1、CDR2或CDR3序列中的任何一者。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表2所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR序列中的兩個。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表2所示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR1、CDR2和CDR3序列。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以具有這樣的序列，該序列包含表2所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列以及表2所示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為抗體。在某些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體。在某些其他的實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體的結(jié)合片段。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包括(a) SEQ ID NO 2 的 VH CDRl，其具有與 SEQ ID NO 2 的 VH CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 2的VH⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(b)SEQ ID NO 2 的 VH CDR2，其具有與 SEQ ID NO 2 的 VH CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 2的VH⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(c)SEQ ID NO 2 的 VH CDR3，其具有與 SEQ ID NO 2 的 VH CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 2的VH⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(d)SEQ ID NO 4 的 VL CDRl，其具有與 SEQ ID NO 4 的 VL CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 4的VL⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(e)SEQ ID NO 4 的 VL CDR2，其具有與 SEQ ID NO 4 的 VL CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 4的VL⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID NO 4 的 VL CDR3，其具有與 SEQ ID NO 4 的 VL CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 4的VL⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包括(a) SEQ ID NO :26 的 VH CDRl，其具有與 SEQ ID NO 26 的 VH CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 26的VH⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(b)SEQ ID NO :26 的 VH CDR2，其具有與 SEQ ID NO 26 的 VH CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 26的VH⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(c)SEQ ID NO 26 的 VH CDR3，其具有與 SEQ ID NO 26 的 VH CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 26的VH⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(d)SEQ ID NO :28 的 VL CDRl，其具有與 SEQ ID NO 28 的 VL CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 28的VL⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(e)SEQ ID NO :28 的 VL CDR2，其具有與 SEQ ID NO 28 的 VL CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 28的VL⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID NO :28 的 VL CDR3，其具有與 SEQ ID NO 28 的 VL CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 28的VL⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代。在又一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包括(a) SEQ ID NO :30 的 VH CDRl，其具有與 SEQ ID NO 30 的 VH CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 30的VH⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(b)SEQ ID NO :30 的 VH CDR2，其具有與 SEQ ID NO 30 的 VH CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 30的VH⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(c)SEQ ID NO 30 的 VH CDR3，其具有與 SEQ ID NO 30 的 VH CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 30的VH⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(d)SEQ ID NO :32 的 VL CDRl，其具有與 SEQ ID NO 32 的 VL CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 32的VL⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(e)SEQ ID NO :32 的 VL CDR2，其具有與 SEQ ID NO 32 的 VL CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 32的VL⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID NO :32 的 VL CDR3，其具有與 SEQ ID NO 32 的 VL CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 32的VL⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑可以包含這樣的序列，該序列包含由命名為Mab4. 120VH、Mab4. 37VH或Mab6B10VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的可變重鏈序列的CDR1、CDR2或CDR3中的任何一者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American type culture collection(ATCC))中，編號分別為 2008 年 9 月 17 日的PTA-9514、PTA-9511或PTA-9510。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑可以包含這樣的序列，該序列包含由命名為Mab4. 120VL、Mab4. 37VL或Mab6B10VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的可變輕鏈序列的CDR1、CDR2或CDR3中的任何一者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號分別為2008年9月17日的PTA-9513、PTA-9512或PTA-9499。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 120VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9514。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 120VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9514 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 120VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9513。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 120VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9514。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變輕鏈氨基酸序列，該可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 120VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9514。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 120VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9514 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 120VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9513。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 37VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9511。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 37VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9511 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 37VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9512。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 37VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9511。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變輕鏈氨基酸序列，該可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 37VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9512。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 37VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9511 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4. 37VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9512。
12
在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6B10VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9510。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6B10VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9510 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6B10VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9499。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6B10VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9510。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變輕鏈氨基酸序列，該可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6B10VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9499。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6B10VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9510 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6B10VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9499。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab4. 120VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9514。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab4. 37VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9511。 在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab6B10VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9510。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab4. 120VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9513。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab4. 37VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中
13心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9512。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab6BIOVL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9499。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab4. 120VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9514，以及由命名為Mab4. 120VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9513。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab4. 37VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9512 ；以及由命名為Mab4. 37VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9511。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab6BIOVH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9510，以及由命名為Mab6B10VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9499。應(yīng)該注意，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以容易地完成⑶R的測定。例如參見Kabatet al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIHPublication 91-3242，Bethesda MD(1991)，vols. 1-3。Kabat 提供了得自多個物種的同種型抗體的免疫球蛋白鏈的多個序列比對。根據(jù)單一的編號系統(tǒng)(Kabat編號系統(tǒng))對比對的序列進(jìn)行編號。Kabat序列從1991的出版物開始更新，并且可以用作電子序列數(shù)據(jù)庫(最近的可下載的版本1997)?？梢愿鶕?jù)Kabat通過與Kabat參照序列進(jìn)行比對來對任何免疫球蛋白序列進(jìn)行編碼。因此，Kabat編碼系統(tǒng)提供了用于編碼免疫球蛋白鏈的統(tǒng)一的系統(tǒng)。在一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有表2所示重鏈序列中的任何一者的序列。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有抗體4. 120，4. 37和6B10的重鏈序列中的任何一者的序列。輕鏈混雜(promiscuity)在本領(lǐng)域中是良好建立的，因此包含以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體可以進(jìn)一步包含表2中所示的；或者抗體4. 120,4. 37和6B10的；或者本文中所公開的另一種抗體的輕鏈序列中的任何一者，其中所述的序列包含抗體4. 120,4. 37和6B10的或者本文中所公開的另一種抗體的重鏈序列中的任何一者。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有表2所示的輕鏈序列中的任何一者的序列。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有抗體4. 120，4. 37和6B10輕鏈序列中的任何一者。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑是選自4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1和6A6中的單克隆抗體。在一個實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑包含全人源單克隆抗體4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1 和 6A6 中的一種或多種。在某些實(shí)施方
案中，靶向結(jié)合劑是單克隆抗體4. 120。在某些其他實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑是單克隆抗體4.37。在某些其他實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑是單克隆抗體6B10。在一個實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自表2中所示序列中的任何一者的重鏈CDRl、CDR2和CDR3。在一個實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自表2中所示序列中的任何一者的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3。在一個實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自抗體4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1 和 6A6 的 CDR 中的任何一者的重鏈 CDRl、CDR2和CDR3。在一個實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自抗體 4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1 和 6A6 的 CDR 中的任何一者的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體4. 120，4. 37或6B10中的任何一者的⑶R1、⑶R2或⑶R3中的任何一者。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體4. 120,4. 37或6B10中的任何一者的⑶R1、⑶R2或CDR3中的任何一者。在一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體4. 120，4. 37或6B10的⑶R1、⑶R2或⑶R3。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體4. 120，4. 37或6B10的⑶R1、⑶R2或⑶R3。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體4. 120,4. 37或6B10的CDR1、CDR2或CDR3 ；以及表2中所示的全人源單克隆抗體4. 120，4. 37或6B10的⑶R1、⑶R2或⑶R3。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體4. 120的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列和表2中所示的全人源單克隆抗體4. 120的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體4. 37的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列和表2中所示的全人源單克隆抗體4. 37的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體6B10的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列和表2中所示的全人源單克隆抗體6B10的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案為包含以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列具有跨越表2中所示序列的任何一者的構(gòu)架區(qū)和⑶R (具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至CDR3)的臨近序列。在一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有跨越表2中所示的單克隆抗體4. 120，4. 37或6B10序列的任何一者的構(gòu)架區(qū)和CDR(具體而言為FRl至FR4、或者CDRl至CDR3)的臨近序列。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ IDNO. :2序列的重鏈多肽。在一個實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :4序列的輕鏈多肽。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。一個實(shí)施方案提供靶向結(jié)合劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分，其中所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. 序列的重鏈多肽。在一個實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. 序列的輕鏈多肽。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ IDNO. :30序列的重鏈多肽。在另一個實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :32的輕鏈多肽。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在一個實(shí)施方案中，在所公開的CDR、或者重鏈或輕鏈框架序列中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含多達(dá)20、16、10、9或更少(例如1、2、3、4或5個)的氨基酸添加、取代、刪除和/或插入。這種修飾可以潛在地在CDR和/或框架序列范圍內(nèi)的任何殘基處形成。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含本文所公開的CDR的變體或衍生物、跨越構(gòu)架區(qū)和⑶R的臨近序列(具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至⑶R3)、本文所公開的輕鏈或重鏈序列、或者本文所公開的抗體。變體包含這樣的靶向結(jié)合劑或抗體，該靶向結(jié)合劑或抗體具有在表2中所示的⑶R1、⑶R2或⑶R3的任何一者中具有多達(dá)20、16、10、9或更少(例如1、2、3、4、5或6個)的氨基酸添加、取代(例如保守氨基酸取代)、刪除和/或插入的序列；跨越表2中所示的構(gòu)架區(qū)和⑶R(具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至CDR3)的臨近序列；本文所公開的輕鏈或重鏈序列；或者本文所公開的單克隆抗體。變體包含這樣的靶向結(jié)合劑或抗體，該靶向結(jié)合劑或抗體具有表2中所示的CDR1、CDR2或CDR3中的任何一者的至少大約60、70、80、85、90、95、98或大約99%氨基酸序列一致性的序列；跨越表2中所示的構(gòu)架區(qū)和CDR(具體而言為FRl至FR4、或者CDRl至CDR3)的臨近序列；本文所公開的輕鏈或重鏈序列；或者本文所公開的單克隆抗體。兩個氨基酸序列的百分率一致性可以通過本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的任何方法來測定，包括但不限于成對的蛋白質(zhì)比對。在一個實(shí)施方案中，變體包含在CDR序列中或者在本文所公開的輕鏈或重鏈多肽中的變化，所述的變化是天然存在的，或者采用重組DNA技術(shù)或誘變技術(shù)對天然序列進(jìn)行體外基因工程處理而誘導(dǎo)得到的。天然存在的變體包括在針對外源抗原產(chǎn)生抗體的過程中相對于種系核苷酸序列而在體內(nèi)產(chǎn)生的那些。在一個實(shí)施方案中，所述的衍生物可以為異種抗體，其為其中兩個或多個抗體被連接到一起而形成的抗體。衍生物包括經(jīng)過化學(xué)修飾的抗體。實(shí)例包括一種或多種聚合物形成的共價連接物，例如水溶性的聚合物，N-連接或0-連接的碳水化合物，糖，磷酸酯和/或其他此類分子。所述的衍生物按照不同于天然存在的或起始抗體的方式進(jìn)行修飾(按照所附分子的種類或位置)。衍生物還包含刪除天然存在于所述抗體上的一個或多個化學(xué)基團(tuán)。在一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為雙特異性抗體。雙特異性抗體為對至少兩個不同的抗原決定部位具有結(jié)合特異性的抗體。用于制備雙特異性抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。(例如參見，Millstein et al, Nature, 305 :537-539(1983) ；Traunecker et al,EMBO J, 10 :3655-3659(1991) ；Suresh et al, Methods in Enzymology,121 :210(1986)；
16Kostelny et al, J. Immunol,148(5) :1547-1553(1992) ；Hollinger et al, Proc.NatlAcad. Sci. USA, 90 :6444-6448 (1993) ；Gruber et al, J. Immunol, 152 :5368(1994)；美國專利 No. 4，474，893 ；4，714，681 ；4，925，648 ；5，573，920 ；5，601，81 ；95，731，168 ；4，676，980 ；和 4,676,980，WO 94/04690 ；WO 91/00360 ；WO 92/200373；WO 93/17715 ；WO 92/08802 ；和EP 03089)。在一個例子中，本發(fā)明的雙特異性抗體是對于至少兩個不同CD105抗原決定部位具有結(jié)合特異性的抗體。由于本發(fā)明的多種CD105靶向結(jié)合劑具有不同的抗原決定部位或者具有部分或重疊的抗原決定部位，因此涵蓋本發(fā)明的雙特異性抗體可包括具有部分或重疊的抗原決定部位的⑶105靶向結(jié)合劑的任意組合。例如，6A6和6B10具有與4D4和10C9不同的抗原決定部位。在一個例子中，雙特異性抗體6A6或6B10的可變或高變區(qū)以及4D4或10C9的可變或高變區(qū)。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有SEQ ID NO. 26的序列。在某些實(shí)施方案中，SEQ ID NO. J6包含表5的各行中所示的種系和非種系殘基的組合中的任何一者。在一些實(shí)施方案中，SEQ ID NO. J6包含表5中所示的種系殘基的任何一者、任何二者、或三者或者所有三者。在某些實(shí)施方案中，SEQ ID NO. :2包含表5的各行所示的種系和非種系殘基的獨(dú)特組合中的任何一者。在其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體衍生自具有VH3-33、D6-13和JH6結(jié)構(gòu)域的種系序列，其中一個或多個殘基已經(jīng)突變，從而在所述位置處產(chǎn)生相應(yīng)的種系殘基。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案為與本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體競爭性地結(jié)合CD105的靶向結(jié)合劑或抗體。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，存在有與本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體競爭性地結(jié)合CD105的抗體。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體與全人源單克隆抗體 4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1 或 6A6 的任何一者競爭性地結(jié)合⑶105?！案偁帯笔侵杆龅陌邢蚪Y(jié)合劑或抗體與全人源單克隆抗體4. 120，9H10，10C9，4D4,11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1或6A6中的任何一者競爭性地結(jié)合CD105,即，競爭是非單向性的。本發(fā)明的實(shí)施方案包含與全人源單克隆抗體4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1或6A6中的任何一者交叉競爭以結(jié)合⑶105的靶向結(jié)合劑或抗體?！敖徊娓偁帯笔侵概c全人源單克隆抗體 4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1 或 6A6 中的任何一者競爭性地結(jié)合CD105的靶向結(jié)合劑或抗體，反之，S卩，競爭是指雙向性的。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案為競爭性地結(jié)合CD105的靶向結(jié)合劑或抗體。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，存在有與本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體交叉競爭性地結(jié)合CD105的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案為與本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體相同的CD105上的抗原決定部位相結(jié)合的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的實(shí)施方案還包括與全人源單克隆抗體4. 120,9H10,10C9,4D4,11H2,6B1,4. 37，6B10，3C1 或6A6 中的任何一者的 CD105 上相同的抗原決定部位相結(jié)合的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的其他實(shí)施方案包括編碼本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體中的任何一者的經(jīng)分離的核酸分子、具有編碼本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體的經(jīng)分離的核酸分子的載體、或者使用這種核酸分子的任何一者的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。本發(fā)明的實(shí)施方案包括這樣的核酸分子，該核酸分子編碼特異性地與⑶105相結(jié)合并抑制⑶105配體例如TGF- β與⑶105受體相結(jié)合的全人源經(jīng)分離的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明還涵蓋了在如本文所定義的嚴(yán)格或嚴(yán)格程度較低的雜交條件下與編碼本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體中的任何一者的多核苷酸相雜交的多核苷酸。本發(fā)明的實(shí)施方案還包括具有編碼所述結(jié)合劑的核酸分子的載體。其他實(shí)施方案包括具有所述載體(包含所述的核酸分子)的宿主細(xì)胞。如本領(lǐng)域已知的那樣，抗體可以有利地為(例如)多克隆、寡克隆、單克隆、嵌合的、人源的和/或全人源的抗體。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實(shí)施方案不限于任何特定形式的抗體或者生成或制備方法。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體的結(jié)合片段。例如，所述的靶向結(jié)合劑可以為全長的抗體(例如具有完整的人源Fc區(qū)域)或者抗體結(jié)合片段(例如Fab、Fab’或F(ab，)2、FV或者dAb)。此外，所述的抗體可以為單一結(jié)構(gòu)域的抗體，例如與⑶105結(jié)合的camel id或人源單一 VH或VL結(jié)構(gòu)域(例如dAb片段)。本文所述的本發(fā)明的實(shí)施方案還提供了用于制備所述這些抗體的細(xì)胞。細(xì)胞的實(shí)例包括雜交瘤細(xì)胞、重組創(chuàng)建的細(xì)胞(例如中國倉鼠卵細(xì)胞(CHO))、CHO細(xì)胞的變體(例如DG44)以及產(chǎn)生對抗CD105的抗體的NSO細(xì)胞。關(guān)于CHO細(xì)胞的變體的其他信息可以在Andersen and Reilly (2004) Current Opinion in Biotechnology 15,456-462 中找至Ij,該文獻(xiàn)以引用方式全文并入本文。所述的抗體可以由分泌所述抗體的雜交瘤細(xì)胞、或者由重組的基因工程細(xì)胞(其經(jīng)編碼所述抗體的基因轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染)制得。此外，本發(fā)明的一個實(shí)施方案為通過在核酸分子被表達(dá)從而制得所述抗體、然后回收所述抗體的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞來制備本發(fā)明的抗體的方法。應(yīng)該認(rèn)識到，本發(fā)明的實(shí)施方案還包括可以編碼本發(fā)明的抗體或抗體片段的任何核酸分子(包括當(dāng)被轉(zhuǎn)染到用于抗體制備的宿主細(xì)胞中時被優(yōu)化用于提高抗體及其片段的核酸序列的產(chǎn)量)。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括通過使用表達(dá)人源⑶105的細(xì)胞免疫哺乳動物、分離含有人源CD105的細(xì)胞膜、純化出人源CD105或其片段和/或一個或多個定向進(jìn)化同源序列或其片段來制備與CD105特異性結(jié)合并抑制CD105的生物學(xué)活性的抗體的方法。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了組合物，該組合物包含本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體或者其結(jié)合片段、以及可藥用的載體或稀釋劑。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括通過對動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合CD105的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有血管原增殖性疾病的動物的方法。在某些實(shí)施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療腫瘤、癌癥和/或細(xì)胞增殖紊亂的動物，以及向這些動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合CD105的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括通過對動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合CD105的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有贅生性疾病的動物的方法。在某些實(shí)施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療贅生性疾病的動物，以及向這些動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合⑶105的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括通過對動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合CD105的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有惡性腫瘤的動物的方法。在某些實(shí)施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療惡性腫瘤的動物，以及向這些動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合⑶105的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括通過對動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合
18⑶105的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有與⑶105表達(dá)有關(guān)的疾病或狀況的動物的方法。在某些實(shí)施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療與⑶105表達(dá)有關(guān)的疾病或狀況的動物，以及向這些動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合⑶105的靶向結(jié)合劑。惡性腫瘤可以選自黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌(膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤(pediatric malignancy)以及扁平上皮癌?？芍委煹脑鲋承曰蜓茉膊“ㄙ樕约膊?，例如黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、晚期非小細(xì)胞肺癌、肝細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、膽囊癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、腎細(xì)胞癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌(膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤、扁平上皮癌和白血病(包括慢性粒細(xì)胞白血病)。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可用于治療實(shí)體瘤，包括肺癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、卵巢癌、肝細(xì)胞癌、頭頸癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、食道癌。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明適用于抑制具有腫瘤的患者中的CD105，所述腫瘤單獨(dú)或部分依賴于⑶105。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有增殖或血管原相關(guān)性疾病的動物的藥劑中的用途。在某些實(shí)施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療增殖或血管原相關(guān)性疾病的動物。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有贅生性疾病的動物的藥劑中的用途。在某些實(shí)施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療贅生性疾病的動物。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有非贅生性疾病的動物的藥劑中的用途。在某些實(shí)施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療非贅生性疾病的動物。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有惡性腫瘤的動物的藥劑中的用途。在某些實(shí)施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療惡性腫瘤的動物。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有CD105表達(dá)相關(guān)性疾病或狀況的動物的藥劑中的用途。在某些實(shí)施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療CD105表達(dá)相關(guān)性疾病或狀況的動物。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括用作用于治療患有增殖或血管原相關(guān)性疾病的動物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括用作用于治療患有贅生性疾病的動物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括用作用于治療患有惡性腫瘤的動物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括用作用于治療患有⑶105表達(dá)相關(guān)性疾病或狀況的動物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。
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本發(fā)明的又一個實(shí)施方案包括用作用于治療患有⑶105誘導(dǎo)疾病的動物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。在一個實(shí)施方案中，治療增殖或血管原相關(guān)性疾病贅生性疾病；惡性腫瘤；眼?。宦匝装Y疾??；與⑶105表達(dá)有關(guān)的疾病或狀況；或者包括管理、減輕、抑制任何上述疾病或狀況。在一個實(shí)施方案中，贅生性疾病的治療包括腫瘤生長的抑制、腫瘤生長的延遲、腫瘤的衰退、腫瘤的收縮、在治療終止時腫瘤再次生長的時間的增長、腫瘤復(fù)發(fā)的時間的增長、疾病進(jìn)程的減慢。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的待治療的動物為人。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑選自全人源單克隆抗體4. 120，9H10,10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1 和 6A6。本發(fā)明的實(shí)施方案包括含有本文所述的靶向結(jié)合劑與治療劑的綴合物。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的治療劑為毒素。在其他實(shí)施方案中，所述的治療劑為放射性同位素。在其他實(shí)施方案中，所述的治療劑為藥物組合物。在另一個方面中，提供了選擇性地殺死患者中的癌細(xì)胞的方法。所述的方法包括向患者給藥全人源抗體綴合物。該全人源抗體綴合物包括可以與CD105結(jié)合的抗體、以及試劑。所述的試劑為毒素、放射性同位素或者會殺死癌細(xì)胞的另一種物質(zhì)。因此，所述的抗體綴合物選擇性地殺死癌細(xì)胞。在一個方面中，提供了特異性地結(jié)合CD105的綴合全人源抗體。所述的抗體附著在試劑上，并且抗體與細(xì)胞相結(jié)合使得所述的試劑被傳遞給細(xì)胞。在一個實(shí)施方案中，上述綴合全人源抗體與CD105的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合。在另一個實(shí)施方案中，所述的抗體與綴合的毒素被表達(dá)CD105的細(xì)胞內(nèi)化。在另一個實(shí)施方案中，所述的試劑為細(xì)胞毒性試劑。在另一個實(shí)施方案中，所述的試劑為(例如)皂草素、auristatin、假單胞菌外毒素、白樹毒素、蓖麻毒素、刺孢毒素、或者基于美登素的免疫綴合物等。在另一個實(shí)施方案中，所述的試劑為放射性同位素。本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體可以單獨(dú)給藥，或者可以與其他的抗體、化療藥品或放療結(jié)合給藥。例如，阻斷細(xì)胞粘附、侵入、血管生成或增殖的CD105抗體的單克隆、寡克隆或多克隆混合物可以與表現(xiàn)出可抑制腫瘤細(xì)胞增殖的藥品結(jié)合給藥。此外，本發(fā)明的CD105靶向劑可以用于其他化療治療(例如包含抗-VEGF試劑的治療)失效的患者中。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括診斷疾病或狀況的方法，其中本文所述的抗體用于檢測患者或患者樣品中⑶105的水平。在一個實(shí)施方案中，所述的患者樣品為血液、血清或尿液。在另一個實(shí)施方案中，列出了檢測風(fēng)險因子、診斷疾病以及疾病分段的方法，其中涉及使用抗CD105抗體檢測CD105的表達(dá)和/或過表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述的方法包括向患者給藥與細(xì)胞上的CD105選擇性地結(jié)合的全人源抗體綴合物。所述的抗體綴合物包含特異性地與CD105相結(jié)合的抗體以及標(biāo)記。所述的方法還包括觀察患者中所述標(biāo)記的存在情況。標(biāo)記的量相對高表明所述疾病的風(fēng)險相對高，而標(biāo)記的量相對低表明所述疾病的風(fēng)險相對低。在一個實(shí)施方案中，所述的標(biāo)記為綠色熒光蛋白質(zhì)。本發(fā)明還提供了測定患者樣品中CD105水平的方法，包括將本文所述的抗體與得自患者的生物學(xué)樣品相接處，以及檢測所述樣品中所述抗體與CD105之間的結(jié)合水平。在更具體的實(shí)施方案中，所述的生物學(xué)樣品為血液、血漿或血清。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括通過將所述的血清或細(xì)胞與本文所述的抗體相接觸、然后檢測CD105的存在情況來診斷與細(xì)胞中CD105的表達(dá)有關(guān)的狀況的方法。在一個實(shí)施方案中，所述的狀況可以為增殖、血管原性、細(xì)胞粘附或侵入相關(guān)性疾病，包括但不限于贅生性疾病。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包括用于檢測哺乳動物組織、細(xì)胞或體液中的CD105以篩查CD105相關(guān)性疾病的測試試劑盒。所述的試劑盒包括本文所述的抗體以及用于表明所述抗體與CD105(如果存在的話)的反應(yīng)情況的手段。在一個實(shí)施方案中，與CD105相結(jié)合的抗體被標(biāo)記。在另一個實(shí)施方案中，所述的抗體為未標(biāo)記的初級抗體，而所述的試劑盒還包含用于檢測所述初級抗體的手段。在一個實(shí)施方案中，所述的檢測手段包括作為抗免疫球蛋白的經(jīng)標(biāo)記的第二抗體。所述的抗體可以用選自熒光色素、酶、放射性核以及非透過性材料的標(biāo)志物來標(biāo)記。在一些實(shí)施方案中，可以對本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而增強(qiáng)它們結(jié)合補(bǔ)體及參與補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在其他實(shí)施方案中，可以對所述的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而增強(qiáng)它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性(ADCC)的能力。在其他實(shí)施方案中，可以對本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而增強(qiáng)它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性(ADCC)的能力，以及增強(qiáng)它們結(jié)合補(bǔ)體及參與補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在一些實(shí)施方案中，可以對本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而降低它們結(jié)合補(bǔ)體及參與補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在其他實(shí)施方案中，可以對所述的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而降低它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性(ADCC)的能力。在其他實(shí)施方案中，可以對本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而降低它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性(ADCC)的能力，以及降低它們結(jié)合補(bǔ)體及參與補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在某些實(shí)施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的半衰期以及本發(fā)明的組合物的半衰期為至少大約4至7天。在某些實(shí)施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的平均半衰期以及本發(fā)明的組合物的平均半衰期為至少大約2至5天、3至6天、4至7天、5至8天、6至9天、7至10天、8至11天、8至12天、9至13天、10至14天、11至15天、12至16天、13至17天、14至18天、15至19天、或者16至20天。在其他實(shí)施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的平均半衰期以及本發(fā)明的組合物的平均半衰期為至少大約17至21天、18至22天、19至23天、20至M天、21至25天、22至沈天、23至27天、M至28天、25至四天、或者沈至30天。在另一個實(shí)施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的半衰期以及本發(fā)明的組合物的半衰期可以為至多大約50天。在某些實(shí)施方案中，抗體的半衰期以及本發(fā)明的組合物的半衰期可以通過本領(lǐng)域已知的方法延長。這種延長轉(zhuǎn)而可以降低所述抗體組合物的定量給藥的量和/或頻率。具有改善的體內(nèi)半衰期的抗體以及制備這些抗體的方法在美國專利No. 6，277，375、以及國際公開No. WO 98/23289和WO 97/3461中有所公開。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有容器的制造制品。所述的容器包含裝有本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的組合物，以及表明所述組合物可以用于治療細(xì)胞粘附、侵入、血管生成和/或增殖相關(guān)性疾病(包括但不限于由CD105表達(dá)或過表達(dá)所表征的疾病)的包裝插入物或標(biāo)記。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了試劑盒，該試劑盒包含裝有本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的組合物、以及向需要治療的受試對象給藥所述組合物的說明書。本發(fā)明提供了包含變體Fc區(qū)域的蛋白質(zhì)的配制物。即，非天然存在的Fc區(qū)域，例如包含一個或多個非天然存在的氨基酸殘基的Fc區(qū)域。此外，本發(fā)明的變體Fc區(qū)域還涵蓋了包含氨基酸刪除、添加和/或修飾的Fc區(qū)域?？梢酝ㄟ^增加Fc區(qū)域?qū)cfoi的結(jié)合親和性來增長包含F(xiàn)c區(qū)域的蛋白質(zhì)的血清半衰期。在一個實(shí)施方案中，與同類分子相比，F(xiàn)c變體蛋白質(zhì)增長了血清半衰期。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域在選自239、330和332 (按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含至少一個非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自239D、330L和332E(按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然存在的氨基酸?？蛇x地，所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含添加的非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自239D、330L和332E (按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然存在的氨基酸，以及在選自252Y、254T和256E(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處的至少一個非天然存在的氨基酸。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域在選自234、235和331 (按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含至少一個非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自234F、235F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然存在的氨基酸。在另一個具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的Fc變體包含234F、235F和331S (按照Kabat列出的EU索引編號)非天然存在的氨基酸殘基。在另一個具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的Fc變體包含234F、235Y和331S (按照Kabat列出的EU索引編號)非天然存在的氨基酸?？蛇x地，所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含添加的非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自234F、235F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然存在的氨基酸；以及在選自252Y、254T和256E(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處的至少一個非天然存在的氨基酸。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域在選自239、330和332(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含至少一個非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中
22所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自239D、330L和332E (按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然存在的氨基酸?？蛇x地，所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含添加的非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自239D、330L和332E(按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然存在的氨基酸，以及在選自252Y、254T和256E (按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處的至少一個非天然存在的氨基酸。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域在選自234、235和331(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含至少一個非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自234F、235F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然存在的氨基酸?？蛇x地，所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256 (按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含添加的非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自234F、235F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然存在的氨基酸；以及在選自252Y、254T和256E(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處的至少一個非天然存在的氨基酸。用于生成非天然存在的Fc區(qū)域的方法是本領(lǐng)域已知的。例如，氨基酸的取代和/或刪除可以通過突變方法生成，包括但不限于定點(diǎn)突變(Kunkel，Proc. Natl. Acad.Sci. USA 82 :488-492(1985))、PCR 突變(Higuchi, in “ PCR Protocols :A Guide toMethods and Applications " , Academic Press, San Diego, pp. 177-183 (1990))、盒式突變(Wells et al，Gene 34:315-323(1985))。優(yōu)選的是，定點(diǎn)突變是通過重疊延伸PCR方法來進(jìn)行的(Higuchi, in" PCR Technology Principles and Applications for DNAAmplification" ,Stockton Press, New York，pp. 61-70 (1989))。重疊延伸 PCR (Higuchi,ibid.)技術(shù)還可以用于向靶向序列(起始DNA)中引入任何所需的突變。例如，在重疊延伸方法中PCR的第一個循環(huán)涉及使用外引物(引物1)和內(nèi)突變引物(引物3)、以及分開的第二外引物(引物4)和內(nèi)引物(引物2)來擴(kuò)增靶向序列，從而產(chǎn)生兩條PCR節(jié)段(節(jié)段A和B)。內(nèi)突變引物(引物幻被設(shè)計成包含與靶向序列的錯配，從而指定了所需的突變。在PCR的第二個循環(huán)中，通過使用所述的兩個外引物(引物1和4)進(jìn)行PCR而擴(kuò)增得到第一個PCR循環(huán)的產(chǎn)物(節(jié)段A和B)。使用限定性酶對所得的全長PCR節(jié)段(節(jié)段C)進(jìn)行水解，并將所得的限制性片段克隆到合適的載體中。作為突變的第一個步驟，將起始DNA(例如編碼Fc融合蛋白質(zhì)、抗體或者簡單的Fc區(qū)域)可操作地克隆到突變載體中。所述的引物被設(shè)計成反應(yīng)了所需的氨基酸取代。用于生成變體Fc區(qū)域的其他方法是本領(lǐng)域已知的(例如參見美國專利 No. 5，624，821 ；5，885，573 ；5，677，425 ；6，165，745 ；6，277，375 ；5，869，046 ；6，121，022 ；5，624，821 ；5，648，260 ；6，528，624 ；6，194，551 ；6，737，056 ；6，821，505 ；6，277，375 ；美國專利公開 No. 2004/0002587 以及 PCT 公開 W 94/29351 ；WO 99/58572 ；WO00/42072 ；WO 02/060919 ；WO 04/029207 ；WO 04/099249 ；WO 04/063351)。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，本文所提供的抗體的糖基化模式被修改，以增強(qiáng)ADCC 和 CDC 效應(yīng)器的功能。參見 Shields RL et al, (2002) JBC. 277 :26733 ；Shinkawa Tet al“2003) JBC. 278 :3466 和 Okazaki A et al, (2004) J. Mol. Biol. ,336 12390 在一些實(shí)施方案中，F(xiàn)c變體蛋白質(zhì)包含一個或多個基因工程化的糖型，S卩，碳水化合物組合物以共價方式與包含F(xiàn)c區(qū)域的分子相連?；蚬こ袒奶切涂梢杂糜诙喾N目的，包括但不限于增強(qiáng)或降低效應(yīng)器的功能。基因工程化的糖型可以通過本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的任何方法生成，例如通過采用基因工程化的或變體表達(dá)的菌株，通過與一種或多種酶(例如DI N-乙?；被咸寝D(zhuǎn)移酶IIItenTIll))共表達(dá)，通過在多種有機(jī)體或得自多種有機(jī)體的細(xì)胞系中表達(dá)包含F(xiàn)c區(qū)域的分子，或者通過在包含F(xiàn)c區(qū)域的分子已經(jīng)被表達(dá)之后對碳水化合物進(jìn)行修飾。用于生成基因工程化的糖型的方法是本領(lǐng)域已知的，并且包括但不限于在Umanaet al,1999,Nat. Biotechnol 17 :176-180 ；Davies et al,20017 Biotechnol Bioeng 74:288-294 ；Shields et al，2002，J Biol Chem 277 :26733-26740 ；Shinkawa et al，2003，J Biol Chem 278 :3466-3473)美國專利 No. 6，602，684 ；美國系列號 No. 10/277，370 ；美國系列號 No. 10/113, 929 ；PCT WO 00/61739A1 ；PCT WO 01/292246A1 ；PCT WO 02/311140A1 ；PCT WO 02/30954A1 ；Potillegent technology (Biowa,Inc. Princeton,N. J.) ；GlycoMAb glycosylation engineering technology(GLYCART biotechnology AG, Zurich,Switzerland) 例如參見 WO 00061739 ；EA01229125 ；US 20030115614 ；Okazaki et al,2004，JMB，336 :1239-49中所描述的那些。因此，在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗-⑶105抗體的Fc區(qū)域包含氨基酸殘基的改變的糖基化。在另一個實(shí)施方案中，氨基酸殘基的改變的糖基化導(dǎo)致降低的效應(yīng)器的功能。在另一個實(shí)施方案中，氨基酸殘基的改變的糖基化導(dǎo)致增加的效應(yīng)器的功能。在特定實(shí)施方案中，F(xiàn)c區(qū)域具有降低的巖藻糖基化。在另一個實(shí)施方案中，F(xiàn)c區(qū)域是非巖藻糖基化的(afucosylated)(例如參見美國專利申請公開No. 2005/02^867)。在一個方面，這些具有增加的效應(yīng)器的功能的抗體，具有而言為ADCC，產(chǎn)生在宿主細(xì)胞(例如CHO細(xì)胞，Lemnaminor)，其被工程化以產(chǎn)生高度去巖藻糖基化抗體，所述抗體和由親代細(xì)胞產(chǎn)生的抗體相比具有超過 100 倍高的 ADCC (Mori et al.，2004，Biotechnol Bioeng 88 :901-908 ；Cox etal.，2006，Nat Biotechnol. ,24 :1591-7)。本領(lǐng)域還已知Fc區(qū)域的糖基化可以被修飾，以增強(qiáng)或降低效應(yīng)器的功能(例如參見 Umana et al，1999，Nat. Biotechnol 17 :176-180 ；Davies et al，2001，Biotechnol Bioeng 74 :288-294 ；Shields et al，2002，J Biol Chem 277:26733-26740;Shinkawa et al，2003，J Biol Chem 278:3466-3473)美國專利 No. 6，602，684 ；美國序列.No. 10/277，370 ；美國序列.No. 10/113，9 ;PCT WO 00/61739A1 ；PCT WO 01/292246A1 ；PCT WO 02/311140A1 ；PCT WO 02/30954A1 ；Poti1legent technology(Biowa, Inc. Princeton, N. J.) ；GlycoMAb glycosylation engineeringtechnology (GLYCART biotechnology AG, Zurich, Switzerland)) 因此，在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體的Fc區(qū)域包含糖基化被改變的氨基酸殘基。在另一個實(shí)施方案中，糖基化被改變的氨基酸使得效應(yīng)器的功能降低。在另一個實(shí)施方案中，糖基化被改變的氨基酸殘基使得效應(yīng)器的功能增強(qiáng)。在具體的實(shí)施方案中，所述的Fc區(qū)域具有減少的巖藻糖基化。在另一個實(shí)施方案中，所述的Fc區(qū)域?yàn)閹r藻糖基化的(例如參見美國專利申請公開No. 2005/0226867)。附圖簡述


圖1示出柱狀圖，其表示抗體4. 37和4. 120的HUVEC增殖測定的結(jié)果。圖 2 示出柱狀圖，其表示抗體 4D4，6A6，6B1，6B10，11H2，9H10，3C1 和 10C9 的 HUVEC增殖測定的結(jié)果。圖3示出柱狀圖，其表示抗體4D4，6B1，6B10和10C9對于血管長度(mm)和分叉數(shù)
量的影響。圖4示出柱狀圖，其表示結(jié)合研究的結(jié)果。具體而言，抗體4D4，6A6，6B1，6B10，11H2，9H10，3C1，4. 37，4. 120 和 10C9 能夠阻斷 SN6 結(jié)合 HUVEC 細(xì)胞。圖5示出柱狀圖，其表示對于抗體4. 120，4D4，6B 10和4. 37而言測量血紅蛋白(hb)含量的Colo205基質(zhì)膠塞測定的結(jié)果。圖6示出柱狀圖，其表示對于抗體4. 120，4D4，6B10和4. 37而言測量陽性CD31染色的Colo205基質(zhì)膠塞測定的結(jié)果。圖 7 示出柱狀圖，其表示抗體 4D4，6A6，6B1，6B10，11H2，9H10，3C1，4. 37,4. 120 和10C9的ADCC活性。圖8示出柱狀圖，其表示抗體4. 120的⑶C活性。圖 9 示出柱狀圖，其表示抗體 4D4，6A6，6B1，6B10，11H2，9H10，3C1，4. 37,4. 120 和10C9的內(nèi)在化結(jié)果。發(fā)明詳述本發(fā)明的實(shí)施方案涉及能夠抑制TGF-β信號傳導(dǎo)的一組新型的CD105阻斷分子，例如抗體。這種分子可以以單一試劑的形式使用、或者可選擇地與其他結(jié)合抗體/試劑組合使用。此外，它們還可以與任何標(biāo)準(zhǔn)品或新型抗癌試劑組合使用。本發(fā)明的實(shí)施方案涉及與CD105相結(jié)合的靶向結(jié)合劑。在一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑與⑶105相結(jié)合，并抑制⑶105配體例如TGF-β與其受體⑶105相結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，這種結(jié)合可以中和、阻斷、抑制、消除或干擾CD105相關(guān)作用的一個或多個方面。在一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體或其結(jié)合片段。本文中，這種單克隆抗體可以被稱為抗CD105的抗體。本發(fā)明的其他實(shí)施方案包括全人源抗CD105的抗體，以及具有治療用途的抗體制備物。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗CD105抗體的制備物具有所需的治療性質(zhì)，包括對CD105的強(qiáng)的結(jié)合親和性、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡或抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖的能力、調(diào)制細(xì)胞骨架的形成、抑制管的形成、以及通過ADCC和/或CDC活性誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞毒性的能力。此外，本發(fā)明的實(shí)施方案包括使用所述的這些抗體來治療疾病的方法。本發(fā)明的抗CD105的抗體可以用于預(yù)防CD105介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞的增殖和健康組織的腫瘤侵入。另外，CD105抗體可以用于治療和血管生成有關(guān)的疾病，例如眼病如AMD、炎癥性疾病如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、和心血管疾病與敗血癥、以及贅生性疾病?？梢员碚鳛槿魏晤愋偷膼盒阅[瘤(包括轉(zhuǎn)移性癌癥、淋巴腫瘤以及血癌)的任何疾病也都可以通過這種抑制機(jī)制來進(jìn)行治療。人類中示例性的癌癥包括膀胱腫瘤、腎細(xì)胞癌、乳腺腫瘤、前列腺腫瘤、基細(xì)胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦和CNS癌(例如神經(jīng)膠質(zhì)腫瘤)、宮頸癌、絨毛膜癌、結(jié)腸和直腸癌、結(jié)締組織癌、消化系統(tǒng)的癌癥；子宮內(nèi)膜癌、食管癌；眼癌；頭部和頸部的癌癥；胃部的癌癥；上皮內(nèi)贅生物；腎癌；喉癌；白血??；肝癌；肺癌(例如小細(xì)胞和非小細(xì)胞)；淋巴瘤，包括Hodgkin或非Hodgkin淋巴瘤；黑素瘤；骨髓瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、口腔癌(例如唇、舌、口和咽)；卵巢
25癌；胰腺癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；橫紋肌肉瘤；直腸癌、腎癌、呼吸系統(tǒng)的癌癥；肉瘤、皮膚癌；胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌；子宮癌、泌尿系統(tǒng)的癌癥以及其他癌癥和肉瘤。通常在狗、貓和其他寵物中診斷的惡性紊亂包括但不限于淋巴肉瘤、骨肉瘤、乳房腫瘤、肥大細(xì)胞瘤、腦腫瘤、黑素瘤、腺鱗癌、良性的肺部腫瘤、支氣管腺腫瘤、細(xì)支氣管腺癌、纖維瘤、粘液軟骨瘤、肺部肉瘤、神經(jīng)肉瘤、骨瘤、刺瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、Ewing肉瘤、Wilm腫瘤、Burkitt淋巴瘤、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、破骨細(xì)胞瘤、口腔瘤形成、纖維肉瘤、骨肉瘤和橫紋肌肉瘤、生殖器鱗狀細(xì)胞癌、傳染性性病腫瘤、睪丸腫瘤、精原細(xì)胞瘤、Sertoli細(xì)胞腫瘤、血管外皮細(xì)胞瘤、組織細(xì)胞瘤、綠色瘤(例如粒細(xì)胞肉瘤)、角膜刺瘤、角膜鱗狀細(xì)胞癌、血管肉瘤、胸膜間皮瘤、基細(xì)胞腫瘤、胸腺瘤、胃部腫瘤、腎上腺癌、口腔多發(fā)性乳頭瘤、血管內(nèi)皮瘤和囊腺瘤、毛囊淋巴瘤、小腸淋巴瘤、纖維肉瘤和肺部鱗狀細(xì)胞癌。在嚙齒動物(例如雪貂)中，示例性的癌癥包括胰島瘤、淋巴瘤、肉瘤、神經(jīng)瘤、胰腺島細(xì)胞腫瘤、胃部MALT淋巴瘤和胃腺瘤。影響農(nóng)業(yè)牲畜的瘤形成包括白血病、血管外皮細(xì)胞瘤和牛眼部的瘤形成(在牛中)；包皮纖維肉瘤、潰瘍性鱗狀細(xì)胞癌、包皮癌、結(jié)締組織瘤形成和肥大細(xì)胞瘤(在馬中)；肝細(xì)胞癌(在豬中)；淋巴瘤和肺部腺瘤病(在羊中)；肺部肉瘤、淋巴瘤、Rous肉瘤、成血細(xì)胞綜合癥、纖維肉瘤、腎母細(xì)胞瘤、B細(xì)胞淋巴瘤和淋巴白血性增生(在鳥類物種中)；視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、肝臟的瘤形成、淋巴肉瘤(成淋巴細(xì)胞的淋巴瘤)、類漿細(xì)胞白血病和浮囊肉瘤(在魚中)、干酪樣淋巴結(jié)炎(CLA)；由細(xì)菌假結(jié)核棒桿菌(Corynebacteriumpseudotuberculosis)引起的綿羊和山羊的慢性感染性傳染病、以及由南非羊肺炎引起的綿羊的傳染性肺部腫瘤。本發(fā)明的其他實(shí)施方案包括用于特異性檢測生物學(xué)樣品中CD105的數(shù)量的診斷性測試。所述的測試試劑盒可以包括本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體以及用于檢測這些抗體的必要性的標(biāo)記。這些診斷性測試可用于篩查細(xì)胞粘附、侵入、血管生成或增殖相關(guān)性疾病，包括但不限于贅生性疾病。本發(fā)明的另一個方面為CD105的生物學(xué)活性的拮抗劑，其中所述的拮抗劑能夠與CD105結(jié)合。在一個實(shí)施方案中，所述的拮抗劑為靶向結(jié)合劑，例如抗體。所述的拮抗劑可以選自本文所述的抗體，例如抗體 4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1 和 6A6。在一個實(shí)施方案中，所述的CD105的生物學(xué)活性的拮抗劑可以與CD105相結(jié)合，并由此抑制或阻止配體與CD105受體相結(jié)合，由此抑制腫瘤血管生成和/或細(xì)胞增殖。一個實(shí)施方案為與全人源單克隆抗體4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1和6A6相同的一個或多個抗原決定部位相結(jié)合的靶向結(jié)合劑。一個實(shí)施方案為與全人源單克隆抗體4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1和6A6相同的一個或多個抗原決定部位相結(jié)合的抗體。一個實(shí)施方案為能夠產(chǎn)生上文所述的靶向結(jié)合劑的雜交瘤細(xì)胞。在一個實(shí)施方案中，為能夠產(chǎn)生上文所述的抗體的輕鏈和/或重鏈的雜交瘤細(xì)胞。在一個實(shí)施方案中，所述的雜交瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生全人源單克隆抗體的輕鏈和/或重鏈。在另一個實(shí)施方案中，所述的雜交瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生全人源單克隆抗體4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1和6A6的輕鏈和/或重鏈?？蛇x擇地，所述的雜交瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生這樣的抗體，該抗體能夠與全人源單克隆抗體4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1和6A6相同的一個或多個抗原決定部位相結(jié)合。
另一個實(shí)施方案為編碼上文所述的靶向結(jié)合劑的核酸分子。在一個實(shí)施方案中，為編碼上文所述的抗體的輕鏈或重鏈的核酸分子。在一個實(shí)施方案中，所述的核酸分子編碼了全人源單克隆抗體的輕鏈或重鏈。另一個實(shí)施方案為編碼選自抗體4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1和6A6中的全人源單克隆抗體的輕鏈或重鏈的核酸分子。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案為包含一個或多個上文所述的核酸分子的載體，其中所述的載體編碼了上文所述的靶向結(jié)合劑。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，為包含一個或多個上文所述的核酸分子的載體，其中所述的載體編碼了上文所述的抗體的輕鏈和/或重鏈。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案為包含上文所述的載體的宿主細(xì)胞?？蛇x擇地，所述的宿主細(xì)胞可以包含多于一個的載體。此外，本發(fā)明的一個實(shí)施方案為通過在其中核酸分子被表達(dá)從而產(chǎn)生所述的靶向結(jié)合劑、然后回收所述的靶向結(jié)合劑的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞來制備本發(fā)明的靶向結(jié)合劑的方法。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中衛(wèi)通過在核酸分子被表達(dá)從而產(chǎn)生所述的抗體、然后回收所述的抗體的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞來制備本發(fā)明的抗體的方法。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過用編碼上文所述的靶向結(jié)合劑的至少一個核酸分子轉(zhuǎn)染至少一個宿主細(xì)胞、在所述的宿主細(xì)胞中表達(dá)所述的核酸分子以及分離所述的靶向結(jié)合劑來制備靶向結(jié)合劑的方法。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過用編碼上文所述的抗體的至少一個核酸分子轉(zhuǎn)染至少一個宿主細(xì)胞、在所述的宿主細(xì)胞中表達(dá)所述的核酸分子以及分離所述的抗體來制備抗體的方法。根據(jù)另一個方面，本發(fā)明包括通過給藥本文所述的拮抗劑來拮抗CD105的生物學(xué)活性的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的CD105的生物學(xué)活性的拮抗劑。本發(fā)明的另一個方面包括通過給藥上文所述的靶向結(jié)合劑來拮抗CD105的生物學(xué)活性的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的另一個方面包括通過給藥上文所述的抗體來拮抗CD105的生物學(xué)活性的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗CD105的生物學(xué)活性的抗體。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的CD105的生物學(xué)活性的拮抗劑來治療動物中細(xì)胞增殖的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的CD105的生物學(xué)活性的拮抗劑。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑來治療動物中血管生成和/或增殖的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。所述的靶向結(jié)合劑可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗CD105的生物學(xué)活性的抗體來治療動物中血管生成和/或增殖的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗CD105的生物學(xué)活性的抗體。所述的抗體可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。
根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的CD105的生物學(xué)活性的拮抗劑來治療動物癌癥的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療癌癥的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗CD105的生物學(xué)活性的拮抗劑。所述的拮抗劑可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑來治療動物癌癥的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療癌癥的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。所述的靶向結(jié)合劑可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗CD105的生物學(xué)活性的抗體來治療動物癌癥的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療癌癥的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗CD105的生物學(xué)活性的抗體。所述的抗體可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗CD105的生物學(xué)活性的抗體來減輕或抑制動物腫瘤細(xì)胞的增殖、粘附、侵入和/或血管生成的方法。所述的方法可以包括選擇需要減輕或抑制增殖、粘附、侵入和/或血管生成的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗CD105的生物學(xué)活性的抗體。所述的抗體可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗CD105的生物學(xué)活性的抗體來減緩動物腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移的方法。所述的方法可以包括選擇需要減緩腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗CD105的生物學(xué)活性的抗體。所述的抗體可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了 CD105的生物學(xué)活性拮抗劑在用于制造治療腫瘤血管生成和/或細(xì)胞增殖的藥劑中的用途。在一個實(shí)施方案中，所述的CD105的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。在一個實(shí)施方案中，所述的CD105的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于治療腫瘤血管生成和/或細(xì)胞增殖的藥劑的CD105的生物學(xué)活性拮抗劑。在一個實(shí)施方案中，所述的CD105的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。在一個實(shí)施方案中，所述的CD105的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了拮抗所述的CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造治療血管生成和/或增殖的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于治療血管生成和/或增殖的藥劑的、拮抗所述的CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了拮抗所述的CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造治療疾病相關(guān)性血管生成和/或增殖的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于治療疾病相關(guān)性血管生成和/或增殖的藥劑的、拮抗所述的CD105的生物學(xué)活性的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了所述的CD105的生物學(xué)活性的拮抗劑在用于制造用于治療哺乳動物癌癥的藥劑中的用途。在一個實(shí)施方案中，所述的CD105的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。在一個實(shí)施方案中，所述的CD105的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于治療哺乳動物癌癥的藥劑的CD105的生物學(xué)活性拮抗劑。在一個實(shí)施方案中，所述的CD105的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。在一個實(shí)施方案中，所述的CD105的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了拮抗所述的CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑在用于制造用于治療哺乳動物癌癥的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于治療哺乳動物癌癥的藥劑的、拮抗所述的CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了拮抗所述的CD105的生物學(xué)活性的抗體在用于制造用于治療哺乳動物癌癥的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于治療哺乳動物癌癥的藥劑的、拮抗所述的⑶105的生物學(xué)活性的抗體。根據(jù)另一個方面，提供了拮抗所述的CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造用于減緩或抑制動物增殖和/或血管生成的藥劑中的用途。根據(jù)另一個方面，提供了用作用于減緩或抑制動物中增殖和/或血管生成的藥劑的、拮抗所述的CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體。根據(jù)另一個方面，提供了拮抗所述的CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造用于減緩動物腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移的藥劑中的用途。根據(jù)另一個方面，提供了用作用于減緩動物中腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移的藥劑的、拮抗所述的CD105的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明特別適用于在患有單獨(dú)依賴于或部分依賴于⑶105受體信號傳導(dǎo)的腫瘤患者中拮抗CD105。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了包含CD105的生物學(xué)活性的拮抗劑以及可藥用的載體的藥物組合物。在一個實(shí)施方案中，所述的拮抗劑包含抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了包含CD105的生物學(xué)活性的拮抗劑以及可藥用的載體的藥物組合物。在一個實(shí)施方案中，所述的拮抗劑包含抗體。在一些實(shí)施方案中，在給藥特異性結(jié)合CD105的抗體之后，給藥清除劑，從而移除血液中過量的循環(huán)抗體?？耿?05的抗體可以用于消除患者樣品中的⑶105，并因此可以用作用于本文所述的疾病狀態(tài)的診斷工具。此外，基于抗CD105抗體的顯著抑制由CD105介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)活性(如以下實(shí)施例中所表明的那樣)的能力，所述的抗CD105的抗體在治療由CD105的表達(dá)所導(dǎo)致的癥狀和狀況中具有治療作用。在具體的實(shí)施方案中，本文所述的抗體和方法涉及治療由CD105誘導(dǎo)的血管生成、增殖和/或細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)所導(dǎo)致的癥狀。另一個實(shí)施方案涉及采用本文所述的抗體和方法來治療血管生成和/或增殖相關(guān)性疾病，包括贅生性疾病，例如黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、干細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌以及胰腺癌。所述的抗體還可用于治療細(xì)胞粘附和/或關(guān)節(jié)炎侵入、動脈硬化癥和涉及血管生成的疾病。CN 102388067 A
說明書
25/90頁本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括用于檢測哺乳動物組織、細(xì)胞或體液中的CD105以篩查細(xì)胞粘附、侵入、血管生成或增殖相關(guān)性疾病的測試試劑盒。所述的試劑盒包括與CD105相結(jié)合的靶向結(jié)合劑以及用于表明所述的靶向結(jié)合劑與CD105(如果存在的話)的反應(yīng)情況的手段。在一個實(shí)施方案中，與CD105相結(jié)合的靶向結(jié)合劑被標(biāo)記。在另一個實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為未標(biāo)記的，而所述的試劑盒還包含用于檢測所述靶向結(jié)合劑的手段。優(yōu)選的是，所述的靶向結(jié)合劑可以用選自熒光色素、酶、放射性核以及輻射非透過性材料的標(biāo)志物來標(biāo)記。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括用于檢測哺乳動物組織、細(xì)胞或體液中的CD105以篩查細(xì)胞粘附、侵入、血管生成或增殖相關(guān)性疾病的測試試劑盒。所述的試劑盒包括與CD105相結(jié)合的抗體以及用于表明所述抗體與CD105(如果存在的話)的反應(yīng)情況的手段。所述的抗體可以為單克隆抗體。在一個實(shí)施方案中，與CD105相結(jié)合的抗體被標(biāo)記。在另一個實(shí)施方案中，所述的抗體為未標(biāo)記的初級抗體，而所述的試劑盒還包含用于檢測所述初級抗體的手段。在一個實(shí)施方案中，所述的手段包括作為抗免疫球蛋白的經(jīng)標(biāo)記的第二抗體。優(yōu)選的是，所述的抗體可以用選自熒光色素、酶、放射性核以及輻射非透過性材料的標(biāo)志物來標(biāo)記。在以下另外的詳細(xì)材料中提供了本文所公開的、關(guān)于所述抗體的其他實(shí)施方案、特征等。序列列表本發(fā)明的實(shí)施方案包括以下表1中所列的特異性抗體。該表格分別報告了各種抗CD105的抗體的識別編號，以及相應(yīng)重鏈和輕鏈的基因和多肽的可變結(jié)構(gòu)域的SEQ ID編號。各種抗體已經(jīng)給出了識別編號。表 權(quán)利要求
1.一種與CD105特異性結(jié)合的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體表現(xiàn)出一種或多種以下所述的性質(zhì)，包括以小于InM的Kd與人源CD105相結(jié)合；使HUVEC細(xì)胞的細(xì)胞增殖的抑制大于5% ；增強(qiáng)SMAD2磷酸化；表現(xiàn)為抗血管原活性；以及表現(xiàn)為ADCC活性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體抑制哺乳動物中腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移。
3.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體以低于 500pM的Kd與CD105相結(jié)合。
4.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為抗體 4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1，或 6A6 中的任意一者。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為單克隆抗體4.120。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為單克隆抗體4.37。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為單克隆抗體6B10。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為單克隆抗體4D4.1。
9.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含SEQID NO. J6序列，其中SEQ ID NO. J6包含表6的各行所示的種系殘基和非種系殘基的獨(dú)特組合中的任意一者。
10.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含SEQ ID NO. 序列，并且其中SEQ ID NO. 包含表7的各行所示的種系殘基和非種系殘基的獨(dú)特組合中的任意一者。
11.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含SEQ ID NO. :30序列，其中SEQ ID NO. :30包含表8的各行所示的種系殘基和非種系殘基的獨(dú)特組合中的任意一者。
12.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含SEQ ID NO. :32序列，其中SEQ ID NO. :32包含表9的各行所示的種系殘基和非種系殘基的獨(dú)特組合中的任意一者。
13.一種全人源單克隆抗體，其與下列抗體4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37， 6B10, 3C1或6A6中任意一者競爭結(jié)合⑶105。
14.一種全人源單克隆抗體，其與以下抗體中的任意一者結(jié)合CD105上的相同的抗原決定部位，其中所述的抗體為抗體4. 120，9H10，10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1或 6A6。
15.一種包含氨基酸序列的經(jīng)分離的抗體，其中所述的氨基酸序列包含a)如表2中所示的CDR3序列；b)如表2中所示的⑶R1、⑶R2或⑶R3序列中的任何一者；c)如表2中所示的可變輕鏈序列的⑶R1、⑶R2或⑶R3序列；或者d)如表2中所示的可變重鏈序列的⑶R1、⑶R2或⑶R3序列。
16.一種抗體，其免疫特異性地結(jié)合⑶105并包含(a)SEQ ID N0:2的VH CDR1，其具有與SEQ ID N0:2的VH CDRl相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 2的VH⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(b)SEQID N0:2的VH CDR2，其具有與SEQ ID N0:2的VH CDR2相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 2的VH⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(c)SEQID N0:2的VH CDR3，其具有與SEQ ID N0:2的VH CDR3相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 2的VH⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(d)SEQID N0:4的VL CDRl，其具有與SEQ ID N0:4的VL CDRl相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 4的VL⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(e)SEQID N0:4的VL CDR2，其具有與SEQ ID N0:4的VL CDR2相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 4的VL⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID N0:4的VL CDR3，其具有與SEQ ID N0:4的VL CDR3相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 4的VL⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含(a)SEQ ID NO 2 的 VH CDR1、CDR2 和 CDR3 ；以及(b)SEQID NO 4 的 VL CDR1、CDR2 和 CDR3。
18.一種抗體，其免疫特異性地結(jié)合⑶105并包含(a)SEQ ID N0』6的VH CDR1，其具有與SEQ ID N0J6的VH CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 26的VH⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(b)SEQID N0』6的VH CDR2，其具有與SEQ ID N0J6的VH CDR2相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 26的VH⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(c)SEQID N0J6的VH CDR3，其具有與SEQ ID N0J6的VH CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 26的VH⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(d)SEQID N0』8的VL CDR1，其具有與SEQ ID N0J8的VL CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 28的VL⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(e)SEQID N0』8的VL CDR2，其具有與SEQ ID N0J8的VL CDR2相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 28的VL⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID N0J8的VL CDR3，其具有與SEQ ID N0J8的VL CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 28的VL⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的試劑包含(a)SEQ ID NO :26 的 VH CDR1、CDR2 和 CDR3 ；以及(b)SEQID NO 28 的 VL CDR1、CDR2 和 CDR3。
20.一種抗體，其免疫特異性地結(jié)合⑶105，并且包含與SEQ ID NO :26的氨基酸具有至少90%的一致性的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，以及包含與SEQ ID NO 28的氨基酸序列具有至少 90%的一致性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述抗體具有結(jié)合CD105的活性。
21.一種抗體，其免疫特異性地結(jié)合⑶105并包含(a)SEQ ID NO :30的VH CDR1，其具有與SEQ ID N0:30的VH CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 30的VH⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(b)SEQID NO :30的VH CDR2，其具有與SEQ ID N0:30的VH CDR2相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 30的VH⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(c)SEQID N0:30的VH CDR3，其具有與SEQ ID N0:30的VH CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 30的VH⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(d)SEQID NO :32的VL CDR1，其具有與SEQ ID N0:32的VL CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 32的VL⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(e)SEQID NO :32的VL CDR2，其具有與SEQ ID N0:32的VL CDR2相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 32的VL⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID N0:32的VL CDR3，其具有與SEQ ID N0:32的VL CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 32的VL⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含(a)SEQ ID NO :30 的 VH CDR1、CDR2 和 CDR3 ；以及(b)SEQID NO 32 的 VL CDR1、CDR2和 CDR3。
23.一種抗體，其免疫特異性地結(jié)合⑶105，并且包含與SEQ ID NO :30的氨基酸具有至少90%的一致性的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，以及包含與SEQ ID NO :32的氨基酸序列具有至少 90%的一致性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述抗體具有結(jié)合CD105的活性。
24.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為單克隆抗體的結(jié)合片段。
25.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為全人源單克隆抗體。
26.根據(jù)權(quán)利要求10所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的結(jié)合片段選自Fab、Fab’、 F(ab，)2, Fv 和 dAb 片段。
27.具有氨基酸序列的抗體包含以下序列中的任何一者，其中所述的序列為 包含由命名為Mab4. 120VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為 PTA-9514 ；包含由命名為Mab4. 120VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9513 ；或者包含由命名為Mab4. 120VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9514 ；以及包含由命名為Mab4. 120VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9513。
28.具有氨基酸序列的抗體包含以下序列中的任何一者，其中所述的序列為 包含由命名為Mab4. 37VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為 PTA-9517 ；包含由命名為Mab4. 37VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9512 ；或者包含由命名為Mab4. 37VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9517 ；以及包含由命名為Mab4. 37VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9512。
29.具有氨基酸序列的抗體包含包含由命名為Mab6B10VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為 PTA-9510 ；包含由命名為Mab6B10VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9499 ；或者包含由命名為Mab6B10VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9510 ；以及包含由命名為Mab6B10VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9499。
30.一種包含之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的靶向試劑或抗體的組合物。
31.一種包含之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的抗體或抗體的藥物組合物。
32.—種編碼之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的抗體或抗體的核酸分子。
33.一種治療動物中惡性腫瘤的方法，包括選擇需要治療惡性腫瘤的動物；以及向所述的動物給藥治療有效劑量的之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的抗體。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述的動物為人。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述的抗體選自全人源單克隆抗體4.120， 9H10,10C9，4D4，11H2，6B1，4. 37，6B10，3C1 或 6A6。
36.根據(jù)權(quán)利要求33-35所述的方法，其中所述的惡性腫瘤選自黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、 非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、乳腺癌、 卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌(膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤以及扁平上皮癌。
37.用于治療惡性腫瘤的根據(jù)權(quán)利要求30所述的組合物的用途。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的組合物的用途，其中所述的惡性腫瘤選自黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、 乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、 頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌(膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤以及扁平上皮癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及對抗CD105的靶向結(jié)合劑以及這種試劑的用途。更具體而言，本發(fā)明涉及定向于CD105的全人源單克隆抗體。所述的靶向結(jié)合劑可用于治療與CD105的活性和/或過量產(chǎn)生有關(guān)的疾病，并且可以用作診斷工具。
文檔編號C07K16/28GK102388067SQ200980146739
公開日2012年3月21日 申請日期2009年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月19日
發(fā)明者G·加西特-伯恩斯坦, J·巴布科克, N·萊恩, Q·周, S·T·巴里 申請人:米迪繆尼有限公司