專利名稱：Il-17ra-il-17rb拮抗物及其用途的制作方法
IL-17RA-1L-17RB拮抗物及其用途
相關(guān)申請的交叉引用
本申請要求于2009年1月20日提出的美國臨時申請第61/145，901號和于2008 年2月21日提出的美國臨時申請第61/066，538號的35U. S. C. § 119的權(quán)益，所述申請案 通過引用結(jié)合到本文中。發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及白介素-17配體和受體家族成員，以及IL-17受體A和IL-17受體B 形成有生物活性的異聚復(fù)合體的發(fā)現(xiàn)。公開了所述IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的拮 抗物和使用方法。
發(fā)明背景
白介素-17家族為一群6種結(jié)構(gòu)相關(guān)的細(xì)胞因子，命名為IL-17A至IL-17F，該細(xì) 胞因子在免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)中為重要的。一級結(jié)構(gòu)水平下，最類似處看來是C端區(qū)，該區(qū)包 含4個保守的半胱氨酸殘基(綜述于Kawaguchi等，J. Allergy Clin Immunol 114 :1265, 2004 ;Kolls 和 Linden, Immunity 21:467,2004)。已確定了 IL-17F 的晶體結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)其 與胱氨酸結(jié)家族生長因子共享結(jié)構(gòu)特征(Hymowitz等，2001，EMBO J. 20 :5532-5341)，胱 氨酸結(jié)家族生長因子為一群通過同二聚和異聚的反構(gòu)(coimterstructure)結(jié)合和發(fā)信 號的同二聚配體(Lu 等，2005，Nat. Rev. Neurosci. 6 :603-614 ；Barker, 2004, Neuron 42 529-533)。
IL-17受體(IL-17R)還形成相關(guān)的I型跨膜蛋白家族。已鑒別出該家族的5個不 同成員(IL-1RA至IL-1RE)，該家族其中幾個還表現(xiàn)出可選剪接，包括可作為誘餌受體的可 溶類型(Kolls和 Linden，見上；Moseley 等，Cytokine Growth Factor Rev. 14 :155,2003)。 盡管IL-17RA能獨(dú)立于配體多聚化，并已表現(xiàn)出與IL-17RC形成生物活性的異聚受體復(fù)合 體(Toy等，JImmunol. 177 36 ；2007)，但形成其它異聚IL-17R復(fù)合體(跨膜或可溶類型) 的可能性和所得到的生物活性(如果有的話)先前為未知。提供本發(fā)明各種實(shí)施方案的該 方面和其它方面。
附圖簡述


圖1為闡述IL-17RA-IL-17RB拮抗物對氣道高反應(yīng)性的作用的圖。空心圓表示在 給予MSA和MuFc的小鼠(N = 4)中得到的結(jié)果；空心正方形表示在給予IL-25和MuFc的 小鼠(N = 3)中得到的結(jié)果；實(shí)心三角表示在給予IL-25和M751的小鼠(N = 3)中得到的結(jié)果。
圖2呈現(xiàn)了 Wfestern印跡，基本如實(shí)施例11中所述制備。泳道1和4包含分子量標(biāo) 記。板A為用抗-IL-17RA印跡的，板B為用抗-HIS印跡的。泳道2呈現(xiàn)了 IL_17RA:HIS陽 性對照，泳道3表示了用IL-17RB:Fc沉淀IL_17RA:HIS的結(jié)果。泳道5呈現(xiàn)了 IL_17RD:HIS 陽性對照，泳道6表明IL-17RD:HIS不能用IL_17RB:Fc沉淀。
圖3為闡述來自實(shí)施例14實(shí)驗(yàn)1的OVA哮喘模型中小鼠的氣道高反應(yīng)性(AHR) 圖。用漸增濃度的乙酰甲膽堿攻擊小鼠，計算PENH中高于基線士SEM的變化。4闡述小鼠在如實(shí)施例14中所述的OVA哮喘模型中的肺阻力(RL)。對各處理 組士 SEM顯示了在曲線(AUC)下的均值氣道阻力(R)面積。圖如呈現(xiàn)了來自實(shí)驗(yàn)2的結(jié) 果，4b則來自實(shí)驗(yàn)3。
圖5呈現(xiàn)了如實(shí)施例14實(shí)驗(yàn)1中所述的支氣管肺泡灌洗液(BALF)細(xì)胞含量的分 析。結(jié)果顯示為總BALFGa)白細(xì)胞、(4b)嗜酸性粒細(xì)胞、( )嗜中性粒細(xì)胞、(4d)淋巴細(xì) 胞和Ge)巨噬細(xì)胞。各實(shí)心圓表示來自一只小鼠的BALF細(xì)胞含量。使用非參數(shù)單向ANOVA 與Durm氏多重比較檢驗(yàn)(*p < 0. 05)進(jìn)行統(tǒng)計分析對比。
圖6類似于圖5，但呈現(xiàn)來自實(shí)施例14實(shí)驗(yàn)2的結(jié)果。結(jié)果顯示為總BALFGa)白 細(xì)胞、(4b)嗜酸性粒細(xì)胞、( )嗜中性粒細(xì)胞、(4d)淋巴細(xì)胞和Ge)巨噬細(xì)胞。使用單向 ANOVA與Bonferroni氏多重比較檢驗(yàn)(*p < 0. 05)進(jìn)行統(tǒng)計分析對比。
圖7呈現(xiàn)來自實(shí)施例14實(shí)驗(yàn)3的結(jié)果。結(jié)果顯示為總BALFGa)白細(xì)胞、Gb)嗜 酸性粒細(xì)胞、(4c)嗜中性粒細(xì)胞、Gd)淋巴細(xì)胞和Ge)巨噬細(xì)胞。各實(shí)心圓表示來自一只 小鼠的BALF細(xì)胞含量。使用非參數(shù)單向ANOVA與Durm氏多重比較檢驗(yàn)(*p < 0. 05)進(jìn)行 統(tǒng)計分析對比。
圖8闡述了來自O(shè)VA哮喘模型中小鼠的BALF IL-13濃度。將來自如實(shí)施例14 (a)實(shí)驗(yàn)l、(b)實(shí)驗(yàn)2、(c)實(shí)驗(yàn)3中所述3個獨(dú)立實(shí)驗(yàn)中各個小鼠的BALF樣品通過ELISA 測定IL-13濃度。各實(shí)心圓表示來自一只小鼠的值。水平線表示組均值。使用單向ANOVA 進(jìn)行組間對比。*ρ<0·05。
圖9呈現(xiàn)來自O(shè)VA哮喘模型中小鼠的BALF IL_5濃度。將來自如實(shí)施例14 (a) 實(shí)驗(yàn)l、(b)實(shí)驗(yàn)2、(c)實(shí)驗(yàn)3中所述3個獨(dú)立實(shí)驗(yàn)中各個小鼠的BALF樣品通過ELISA測 定IL-5濃度。各實(shí)心圓表示來自一只小鼠的值。水平線表示組均值。使用單向ANOVA進(jìn) 行組間對比。*ρ<0·05。
圖10闡述了通過ELISA測定如實(shí)施例14: (a)實(shí)驗(yàn)l、(b)實(shí)驗(yàn)2、(c)實(shí)驗(yàn)3中所 述OVA哮喘模型中的各個小鼠中的血清IgE濃度。各小鼠的血清IgE濃度以實(shí)心圓表示。 水平線表示組均值。使用單向ANOVA進(jìn)行組間對比。*p < 0. 05。
圖11呈現(xiàn)來自如實(shí)施例14實(shí)驗(yàn)3中所述的OVA哮喘模型中小鼠群的肺組織學(xué)分 數(shù)。統(tǒng)計對比使用非配對t-檢驗(yàn)*p < 0. 0001。
發(fā)明詳述
本文所用的節(jié)標(biāo)題僅因組織上的目的，并不應(yīng)把其理解為限制所述主題。
可將標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于重組DNA、寡核苷酸合成、組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化、蛋白純化等?？砂?照制造商的說明書或如本領(lǐng)域通常實(shí)行的或如本文所述的進(jìn)行酶促反應(yīng)和純化技術(shù)?？?按照本領(lǐng)域熟知的傳統(tǒng)方法和如本說明書整篇所引用和所討論的各種一般和更具體參考 中所述的一般地進(jìn)行以下方法和技術(shù)。例如參見Sambrook等，2001，Molecular Cloning A Laboratory Manual,第三版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y.，其通過引用結(jié)合到本文中用于任何目的。除非提供具體定義，本文所述的分 析化學(xué)、有機(jī)化學(xué)和醫(yī)藥學(xué)化學(xué)方面用到的術(shù)語及實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)為本領(lǐng)域熟知和通常使 用的。可將標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物的制備、配方和遞送及患者的治療。
授權(quán)于2000年6月6日的USPN 6，072，033中的實(shí)例已描述IL-17RA的鑒定、 克隆和制備，該專利通過整體引用結(jié)合于本文中。人IL-17RA的氨基酸序列示于USPN46，072，033 的 SEQ ID NO 10 (GenBank 登記號 ΝΜ_014339)。人 IL-17RA 有 N 端信號肽， 該信號肽的預(yù)測切割位點(diǎn)約在第27和28個氨基酸之間。該信號肽后接293個氨基酸 的胞外域、21個氨基酸的跨膜域和525個氨基酸的胞質(zhì)尾部。本發(fā)明的方法中有用的人 IL-17RA(huIL-17RA)的可溶形式包括胞外域(殘基1_320或除信號肽外的殘基觀_320)或 保留結(jié)合IL-17A能力的胞外域片段。如USPN 6，072，033中所更詳細(xì)描述，本發(fā)明的方法 中有用的IL-17RA其它形式包括與保留結(jié)合IL-17A能力的天然IL-17RA至少70%至99% 間的氨基酸同一性的突變蛋白和變異。
IL-17受體B(IL_17RB)和其很多同種型為本領(lǐng)域已知，例如Tian等，Oncogene 19:2098(2000)中公開和描述的那些。另外的實(shí)例包括公共數(shù)據(jù)庫可得到的序列，例如但 不限于GenBank登記號NM_018725。此外，如下所述，IL-17RB還可包括生物活性的片段和/或變體。
IL-17RA締合IL-17RB形成異聚受體復(fù)合體，該復(fù)合體為生物活性的(即一旦結(jié)合 配體，所述受體復(fù)合體就被活化并轉(zhuǎn)導(dǎo)信號進(jìn)入表達(dá)其的細(xì)胞，導(dǎo)致生物活性例如mRNA的 誘導(dǎo)、細(xì)胞因子的分泌、細(xì)胞形態(tài)或活化狀態(tài)的改變等)。異聚受體復(fù)合體的各成員稱為其 “組分”或“亞基”。如本文所使用的，“IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體”(或“異聚受體 復(fù)合體”)指的是包含至少IL-17RA和IL-17RB的復(fù)合體；另外的亞基或組分也可形成異聚 受體復(fù)合體的部分。
因此，本發(fā)明的某些方面涉及以下物質(zhì)(例如如下所述的抗原結(jié)合蛋白)和方 法，其用于阻斷IL-17RA與IL-17RB (和/或與另外的受體亞基)締合，從而防止有功能受 體復(fù)合體(能被活化的受體復(fù)合體)的形成。本發(fā)明的其它方面涉及以下拮抗物，其結(jié) 合IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體，或其亞基或組分，并抑制配體(即IL-25)的結(jié)合及 隨后的受體復(fù)合體的活化。本發(fā)明另外的方面涉及結(jié)合IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合 體或其亞基，并防止活化發(fā)生的拮抗物。防止有功能的復(fù)合體形成和/或活化將減少或防 止信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和減少IL-17RA/IL-17RB活化的下游促炎作用。這種方法和拮抗物將有用于 受IL-17/IL-17R途徑影響的各種炎癥和自身免疫性病癥的治療。本發(fā)明的實(shí)施方案有用 于體外測定，以篩選IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的拮抗物或激動劑和/或鑒定表達(dá) IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的細(xì)胞。
此外，IL-17RA和IL-17RB都對形成有功能的IL-25受體復(fù)合體是必需的的認(rèn)識， 引出另外的有用于抑制或拮抗IL-25生物活性的物質(zhì)(例如抗原結(jié)合蛋白)。例如，結(jié)合至 受體復(fù)合體的一個或更多個亞基(例如結(jié)合IL-17RA的抗體或結(jié)合IL-17RB的抗體)并抑 制IL-25結(jié)合或活化受體復(fù)合體的抗原結(jié)合蛋白，將是有效的IL-25拮抗物。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的拮抗物為“分離的”或“基本純的”(或“基本同源 的”)分子。術(shù)語“分離的分子”(其中分子為例如多肽、肽或抗體)為以下分子，根據(jù)其來 源或衍生源，為(1)不伴隨天然伴隨的組分(在其天然狀態(tài)是伴隨其的)、(2)基本沒有來 自同種的其它分子、C3)從不同種的細(xì)胞表達(dá)的或(4)天然不存在的。因此，化學(xué)合成的或 在不同于其天然起源細(xì)胞的細(xì)胞系統(tǒng)中合成的分子，將為與其天然伴隨的組分“分離的”。
利用本領(lǐng)域熟知的純化技術(shù)，通過分離也可使得分子基本無天然伴隨的組分(即 “純化的”蛋白)?？赏ㄟ^許多本領(lǐng)域熟知的方法測定分子純度或同質(zhì)性。例如，可使用聚丙 烯酰胺凝膠電泳和使用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)染色凝膠以呈現(xiàn)多肽，測定多肽樣品的純度。出于某些目的，可通過將HPLC或本領(lǐng)域熟知的其它用于純化的方法，提供更高的分辨率。
“分離的”拮抗物(即蛋白、多肽、肽或抗體)非伴隨至少一些在其天然狀態(tài)下通常 伴隨的物質(zhì)，在一個實(shí)施方案中構(gòu)成給予樣品總蛋白重量的至少約5%，在另一個實(shí)施方案 中至少約50%?！盎炯儭钡鞍渍伎偟鞍字亓康闹辽偌s75%，具體為至少約80%，尤其具體 為至少約90%。所述定義包括從一種在不同有機(jī)體或宿主細(xì)胞中的有機(jī)體產(chǎn)生蛋白?；?者，通過使用誘導(dǎo)啟動子或高表達(dá)啟動子(使得在增加的濃度水平下制得所述蛋白)，可在 顯著高于通常見到的濃度下制得所述蛋白。
這些僅為本文所述發(fā)明的各種實(shí)施方案許多方面的少數(shù)幾個方面。
1. IL-17RA-IL-17RB 拮抗物
IL-17RA締合IL-17RB形成異聚受體復(fù)合體，其為生物活性的(即當(dāng)通過結(jié)合 配體活化時，轉(zhuǎn)導(dǎo)信號進(jìn)入細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞生物活性的變化，例如mRNA的誘導(dǎo)、細(xì)胞因子 的分泌、細(xì)胞形態(tài)或激活狀態(tài)的改變等)。將IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體定義為至 少IL-17RA和IL-17RB蛋白的締合(例如但不限于蛋白間相互作用)，在細(xì)胞的胞外膜上 顯示為異聚受體復(fù)合體。該異聚受體復(fù)合體至少對IL-25信號傳導(dǎo)(即IL-17RA和/或 IL-17RB的活化)是必需的。應(yīng)該理解的是所述IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體還可包 含另外的蛋白(即“輔助”蛋白)。例如，稱為Act-I的信號分子為IL-17A信號級聯(lián)的部 分，最近的證據(jù)表明其也可涉及IL-25信號傳導(dǎo)(Claudio等，J. Immunol. 182 :1617,2009 ； Swaidani等，J. Immunol. 182 =1631,2009)。通過結(jié)合IL-17配體家族成員，例如但不限于 IL-25 (IL-17E)，實(shí)現(xiàn)IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的活化。IL-17RA-IL-17RB異聚受 體復(fù)合體的活化包括但不限于胞內(nèi)信號級聯(lián)和下游事件(例如基因轉(zhuǎn)錄和翻譯)的啟動。
實(shí)施方案涉及抑制亞基(即IL-17RA和IL-17RB和/或輔助蛋白)締合形成 IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的拮抗物(包括抗原結(jié)合蛋白)，以及抑制配體(即 IL-25)結(jié)合至IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體或其亞基的拮抗物(即抗原結(jié)合蛋白)。 另外的實(shí)施方案涉及以下拮抗物(包括抗原結(jié)合蛋白)，其結(jié)合至IL-17RA-IL-17RB異聚受 體復(fù)合體的一個或更多個亞基并導(dǎo)致構(gòu)象改變，該構(gòu)象改變防止復(fù)合體亞基的締合、配體 結(jié)合至此或其激活。
本文使用的“抗原結(jié)合蛋白”為特異結(jié)合鑒定的靶蛋白(例如17RA-IL-17RB異聚 受體復(fù)合體的亞基或異聚受體復(fù)合體本身)的蛋白。“特異結(jié)合”指的是抗原結(jié)合蛋白對鑒 定的靶蛋白比對其它蛋白具有更高的親和力。典型的是，“特異結(jié)合”指的是平衡解離常數(shù) 為< KT7-KT11M,或< IO"8- < 1 (T1CIM，或< IO"9- < IO-10Mo
抗原結(jié)合蛋白包括特異結(jié)合鑒定的靶蛋白(如本文多處定義的)的抗體或其片 段，以及特異結(jié)合鑒定的靶蛋白的肽或多肽。抑制形成IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體， 或抑制配體結(jié)合至此或由此信號傳導(dǎo)的抗原結(jié)合蛋白本文稱為IL-17RA-IL-17RB拮抗物。 因此，IL-17RA-IL-17RB拮抗物的實(shí)施方案可結(jié)合至IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的 任何部分(即結(jié)合至復(fù)合體本身或其亞基)，并抑制受體活化。IL-17RA-IL-17RB拮抗物屬 的亞屬包括抗體(如本文多處定義的)，以及肽和多肽。
受體的活化或活化作用在本文定義為應(yīng)答于結(jié)合至膜結(jié)合受體的分子一個或更 多個胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑的參與和胞內(nèi)信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)(即信號轉(zhuǎn)導(dǎo))，例如但不限于受體配體 相互作用。本文使用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)為通過從一種物理或化學(xué)形式至另一種形式的轉(zhuǎn)化分程傳遞信號；例如，在細(xì)胞生物學(xué)中，細(xì)胞通過其將胞外信號轉(zhuǎn)換為應(yīng)答(例如分泌細(xì)胞因子、 細(xì)胞的增殖或激活狀態(tài)的改變)的過程。
“抑制”可以IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體活性的減少來衡量，例如異聚受體 復(fù)合體的形成、配體(即，IL-17AIL-17F和/或IL-2Q至異聚受體復(fù)合體(或至少其一個 亞基)的結(jié)合或應(yīng)答于配體(例如IL-17A、IL-17F和/或IL-25)的生物活性(即細(xì)胞因子 分泌的刺激、細(xì)胞數(shù)量或活性狀態(tài)的改變或其它生物效應(yīng))減少了至少io^US^JO^、 25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100%。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的拮抗物將IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的活性減 少了至少30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%;在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的 拮抗物抑制至少35 %、45 %、55 %、65 %、75 %、85 %、95 %或更多的活性。
可用本領(lǐng)域已知的任何方法衡量異聚受體復(fù)合體形成的抑制，例如但不限于本文 所述的共免疫沉淀法。其它實(shí)例包括i^orster共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)分析法和其它本領(lǐng)域 已知和可用于定量或定性分析配體/受體相互作用的方法。配體結(jié)合的抑制也可用本領(lǐng)域 已知的任何方法衡量，例如FACS、EIA、RIA、上述測定法和本領(lǐng)域已知用于評價兩個或更多 個分子間相互作用的方法，包括本文描述的那些和USSN 11/906，094中的。
此外，可以IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體IL-25活化的損失來衡量“抑制”， 該損失以生物相關(guān)讀出來衡量，例如但不限于增量調(diào)節(jié)的基因轉(zhuǎn)錄(例如，IL-5、IL-13、嗜 酸細(xì)胞活化趨化因子、MCP-I和/或IL-17RBmRNA水平的上升)和/或基因翻譯，和/或與 IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體活化有關(guān)的各種因子的釋放(該因子包括IL-5和/或 IL-13)，以及本領(lǐng)域已知的由表達(dá)IL-17RA和/或IL-17RB的任何細(xì)胞釋放的任何其它促 炎介質(zhì)。另外的生物相關(guān)讀出包括生物樣品中的細(xì)胞數(shù)量和/或外觀的改變(例如支氣管 肺泡灌洗樣品中細(xì)胞含量的增加、肺組織樣品中杯狀細(xì)胞增生和/或血管/血管周圍的炎 癥)。
IL-17RA-IL-17RB拮抗物另外的實(shí)施方案涉及結(jié)合至IL-17RA的 IL-17RA-IL-17RB拮抗物。在一個實(shí)施方案中，所述拮抗物部分抑制或完全抑制 IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體亞基的締合，從而防止異聚受體復(fù)合體形成。在某些 實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物無需阻斷IL-25結(jié)合至IL-17RA-IL-17RB異 聚受體復(fù)合體。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物可阻斷IL-25結(jié)合至 IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體(或其亞基)。
IL-17RA-IL-17RB拮抗物另外的實(shí)施方案涉及結(jié)合至IL-17RB的 IL-17RA-IL-17RB拮抗物。在一個實(shí)施方案中，所述拮抗物部分抑制或完全抑制 IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體亞基的締合，從而防止異聚受體復(fù)合體形成。在某些 實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物無需阻斷IL-25結(jié)合至IL-17RA-IL-17RB異 聚受體復(fù)合體。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物可阻斷IL-25結(jié)合至 IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體(或其亞基)。
IL-17RA-IL-17RB拮抗物另外的實(shí)施方案涉及結(jié)合至IL-17RA和IL-17RB兩者的 IL-17RA-IL-17RB拮抗物，包括結(jié)合異聚受體復(fù)合體的那些。在一個實(shí)施方案中，所述拮 抗物部分抑制或完全抑制IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體亞基的締合，從而防止異聚受 體復(fù)合體形成。在某些實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物無需阻斷IL-25結(jié)合至7IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物可阻 斷IL-25結(jié)合至IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體(或其亞基)。
上述IL-17RA-IL-17RB拮抗物的各種實(shí)施方案包括以下IL-17RA-IL-17RB拮抗 物，其結(jié)合至IL-17RA、或IL-17RB或所述異聚受體復(fù)合體，并空間上抑制或阻礙所述異聚 受體復(fù)合體亞基的締合，從而防止IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的形成。在所述異聚 受體復(fù)合體亞基締合的位阻的一個實(shí)例中，拮抗物結(jié)合至亞基發(fā)生在以下位點(diǎn)上，該位點(diǎn) 對該亞基與受體復(fù)合體的其它亞基締合是必需的，或足夠接近于該位點(diǎn)，使得所述拮抗物 的空間排布防止所述異聚受體復(fù)合體亞基的締合?；蛘撸鲜鯥L-17RA-IL-17RB拮抗物的 各種實(shí)施方案包括以下IL-17RA-IL-17RB拮抗物，其結(jié)合至IL-17RA、或IL-17RB或所述異 聚受體復(fù)合體，并誘導(dǎo)(或防止)所述異聚受體復(fù)合體的一個或更多個亞基構(gòu)象改變，從而 抑制IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的形成。在構(gòu)象改變防止所述異聚受體復(fù)合體亞基 的締合的一個實(shí)例中，拮抗物結(jié)合至亞基發(fā)生在以下位點(diǎn)上，該位點(diǎn)可遠(yuǎn)離對該亞基與受 體復(fù)合體的其它亞基締合必需的位點(diǎn)，引起防止其與其它亞基締合的該亞基構(gòu)象改變，或 防止對亞基締合所必需的構(gòu)象改變。類似的，上述IL-17RA-IL-17RB拮抗物的各種實(shí)施方 案包括以下IL-17RA-IL-17RB拮抗物，其結(jié)合至IL-17RA、或IL-17RB或所述異聚受體復(fù)合 體，并誘導(dǎo)(或防止)以下構(gòu)象改變，其抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)或空間上阻礙所述異聚受體復(fù)合體的 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。
在另一個替代實(shí)施方案中，上述各種IL-17RA-IL-17RB拮抗物包括以下 IL-17RA-IL-17RB拮抗物，其結(jié)合至IL-17RA、或IL-17RB或所述異聚受體復(fù)合體，并誘導(dǎo)所 述異聚受體復(fù)合體(或其亞基)構(gòu)象改變，從而抑制IL-25(或另一個配體)結(jié)合至所述 IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體。所述實(shí)施方案還包括以下IL-17RA-IL-17RB拮抗物，其 結(jié)合至IL-17RA、或IL-17RB或IL-17RA和IL-17RB兩者，并空間上阻礙或抑制配體(例如 IL-25)結(jié)合至所述IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體。本發(fā)明的實(shí)施方案也包括以下拮抗 物，其結(jié)合至IL-17RA、或IL-17RB或IL-17RA和IL-17RB兩者，并抑制(部分地或完全地) 所述受體復(fù)合體的信號傳導(dǎo)途徑，從而抑制通過IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的信號 傳導(dǎo)。
在另一個替代實(shí)施方案中，IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合至配體(即IL-17A、 IL-25等)，并抑制通過IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的信號傳導(dǎo)。這種拮抗物可通過 抑制至IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體一個亞基或至多于一個這種亞基的結(jié)合而起作 用。因此，例如拮抗物可允許配體結(jié)合第一個受體亞基，但防止第二個受體亞基與配體或第 一個受體亞基的相互作用。這種抑制可如上述發(fā)生，例如通過結(jié)合的位阻、構(gòu)象改變的誘導(dǎo) 等，如此以抑制(部分地或完全地)通過IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的信號傳導(dǎo)。
1. 1IL-17RA-IL-17RB 拮抗物抗體
如本文多處定義，IL-17RA-IL-17RB拮抗物的實(shí)施方案包括抗體或其片段。因此， 所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物包括多克隆抗體、單克隆抗體、雙特異性抗體、雙抗體、微抗 體、域抗體、合成抗體(有時本文稱為“抗體模擬物”)、嵌合抗體、人源化抗體、完全人抗體、 抗體融合物(有時稱為“抗體綴合物(antibody conjugates) ”)，以及其片段。
IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體也可包括單域抗體，該單域抗體包含兩條重鏈的 二聚體，并沒有輕鏈，例如發(fā)現(xiàn)于駱駝和美洲駝的那些(例如，參見Muldermans等，2001，J. Biotechnol. 74 :277-302 ；Desmyter 等，2001，J. Biol. Chem. 276 :26285-26290)。
IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體可包括四聚體或其片段。各四聚體典型地由兩對相 同的多肽鏈組成，每一對具有一條“輕”鏈(典型地具有約25kDa的分子量)和一條“重” 鏈(典型地具有約50-70kDa的分子量)。各鏈的氨基端部分包括主要擔(dān)負(fù)抗原識別的可 變區(qū)。各鏈的羧基端部分界定了主要擔(dān)負(fù)效應(yīng)子功能的恒定區(qū)。人的輕鏈分為κ和λ輕 鏈。重鏈分為μ、δ、Υ、α或ε重鏈，并將抗體的同種型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA 和IgE0 IgG有幾個亞類，包括但不限于IgGU IgG2、IgG3和IgG4。IgM有亞類，包括但不 限于IgMl和IgM2。IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體包括所有這種同種型。為了示范性的目 的，抗體片段包括但不限于F(ab)、F(ab' )、F(ab' ) 2、Fv和單鏈Fv片斷(scfv)，以及單 鏈抗體。IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體可包括任何前述的實(shí)例。
抗體的結(jié)構(gòu)為本領(lǐng)域所熟知，無需在此復(fù)述，但作為實(shí)例，重鏈和輕鏈的可變區(qū)通 常顯示相同的一般結(jié)構(gòu)，由三個高變區(qū)(也叫互補(bǔ)決定區(qū)或CDR)連接相對保守的框架區(qū) (FR)。所述CDR為抗體(或抗原結(jié)合蛋白，如本文概述)的高變區(qū)，該高變區(qū)擔(dān)負(fù)抗原識別 和結(jié)合。來自各對兩條鏈的⑶R由框架區(qū)定位，實(shí)現(xiàn)結(jié)合至特異表位。從N端至C端，輕 鏈和重鏈都包括FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4域。在某些實(shí)施方案中，至各域的 氨基酸分配可與 Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest 中定義的 一致。參見，Chothia 等，1987，J. Mol. Biol. 196 :901-917 ；Chothia 等，1989，Nature 342 878-883。
本文所用的“互補(bǔ)決定區(qū)”或“⑶R”指結(jié)合蛋白區(qū)，該區(qū)組成用于抗原結(jié)合的主 要表面接觸點(diǎn)。本發(fā)明的結(jié)合蛋白可具有六個⑶R，例如一條重鏈⑶Rl( “⑶RH1”)、一條 重鏈 CDR2( “CDRH2”)、一條重鏈 CDR3( “CDRH3”)、一條輕鏈 CDRl ( “CDRL1 ”)、一條輕鏈 CDR2 ( “CDRL2，，)、一條輕鏈CDR3 ( “CDRL3，，)。CDRHl典型地包含約5個至約7個氨基酸， ⑶RH2典型地包含約16個至約19個氨基酸，而⑶RH3典型地包含約3個至約25個氨基酸。 ⑶RLl典型地包含約10個至約17個氨基酸，⑶RL2典型地包含約7個氨基酸，而⑶RL3典 型地包含約7個至約10個氨基酸。
IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體至少包括輕鏈或重鏈可變區(qū)的全部或部分，或 輕鏈和重鏈兩者可變區(qū)的全部或部分，該可變區(qū)的全部或部分特異結(jié)合至IL-17RA、或 IL-17RB、或IL-17RA和IL-17RB兩者?？勺儏^(qū)的片段(即“部分”)的實(shí)例包括CDR。換句 話說，IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體至少包括可變區(qū)的至少一個⑶R，其中所述⑶R特異結(jié) 合 IL-17RA、或 IL-17RB、或 IL-17RA和 IL-17RB 兩者。在替代實(shí)施方案中，IL-17RA-IL-17RB 拮抗物抗體包括可變區(qū)的至少兩個、或至少三個、或至少四個、或至少五個、或至少所有六 個⑶R，其中至少一個⑶R特異結(jié)合IL-17RA、或IL-17RB、或IL-17RA和IL-17RB兩者。所 述⑶R可來自重鏈或輕鏈，可為各鏈中三個⑶R的任一個，即所述⑶R各自獨(dú)立選自⑶RH1、 CDRH2、CDRH3、CDRLl、CDRL2 和 CDRL3。
所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體的實(shí)施方案可包括有用的⑶R移植到其中的支 架結(jié)構(gòu)。某些實(shí)施方案包括用于人源化抗體的人支架組分。在一個實(shí)施方案中，所述支架 結(jié)構(gòu)為傳統(tǒng)的、四聚抗體結(jié)構(gòu)。因此，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體的實(shí)施方案可包括 組成重鏈或輕鏈的另外組分例如框架、J和D區(qū)、恒定區(qū)等。所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物 抗體的實(shí)施方案可包括具有修飾的Fc結(jié)構(gòu)域(稱作Fc變體)的抗體?！癋e變體”指以下分子或序列，其修飾自天然Fc但仍包含補(bǔ)救受體(Fcfoi)的結(jié)合位點(diǎn)?！癋e變體”的另外實(shí) 例包括人化自非人類天然Fc的分子或序列。此外，天然Fc包含可移去的位點(diǎn)，因?yàn)檫@些位 點(diǎn)提供的結(jié)構(gòu)特征或生物活性對本發(fā)明的融合分子是非必需的。因此，術(shù)語“Fe變體”包含 缺少一個或更多個以下天然Fc位點(diǎn)或殘基的分子或序列，該位點(diǎn)或殘基影響或涉及(1) 二 硫鍵形成、( 與選定宿主細(xì)胞的不相容性、( 在選定宿主細(xì)胞中表達(dá)時的N端異質(zhì)性、 (4)糖基化、( 與補(bǔ)體的相互作用、(6)結(jié)合至補(bǔ)救受體之外的Fc受體或(7)依賴抗體的 細(xì)胞毒性(ADCC)。
IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體的實(shí)施方案包括人單克隆抗體。定向抗人IL-17RA、 或IL-17RB或IL-17RA和IL-17RB兩者的人單克隆抗體，可用本領(lǐng)域已知的任何方法制得， 例如但不限于XenoMouse 技術(shù)(例如，參見美國專利第6，114，598、6，162，963、6，833，268、 7, 049, 426,7, 064, 244 號；Green 等，1994，Nature Genetics 7 :13-21 ；Mendez 等，1997， Nature Genetics 15 :146-156 ；Green 禾口 Jakobovitis，1998，J. Ex. Med. 188 :483-495)。 制得完全人抗體的另外實(shí)例包括UltiMab Human Antibody Development System 和 Trans-Phage Technology (Medarex Corp.，Princeton, NJ)、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展 示技術(shù)(例如參見Cambridge Antibody Technology, Cambridge, UK)，以及本領(lǐng)域己知的 任何其它方法。
IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體的某些實(shí)施方案包括嵌合和人源化抗體或其片段。 通常，嵌合抗體和人源化抗體都指結(jié)合來自多于一種物種的區(qū)的抗體。例如，嵌合抗體通常 包含來自非人類的可變區(qū)和來自人類的恒定區(qū)。人源化抗體通常指非人類抗體，其已將可 變域框架區(qū)交換人抗體中發(fā)現(xiàn)的序列。通常，在人源化抗體中，整個抗體除CDR外由人源多 核苷酸編碼，或除其⑶R內(nèi)的外與這種抗體相同。所述⑶R，其中一些或全部由源自非人類 有機(jī)體的核酸編碼，被移植進(jìn)人抗體可變區(qū)的β折疊片框架以制造一種抗體，該抗體的特 異性由移植的⑶R決定。這種抗體的制造為本領(lǐng)域所熟知(例如，參見Jones，1986, Nature 321 :522-525 ；Verhoeyen 等，1988，kience 239 1534-1536)。人源化抗體也可用具有基因 工程化免疫系統(tǒng)的小鼠或用本領(lǐng)域已知的任何其它方法或技術(shù)產(chǎn)生(例如參見Roque等， 2004, Biotechnol. Prog. 20 :639-6 )。在某些實(shí)施方案中，所述CDR為人類的，因而在本文 中人源化抗體和嵌合抗體都可包含一些非人類CDR ；例如，可產(chǎn)生以下人源化抗體，其包含 ⑶RH3和⑶RL3區(qū)，而其它⑶R區(qū)中的一個或更多個為不同特定來源。
在一個實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體包括多特異性抗體。這些 為結(jié)合至兩個(或更多個)不同抗原的抗體。本領(lǐng)域已知的雙特異性抗體實(shí)例為“雙抗 體(diabody)”。雙抗體可以本領(lǐng)域已知的各種方法產(chǎn)生，例如以化學(xué)法或從雜種雜交瘤 制備(Holliger 和 Winter，1993，Current Opinion Biotechnol. 4 :446-449)。多特異性 IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體的具體實(shí)施方案為具有結(jié)合IL-17RA和IL-17RB兩者能力的 抗體。
在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體包括微抗體。微抗體為極 小化的抗體樣蛋白，包含連接至CH3結(jié)構(gòu)域的單鏈Fv(SCFv ；描述于下面)(例如，參見Hu 等，1996，Cancer Res. 56 :3055-3061)。
在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體包括域抗體；例如描述于 美國專利第6，M8，516號的那些。域抗體(dAbs)為抗體的有功能的結(jié)合結(jié)構(gòu)域，相當(dāng)于人抗體的重鏈(VH)或輕鏈(VL)的可變區(qū)。dAbs具有約13kDa的分子量，或不到完整抗體大 小的1/10。dAbs在各種宿主中良好表達(dá)，該宿主包括細(xì)菌、酵母和哺乳動物的細(xì)胞系統(tǒng)。此 外，dAbs高度穩(wěn)定，甚至經(jīng)受嚴(yán)酷條件(例如冷凍干燥或熱變性)后仍保留活性。例如，參 見美國專利 6，291，158 ；6，582，915 ；6，593，081 ；6，172，197 ；美國序號 2004/0110941 ；歐洲 專利 0368684 ；美國專利 6，696，245、W004/058821、W004/003019 和 W003/002609。
如前所述，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體可包括抗體片段，即本文任何所述 抗體的片段，該片段保留結(jié)合至IL-17RA、或IL-17RB或IL-17RA和IL-17RB兩者的特異 性。具體抗體片段包括但不限于⑴由VL、VH、CL和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fab片段、(ii)由 VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段、(iii)由單個抗體的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段、(iv) 由單可變域組成的dAb片段(例如參見Ward等，1989，Nature 341 :544-546)、(ν)分離 出的⑶R區(qū)、(vi)F(ab' )2片段，包含兩個連接著的Fab片段的二價片段、(vii)單鏈Fv 分子(scFv)，其中VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域由肽接頭連接，該肽接頭允許兩個結(jié)構(gòu)域締合形 成抗原結(jié)合位點(diǎn)(例如參見 Bird 等，1988Science 242 :423-426 ；Huston 等，1988，Proc. Natl. Acad. Sci. 85 :5879-5883), (viii)雙特異性單鏈 Fv 二聚體和(ix) “雙抗體”或“三 鏈抗體(triabody) ”，通過基因融合構(gòu)建的多價或多特異性片段(例如，參見Tomlinson等， 2000，Methods Enzymo 1. 326 :461-479 ；W094/13804 ；Holliger 等，1993，Proc. Natl. Acad. Sci. 90 :6444-6448)?？尚揎椝隹贵w片段。例如，可通過摻入連接VH和VL結(jié)構(gòu)域的二硫 橋而穩(wěn)定所述分子(例如，參見Reiter等，1996，Nature Biotech. 14 :1239-1245)。再次， 如本文概述，這些片段的非⑶R成分優(yōu)選人序列。
在另外的實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體包括抗體融合蛋白(有 時本文稱為“抗體綴合物”)。所述綴合配偶體可為蛋白類的或非蛋白類的；后者通常使用 抗原結(jié)合蛋白(參見關(guān)于抗原結(jié)合蛋白的共價修飾的討論)和綴合配偶體上的官能團(tuán)產(chǎn) 生。例如本領(lǐng)域已知接頭；例如本領(lǐng)域熟知的同雙功能或異雙功能接頭(例如，參見通過 引用結(jié)合到本文的1994年P(guān)ierce Chemical Company目錄，關(guān)于交聯(lián)劑的技術(shù)部分，頁碼 155-200)。合適的綴合物包括但不限于如下述的標(biāo)記、藥物或細(xì)胞毒類物質(zhì)(包括但不限 于細(xì)胞毒類藥物(例如化療劑)或毒素或這種毒素的活性片段)。合適的毒素和其相應(yīng)的 片段包括白喉毒素A鏈、外毒素A鏈、蓖麻毒蛋白A鏈、相思豆毒蛋白A鏈、麻瘋樹毒蛋白、 巴豆毒蛋白、酚霉素、伊諾霉素等。細(xì)胞毒類物質(zhì)還包括放射化學(xué)物質(zhì)，其通過將放射性同 位素綴合至抗原結(jié)合蛋白，或?qū)⒎派湫院怂亟Y(jié)合至已共價連接至抗原結(jié)合蛋白的螯合劑制 得。另外的實(shí)施方案利用刺孢霉素、auristatin、格爾德霉素和美登素。
在一個實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體包括抗體類似物，有時稱 為“合成抗體”。例如可用來自IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體的⑶R移植各種替代蛋白支 架或人工支架。這種支架包括但不限于為穩(wěn)定結(jié)合蛋白的三維結(jié)構(gòu)所引入的突變，以及由 例如生物相容聚合物組成的完全合成的支架。例如，參見Korndorfer等，2003，Proteins Structure, Function, and Bioinformatics,卷 53,第 1 期121-129 ；Roque 等，2004, Biotechnol. Prog. 20 :639_6M。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抗體可 包括肽抗體模擬物或“PAMs”，以及利用纖連蛋白成分作為支架的抗體模擬物。
1. 2IL-17RA-IL-17RB 拮抗物肽 / 多肽
IL-17RA-IL-17RB拮抗物的實(shí)施方案包括以肽和多肽形式的蛋白，該肽和多肽特異結(jié)合至 IL-17RA、或 IL-17RB 或 IL-17RA 和 IL-17RB 兩者，并抑制 IL-17A、IL-17F 和 / 或 IL-25的活性。在某些實(shí)施方案中，IL-17RA-IL-17RB拮抗物抑制所述IL-17RA-IL-17RB異 聚受體復(fù)合體亞基的締合；誘導(dǎo)(或防止)受體亞基的構(gòu)象改變，從而抑制其相互作用；抑 制配體(即IL-2Q至所述異聚受體復(fù)合體(或其亞基)的結(jié)合，或誘導(dǎo)所述異聚受體復(fù)合 體(或其亞基)的構(gòu)象改變，該構(gòu)象改變抑制配體結(jié)合至此。
實(shí)施方案包括重組的IL-17RA-IL-17RB拮抗物。“重組蛋白”為利用重組技術(shù)制得 的蛋白，即通過利用本領(lǐng)域已知的方法表達(dá)重組核酸。
本文所使用的“肽”指1-100個氨基酸的分子。示范性的肽可包括產(chǎn)生自隨機(jī)庫的 那些，該示范性的肽結(jié)合至IL-17RA、或IL-17RB或IL-17RA和IL-17RB兩者，抑制L-17RA 和IL-17RB締合形成IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體或抑制IL-17RA-IL-17RB異聚受體 復(fù)合體信號傳導(dǎo)。例如以下肽序列，其來自完全隨機(jī)序列(例如由噬菌體展示法或RNA-肽 篩選法選出的)，和序列中天然存在分子的一個或更多個殘基被天然存在分子中該位置不 存在的氨基酸殘基取代的序列。鑒定肽序列的示范性方法包括噬菌體展示、大腸桿菌展示、 核糖體展示、RNA-肽篩選、化學(xué)篩選等。
本文所用的“蛋白”指至少兩個共價連接的氨基酸，所述蛋白包括蛋白、多肽、寡肽 和肽。在某些實(shí)施方案中，所述兩個或更多個共價連接的氨基酸通過肽鍵連接。所述蛋白可 由天然存在的氨基酸和肽鍵組成，例如如下面概述的當(dāng)利用表達(dá)系統(tǒng)和宿主細(xì)胞重組地制 得蛋白時。或者，在某些實(shí)施方案中(例如當(dāng)篩選蛋白類候選物的抑制IL-17RA和IL-17RB 締合的能力時)，所述蛋白可包含合成氨基酸(例如高苯丙氨酸、瓜氨酸、鳥氨酸和正亮氨 酸)或擬肽類結(jié)構(gòu)，即“肽或蛋白類似物”，例如類肽(參見，Simon等，1992，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 89 :9367，通過引用結(jié)合到本文中)，該蛋白能抗蛋白酶或其它生理和/或 貯藏條件。特別在蛋白通過本領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法體外合成時，可摻入這種合成氨基酸。 此外，可使用擬肽、合成和天然存在的殘基/結(jié)構(gòu)的任何組合?！鞍被帷币舶▉啺被釟?基，例如脯氨酸和羥脯氨酸。該氨基酸“R基團(tuán)”或“側(cè)鏈”可為(L)-或(S)-構(gòu)型。在一個 具體的實(shí)施方案中，該氨基酸處于(L)-或(S)-構(gòu)型。
拮抗蛋白的一個實(shí)例為可溶的IL-17RA-IL-17RB異聚受體。制備這種可溶異聚 受體的方法為本領(lǐng)域已知，例如通過引用結(jié)合到本文的授權(quán)于2003年7月8號的美國專 利6，589，764中所述。IL_17A_IL_17B受體復(fù)合體包括以下IL-17RA和IL-17RB (禾口 /或 另外的亞基)，其作為共表達(dá)于相同細(xì)胞中的蛋白，或作為互相連接(例如，通過任何合適 的方法(例如通過交聯(lián)劑或多肽接頭)共價連接)的受體亞基。在一個實(shí)施方案中，異聚 受體形成自各受體成分與抗體分子的一部分(例如Fc區(qū))的融合蛋白。或者，所述異聚 IL-17A-IL-17B受體可通過非共價相互作用形成，例如生物素與抗生物素蛋白的非共價相 互作用。
2. 0IL-17RA-IL-17RB 拮抗物
如上所述，IL-17RA-IL-17RB拮抗物包括IL-17RA-IL-17RB抗原結(jié)合蛋白，該 抗原結(jié)合蛋白包括但不限于抗體、肽和多肽，以及其它拮抗物(包括其它多肽或蛋白)。 IL-17RA-IL-17RB拮抗物(例如IL-17RA-IL-17RB抗原結(jié)合蛋白)的替代實(shí)施方案包括 IL-17RA-IL-17RB拮抗物的共價修飾。這種修飾可在翻譯后完成。例如，通過使所述拮抗 物的特定氨基酸殘基與以下有機(jī)衍生劑反應(yīng)，將所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物的數(shù)種共價修飾引入分子中，該有機(jī)衍生劑能與選定的側(cè)鏈或N-或C-端殘基反應(yīng)。以下表示這種對 IL-17RA-IL-17RB拮抗物修飾的實(shí)例。
最常將半胱氨酰殘基與α -鹵代乙酸酯(及相應(yīng)的胺)(例如氯乙酸或氯乙酰胺) 反應(yīng)，以得到羧甲基或氨甲酰甲基衍生物。也通過與一溴三氟丙酮、α-溴-β-(5-咪唑 基)丙酸、磷酸氯乙酰酯、N-烷基馬來酰亞胺、3-硝基-2-吡啶基二硫化物、甲基2-吡啶基 二硫化物、對氯汞苯甲酸、2-氯汞基-4-硝基酚或氯-7-硝基苯并-2- Pl-1,3- 二唑反應(yīng) 衍生半胱氨酰殘基。通過與焦碳酸二乙酯在PH 5. 5-7.0反應(yīng)衍生組氨酰殘基，因?yàn)樵撛噭?相對專一于組氨酰側(cè)鏈。對溴代苯甲酰甲基溴也為有用的；反應(yīng)優(yōu)選在PH 6. 00. IM二甲胂 酸鈉中進(jìn)行。將賴氨酰(Iysinyl)和氨基末端殘基與琥珀酸酐或其它羧酸酐反應(yīng)。與這些 試劑的衍生具有反轉(zhuǎn)賴氨酰殘基電荷的作用。其它適用于衍生含α氨基殘基的試劑包括 亞氨酸酯，例如甲基吡啶亞胺甲酯；磷酸吡哆醛；吡哆醛；chloroborohydride ；三硝基苯磺 酸；鄰甲基異脲；2，4_戊二酮；及轉(zhuǎn)氨酶催化的與乙醛酸的反應(yīng)。通過與一種或幾種常規(guī)試 劑反應(yīng)修飾精氨酰殘基，例如苯甲酰甲醛、2，3_ 丁二酮、1，2_環(huán)己二酮和茚三酮。因?yàn)殡夜?能團(tuán)的高pKa，精氨酸殘基的衍生反應(yīng)需要在堿性條件下進(jìn)行。此外，這些試劑可與賴氨酸 的基團(tuán)以及精氨酸ε氨基反應(yīng)。
酪氨酰殘基的特異修飾，尤其有興趣于引入光譜標(biāo)記進(jìn)酪氨酰殘基，可通 過與芳香族重氮化合物或四硝基甲烷反應(yīng)得到。最通常的是，將N-乙?；溥?(N-acetylimidizole)和四硝基甲烷分別用于形成0_乙酰酪氨酰類和3_硝基衍生物。使 用125I或131I碘化酪氨酰殘基以制備用于IL-17RA放射免疫測定的標(biāo)記蛋白，上述的氯胺T 法為適用的。通過與碳二亞胺(R' -N = C = N-R')反應(yīng)選擇性地修飾羧基側(cè)基(天冬 氨?；蚬劝滨；?，其中R和R'任選為不同烷基，例如1-環(huán)己基-3-(2-嗎啉基-4-乙 基)碳二亞胺或1-乙基-3-(4-氮陽離子-4，4-二甲基戊基)碳二亞胺。此外，通過與銨 離子反應(yīng)將天冬氨酰基和谷氨?；鶜埢D(zhuǎn)化為天冬酰胺?；凸劝滨０孵；鶜埢?。
雙功能物質(zhì)的衍生有用于交聯(lián)IL-17RA-IL-17RB拮抗物至水不溶性載體的基質(zhì) 或表面，以用于各種方法中。通常使用的交聯(lián)劑包括，例如1，1-雙(重氮乙酰基)-2-苯乙 烷、戊二醛、N-羥琥珀酰亞胺酯，例如具有4-疊氮基水楊酸的酯類、同雙功能亞氨酸酯(包 括雙琥珀酰胺酯(例如3，3 ‘ - 二硫代雙(琥珀酰亞胺丙酸酯))和雙功能馬來酰亞胺(例 如雙-N-馬來酰亞氨基-1，8辛烷)。衍生物，例如甲基-3-[(對-疊氮基苯基)二硫代] 丙亞氨酸酯，產(chǎn)生光可活化中間體，該中間體在存在光時能形成交聯(lián)。或者，使用水不溶 性反應(yīng)性基質(zhì)例如溴化氰活化的碳水化合物和描述于美國專利第3，969，287,3, 691，016、 4，195，128,4, 247，642,4, 229，537和4，330，440號的反應(yīng)性底物用于蛋白固定化。
谷氨酰胺酰基和天冬酰胺?；鶜埢３７謩e脫去酰胺基成為相應(yīng)的谷氨?；?天冬氨?；鶜埢；蛘?，這些殘基在溫和的酸性條件性下脫去酰胺基。這些殘基的任一 種形式都落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。其它修飾包括脯氨酸和賴氨酸的羥基化、絲氨?；蛱K氨 酰殘基羥基的磷酸化、賴氨酸、精氨酸和組氨酸側(cè)鏈α氨基的甲基化(Τ. Ε. Creighton， Proteins Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co. , San Francisco, pp. 79-86 [1983])、N端氨基的乙?；腿魏蜟端羧基的酰胺化。
本發(fā)明范圍內(nèi)的IL-17RA-IL-17RB拮抗物的另一種共價修飾包括改變蛋白的糖 基化模式。如本領(lǐng)域已知，糖基化模式可取決于蛋白的序列(例如特定糖基化氨基酸殘基，在下面討論)，或產(chǎn)生蛋白的宿主細(xì)胞或有機(jī)體。多肽的糖基化通常為N 連接或0連接。N連接指碳水化合物部分連接至天冬酰胺殘基的側(cè)鏈。三肽序列天冬酰 胺-χ-絲氨酸和天冬酰胺-χ-蘇氨酸，其中X為除脯氨酸外的任何氨基酸，為碳水化合物部 分酶促連接至天冬酰胺側(cè)鏈的識別序列。因此，多肽中存在這些三肽序列中的任一種則產(chǎn) 生潛在的糖基化位點(diǎn)。0連接的糖基化指糖類N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一個連 接至羥基氨基酸，最通常為絲氨酸或蘇氨酸，盡管5-羥脯氨酸或5-羥賴氨酸也可用到。通 過改變氨基酸序列容易實(shí)現(xiàn)將糖基化位點(diǎn)加至IL-17RA-IL-17RB拮抗物，使得其包含一個 或更多個上述的三肽序列(用于N連接的糖基化位點(diǎn))。所述改變也可通過一個或更多個 絲氨酸或蘇氨酸殘基的加入或取代起始序列得到(用于0連接的糖基化位點(diǎn))。簡言之，所 述抗原結(jié)合蛋白氨基酸序列優(yōu)選通過以下改變，其為在DNA水平的變化，尤其通過編碼目 標(biāo)多肽的DNA在預(yù)選堿基上的突變，使得產(chǎn)生將翻譯成所需氨基酸的密碼子。
在IL-17RA-IL-17RB拮抗物上增加碳水化合物部分的數(shù)量的另一種方法為通過 化學(xué)或酶促偶聯(lián)糖苷至蛋白。這些方法的優(yōu)勢在于其無需在具有用于N-或0-連接糖基 化的糖基化能力的宿主細(xì)胞中生產(chǎn)所述蛋白。取決于所用的偶聯(lián)方式，所述糖類可連接至 (a)精氨酸和組氨酸、(b)自由羧基、(c)自由巰基(例如半胱氨酸的那些)、(d)自由羥基 (例如絲氨酸、蘇氨酸或羥脯氨酸的那些)、(e)芳族殘基(例如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸 的那些)或(f)谷氨酰胺的酰胺基。這些方法在1987年9月11日公開的WO 87/05330和 Aplin 和 Wriston，1981，CRC Crit. Rev. Biochem.，pp. 259-306 中所述。
可以化學(xué)或酶促地實(shí)現(xiàn)存在于起始IL-17RA-IL-17RB拮抗物的碳水化合物部分 的去除。化學(xué)去糖基化要求蛋白暴露至化合物三氟甲烷磺酸或等同的化合物中。該處理 導(dǎo)致除連接糖類(N-乙酰葡糖胺或N-乙酰半乳糖胺)外的多數(shù)或全部糖類的裂解，而完 整地留下多肽?；瘜W(xué)去糖基化由Hakimuddin等，1987，Arch. Biochem. Biophys. 259 :52和 Edge等，1981, Anal. Biochem. 118 :131所述。在多肽上的碳水化合物部分的酶促裂解可通 過利用各種內(nèi)切和外切糖苷酶實(shí)現(xiàn)，如Thotakura等，1987，Meth. Enzymol. 138 :350所述。 可通過利用化合物衣霉素防止在潛在糖基化位點(diǎn)的糖基化，如Duskin等，1982，J. Biol. Chem. 257 :3105所述。衣霉素阻斷蛋白-N-糖苷連接的形成。
所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物的另一種共價修飾包括以美國專利第4，640，835、 4，496，689,4, 301，144,4, 670，417,4, 791，192 或 4，179，337 號中闡述的方式將抗原結(jié)合蛋白連接至各種非蛋白類聚合物，包括但不限于各種多羥基化合物，例如聚乙二醇(PEG)、聚 丙二醇或聚氧乙烯。此外，如本領(lǐng)域已知，氨基酸取代可在抗原結(jié)合蛋白內(nèi)的各個位置完 成，以促進(jìn)聚合物例如PEG的加入。
IL-17RA-IL-17RB拮抗物的共價修飾包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，且通常但不總是在 翻譯后實(shí)現(xiàn)。例如，通過使IL-17RA-IL-17RB拮抗物的特定氨基酸殘基與能跟選定側(cè)鏈或 N-或C末端殘基反應(yīng)的有機(jī)衍生化試劑反應(yīng)，將IL-17RA-IL-17RB拮抗物的數(shù)種共價修飾 引入所述分子中。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白的共價修飾包括加入一種或更多種標(biāo) 記。通常，取決于檢測標(biāo)記的方法，標(biāo)記分為多種類別a)同位素標(biāo)記，其可為放射性同位素 或重同位素；b)磁性標(biāo)記(例如磁性粒子)；c)氧化還原活性部分；d)光學(xué)染料；酶促基團(tuán) (例如辣根過氧物酶、β-半乳糖苷酶、螢光酶、堿性磷酸酶)；e)生物素化的基團(tuán)；和f)由14次級報道分子識別的預(yù)定多肽表位(例如亮氨酸拉鏈序列對、第二抗體的結(jié)合位點(diǎn)、金屬 結(jié)合域、表位標(biāo)記等)。在某些實(shí)施方案中，所述標(biāo)記基團(tuán)通過各種長度的間隔臂偶聯(lián)至所 述抗原結(jié)合蛋白以減少潛在位阻。用于標(biāo)記蛋白的各種方法為本領(lǐng)域已知，可在進(jìn)行本發(fā) 明中使用。
具體標(biāo)記包括光學(xué)染料，包括但不限于發(fā)色團(tuán)、磷光體和熒光團(tuán)，后者在很多例子 中將具體化。熒光團(tuán)可為“小分子”熒光劑或蛋白類熒光劑。“熒光標(biāo)記”指可通過其固 有熒光特性檢測的任何分子。合適的熒光標(biāo)記包括但不限于熒光素、羅丹明、四甲基羅丹 明、伊紅、藻紅、香豆素、甲基香豆素、芘、孔雀石綠、芪、螢光黃、Cascade BlueJ, Texas Red、 IAEDANS、EDANS、BODIPY FL, LC Red 640、Cy 5、Cy 5. 5、LC Red 705、俄勒岡綠(Oregon green)、Alexa-Fluor 染料(Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 430、Alexa Fluor 488、 Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor633、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680)、Cascade Blue、Cascade Yellow 禾口 R-藻紅蛋白(PE) (Molecular Probes, Eugene, OR)、FITC、羅丹明、及 Texas Red (Pierce, Rockford, IL)、Cy5、Cy5. 5、 Cy7 (Amersham Life Science, Pittsburgh, PA) 合適的光學(xué)染料，包括熒光團(tuán)，描述于 Richard P. Haugland 的 Molecular Probes Handbook，通過引用明確地結(jié)合至此。
合適的蛋白類熒光標(biāo)記也包括但不限于綠色熒光蛋白(包括海腎(Renilla)、 Ptilosarcus Aequorea 禾中白勺 GFP (Chalfie 1994, Science263 :802-805)), EGFP(Clontech Laboratories, Inc.，Genbank登記號U55762)、藍(lán)色熒光蛋白(BFP,Quantum Biotechnologies, Inc. 1801de Maisonneuve Blvd. West,8th Floor, Montreal, Quebec, Canada H3H 1J9 ；Stauber,1998, Biotechniques 24 :462-471 ；Heim φ,1996, Curr. Biol. 6 :178-182)、增強(qiáng)的黃色熒光蛋白(EYFP, Clontech Laboratories, Inc.)、螢光素 酶(Ichiki 等，1993，J. Immunol. 150 :5408-5417)、β 半乳糖苷酶(Nolan 等，1988，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 85 :2603-2607)和海腎(W092/15673、W095/07463、W098/14605、 W098/26277、W099/49019，美國專利第 5292658、5418155、5683888、5741668、5777079、 5804387、5874304、5876995、5925558號)。所有上面引用的參考通過引用明確地結(jié)合到本 文中。
還可對任何其它蛋白類IL-17RA-IL-17RB拮抗物進(jìn)行抗原結(jié)合蛋白的所有上述 修飾，例如異聚IL-17RA-IL-17RB復(fù)合體或如本文描述的多肽或肽類拮抗物。
3. O使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明還提供使用IL-17RA-IL-17RB拮抗物的方法，包括例如使用 IL-17RA-IL-17RB拮抗物用于診斷目的或用于治療目的。應(yīng)該理解的是，用于治療， IL-17RA-IL-17RB拮抗物的使用通常用于減少或改善所給予治療的疾病或狀況的病征和/ 或癥狀。本發(fā)明提供如遍及本說明書所述的IL-17RA-IL-17RB拮抗物，該拮抗物可在制備 或生產(chǎn)用于治療本文所述的各種狀況或疾病的藥物中使用。此外，IL-17RA-IL-17RB拮抗 物的有效量和一種或更多種如本文所述的附加活性物質(zhì)的治療有效量，可用于制備或生產(chǎn) 有用于所述治療的藥物。某些實(shí)施方案包括部分包含IL-17RA-IL-17RB拮抗物的試劑盒； 任選的是，這種試劑盒可包含至少一種附加的用于分開、同時或隨后給予需要其的受試者 的活性成分。
另外的實(shí)施方案包括使用一種或更多種本文所述的IL-17RA-IL-17RB拮抗物，在表達(dá)IL-17RA和IL-17RB的細(xì)胞中抑制IL-17RA和/或IL-17RB活化作用的方法。例如， 在表達(dá)IL-17RA和IL-17RB的細(xì)胞中抑制IL-17RA和/或IL-17RB活化作用的方法，包括 暴露該細(xì)胞至IL-17RA-IL-17RB拮抗物，其中所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚 受體復(fù)合體的至少一個亞基或組分，并部分抑制或完全抑制其與所述異聚受體復(fù)合體的另 一個亞基或組分的締合(通過位阻或構(gòu)象改變)，從而防止IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合 體形成。在某些實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體的一 個亞基。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體的多 于一個亞基或結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體本身。在某些實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB 拮抗物無需抑制配體(例如IL-2Q至所述異聚受體復(fù)合體一個或更多個組分的結(jié)合，以抑 制IL-17RA和/或IL-17RB活化作用。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物 抑制配體(即IL-25)至IL-17RA和/或IL-17RB的結(jié)合，并抑制IL-17RA和/或IL-17RB 活化作用。另外的實(shí)施方案包括一種方法，其中該IL-17RA-IL-17RB拮抗物為如本文中定 義的抗原結(jié)合蛋白；所述抗原結(jié)合蛋白任選為以藥物組合物的形式。
另外的實(shí)施方案包括使用一種或更多種本文所述的IL-17RA-IL-17RB拮抗物， 在體內(nèi)表達(dá)至少IL-17RA和IL-17RB的細(xì)胞中抑制IL-17RA和/或IL-17RB活化作用的 方法。例如，在體內(nèi)表達(dá)IL-17RA和IL-17RB的細(xì)胞中抑制IL-17RA和/或IL-17RB活 化作用的方法包括暴露該細(xì)胞至IL-17RA-IL-17RB拮抗物，其中所述IL-17RA-IL-17RB 拮抗物結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體的至少一個亞基或組分，并部分抑制或完全抑制其與 所述異聚受體復(fù)合體的另一個亞基或組分的締合(通過位阻或構(gòu)象改變)，從而抑制 IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體活化。在某些實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗 物結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體的一個亞基。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗 物結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體的多于一個亞基，或結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體本身。在某些 實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物無需阻斷配體(例如IL-25)至所述異聚受體 復(fù)合體一個或更多個組分的結(jié)合，以抑制IL-17RA和/或IL-17RB激活。在替代實(shí)施方 案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抑制配體(即IL-25)至IL-17RA和/或IL-17RB的 結(jié)合，并抑制IL-17RA和/或IL-17RB活化作用。另外的實(shí)施方案包括一種方法，其中該 IL-17RA-IL-17RB拮抗物為如本文中定義的抗原結(jié)合蛋白；所述抗原結(jié)合蛋白任選為以藥 物組合物的形式。
另外的實(shí)施方案包括使用一種或更多種本文所述的IL-17RA-IL-17RB拮抗物， 在體內(nèi)表達(dá)IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的細(xì)胞中減少該復(fù)合體活化后釋放的促炎 介質(zhì)的方法。例如，在體內(nèi)表達(dá)IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的細(xì)胞中減少該復(fù)合 體激活后促炎介質(zhì)的釋放的方法，包括暴露該細(xì)胞至IL-17RA-IL-17RB拮抗物，其中所述 IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體至少一個亞基或組分，并部分抑制或完 全抑制IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的形成或活化(通過位阻或構(gòu)象改變)，從而減 少促炎介質(zhì)的釋放。在某些實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚受 體復(fù)合體的一個亞基。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚 受體復(fù)合體的多于一個亞基，或結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體本身。在某些實(shí)施方案中，所述 IL-17RA-IL-17RB拮抗物無需抑制配體(例如IL-2Q至所述異聚受體復(fù)合體一個或更多個 組分的結(jié)合，以減少促炎介質(zhì)的釋放。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抑制配體(即IL-25)至IL-17RA和/或IL-17RB的結(jié)合，并減少促炎介質(zhì)的釋放。另外的實(shí) 施方案包括一種方法，其中該IL-17RA-IL-17RB拮抗物為如本文定義的抗原結(jié)合蛋白；所 述抗原結(jié)合蛋白任選為以藥物組合物的形式。
另外的實(shí)施方案包括如上所述的方法，其中所述促炎介質(zhì)為下列中的至少一種 IL-5、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、CXCLU CXCL2、GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-I β、TNF α、 RANK-L、LIF、PGE2、MMP3、MMP9、GR0a、N0、嗜酸細(xì)胞活化趨化因子、MCP-1 和 IL-17RB，以及 本領(lǐng)域已知的任何其它促炎介質(zhì)，該促炎介質(zhì)通過IL-17RA和/或IL-17RB的活化作用釋 放自任何細(xì)胞。
另外的實(shí)施方案包括用所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物，治療與IL-17家族成員有 關(guān)病癥(例如但不限于炎性和自身免疫病癥)的如上述的方法。
另外的實(shí)施方案包括治療炎癥的方法，其中通過給予本文所述的一種或更多種 IL-17RA-IL-17RB拮抗物，部分或完全阻斷所述IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體被活 化。例如，在需要其的患者中治療炎癥的方法包括將IL-17RA-IL-17RB拮抗物給予該患 者，其中所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體的至少一個亞基或組分， 并部分抑制或完全抑制所述異聚受體復(fù)合體的形成或活化(通過位阻或構(gòu)象改變)，從 而促進(jìn)炎癥的治療。在某些實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚受 體復(fù)合體的一個亞基。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚 受體復(fù)合體的多于一個亞基，或結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體本身。在某些實(shí)施方案中，所述 IL-17RA-IL-17RB拮抗物無需阻斷配體(例如IL-25)至所述異聚受體復(fù)合體一個或更多個 組分的結(jié)合，以有用于治療炎癥。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物抑制配 體(即IL-25)至IL-17RA和/或IL-17RB的結(jié)合，并有用于治療炎癥。另外的實(shí)施方案包 括一種方法，其中該IL-17RA-IL-17RB拮抗物為如本文定義的抗體；所述抗體任選為以藥 物組合物的形式。
另外的實(shí)施方案包括治療自身免疫病癥的方法，其中通過給予本文所述的一種或 更多種IL-17RA-IL-17RB拮抗物，部分或完全阻斷所述IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合 體被活化。例如，在有此需要的患者中治療自身免疫病癥的方法包括將IL-17RA-IL-17RB 拮抗物給予該患者，其中所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體的至少 一個亞基或組分，并部分抑制或完全抑制所述異聚受體復(fù)合體的形成或活化，從而促進(jìn)自 身免疫病癥的治療。在某些實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚受 體復(fù)合體的一個亞基。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物結(jié)合所述異聚 受體復(fù)合體的多于一個亞基，或結(jié)合所述異聚受體復(fù)合體本身。在某些實(shí)施方案中，所述 IL-17RA-IL-17RB拮抗物無需阻斷配體(例如IL-25)至所述異聚受體復(fù)合體一個或更多個 組分的結(jié)合，以有用于治療自身免疫病癥。在替代實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗 物抑制配體(即IL-25)至IL-17RA和/或IL-17RB的結(jié)合，并有用于治療自身免疫病癥。 另外的實(shí)施方案包括一種方法，其中該IL-17RA-IL-17RB拮抗物為如本文定義的抗體；所 述抗體任選為以藥物組合物的形式。
另外的實(shí)施方案包括如上述的治療炎癥和/或自身免疫病癥的方法，其中所述病 癥包括但不限于軟骨炎癥和/或骨退化、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型關(guān)節(jié)炎、幼年型 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、少關(guān)節(jié)的幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)的幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身發(fā)病型幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型強(qiáng)直性脊柱炎、幼年型腸病性關(guān)節(jié)炎、幼年型反應(yīng)性 關(guān)節(jié)炎、幼年型萊特氏綜合征(Reter's Syndrome)、SEA綜合征(血清陰性、起止點(diǎn)病、關(guān)節(jié) 病綜合征)、幼年型皮肌炎、幼年型銀屑病關(guān)節(jié)炎、幼年型硬皮病、幼年型全身性紅斑狼瘡、 幼年型血管炎、少關(guān)節(jié)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身發(fā)病型類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、腸病性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、萊特氏綜合征、SEA綜合征(血清陰 性、起止點(diǎn)病、關(guān)節(jié)病綜合征)、皮肌炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、硬皮病、全身性紅斑狼瘡、血管炎、肌 炎、多發(fā)性肌炎、皮肌炎、骨關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)性多動脈炎(polyarteritis nodossa)、韋格納氏 (Wegener' s)肉芽腫病、動脈炎、風(fēng)濕性多肌痛、結(jié)節(jié)病、硬皮病、硬化、原發(fā)性膽管纖維硬 化、硬化性膽管炎、斯耶格倫氏(Sjogren’ s)綜合征、銀屑病、斑塊狀銀屑病、滴狀干癬、皮 褶銀屑病、膿皰性銀屑病、紅皮性銀屑病、皮炎、特應(yīng)性皮炎、動脈粥樣硬化、狼瘡、斯提耳氏 病(Still’ s disease)、全身性紅斑狼瘡(SLE)、重癥肌無力、炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病 (Crohn's disease)、潰瘍性結(jié)腸炎、乳糜瀉、多發(fā)性硬化(MS)、哮喘(包括外源性哮喘和內(nèi) 源性哮喘以及相關(guān)的慢性炎性狀況，或氣道高反應(yīng)性)、慢性阻塞性肺病(C0PD，即慢性支 氣管炎、肺氣腫)、急性呼吸病癥綜合征(ARDQ、呼吸窘迫綜合征、囊性纖維化病、肺動脈高 壓、肺血管收縮、急性肺損傷、變應(yīng)性支氣管肺曲菌病、過敏性肺炎、嗜酸細(xì)胞性肺炎、支氣 管炎、過敏性支氣管炎支氣管擴(kuò)張癥、結(jié)核病、過敏性肺炎、職業(yè)性哮喘、哮喘樣病癥、肉樣 瘤、反應(yīng)性氣道病(或功能障礙)綜合征、棉塵肺、間質(zhì)性肺病、嗜酸細(xì)胞增多綜合征、鼻炎、 鼻竇炎和肺寄生蟲病、與病毒(例如呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)、鼻病毒(RV) 和腺病毒)誘導(dǎo)狀況有關(guān)的氣道高反應(yīng)性、格林-巴利病(Guillain-Barre disease)、1型 糖尿病、格雷夫斯氏病(Graves’ disease)、阿狄森氏綜合征(Addison's disease)、雷諾氏 現(xiàn)象(!Raynaud’ s phenomenon)、自身免疫性肝炎、GVHD等。
另外的實(shí)施方案包括藥學(xué)組合物，所述藥學(xué)組合物包含治療有效量的一種或更多 種IL-17RA-IL-17RB拮抗物和藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體、增溶劑、乳化劑、防腐劑和/或 佐劑。此外，本發(fā)明提供通過給予這種藥學(xué)組合物治療患者的方法，以及制備或生產(chǎn)用于治 療上述狀況的藥物的方法。
可接受的配方材料為在采用的劑量和濃度下對受試者無毒的。在某些實(shí)施方案 中，所述藥學(xué)組合物可包含用于改變、維持或保存組合物的例如PH、滲透性、粘度、澄清度、 色澤、等滲性、氣味、無菌度、穩(wěn)定性、溶解或釋放速率、吸收或滲透的配方材料。在這種實(shí)施 方案中，合適的配方材料包括但不限于氨基酸(例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸 或賴氨酸)；抗菌劑；抗氧化劑(例如抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉)；緩沖劑(例如硼 酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其它有機(jī)酸)；膨脹劑(例如甘露醇或甘氨 酸)；螯合劑(例如乙二胺四乙酸(EDTA))；絡(luò)合劑(例如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-環(huán) 糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精)；填充劑；單糖；二糖；及其它碳水化合物(例如葡萄糖、甘露 糖或糊精)；蛋白(例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白)；著色劑、矯味劑和稀釋劑；乳化 劑；親水聚合物(例如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；形成鹽的平衡離子(例如鈉)；防 腐劑(例如苯扎氯銨、安息香酸、水楊酸、硫柳汞、苯乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲 酸丙酯、氯己定、山梨酸或過氧化氫)；溶劑(例如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(例如 甘露醇或山梨醇)；懸浮劑；表面活性劑或潤濕劑(例如泊洛沙姆、PEG、山梨坦酯、聚山梨 醇酯類例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯、triton、氨基丁三醇、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙泊)；穩(wěn)定性強(qiáng)化劑(例如蔗糖或山梨醇)；張力強(qiáng)化劑(例如堿金屬鹵化物，優(yōu)選氯化鈉或氯 化鉀，甘露醇山梨醇)；遞送載體；稀釋劑；賦形劑和/或藥學(xué)佐劑。參見，REMINGTON' S PHARMACEUTICAL SCIENCES,18 “ Edition, (A. R. Genrmo，ed.)，1990，Mack Publishing Company。
在某些實(shí)施方案中，最佳藥學(xué)組合物將由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)例如給藥的計劃 途徑、遞送形式和所需劑量確定。例如，參見REMINGTON' SPHARMACEUTICAL SCIENCES, 見上。在某些實(shí)施方案中，這種組合物可影響所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物的物理狀 態(tài)、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放速率和體內(nèi)清除速率。在某些實(shí)施方案中，藥學(xué)組合物中的主要媒 介物或載體性質(zhì)上可為水的或非水的。例如，合適的媒介物或載體可為注射用水、生理 鹽水或人工腦脊液，可附加組合物中其它常見的用于腸胃外給藥的物質(zhì)。中性緩沖鹽水 或混合著血清白蛋白的鹽水為另外的示范性載體。在具體實(shí)施方案中，藥學(xué)組合物包含 PH約7. 0-8. 5的1Tris緩沖液或pH約4. 0-5. 5的醋酸鹽緩沖液，還可包含山梨醇或合適 的替代品。在某些實(shí)施方案中，可通過將具有所需純度的選定組合物與任選的配方物質(zhì) (REMINGTON' SPHARMACEUTICAL SCIENCES，見上)混合，制備以凍干餅或水溶液形式用于 貯藏的IL-17RA-IL-17RB拮抗物組合物。此外，在某些實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB 拮抗物制品可利用合適的賦形劑例如蔗糖配成凍干物。
可選擇本發(fā)明的藥學(xué)組合物用于腸胃外遞送?；蛘?，可選擇所述組合物用于吸入 或通過消化道(例如口服)遞送。這種藥學(xué)可接受組合物的制備在本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)。所 述配方組分優(yōu)選在給藥位點(diǎn)可接受的濃度內(nèi)存在。在某些實(shí)施方案中，使用緩沖液維持組 合物在生理pH或稍低pH，典型地在pH約5至約8范圍內(nèi)。
當(dāng)打算腸胃外給藥時，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物可以無熱源、腸胃外可接受 的水溶液形式提供，該水溶液包含在藥學(xué)可接受載體中的所需IL-17受體抗原結(jié)合蛋白。 尤其適用于腸胃外注射的載體為無菌蒸餾水，其中所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物配置為無 菌、等滲的溶液且良好保存著。在某些實(shí)施方案中，所述制備可涉及所需分子與物質(zhì)例如可 注射微球、可生物蝕解粒子、聚合物(例如聚乳酸或聚乙醇酸)，珠子或脂質(zhì)體的配制，該配 制可帶來可通過積存注射遞送的產(chǎn)品的控釋或緩釋。在某些實(shí)施方案中，可使用透明質(zhì)酸， 具有促進(jìn)在循環(huán)中緩釋持續(xù)時間的作用。在某些實(shí)施方案中，可使用可植入藥物遞送裝置 以引入所需抗原結(jié)合蛋白。
本發(fā)明的藥學(xué)組合物可配制用于吸入。在這些實(shí)施方案中，IL-17RA-IL-17RB拮 抗物可配成干的、可吸入粉末。吸入溶液也可與推進(jìn)劑一起配制用于氣溶膠遞送。在某些 實(shí)施方案中，溶液可備噴霧。肺部給藥和為此的配制方法進(jìn)一步在國際專利申請?zhí)朠CT/ US94/001875中描述，該申請通過引用結(jié)合并描述了化學(xué)改性蛋白的肺部給藥。
也設(shè)想了配方可口服給藥。以這種方式給予的IL-17RA-IL-17RB拮抗物可與或不 與通常用于固體劑型(例如片劑和膠囊)配方中的載體一起配制。在某些實(shí)施方案中，可設(shè) 計膠囊在胃腸道的當(dāng)生物利用度最大化且系統(tǒng)前降解最小化的點(diǎn)上釋放配方的活性部分。 可包含附加物質(zhì)以促進(jìn)所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物的吸收。還可使用稀釋劑、矯味劑、低 熔點(diǎn)蠟、植物油、潤滑劑、助懸劑、片劑崩解劑和粘合劑。
優(yōu)選提供包含有效量的一種或更多種IL-17RA-IL-17RB拮抗物的本發(fā)明的藥學(xué) 組合物，該拮抗物與適于制備片劑的無毒賦形劑混合。通過在無菌水或其它合適媒介物中溶解所述片劑，溶液可制成單位劑量形式。合適的賦形劑包括但不限于惰性稀釋劑，例如 碳酸鈣、碳酸鈉或碳酸氫鈉、乳糖或磷酸鈣；或粘合劑，例如淀粉、明膠或阿拉伯膠；或潤滑 劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。
另外的藥學(xué)組合物對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，該組合物包括使 IL-17RA-IL-17RB拮抗物包含在緩釋或控釋給藥配方中的配方。用于配制各種其它緩釋或 控釋遞送工具(例如脂質(zhì)體載體、可生物蝕解的微粒或多孔珠和積存注射劑)的技術(shù)同樣 為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知。例如，參見國際專利申請?zhí)朠CT/US93/00^9，其通過引用結(jié)合并 描述了用于遞送藥學(xué)組合物的多孔聚合微粒的控釋。緩釋制劑可包含以定形物形式的半 透性聚合基質(zhì)，例如薄膜或微膠囊。緩釋基質(zhì)可包含聚酯、水凝膠、聚交酯(如美國專利第 3，773，919號和歐洲專利申請公開號EP 058481中公開的，各自通過引用結(jié)合)、L_谷氨酸 和L-谷氨酸Y-乙酯的共聚物(Sidman等，1983，Biopolymers 2 :547-556)、聚(甲基丙烯 酸 2-羥乙酯)(Langer 等，1981，J. Biomed. Mater. Res. 15 :167-277 和 Langer，1982，Chem. Tech. 12 :98-105)、乙烯醋酸乙烯酯(Langer等，1981，見上)或聚-D (-)-3-羥丁酸(歐洲 專利申請公開號EP 133，988)。緩釋組合物也可包含脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體可通過本領(lǐng)域已知 幾種方法的任一種制備。例如，參見 Eppstein 等，1985，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 82 3688-3692 ；歐洲專利申請公開號EP 036，676、EP 088，046和EP 143，949，其通過引用結(jié)口 O
用于體內(nèi)給予的藥學(xué)組合物通常提供為無菌制劑?？赏ㄟ^無菌濾膜過濾實(shí)現(xiàn)除 菌。當(dāng)所述組合物為凍干的時，可在凍干和重構(gòu)前或后使用該方法進(jìn)行除菌。用于腸胃外 給藥的組合物可以凍干形式或在水溶液中存儲。腸胃外組合物通常放置在具有無菌入口的 容器中，例如具有可被皮下注射針刺穿的塞子的靜脈注射溶液袋或小瓶。
一旦配制成所述藥學(xué)組合物，其可作為溶液、懸浮液、凝膠體、乳液、固體、晶體或 以脫水的或凍干的粉存儲于無菌小瓶中。這種配方可以隨時可用的形式或以給藥前重構(gòu)的 形式(例如凍干品)存儲。本發(fā)明還提供用于制備單劑量給藥單位的試劑盒。本發(fā)明的試 劑盒每個可包含具有干蛋白的第一個容器和具有液態(tài)配方的第二個容器。在本發(fā)明的某些 實(shí)施方案中，提供包含單室和多室預(yù)裝填注射器(例如液體注射器和lyosyringe)的試劑品.ο
使用的包含IL-17RA-IL-17RB拮抗物的藥學(xué)組合物的治療有效量將取決于例如 治療背景和對象。本領(lǐng)域的技術(shù)人員會認(rèn)可，用于治療的合適劑量水平將部分地根據(jù)所給 藥的分子、正在使用所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物的適應(yīng)癥、給藥途徑和患者的尺寸(體 重、體表或器官大小)和/或狀態(tài)(年齡和大致健康狀態(tài))而變化。在某些實(shí)施方案中，臨 床醫(yī)生可滴定劑量并改變給藥途徑以獲得最佳治療效果。根據(jù)上述因素，典型的劑量可從 約0. 1 μ g/kg至最高約30mg/kg或更高間變化。在具體實(shí)施方案中，所述劑量可從0. 1 μ g/ kg至最高約30mg/kg間變化，任選地從1 μ g/kg至最高約30mg/kg間或從10 μ g/kg至最 高約5mg/kg間變化。當(dāng)然，應(yīng)該理解的是，這該由有資格的醫(yī)師決定及這些劑量僅為示范 性的。給藥頻率將取決于所使用配方中具體IL-17RA-IL-17RB拮抗物的藥物動力學(xué)參數(shù)。 通常，臨床醫(yī)生給予所述組合物直至達(dá)到實(shí)現(xiàn)所需效果時的劑量。因此，所述組合物可隨著 時間以單劑、或雙劑或更多劑(其可包含所需分子相同或不同的量)給予，或通過植入裝置 或?qū)Ч苓B續(xù)灌輸給予。進(jìn)一步精細(xì)化合適的劑量由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員常規(guī)地進(jìn)行，也是20在其常規(guī)執(zhí)行的任務(wù)范圍內(nèi)的。合適的劑量可通過利用合適的劑量響應(yīng)數(shù)據(jù)確定。在某 些實(shí)施方案中，所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物可在整個長時間周期內(nèi)給予患者。慢性給予 IL-17RA-IL-17RB拮抗物可將通常伴隨著非完全人IL-17RA-IL-17RB拮抗物的有害免疫或 變應(yīng)性應(yīng)答降至最低，該非完全人IL-17RA-IL-17RB拮抗物為例如在非人類動物中產(chǎn)生的 抗人抗原的抗體，例如在非人種中產(chǎn)生的非完全人抗體或非人類抗體。
所述藥學(xué)組合物的給予途徑與已知方法一致，例如口服、通過靜脈、腹膜內(nèi)、腦內(nèi) (腦實(shí)質(zhì)內(nèi))、腦室內(nèi)、肌肉、眼內(nèi)、動脈內(nèi)、門靜脈內(nèi)或損害內(nèi)途徑注射；通過緩釋系統(tǒng)或植 入裝置。在某些實(shí)施方案中，所述組合物可通過推注或連續(xù)灌輸或植入裝置給予。
所述組合物還可通過植入膜、海綿或其它合適的已吸收或膠囊化所需分子的物質(zhì) 而局部給予。在使用植入裝置的某些實(shí)施方案中，該裝置可植入任何適宜的組織或器官，并 可通過擴(kuò)散、定時釋藥推注或連續(xù)給予遞送所需分子。
本文所述的IL-17RA-IL-17RB拮抗物可與用于治療本文所述的疾病和狀況的 藥學(xué)物質(zhì)聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用。在一個實(shí)施方案中，本文所述的 IL-17RA-IL-17RB拮抗物可與任一種或更多種用于治療或預(yù)防本文所述的疾病和病癥的 TNF抑制劑聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用，例如但不限于所有類型的可溶TNF受 體，其包括依那西普(例如ENBREL )，以及所有類型的單體或多聚P75和/或p55TNF 受體分子和其片段；抗人TNF抗體，例如但不限于英夫利昔單抗(例如REMICADE )和 D2E7(例如HUMIRA )等。這種TNF抑制劑包括阻斷TNF的體內(nèi)合成或胞外釋放的化 合物和蛋白。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與下列TNF抑制 劑的任一種或更多種的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用TNF結(jié)合蛋白(如本文 中定義的I型可溶TNF受體和II型可溶TNF受體(“sTNFRs"))、抗TNF抗體、粒細(xì)胞 集落刺激因子、沙利度胺、BN 50730、替尼達(dá)普、E 5531、tiapafant PCA似48、尼美舒利、 panavir、咯利普蘭、RP 73401、肽 T、MDL 201，449A、鹽酸(1R，3S)-順式-1_[9_ (2，6-二氨 嘌呤基)]-3-羥-4-環(huán)戊烯、(1R，3R)-反式-1-[9- (2,6- 二氨)嘌呤]-3-乙酰氧環(huán)戊烷、 鹽酸(1R，3R)_反式-1-(9-腺嘌呤基)-3-疊氮環(huán)戊烷和(1R，3R)_反式-1-(6-羥-嘌 呤-9-基)-3-疊氮環(huán)戊烷。TNF結(jié)合蛋白公開于本領(lǐng)域(EP 308 378、EP 422 339、GB 2 218 101、EP 393 438、WO 90/13575、EP 398 327、EP 412 486、WO 91/03553、EP 418 014、JP 127，800/1991、EP 433 900、美國專利第 5，136，021 號、GB 2 246 569、EP 464 533、W092/01002、WO 92/13095、WO 92/16221、EP 512 528、EP 526 905、WO 93/07863、EP 568 928、WO 93/21946、WO 93/19777、EP 417 563、WO 94/06476 和 PCT 國際申請?zhí)?PCT/ US97/12M4)。例如，EP 393 438 和 EP 422 339 指出 I 型可溶 TNF 受體(也稱為‘‘sTNFR-I，， 或"30kDa TNF抑制劑”)和II型可溶TNF受體(也稱為"sTNFR-II”或"40kDa TNF抑制 劑”)(一起稱為“sTNFRs”)以及其改良型(例如片段、有功能的衍生物和變體)的氨基酸 和核酸序列。EP 393 438和EP 422 339也公開了分離負(fù)責(zé)編碼該抑制劑的基因、克隆該 基因到合適的載體和細(xì)胞型中以及表達(dá)該基因以生產(chǎn)該抑制劑的方法。此外，也已公開了 sTNFR-I和sTNFR-II的多價型(即包含多于一個活性部分的分子)。在一個實(shí)施方案中， 可通過化學(xué)方法將至少一種TNF抑制劑和另一部分與任何臨床可接受的接頭(例如聚乙 二醇(W092/16221 和 WO 95/34326))偶聯(lián)、通過肽接頭(Neve 等.(1996), Cytokine, 8 (5) 365-370)、通過化學(xué)方法偶聯(lián)至生物素然后結(jié)合至抗生物素蛋白(W091/0355;3)及最后通過結(jié)合嵌合抗體分子(美國專利5，116，964、W089/09622、W0 91/16437和EP 315062)構(gòu)建 所述多價型?？?TNF 抗體包括 MAK 195F Fab 抗體(Holler 等(1993)，1st International Symposium on Cytokines in Bone Marrow Transplantation,147)> CDP 571 抗 _TNF 單 克隆抗體(Rankin 等(1995)，British Journal of Rheumatology, 34 :334-342)、BAY ΧΠ51鼠抗-腫瘤壞死因子單克隆抗體(Kieft等(199 ，7th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases,第 9 頁)、CenTNF cA2 抗-TNF 單克 隆抗體(Elliott 等(1994)，Lancet, ；344 :1125-1127 和 Elliott 等(1994)，Lancet, 344 1105-1110)。
本文所述的IL-17RA-IL-17RB拮抗物可與所有類型的IL-I抑制劑，例如但不限 于kiniret (例如ANAKINRA )，聯(lián)合使用(治療前、治療后或同時治療)。白介素_1 受體拮抗物(IL-Ira)為作為白介素_1的天然抑制劑的人蛋白。白介素_1受體拮抗物以 及其制造方法和使用方法描述于美國專利第5，075，222號、WO 91/08285, WO 91/17184、 AU 9173636、WO 92/16221、WO 93/21946、WO 94/06457、WO 94/21275、FR 2706772、WO 94/21235、DE 4219626、WO 94/20517、WO 96/22793 和 WO 97/288280 所述蛋白包括糖基 化以及非糖基化的IL-I受體拮抗物。具體的是，三種類型的IL-Ira (IL-lra α、IL-Ira β 和IL-lrax)，每種都由相同的DNA編碼序列和其變體編碼，公開和描述于美國專利第 5，075，222號。制備IL-I抑制劑尤其是IL-Iras的方法，也公開于專利5，075，222。白介 素-1抑制劑的另外種類包括能特異地防止IL-I細(xì)胞受體活化作用的化合物。這種化合物 包括IL-I結(jié)合蛋白，例如可溶受體和單克隆抗體。這種化合物還包括所述受體的單克隆抗 體。白介素-1抑制劑的另一種類包括阻斷IL-I的體內(nèi)合成和/或胞外釋放的化合物和蛋 白。這種化合物包括影響IL-I基因轉(zhuǎn)錄或IL-I前蛋白加工的物質(zhì)。
本文所述的IL-17RA-IL-17RB拮抗物可與所有類型的⑶觀抑制劑，例如但不限于 阿巴西普(abatac印t)(例如ORENCIA )，聯(lián)合使用(治療前、治療后或同時治療)。所 述IL-17RA-IL-17RB拮抗物可與一種或更多種細(xì)胞因子、淋巴因子、造血因子和/或抗炎藥 聯(lián)合使用(治療前、治療后或同時治療)。
本文所述的疾病和病癥的治療可包括控制疼痛和/或炎癥的一線藥物的使用與 一種或更多種本文提供的IL-17RA-IL-17RB拮抗物的治療的聯(lián)合(治療前、治療后或同時 治療)。這些藥物分類為非留體類抗炎藥物(NSAIDs)。第二類治療藥包括皮質(zhì)類固醇長效 抗風(fēng)濕藥(SAARDs)或疾病調(diào)修(DM)藥。關(guān)于下列化合物的信息可在The Merck Manual of Diagnosis and Therapy,第十八版，Merck, Sharp & Dohme Research Laboratories, Merck & Co.，Rahway, N. J. (2006)禾口 Pharmaprojects，PJB Publications Ltd 中查至lj。
在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用IL-17RA-IL-17RB拮抗物和任一種或更多種 NSAIDs治療本文所述的疾病和病癥(治療前、治療后或同時治療)。NSAIDs的抗炎作用至 少部分歸因于前列腺素合成的抑制(Goodman和Gilman的“The Pharmacological Basis of Therapeutics, ”MacMillan 第 7 版(1985)) NSAIDs 可表征為至少九組(1)水楊酸類 衍生物、⑵丙酸類衍生物、(3)乙酸類衍生物、⑷芬那酸(fenamic acid)類衍生物、(5) 羧酸類衍生物、(6) 丁酸類衍生物、(7)昔康類(oxicams)、(8)吡唑類和(9)吡唑啉酮類。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多種 水楊酸類衍生物、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用。這種水楊酸類衍生物、其前藥酯類和藥學(xué)可接受鹽包括醋氨沙羅、阿洛普令、阿斯匹林、貝 諾酯、溴水楊醇、乙酰水楊酸鈣、三水楊酸膽堿鎂、水楊酸鎂、水楊酸膽堿、diflusinal、依特 柳酯、芬度柳、龍膽酸、乙二醇單水楊酸酯、水楊酸咪唑、賴氨酸乙酰水楊酸、5-氨基水楊酸、 水楊嗎啉、水楊酸1-萘酯、奧沙拉秦、帕沙米特、乙酰水楊酸苯酯、水楊酸苯酯、醋水楊胺、 乙酰水楊酰胺0-乙酸、雙水楊酯、水楊酸鈉和柳氮磺胺吡啶。這組也意圖涵蓋具有類似鎮(zhèn) 痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的水楊酸類衍生物。
在又一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多種 丙酸類衍生物、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用。所 述丙酸類衍生物、其前藥酯類和藥學(xué)可接受鹽包括阿明洛芬、苯_洛芬、布氯酸、卡洛芬、 右吲哚洛芬、非諾洛芬、氟諾洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、呋洛芬、布洛芬、布洛芬鋁、異丁普生、 吲哚洛芬、異洛芬、酮洛芬、洛索洛芬、咪洛芬、萘普生、萘普生鈉、奧沙普秦、吡酮洛芬、匹美 洛芬、吡洛芬、普拉洛芬、丙替嗪酸、批多咯芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫噁洛芬。這組也意圖涵 蓋具有類似鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的丙酸類衍生物。
在又另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多 種乙酸類衍生物、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用。 所述乙酸類衍生物、其前藥酯類和藥學(xué)可接受鹽包括阿西美辛、阿氯芬酸、氨芬酸、丁苯羥 酸、桂美辛、氯吡酸、地美辛、雙氯芬酸鉀、雙氯酚酸鈉、依托度酸、聯(lián)苯乙酸、芬氯酸、苯克洛 酸、芬克洛酸、芬替酸、呋羅芬酸、葡美辛、異丁芬酸、吲哚美辛、三苯唑酸、伊索克酸、氯那唑 酸、甲嗪酸、奧沙美辛、oxpinac、吡美辛、丙谷美辛、舒林酸、他美辛、噻拉米特、硫平酸、托美 丁、托美丁鈉、齊多美辛和佐美酸。這組也意圖涵蓋具有類似鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的 乙酸類衍生物。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多種 芬那酸類衍生物、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用。 所述芬那酸類衍生物、其前藥酯類和藥學(xué)可接受鹽包括苯乙氨茴酸、依托芬那酯、氟芬那 酸、異尼辛、甲氯芬那酸、甲氯芬那酸鈉、medofenamic acid、甲芬那酸、尼氟酸、他尼氟酯、 特羅芬那酯、托芬那酸和烏芬那酯。這組也意圖涵蓋具有類似鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān) 的芬那酸類衍生物。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多種 羧酸類衍生物、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用?？?使用的所述羧酸類衍生物、其前藥酯類和藥學(xué)可接受鹽包括環(huán)氯茚酸、二氟尼柳、氟苯柳、 inoridine、酮咯酸和替諾立定。這組也意圖涵蓋具有類似鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的羧 酸類衍生物。
在又另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多 種丁酸類衍生物、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用。 所述丁酸類衍生物、其前藥酯類和藥學(xué)可接受鹽包括丁丙二苯胼、布替布芬、芬布芬和聯(lián) 苯丁酸。這組也意圖涵蓋具有類似鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的丁酸類衍生物。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多種 昔康類、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用。所述昔康 類、其前藥酯類和藥學(xué)可接受鹽包括屈@昔康、依諾利康、伊索昔康、吡羅昔康、舒多昔康、替諾昔康和4-羥基-1，2-苯并噻嗪1，1- 二氧化4-(N-苯基)_氨甲酰。這組也意圖涵蓋 具有類似鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的昔康類。
在又另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多 種吡唑類、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用?？墒褂?的所述吡唑類、其前藥酯類和藥學(xué)可接受鹽包括二苯米唑和依匹唑。這組也意圖涵蓋具有 類似鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的吡唑類。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多種 吡唑啉酮類、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用?？?使用的所述吡唑啉酮類、其前藥酯類和藥學(xué)可接受鹽包括阿扎丙宗(apazone)、阿扎丙酮 (azapropazone)、芐哌吡酮、非普拉宗、莫非布宗、嗎拉宗、羥布宗、保泰松、哌布宗、異丙安 替比林、雷米那酮、琥布宗和噻唑丁炎酮(thiazolinobutazone)。這組也意圖涵蓋具有類似 鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的吡唑啉酮類。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多種 下列NSAIDs的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)使用ε -乙酰氨基己酸、S-腺苷甲硫 氨酸、3-氨基-4-羥丁酸、阿米西群、阿尼扎芬、安曲非寧、芐達(dá)酸、芐達(dá)賴氨酸(bendazac lysinate)，芐達(dá)明、b印rozin、溴哌莫、布可隆、丁苯唑酸、環(huán)丙喹宗、氯芐叉胺酯、達(dá)齊胺、 地波沙美、地托咪定、聯(lián)苯吡胺(difenpiramide)、difenpyramide、difisalamine、地他唑、 依莫法宗、甲磺法奈替唑(fanetizole mesylate)、芬氟咪唑、夫洛非寧、氟咪唑、氟尼辛、氟 丙喹宗、福吡托林、磷柳酸、胍美柳、guaiazolene, isonixirn、鹽酸來苯胺、來氟米特、洛非 咪唑、氯替法唑、賴氨酸氯尼辛(lysin clonixinate)、美西拉宗、萘丁美酮、尼克吲哚、尼美 舒利、奧古蛋白、奧帕諾辛、奧沙西羅、奧沙帕朵、瑞尼托林、哌立索唑、枸櫞酸哌立索唑、哌 福肟、piproxen、吡拉唑酸、吡非尼酮、普羅喹宗、普羅沙唑、thielavin B、替氟咪唑、替美加 定、托來汀、托帕朵、tryptamid和用公司代號命名的那些，例如480156S、AA861、AD1590, AFP802、AFP860、AI77B、AP504、AU8001、BPPC、BW540C、CHIN0IN 127、CN100、EB382、EL508、 F1044、FK-506、GV3658、ITF182、KCNTEI6090、KME4、LA2851、MR714、MR897、MY309、0N03144、 PR823、PV102、PV108、R830、RS2131、SCR152、SH440、SIR133、SPAS510、SQ27239、ST281、 SY6001、TA60、TAI-901 苯甲酰-1-茚羧酸)、TVX2706、U60257、UR2301 和 WY41770。這 組也意圖涵蓋具有與所述NSAIDs類似鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的NSAIDs。
在又另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多 種皮質(zhì)類固醇、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)用于治 療本文所述的疾病和病癥。皮質(zhì)類固醇、其前藥酯類和藥學(xué)可接受鹽包括氫化可的松和衍 生自氫化可的松的化合物，例如21-乙酰氧基孕烯醇酮、alclomerasone、阿爾孕酮、安西 奈德、倍氯米松、倍他米松、戊酸倍他米松、布地奈德、氯潑尼松、氯倍他索、丙酸氯倍他索、 氯倍他松、丁氯倍他松、氯可托龍、氯潑尼醇、皮質(zhì)酮、可的松、可的伐唑、deflazacon、地奈 德、desoximerasone、地塞米松、二氟拉松、二氟可龍、二氟潑尼酯、甘草次酸、氟扎可特、氟 二氯松、氟米松、特戊酸氟米松、flucinolone acetonide、氟尼縮松、氟新諾龍酯、氟西奈德 (fluorocinolone acetonide)、氟考丁酯、氟可龍、己酸氟可龍、戊酸二氟可龍、氟米龍、醋 酸氟培龍、醋酸氟潑尼定、氟潑尼龍、flurandenolide、福莫可他、哈西奈德、鹵米松、醋酸鹵 潑尼松、氫可他酯、氫化可的松、醋酸氫可的松、氫化可的松丁酸酯、磷酸氫化可的松、氫化24可的松21-琥珀酸鈉、叔丁醋酸氫化可的松、馬潑尼酮、甲羥松、甲潑尼松、甲潑尼龍、糠酸 莫米松、帕拉米松、潑尼卡酯、潑尼松龍、潑尼松龍21-diedryaminoacetate、潑尼松龍磷酸 鈉、潑尼松龍琥珀酸鈉、潑尼松龍21-間磺基苯甲酸鈉、潑尼松龍21-硬脂酰乙醇酸鈉、潑尼 松龍叔丁乙酯、潑尼松龍21-三甲基乙酸酯、潑尼松、強(qiáng)的松龍戊酸酯、潑尼立定、潑尼立定 21-二乙氨乙酯、替可的松、曲安西龍、曲安奈德、苯曲安奈德和己曲安奈德。這組也意圖涵 蓋具有類似鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的皮質(zhì)類固醇。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物與任一種或更多種 長效抗風(fēng)濕藥(SAARDs)或疾病調(diào)修抗風(fēng)濕藥(DMARDQ、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽聯(lián)合 (治療前、治療后或同時治療)用于治療本文所述的疾病和病癥。SAARDs或DMARDS、其前藥 酯類和藥學(xué)可接受鹽包括阿洛酮鈉、金諾芬、金硫葡糖、金硫醋苯胺、硫唑嘌呤、布喹那鈉、 布西拉明、3-金硫-2-丙醇-1-磺酸鈣、苯丁酸氮芥、氯喹、氯丁扎利、銅克索林、環(huán)磷酰胺、 環(huán)孢菌素、氨苯砜、15-脫氧精胍菌素、雙醋瑞因、氨基葡萄糖、金鹽類(例如，環(huán)喹金鹽、金 硫丁二鈉、硫代硫酸金鈉)、羥氯喹、硫酸羥氯喹、羥基脲、凱布宗、左旋咪唑、氯苯扎利、蜂毒 肽、6-巰基嘌呤、甲氨蝶呤、咪唑立賓、麥考酚酸莫酯、金硫乙酸鈣、氮芥、D-青霉胺、吡啶酚 咪唑(pyridinolimidazole)(例如SKNF86002和SB203580)、雷帕霉素、硫醇類、胸腺生成素 和長春新堿。這組也意圖涵蓋具有類似鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的SAARDs或DMARDs。
在另一個具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物(治療前、治療后 或同時治療)與任一種或更多種C0X2抑制劑、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽用于治療本文 所述的疾病和病癥。C0X2抑制劑、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的實(shí)例包括例如塞來考昔。 這組也意圖涵蓋具有類似鎮(zhèn)痛和抗炎特性的結(jié)構(gòu)相關(guān)的C0X2抑制劑。C0X-2選擇性抑制 劑的實(shí)例包括但不限于艾托考昔、伐地考昔、塞來考昔、利克飛龍(licofelone)、羅美昔布 (Iumiracoxib)、羅非考昔等。
本文所述的疾病和病癥的治療包括控制炎癥反應(yīng)(例如染病個體氣道中的高反 應(yīng)性)的一線藥物的使用與一種或更多種本文提供的IL-17RA-IL-17RB拮抗物的治療的聯(lián) 合(治療前、治療后或同時治療)。常用于治療這種疾病或病癥的藥物包括β 2-激動劑、 白三烯抑制劑、甲基黃嘌呤類、抗炎藥、抗膽堿藥、支氣管擴(kuò)張藥、皮質(zhì)類固醇和這些物質(zhì) 的聯(lián)合。關(guān)于下列化合物的信息可在The Merck Manual of Diagnosis and Therapy，第 十八版，Merck, Sharp&Dohme Research Laboratories,Merck &Co. , Rahway, N. J. (2006)禾口 Pharmaprojects, PJB Publications Ltd 中查至Ij0
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物(治療前、治療 后或同時治療)與任一種或更多種β 2-激動劑、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽用于治療 本文所述的疾病和病癥。β-2激動劑、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的實(shí)例包括例如沙 丁胺醇(Accuneb 、ftOair HFA 、Proventil HFA、Ventolin HFA )、奧西那林 (Alupent 、Alupent 吸入溶液、Alupent 糖漿)、醋酸吡布特羅(Maxair Autohaler )和硫酸特布他林(Brethair 、Brethine )。長效β -2激動劑(其中一些與其它物質(zhì) (例如 Advair 、Symbicort 、Serevent 和 Foradil )聯(lián)合)為已知，且有用于與 IL-17RA-IL-17RB拮抗物的聯(lián)合。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物(治療前、治療后或同時治 療)與任一種或更多種白三烯抑制劑、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽用于治療本文所述的疾病和病癥。白三烯抑制劑、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的實(shí)例包括例如齊留通(Zyflo )、扎 魯司特(Accolate )和孟魯司特(Singulair )。
在又一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物(治療前、治療后或 同時治療)與任一種或更多種甲基黃嘌呤類、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽用于治療本文所 述的疾病和病癥。甲基黃嘌呤類、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的實(shí)例包括例如茶堿(例如 Bronkodyl 、 Elixophyllin 、Slo- bid 、Slo- Phyllin 、Theo- 24 、Theo- Dur 、 Theolair 、Uniphyl )和氨茶堿(例如Phyllocontin 、Truphylline )。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物(治 療前、治療后或同時治療)與任一種或更多種抗炎藥、其前藥酯類或藥學(xué)可接 受鹽用于治療本文所述的疾病和病癥。這種抗炎藥實(shí)例包括但不限于色甘酸 (Cromolyn) (Nasalcrom 、Intal 、Opticrom )和奈多羅米(Tilade )。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物(治療前、治療后或同時治 療)與任一種或更多種抗膽堿能藥、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽用于治療本文所述的疾病 和病癥。這種抗膽堿能藥、前藥酯類或其藥學(xué)可接受鹽的實(shí)例包括但不限于異丙托溴銨 (Atrovent )和噻托溴銨(tiotropium) (Spiriva )。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物(治療 前、治療后或同時治療)與任一種或更多種皮質(zhì)類固醇、其前藥酯類或藥學(xué)可接 受鹽用于治療本文所述的疾病和病癥。吸入型皮質(zhì)類固醇實(shí)例包括二丙酸倍氯 美松(Beclovent 、Beconase 、Vancenase 禾B Vanceril )、曲安奈德 (Azmacort 、Nasacort Jri-Nasal )和氟尼縮松(Aerobid ,Nasalide )。有用 于本發(fā)明的其它皮質(zhì)類固醇的實(shí)例包括潑尼松(PrednisoneIntensol 、Sterapred )和 潑尼松龍(Orapred 、Pediapred 、Prelone )。
本發(fā)明的又另一實(shí)施方案涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物(治療前、治療后 或同時治療)與任一種或更多種吸入型β_2激動劑、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽用 于治療本文所述的疾病和病癥。皮質(zhì)類固醇、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽的實(shí)例包 括例如沙丁胺醇(Ventolin 、Proventil )、奧西那林(Alupent )、醋酸吡布特羅 (Maxair )、特布他林(Brethine 、Brethaire )、異他林(Bronkosol )和左沙 丁 胺醇 (Ievalbuterol) (Xopenex )。
在又一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物(治療前、治療后或 同時治療)與任一種或更多種支氣管擴(kuò)張藥(或抗膽堿能藥)、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽 用于治療本文所述的疾病和病癥。支氣管擴(kuò)張藥的實(shí)例包括異丙托銨(Atrovent )和噻托 溴銨(Spiriva )。
治療本文所述的疾病和病癥可包括治療或控制傳染病一線藥物的使用與一種或 更多種本文提供的IL-17RA-IL-17RB拮抗物的治療的聯(lián)合(治療前、治療后或同時治療)。 常用于治療這種疾病或狀況的藥物包括抗生素、抗菌劑、抗病毒劑和其聯(lián)合。關(guān)于下列化 -a^^iinM^^t The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, H+A Merck, Sharp & Dohme Research Laboratories, Merck & Co. , Rahway, N. J. (2006)禾口 Pharmaprojects, PJBPublications Ltd 中查到。
在又另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及IL-17RA-IL-17RB拮抗物聯(lián)合(治療前、 治療后或同時治療)任一種或更多種抗菌劑、其前藥酯類或藥學(xué)可接受鹽用于治療本文所 述的疾病和病癥?？咕鷦┌ɡ鐝V譜的青霉素類、頭孢菌素類和其它內(nèi)酰胺類、氨 基糖苷類、吡咯類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、利福霉素類、四環(huán)素類、磺胺類藥、林肯酰胺類抗 生素和多粘菌素類。所述青霉素類包括但不限于青霉素G、青霉素V、甲氧西林、萘夫西林、 苯唑西林、氯唑西林、雙氯西林、氟氯西林、氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、阿莫西林、阿莫西 林/克拉維酸鉀(clavulanate)、海他西林、環(huán)青霉素、巴氨西林、羧芐西林、卡茚西林、替卡 西林、替卡西林/克拉維酸鉀、阿洛西林、美洛西林、哌拉西林(peperacilli)和美西林。所 述頭孢菌素類以及其它內(nèi)酰胺類包括但不限于頭孢噻吩、頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢拉 定、頭孢唑林、頭孢羥氨芐、頭孢克洛、頭孢孟多、頭孢替坦、頭孢西丁、ceruroxime、頭孢尼 西、ceforadine、頭孢克肟、頭孢噻肟、拉氧頭孢、頭孢唑肟、頭孢曲松、c印hoperazone、頭孢 他啶、亞胺培南和氨曲南。所述氨基糖苷類包括但不限于鏈霉素、慶大霉素、妥布霉素、阿米 卡星、奈替米星、卡那霉素和新霉素。所述吡咯類包括但不限于氟康唑。所述喹諾酮類包 括但不限于萘啶酸、諾氟沙星、依諾沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、司帕沙星和替馬沙星。所述 大環(huán)內(nèi)酯類包括但不限于紅霉素、螺旋霉素和阿奇霉素。所述利福霉素類包括但不限于利 福平。所述四環(huán)素類包括但不限于spicycline、金霉素、氯莫環(huán)素、地美環(huán)素、脫氧土霉素、 胍甲環(huán)素、賴甲環(huán)素、甲氯環(huán)素、甲烯氧四環(huán)素、米諾環(huán)素、土霉素、青哌環(huán)素、匹哌環(huán)素、羅 利環(huán)素、山環(huán)素、琥氯霉素吡甲四環(huán)素和四環(huán)素。所述磺胺類藥包括但不限于對氨基苯磺酰 胺、磺胺甲基異嘿唑、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺異螺唑和復(fù)方新諾明(甲氧芐啶/磺胺甲 基異嚷唑)。所述林肯酰胺類抗生素包括但不限于克林霉素和林可霉素。所述多粘菌素類 (多肽類)包括但不限于多粘菌素B和多粘菌素E。
4.0篩選測定
另外的實(shí)施方案包括篩選所述IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體拮抗物的方法。 設(shè)想了本領(lǐng)域已知的且適合于鑒定IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體拮抗物的篩選測定 形式。例如一種篩選IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體拮抗劑的方法，該方法包括提供 IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體中的IL-17RA和IL-17RB ；將候選物質(zhì)暴露至該受體復(fù)合 體；及測定相對于未暴露于候選物質(zhì)的受體復(fù)合體形成的量。將候選物質(zhì)暴露于受體復(fù)合 體的步驟可在IL-17RA和IL-17RB形成IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體之前、期間或之 后。
另外的實(shí)施方案包括篩選IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體活化的拮抗物的方 法，該方法包括提供IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體中的IL-17RA和IL-17RB ；將候選物 質(zhì)暴露至該受體復(fù)合體；加入一種或更多種IL-17配體；及測定相對于未暴露于候選物質(zhì) 的IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體活化的量。認(rèn)為以下候選物質(zhì)是陽性的，其在存在一 種或更多種IL-17配體時減少IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體活化，這通過生物相關(guān)讀 出(見下文)測定。所述IL-17配體可為IL-17A、IL-17F、IL-25或任何其它結(jié)合并活化 IL-17RA.IL-17RB或IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的IL-17配體。活化作用在說明書 其它地方定義。相關(guān)生物讀出包括 IL-5、IL-6、IL-8、IL-13、CXCLl、CXCL2、GM-CSF、G-CSF、 M-CSF, IL-I β ,TNFa、RANK-L、LIF、PGE2、IL-12、ΜΜΡ3、ΜΜΡ9、GRO a、N0 以及本領(lǐng)域已知任 何其它分子，該分子釋放自表達(dá)IL-17RA和/或IL-17RB的任何細(xì)胞。將候選物質(zhì)暴露于所述受體復(fù)合物的步驟可在IL-17RA和IL-17RB形成IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體之前、期間或之后。應(yīng)該理解的是，候選物質(zhì)可部分抑制IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體， 即低于100%抑制。在某些測定條件下，候選物質(zhì)可完全抑制IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體。
在一方面，本發(fā)明提供基于細(xì)胞的測定，以檢測候選物質(zhì)對IL-17RA和IL-17RB的 締合、所述17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體以及所述17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的活化 的影響。因此，本發(fā)明提供將候選物質(zhì)加入至細(xì)胞，以篩選17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體 拮抗物。
本文所用的“候選物質(zhì)”或“候選藥物”描述可被篩選如本文概述的活性的任 何分子，例如但不限于肽類、肽的融合蛋白(例如結(jié)合共價或非共價結(jié)合至其它蛋白的 IL-17RA.IL-17RB或所述17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的肽，例如本領(lǐng)域已知的抗體片段 或蛋白基支架)、蛋白、抗體、小有機(jī)分子(包括已知藥物和藥物候選者)、多糖、脂肪酸、疫苗、核酸等。
候選物質(zhì)包括眾多化學(xué)種類。在一個實(shí)施方案中，所述候選物質(zhì)為有機(jī)分子，優(yōu)選 具有分子量大于100而小于約2500道爾頓的小有機(jī)化合物。包括具有分子量大于100而 小于約2000道爾頓、更優(yōu)選小于約1500道爾頓、更優(yōu)選小于約1000道爾頓、更優(yōu)選小于 500道爾頓的小有機(jī)化合物。候選物質(zhì)包含對與蛋白結(jié)構(gòu)相互作用尤其是氫鍵合必需的官 能團(tuán)，并通常包含至少一個胺基、羰基、羥基或羧基，優(yōu)選至少兩個所述化學(xué)官能團(tuán)。所述候 選物質(zhì)常常包含被上述官能團(tuán)中的一個或更多個取代的環(huán)碳或雜環(huán)結(jié)構(gòu)和/或芳族或聚 芳族結(jié)構(gòu)。也在生物分子中發(fā)現(xiàn)候選物質(zhì)，該生物分子包括肽類、糖類、脂肪酸類、留類、嘌 呤類、嘧啶類、衍生物、結(jié)構(gòu)類似物或其組合。
候選物質(zhì)得自多種的來源，包括合成或天然化合物的庫。例如，現(xiàn)有眾多方法可用 于隨機(jī)和定向合成多種有機(jī)化合物和生物分子，該方法包括表達(dá)和/或合成隨機(jī)的寡核苷 酸和肽?；蛘?，以細(xì)菌、真菌、植物和動物提取物形式的天然化合物的庫為現(xiàn)有的或容易制 得。此外，通過常規(guī)的化學(xué)方法、物理方法和生物化學(xué)方法容易修飾天然或合成制得的庫和 化合物。已知的藥理學(xué)物質(zhì)可受到定向或隨機(jī)的化學(xué)修飾例如?；饔谩⑼榛饔?、酯化作 用、酰胺化作用(amidification)，以生產(chǎn)結(jié)構(gòu)類似物。
在替代實(shí)施方案中，所述候選生物活性物質(zhì)可為蛋白或蛋白片段。因此，例如可使 用包含蛋白的細(xì)胞提取物，或蛋白類細(xì)胞提取物的隨機(jī)或定向消化物。這樣可制得用于在 本文所述的系統(tǒng)中篩選的原核和真核蛋白的庫。該實(shí)施方案包括細(xì)菌蛋白庫、真菌蛋白庫、 病毒蛋白庫和哺乳動物蛋白(包括人蛋白)庫。
在某些實(shí)施方案中，所述候選物質(zhì)為肽類。在該實(shí)施方案中，使用包含展示結(jié)構(gòu)的 肽類構(gòu)建物可為有用的。“展示結(jié)構(gòu)”或語法上等同物本文中指一種序列，當(dāng)其融合于候選 生物活性物質(zhì)時，引起所述候選物質(zhì)呈現(xiàn)構(gòu)象限制形式。蛋白主要通過構(gòu)象限制域各自相 互作用。盡管如本領(lǐng)域已知的具有自由旋轉(zhuǎn)氨基和羧基末端的小肽類可具有強(qiáng)大的功能， 但是由于不能預(yù)測擬肽合成的側(cè)鏈位置，將這種肽結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化成藥理物質(zhì)是困難的。因此，構(gòu) 象限制結(jié)構(gòu)中肽的展示將有益于下一代藥物，也將很可能導(dǎo)致所述肽與目標(biāo)蛋白更高的親 和作用。該事實(shí)已在組合庫產(chǎn)生系統(tǒng)中認(rèn)可，該系統(tǒng)使用在細(xì)菌噬菌體系統(tǒng)中生物產(chǎn)生的 短肽。很多工作者已構(gòu)建了小域分子，其中可展示隨機(jī)肽結(jié)構(gòu)。特定的展示結(jié)構(gòu)通過在外環(huán)展示肽，使對該肽的可接近性達(dá)到最大程度。因此，合適的展示結(jié)構(gòu)包括但不限于微抗體 結(jié)構(gòu)、β折疊轉(zhuǎn)角上的環(huán)和卷曲螺旋莖結(jié)構(gòu)(其中對結(jié)構(gòu)無關(guān)緊要的殘基為隨機(jī)的)、鋅指 結(jié)構(gòu)域、半胱氨酸連接的(二硫化物)結(jié)構(gòu)、谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶連接的結(jié)構(gòu)、環(huán)肽、B環(huán)結(jié)構(gòu)、 螺旋的桶或束、亮氨酸拉鏈基序等。參見通過引用結(jié)合的美國專利第6，153，380號。
在篩選測定中有具體用途的為噬菌體展示庫；例如，參見美國專利第5，223，409、 5，403，484,5, 571，698和5，837，500號，為了噬菌體展示方法和構(gòu)建物，它們所有都通過引 用其整體而明確地結(jié)合。通常，噬菌體展示庫可利用合成蛋白(例如肽)插入片段，或可利 用基因組、cDNA等的消化物。
取決于測定和所需結(jié)果，可使用多種細(xì)胞型，包括真核細(xì)胞和原核細(xì)胞；發(fā)現(xiàn)哺乳 動物細(xì)胞和人細(xì)胞尤其有用于本發(fā)明。在一個實(shí)施方案中，所述細(xì)胞可為遺傳改造的，例 如其可包含外源核酸，例如編碼IL-17RA和IL-17RB的那些。在某些情況下，將本發(fā)明的 IL-17RA和IL-17RB蛋白改造為包含標(biāo)記(例如表位標(biāo)記)，例如但不限于用于免疫沉淀測 試或其它用途的那些。
將所述候選物質(zhì)加到細(xì)胞中，并允許溫育適宜的時期。將候選物質(zhì)暴露至所述受 體復(fù)合體的步驟可在IL-17RA和IL-17RB形成IL_17RA_IL_17RB異聚受體復(fù)合體之前、期 間或之后。在一個實(shí)施方案中，在存在和不存在所述候選物質(zhì)時評估IL-17RA和IL-17RB 的締合。例如通過使用標(biāo)記的構(gòu)建物和抗體，可完成免疫沉淀試驗(yàn)。然后，對干擾IL-17RA 和IL-17RB締合的候選物質(zhì)，測試IL-17配體家族成員(例如IL-17A和IL-17F)信號傳導(dǎo) 活性，例如通過測試由如上述的IL-17配體家族成員活化的基因表達(dá)。
在某些實(shí)施方案中，所述IL-17RA和/或IL-17RB蛋白為融合蛋白。例如可以某種 方式修飾受體蛋白以形成嵌合分子，該嵌合分子包含融合至另一個異源多肽或氨基酸序列 的脫輔基蛋白(即嵌合分子或復(fù)合體的蛋白部分)。在一個實(shí)施方案中，這種嵌合分子包含 一種或更多種受體與標(biāo)記多肽的融合體，該標(biāo)記多肽提供抗-標(biāo)記抗體可選擇性結(jié)合的表 位。該表位標(biāo)記通常位于所述受體蛋白的氨基或羧基末端?？墒褂每乖摌?biāo)記多肽的抗體檢 測這種表位標(biāo)記形式的受體的存在。此外，提供這種表位標(biāo)記使受體多肽能易于通過親和 純化法純化，該親和純化法使用抗-標(biāo)記抗體或其它類型的結(jié)合表位標(biāo)記的親和基質(zhì)。這 些表位標(biāo)記可用于固定到如本文中概述的固體支持物。
各種標(biāo)記多肽和其各自的抗體為本領(lǐng)域所熟知。實(shí)例包括聚組氨酸(聚his)或 聚組氨酸-甘氨酸(聚his-gly)標(biāo)記；流感HA標(biāo)記多肽和其抗體12CA5 [Field等，Mol. Cell. Biol.，8 :2159-2165(1988)] ；c-myc 標(biāo)記和其 8F9、3C7、6E10、G4、B7 和 9E10 抗體 [Evan 等，Molecular and Cellular Biology, 5 :3610-3616(1985)]；以及單純皰疹病毒糖 蛋白 D(gD)標(biāo)記和其抗體[Paborsky 等，Protein Engineering, 3 (6) :547-553 (1990)]。其 它標(biāo)記多肽包括 FLAGGTM-肽[Hopp 等，BioTechnology, 6 :1204-1210(1988)] ；KT3 表位肽 [Martin 等，Science，255 :192-194(1992)]；微管蛋白表位肽[Skinner 等，J. Biol. Chem.， 266 :15163-15166(1991)]；以及 T7 基因 10 蛋白肽標(biāo)記[Lutz-Freyermuth 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA,87 :6393-6397(1990)]。
可制得多種表達(dá)載體。所述表達(dá)載體可為自復(fù)制型染色體外載體或整合至宿主基 因組的載體。通常，這些表達(dá)載體包括可操作地連接至編碼金屬蛋白的核酸的轉(zhuǎn)錄和翻譯 調(diào)節(jié)核酸。術(shù)語“控制序列”指在特定宿主生物體中對表達(dá)可操作連接的編碼序列必需的DNA序列。適合于原核生物的控制序列包括例如啟動子、任選操縱基因序列和核糖體結(jié)合位 點(diǎn)。真核細(xì)胞已知利用啟動子、聚腺苷酸化信號和增強(qiáng)子。
在某些實(shí)施方案中，在體外進(jìn)行抑制至IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的結(jié)合 的測定。例如，將測定混合物(候選物質(zhì)、IL-17RA和IL-17RB)的成分固定在一個表面上， 再加入其它成分(在某些實(shí)施方案中其中一種為標(biāo)記的)。例如，可將IL-17RA或IL-17RB 連到一個表面，再加入候選物質(zhì)和標(biāo)記的IL-17RA和/或IL-17RB。洗滌后，評估標(biāo)記的存 在。在該實(shí)施方案中，如本領(lǐng)域已知的分離所述IL-17RA和IL-17RB蛋白。
總的來說，通常如本領(lǐng)域已知的實(shí)現(xiàn)連接，而且連接取決于將被連接兩種物質(zhì)的 組成。通常，通過利用各成分上可用于連接的官能團(tuán)使用連接接頭。用于連接的官能團(tuán) 為氨基、羧基、橋氧基、羥基和硫醇基。然后這些官能團(tuán)可通過利用接頭直接或間接連接。 接頭為本領(lǐng)域所熟知；例如熟知同雙功能或異雙功能接頭(參見通過引用結(jié)合到本文的 1994Pierce Chemical Company目錄，關(guān)于交聯(lián)劑的技術(shù)部分，第155-200頁)。連接接頭包 括但不限于烷基(包括取代烷基和包含雜原子部分的烷基)，包括短烷基、酯類、酰胺、胺、 環(huán)氧基及乙二醇和衍生物。或者，使用融合配偶體；合適的融合配偶體包括其它固定成分， 例如用于與具有鎳的表面連接的組氨酸標(biāo)記、用于接頭和標(biāo)記等連接的功能成分和蛋白類 標(biāo)記。
在一個實(shí)施方案中，尤其當(dāng)候選物質(zhì)固定在固體支持物時，合適的融合配偶體 為自熒光蛋白標(biāo)記。合適的蛋白類熒光標(biāo)記還包括但不限于綠色熒光蛋白(GFP)(包括 海腎、Ptilosarcus 或 Aequorea 種的 GFP(Chalfie 等，1994，Science 263 :802-805))、 EGFP (Clontech Laboratories, Inc.，Genbank 登記號 U55762)、藍(lán)色熒光蛋白(BFP， Quantum Biotechnologies, Inc.180IdeMaisonneuve Blvd. West,8th Floor, Montreal, Quebec, Canada H3H 1J9, Stauber,1998, Biotechniques 24 :462-471 ；Heim φ,1996, Curr. Biol. 6 :178-182)、增強(qiáng)的黃色熒光蛋白(EYFP, Clontech Laboratories，Inc.)、螢光 酶(Ichiki 等，1993，J. Immunol. 150 :5408-5417)、β 半乳糖苷酶(Nolan 等，1988，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 85 :2603-2607)和海腎(W092/15673、W095/07463、W098/14605、 W098/26277、W099/49019，美國專利第 5292658、5418155、5683888、5741668、5777079、 5804387,,5874304,5876995,5925558)。所有上面引用的參考通過引用明確地結(jié)合到本文 中。
所述不溶性支持物可由任何組分構(gòu)成，所述組合物可結(jié)合至該組分，該不溶支持 物易于從可溶物質(zhì)中分離，并另外的與全部篩選方法相容。這種支持物的表面可為實(shí)心或 多孔的及任何適宜形狀。合適的支持物實(shí)例包括微量滴定板、陣列、膜類和珠子，并包括但 不限于玻璃和改性或官能化的玻璃、塑料(包括丙烯酸樹脂、聚苯乙烯及苯乙烯和其它物 質(zhì)的共聚物、聚丙烯、聚乙烯、聚丁烯、聚氨酯、聚四氟乙烯等)、多糖、尼龍或硝化纖維、樹 脂、硅石或包括硅和改性硅的硅石基材料、碳、金屬、無機(jī)玻璃、塑料、陶瓷和各種其它聚合 物。在某些實(shí)施方案中，所述實(shí)心支持物允許光學(xué)檢測且其自身不明顯發(fā)熒光。此外，如本 領(lǐng)域已知，所述實(shí)心支持物可涂上許多的物質(zhì)，包括聚合物，例如葡聚糖、丙烯酰胺、明膠、 瓊脂糖等。示范性的實(shí)心支持物包括硅、玻璃、聚苯乙烯及其它塑料和丙烯酸樹脂類。由于 使用小量的試劑和樣品就可同時進(jìn)行大量測定，微量滴定板和陣列尤其便利。所述組合物 結(jié)合的具體方式并不重要，只要其與試劑及本發(fā)明的全部方法相容、保持所述組合物的活性并為非可擴(kuò)散的。
在有利于物質(zhì)靶向性相互作用的反應(yīng)條件下，所述候選物質(zhì)與測定的其它成分接 觸。通常，該條件為生理條件。溫育可在任何利于最佳活性的溫度下進(jìn)行，典型為4-40°C 間。選擇最適活性的溫育周期，但也可優(yōu)化溫育周期利于快速高通量篩選。典型地0.1-1 小時間為足夠的。在固相測定的情況下，過量試劑通常清除掉或洗走。在下面討論測定形 式。
可將各種其它試劑包含進(jìn)測定中。這些包括試劑如鹽、中性蛋白，例如白蛋白、去 污劑等，該試劑可用于促進(jìn)最適宜脫輔蛋白-物質(zhì)結(jié)合和/或減少非特異性或背景相互作 用。此外，還可使用另外地改進(jìn)測定效率的試劑，例如蛋白酶抑制劑、核酸酶抑制劑、抗菌劑 等。成分的混合可以任何提供必需結(jié)合的順序加入。
在一個實(shí)施方案中，本文概述的任何測定可利用用于高通量篩選的機(jī)器人系統(tǒng)。 很多系統(tǒng)通常涉及96 (或更多)孔微量滴定板的使用，但如本領(lǐng)域那些人員會認(rèn)可的，可使 用任何數(shù)量的不同板或配置。此外，本文概述的任何或全部步驟可為自動化的；因此，例如 該系統(tǒng)可為完全或部分自動化的。
如本領(lǐng)域那些人員會認(rèn)可的，有多種可使用的組件，包括但不限于一個或更多個 機(jī)器臂；用于微板位置控制的板操作器(Plate handler)；用于給無交叉污染板上的孔移 去和替換蓋的自動化蓋操作器(lid handler)；用于樣品分發(fā)的帶有一次性尖端的尖端集 合體(tip assemblies)；用于樣品分發(fā)的可洗尖端集合體；96孔裝載塊；冷卻試劑架；微量 滴定板移液管位置(任意冷卻)；平板和尖端的堆料塔(stacking tower)；及計算機(jī)系統(tǒng)。
完全機(jī)器人或微流體系統(tǒng)包括自動化的液體處理、顆粒處理、細(xì)胞處理和有機(jī)體 處理，該處理包括高通量的移液操作以執(zhí)行篩選應(yīng)用的所有步驟。這包括液體、顆粒、細(xì)胞 和有機(jī)體操作，例如抽入、分配、混合、稀釋、洗滌、精確容積轉(zhuǎn)移；移液管吸頭的回收和丟 棄；及用于自單個樣品抽入液多次遞送的等體積重復(fù)移液。這些操作為無交叉污染液體、顆 粒、細(xì)胞和有機(jī)體的轉(zhuǎn)移。該設(shè)備執(zhí)行將微板樣品自動化復(fù)制至濾器、膜和/或子板、高密 度轉(zhuǎn)移、全板連續(xù)稀釋和高容量操作。
在一個實(shí)施方案中，可使用化學(xué)衍生的顆粒、板、管、磁性粒子或其它對測定成分 具有特異性的固態(tài)基質(zhì)。微板、管或任何固相基質(zhì)的結(jié)合表面包括非極性表面、高極性表 面、促進(jìn)共價結(jié)合的改性葡聚糖涂層、抗體涂層、結(jié)合融合蛋白或肽的親和介質(zhì)、表面固定 的蛋白(例如重組蛋白A或G)、核苷酸樹脂或涂層及其它有用于本發(fā)明的親和基質(zhì)。
在一個實(shí)施方案中，為了額外的容量，用于多孔板、復(fù)式管、小管、深孔板、微量離 心管、冷凍管、方孔板、濾器、芯片、光纖、珠子和其它固相基質(zhì)的平臺或具有多種體積的平 臺，容納在可升級組合式平臺。該組合式平臺包括變速定軌振蕩器、電穿孔儀、及用于源樣、 樣品和試劑稀釋的多工位工作板、測定板、樣品和試劑儲存器、移液管吸頭和活動洗滌站。
在一個實(shí)施方案中，循環(huán)變溫器和溫度調(diào)節(jié)系統(tǒng)用于穩(wěn)定熱交換器(例如受控塊 或平臺)的溫度，以提供從4°C至100°C間準(zhǔn)確溫度控制溫育樣品。
在某些實(shí)施方案中，所述儀器化將包括檢測器，取決于標(biāo)記和測定，該檢測器可為 各種不同的檢測器。在一個實(shí)施方案中，有用的檢測器包括具有多通道熒光的顯微鏡；提供 熒光、紫外光和可見光分光光度檢測的具有單波長和雙波長端點(diǎn)及動力學(xué)性能、熒光共振 能量轉(zhuǎn)移(FRET)、SPR系統(tǒng)、發(fā)光、猝滅、兩光子激發(fā)和強(qiáng)度再分配的平板讀數(shù)器；捕捉和變換數(shù)據(jù)和圖像成可計量形式的CCD照相機(jī)；及計算機(jī)工作站。這些將實(shí)現(xiàn)以下的監(jiān)測在細(xì) 胞、組織和有機(jī)體中的特異性標(biāo)記的大小、增長和表型表達(dá)；靶的驗(yàn)定；先導(dǎo)物優(yōu)化；數(shù)據(jù) 分析、開采、組織以及高通量篩選與公眾和專有數(shù)據(jù)庫的整合。
所述17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體為所述受體的生物活性形式，在本文已顯 示了通過促炎介質(zhì)的釋放應(yīng)答配體特異性活化作用。本領(lǐng)域已知多種疾病狀態(tài)(如本 文中示例的)與IL-17配體家族成員的生理水平上升有關(guān)。在一個實(shí)施方案中，所述 IL-17RA-IL-17RB抗原結(jié)合蛋白有用于檢測生物樣品中的IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合 體，和鑒定表達(dá)該復(fù)合體的細(xì)胞或組織。這對研究團(tuán)體具有重要的價值。
本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白可用于診斷目的，以檢測、診斷或監(jiān)測與IL-17或所述 IL-17RA或L-17RB受體有關(guān)的疾病和/或狀況。本發(fā)明提供應(yīng)用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的 經(jīng)典免疫組織學(xué)方法檢測樣品中IL-17受體的存在(例如Tijssen，1993，Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, vol 15(EdsR. H. Burdon and P. H. van Knippenberg, Elsevier, Amsterdam) ；Zola,1987, Monoclonal Atibodies :A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc.) Jalkanen 等，1985，J. Cell. Biol. 101 :976-985 Jalkanen 等，1987，J. CellBiol. 105 :3087-3096)。所述IL-17受體的檢測可在體內(nèi)或體外進(jìn)行。
本文提供的診斷應(yīng)用包括使用所述抗原結(jié)合蛋白去檢測所述IL-17IL-17RA和 IL-17RB蛋白的表達(dá)，及配體至所述IL-17受體的結(jié)合。有用于檢測所述IL-17受體存在的 方法的實(shí)例包括免疫測定，例如酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)和放射免疫測定(RIA)。如上文 概述，使用共免疫沉淀反應(yīng)法對檢測所述IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體非常有用。為 了診斷應(yīng)用，所述抗原結(jié)合蛋白通?？捎萌绫疚闹卸x的可檢測標(biāo)記基團(tuán)標(biāo)記。
本發(fā)明的一個方面提供鑒定表達(dá)所述IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的單個 或復(fù)數(shù)個細(xì)胞。在一具體實(shí)施方案中，將所述抗原結(jié)合蛋白用標(biāo)記基團(tuán)標(biāo)記，檢測該標(biāo)記 抗原結(jié)合蛋白至所述IL-17受體的結(jié)合。在另一具體實(shí)施方案中，在體內(nèi)檢測所述抗原結(jié) 合蛋白至所述IL-17受體的結(jié)合。在另一具體實(shí)施方案中，所述抗原結(jié)合蛋白-IL-17受 體為分離的，利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)測量。例如，參見Harlow和Lane，1988，Antibodies ALaboratory Manual, New York Co Id Spring Harbor (1991 年版，周期性增刊)John Ε· Coligan, 1993年版，Current Protocols In Immunology New York :John Wiley & Sons。
5. 0IL-17RA-IL-17RB 拮抗物的制備
適宜表達(dá)IL-17RA-IL-17RB拮抗物的宿主細(xì)胞包括原核生物、酵母或高等真核生 物細(xì)胞。與細(xì)菌、真菌、酵母和哺乳動物細(xì)胞的宿主一起使用的適宜克隆和表達(dá)載體在例如 Pouwels 等· Cloning Vectors ALaboratory Manual, Elsevier, New York, (1985)中描述。 利用得自本文公開DNA構(gòu)建體的RNA，也可采用無細(xì)胞翻譯系統(tǒng)生產(chǎn)LDCAM多肽。
原核生物包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性有機(jī)體，例如大腸桿菌或芽孢桿菌屬 (Bacilli)0用于轉(zhuǎn)化的適合原核宿主細(xì)胞包括例如大腸桿菌、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)和各種其它屬于假單胞菌屬 (Pseudomonas)、鏈霉菌屬(Streptomyces)禾口 葡萄球菌屬(Staphylococcus)之內(nèi)的 種。在原核宿主細(xì)胞例如大腸桿菌中，IL-17RA-IL-17RB拮抗物可包含N末端甲硫氨酸 殘基，以促進(jìn)重組多肽在原核宿主細(xì)胞中的表達(dá)。該N末端Met可切割自所表達(dá)的重組 IL-17RA-IL-17RB 拮抗物。
IL-17RA-IL-17RB拮抗物可在酵母宿主細(xì)胞中表達(dá)，該酵母宿主細(xì)胞優(yōu)選來自酵 母屬(Saccharomyces)(例如啤酒酵母(S. cerevisiae))。也可采用其它酵母屬，例如畢 赤酵母屬(Pichia)、乳酸克魯維酵母(K. Iactis)或克魯維酵母屬(Kluyveromyces)。酵 母載體常常包含來自2μ酵母質(zhì)粒的復(fù)制起始序列、自主復(fù)制序列(ARS)、啟動子區(qū)、多聚 腺苷酸化序列、轉(zhuǎn)錄終止序列和選擇標(biāo)記基因。酵母載體的適合啟動子序列尤其包括以下 的啟動子金屬硫蛋白、3-磷酸甘油酸激酶(Hitzeman等，J. Biol. Chem. 255 =2073,1980) 或其它糖酵解酶(Hess 等，J. Adv. Enzyme Reg. 7 :149,1968 ；及 Holland 等，Biochem. 17 4900，1978)，例如烯醇化酶、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、己糖激酶、丙酮酸脫羧酶、磷酸果糖激 酶、葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶、3-磷酸甘油酸變位酶、丙酮酸激酶、丙糖磷酸異構(gòu)酶、磷酸葡糖 異構(gòu)酶和葡糖激酶。其它用于酵母中表達(dá)的適合載體和啟動子進(jìn)一步描述于Hitzeman， EPA-73，657 或 Fleer 等，Gene，107 :285-195(1991)；及 van den Berg 等，Bio/technology, 8 :135-139(1990)中。另一個替代性啟動子為葡萄糖阻遏型ADH2啟動子，由Russell等 (J. Biol. Chem. 258 :2674,1982)和 Beier 等(Nature 300 :724，1982)描述。在酵母和大腸 桿菌中都可復(fù)制的穿梭載體可通過將來自PBR322的DNA序列插入到上述酵母載體中構(gòu)建， 該DNA序列用于在大腸桿菌中選擇和復(fù)制(Amplr基因和復(fù)制起點(diǎn))。
可使用酵母α因子前導(dǎo)序列引導(dǎo)所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物的分泌。所述α 因子前導(dǎo)序列常常插入到啟動子序列和結(jié)構(gòu)基因序列之間。例如，參見Kurjan等，Cell30 933，1982 ；Bitter 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA81 :5330,1984 ；美國專利第 4，546，082 號； 及EP 324，274。適于促進(jìn)酵母宿主分泌重組多肽的其它前導(dǎo)序列為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。 可在接近前導(dǎo)序列的3'末端修飾前導(dǎo)序列，以使其包含一個或更多個限制位點(diǎn)。這將促進(jìn) 前導(dǎo)序列融合至結(jié)構(gòu)基因。
酵母的轉(zhuǎn)化方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。一種這種方法由Hirmen等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75 1929，1978描述。Hinnen等的方法在選擇性培養(yǎng)基中挑選Trp+轉(zhuǎn)化體， 其中所述選擇性培養(yǎng)基由0. 67%酵母氮源、0. 5%酪蛋白氨基酸、2%葡萄糖、10μ g/ml腺 嘌呤和20μ g/ml尿嘧啶組成。由包含ADH2啟動子序列的載體轉(zhuǎn)化的酵母宿主細(xì)胞可在 “豐富”培養(yǎng)基中誘導(dǎo)表達(dá)培養(yǎng)。一種豐富培養(yǎng)基的實(shí)例為由酵母提取物、2%蛋白胨和葡萄糖、并添加80μ g/ml腺嘌呤和80μ g/ml尿嘧啶組成的培養(yǎng)基。所述ADH2啟動子 的去阻遏發(fā)生在培養(yǎng)基中的葡萄糖耗盡時。
也可采用哺乳動物或昆蟲宿主細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)表達(dá)重組IL-17RA-IL-17RB拮抗物。 Luckow和Summers，Bio/Technology 6 :47(1988)綜述了用于在昆蟲細(xì)胞中生產(chǎn)異源蛋白 的桿狀病毒系統(tǒng)。也可采用哺乳動物源的已建立細(xì)胞系。適宜的哺乳動物宿主細(xì)胞系的 實(shí)例包括猴腎細(xì)胞(ATCC CRL 1651)的 C0S-7 系(Gluzman 等，Cell23 175，1981)、L 細(xì) 胞、C127細(xì)胞、3T3細(xì)胞(ATCC CCL 163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、HeLa細(xì)胞和BHK (ATCC CRL 10)細(xì)胞系及如McMahan等(ΕΜΒ0 J. 10 =2821,1991)描述的源自非洲青猴腎細(xì)胞系 CVI (ATCC CCL 70)的 CV-1/EBNA-I 細(xì)胞系。
哺乳動物宿主細(xì)胞表達(dá)載體的轉(zhuǎn)錄和翻譯的控制序列可切自病毒基因組。常用的 啟動子序列和增強(qiáng)子序列源自多瘤病毒、腺病毒2、猿猴病毒40 (SV40)和人巨細(xì)胞病毒?？?使用源自SV40病毒基因組的DNA序列例如SV40起始點(diǎn)、早期和后期啟動子、增強(qiáng)子、剪接 和多聚腺苷酸化位點(diǎn)，以提供用于在哺乳動物宿主細(xì)胞中表達(dá)結(jié)構(gòu)基因序列的其它遺傳成33分。病毒的早期啟動子和后期啟動子尤其有用，因?yàn)閮烧呷菀鬃鳛槠螐牟《净蚪M中得 到，該片段還可包含病毒的復(fù)制起點(diǎn)(Fiers等，Nature273 :113，1978)。只要位于SV40病 毒復(fù)制起始點(diǎn)的從Hind III位點(diǎn)延伸至Bgl I位點(diǎn)的大約250bp序列是包含在內(nèi)的，也可 使用較小的或較大的SV40片段。
在哺乳動物宿主細(xì)胞中使用的示范性表達(dá)載體可如Okayama和Berg(Mol. Cell. Biol. 3 =280,1983)所公開的構(gòu)建。用于在C127鼠乳腺上皮細(xì)胞中穩(wěn)定地高水平表達(dá)哺乳 動物cDNA的實(shí)用系統(tǒng)，可基本如Cosman等(Mol. Immunol. 23 :935，1986)所述的構(gòu)建。由 Cosman等，Nature 312 :768，1984所述的一種有用的高表達(dá)載體，PMLSV N1/N4，已保存為 ATCC39890。另外有用的哺乳動物表達(dá)載體在本文通過引用結(jié)合的EP-A-0367566和申請于 1991年5月16日的美國專利申請序號第07/701，415號中描述。所述載體可從反轉(zhuǎn)錄病毒 中得到。為代替天然的信號序列，和除了啟始密碼子甲硫氨酸，可加入異源的信號序列，例 如美國專利4，965，195中所述的IL-7的信號序列、Cosman等，Nature 312 :768(1984)描 述的IL-2受體的信號序列、EP 367，566中描述的IL-4信號肽、美國專利4，968，607中描 述的I型IL-I受體信號肽和EP 460，846中描述的II型IL-I受體信號肽。
本發(fā)明的作為分離、純化或同源蛋白的IL-17RA-IL-17RB拮抗物可通過如上述的 重組表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)或純化自天然存在的細(xì)胞。
—種生產(chǎn)IL-17RA-IL-17RB拮抗物的方法，包括在足以啟動所述 IL-17RA-IL-17RB拮抗物表達(dá)的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞為用包含編碼至少一種 IL-17RA-IL-17RB拮抗物的DNA序列的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的。然后根據(jù)采用的表達(dá)系統(tǒng)，從培 養(yǎng)基或細(xì)胞提取物中回收IL-17RA-IL-17RB拮抗物。如技術(shù)人員已知，純化重組蛋白的方 法將根據(jù)如下因素而變化，例如所用的宿主細(xì)胞型和重組蛋白是否分泌到培養(yǎng)基中。例 如，當(dāng)使用分泌重組蛋白的表達(dá)系統(tǒng)時，首先可用市售的蛋白濃縮過濾器濃縮培養(yǎng)基，例如 Amicon或Millipore Pellicon超濾單元。濃縮步驟之后，可將所述濃縮物施加至純化基質(zhì) 例如凝膠過濾介質(zhì)中?；蛘撸墒褂秒x子交換樹脂，例如具有二乙氨乙基0EAE)側(cè)基的基 質(zhì)或基體。所述基質(zhì)可為丙烯酰胺、瓊脂糖、葡聚糖、纖維素或其它常用于蛋白純化的種類。 或者，可采用陽離子交換步驟。合適的陽離子交換劑包括含磺丙基或羧甲基的各種不溶性 基質(zhì)。最后，可一次或更多次采用使用疏水RP-HPLC介質(zhì)(例如具有甲基或其它脂族基團(tuán) 側(cè)基的硅膠)的反相高效液相色譜(RP-HPLC)步驟，以進(jìn)一步純化IL-17RA-IL-17RB拮抗 物。前述純化步驟中一些或全部(以各種組合)為熟知的，可用于提供基本同質(zhì)的重組蛋 白。
有可能利用包含IL-17RA、或IL-17RB、或IL-17RA和IL-17RB兩者或 IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體蛋白的親和柱，親和純化表達(dá)的IL-17RA-IL-17RB拮抗 物?？衫贸Ｒ?guī)技術(shù)例如在高鹽洗脫緩沖液中，然后在較低鹽緩沖液中透析備用，或通過改 變PH或其它成分(取決于使用的親和基質(zhì))，從親和柱中分離IL-17RA-IL-17RB拮抗物。 或者，所述親和柱可包含結(jié)合IL-17RA-IL-17RB拮抗物的抗體。
可通過以下分離細(xì)菌培養(yǎng)物中產(chǎn)生的重組蛋白，首先破碎宿主細(xì)胞、離心、從細(xì)胞 團(tuán)中提取(如果是不溶的多肽)或從上清液中提取(如果是可溶的多肽)，然后為一步或 更多步濃縮、鹽析、離子交換、親和純化或尺寸排阻色譜步驟。最后，可在最后純化步驟使用 RP-HPLC0微生物細(xì)胞可通過任何常規(guī)方法破碎，例如凍融循環(huán)、超聲、機(jī)械破碎或使用細(xì)胞溶解物質(zhì)。
可使用轉(zhuǎn)化的酵母宿主細(xì)胞，以分泌型多肽的形式表達(dá)IL-17RA-IL-17RB拮抗 物以簡化純化。來自酵母宿主細(xì)胞發(fā)酵的分泌型重組多肽可通過類似于todal等.1984， J. Chromatog. 296 :171公開的方法純化。todal等描述了兩個連續(xù)的反相HPLC步驟，用于 在制備型HPLC柱中純化重組人IL-2。
本說明書主體內(nèi)引用的所有參考都通過引用其整體而明確地結(jié)合到本文中。下列 實(shí)際的和預(yù)言性實(shí)施例都以闡明本發(fā)明的具體實(shí)施方案或特征的目的提供，并且不限制其 范圍。實(shí)施例
人IL-17RD. HIS、山羊抗_hIL_17RA多克隆抗體、山羊抗_hIL_17RB多克隆抗體、山 羊抗-hIL_17RC多克隆抗體和所有的ELISA試劑盒得自R&D Systems (Minneapolis，麗)且 根據(jù)制造商的說明書使用。鼠IL-13得自hvitrogen Biosource (Carlsbad,CA) 鼠血清 白蛋白(MSA)得自 Sigma-Aldrich (St. Louis,MO)?？谷撕托∈?IL-25、IL-17RA 和 IL-17RB 的單克隆抗體基本如Yao等描述的制得(Yao等，1995，Immunity 3 :811-821 ；Yao等，1995， J. Immunol. 155 :5483-5486 ；Yao, 1997，Cytokine9 :794-800)。編碼人和小鼠 IL-17RA 的 cDNA先前已有描述(參見上文三篇Yao的參考)。人和小鼠IL-17RB編碼的開放閱讀框與 先前描述的相同(Tian 等，2000，Oncogene 19(17) :2098-2109)。編碼鼠 IL-25 的 cDNA先前 已有描述(Hurst 等，2002，J Immunol. 169(1) :443-453.)。如(Hurst 等，上文)所述，在大 腸桿菌中表達(dá)和純化鼠IL-25?；救鏨ao等，1995，Immunity (上文)所述，將人IL-17RA 的胞外區(qū)融合至聚HIS或人Fc IgGl (IL-17RA:HIS或IL_17RA:Fc，分別地)；將人IL-17RB 的胞外區(qū)融合至聚HIS(IL-17RB.HIS)或人Fc IgGl (IL-17RB· Fe)。在某些實(shí)驗(yàn)中，使用市 售鼠和人 IL-25、IL-17RAFc 和 IL-17RB Fc (R&D Systems)。
實(shí)施例1
本實(shí)施例在體內(nèi)表明IL-17RB對對IL-25的應(yīng)答為必需的。IL-17RB-/-小鼠使 用本領(lǐng)域已知的方法產(chǎn)生。簡言之，通過用PGKneo盒替換包含鼠IL-17RB外顯子3的基因 組序列，構(gòu)建基因靶向載體。將胸苷激酶盒(MC-TK)插入至載體的5'末端。如(Kolls， J 等· 1994. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91 :215-219)所述，用靶向載體電穿孔 1 源胚胎 干(EQ細(xì)胞，在存在G418和更昔洛韋中選擇。通過結(jié)合PCR和基因組Southern印跡分 析鑒定攜帶IL-17RB的目標(biāo)突變的ES克隆，并將該克隆注入Swiss Black胚泡中。將雄 性嵌合體雜交至雌性Swiss Black,以產(chǎn)生IL-17RB突變的雜合小鼠，該雜合小鼠隨后互交 以產(chǎn)生IL-17RB-缺陷型小鼠。使用標(biāo)記輔助加速回交(Marker-Assisted Aceelerated Backcrossing) (MAX-BAXsm)技術(shù)(Charles River Laboratories, Wilmington, MA)通過 5 次連續(xù)回交至C57BL/6小鼠，將這些小鼠遷移至C57BL/6背景。鑒定為99. 5% C57BL/6的 小鼠用于建立繁殖群，以產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)用途的小鼠。
基本如Hurst 等(J. Immunol. 169 :443,2002)所述，鼻內(nèi)(IN)給予對照 C57BL/6 小鼠(WT)或 IL-17RB-/-小鼠(KO) 50 微升的 MSA(Sigma-Aldrich Jt. Louis M0;10 微克 / mL)或小鼠IL-25 (Amgen ;10微克/mL)，每天一次，共四天。在第5天，從該小鼠采集支氣管 肺泡灌洗液(BALF)和肺組織并分析。
通過把管子插進(jìn)用300微升2. 5%阿佛丁(2_2_2_三溴乙醇，Sigma)的IP注射液 麻醉的小鼠，隨后用兩個600微升體積的冰冷的杜爾貝科氏(Dulbecco’ s)PBS(Gibco)沖 洗肺進(jìn)行支氣管肺泡灌洗(BAL)。該BAL液細(xì)胞通過在IOOOrpm離心10分鐘成球狀，隨后 用PBS+5%胎牛血清(FBS ；HyClone ；Logan, UT)重懸，以用ADVIA 120血液機(jī)器(用于 處理和分析血液樣品的臺式分析器；Siemens Diagnostics, Tarrytown, NY)計算和分析總 白細(xì)胞含量及各種細(xì)胞型的數(shù)量的變化。還通過ELISA(R&D Systems ；檢測限IL-531pg/ mL ；IL-13 62pg/mL)測定該 BALF 的 IL-5 和 IL-13 蛋白濃度。
基本如(Hartel，C.等，1999Scand.J. Immunol. 49(6) :649-654)先前所述，使 M Assays-On-Demand TaqMan 弓| · (Applied Biosystems, Foster City, CA) M il TaqMan (一種快速實(shí)時基于熒光團(tuán)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法)表達(dá)，確定肺組織中各種炎性 介質(zhì)的 mRNA 水平。在 ABI Prism 7900HT FastRT-PCR System (Applied Biosystems)上進(jìn) 行該TaqMan 分析。各治療組中各基因?qū)Ζ?-肌動蛋白、HPRT或GAPDH基因表達(dá)的相對 表達(dá)用 Sequence Detection System 2. 2. 3 (Applied Biosystems)確定。兩個獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的 結(jié)果示于下表1-4。
表1 鼻內(nèi)給予IL-25的IL-17RB KO和WT小鼠中，BALF細(xì)胞含量、IL-5濃度和 IL-13濃度的分析
權(quán)利要求
1.一種抑制IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體活化的方法，所述方法包括將表達(dá)至少 IL-17RA和IL-17RB的細(xì)胞暴露至IL-17RA-IL-17RB拮抗物，使得IL-17RA-IL-17RB異聚受 體復(fù)合體經(jīng)IL-25的活化被部分或完全抑制。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物為抗原結(jié)合蛋白。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體 或其亞基。
4.權(quán)利要求1-3中任一項的方法，其中IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的形成被部 分或完全抑制。
5.權(quán)利要求1-4中任一項的方法，其中至少一種促炎介質(zhì)的釋放被部分或完全抑制。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述促炎介質(zhì)選自IL-5、IL-6、IL-8、IL-13、CXCL1、CXCL2、 GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-I β、TNF α、RANK-L, LIF、PGE2、IL—12、ΜΜΡ3、ΜΜΡ9、GRO α 和 NO。
7.一種在體內(nèi)抑制IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體活化的方法，所述方法包括將表 達(dá)至少IL-17RA和IL-17RB的細(xì)胞暴露至IL-17RA-IL-17RB拮抗物，使得IL-17RA-IL-17RB 異聚受體復(fù)合體經(jīng)IL-25的活化被部分或完全抑制。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物為抗原結(jié)合蛋白。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體 或其亞基。
10.權(quán)利要求7-9中任一項的方法，其中IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的形成被部 分或完全抑制。
11.權(quán)利要求7-10中任一項的方法，其中至少一種促炎介質(zhì)的釋放被部分或完全抑制。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述促炎介質(zhì)選自IL-5、IL-6、IL_8、IL-13、CXCLU CXCL2、GM-CSF、G-CSF、M-CSF、IL-I β , TNF α、RANK-L、LIF、PGE2、IL-12、MMP3、MMP9、GRO α 禾口 NO。
13.權(quán)利要求7-12中任一項的方法，其中將所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物給予受自身 免疫或炎性疾病折磨的個體。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述自身免疫或炎性疾病選自急性呼吸病癥綜合征 (ARDQ、呼吸窘迫綜合征、支氣管炎和與病毒誘導(dǎo)性狀況有關(guān)的氣道高反應(yīng)性，該病毒為例 如呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)、鼻病毒(RV)和腺病毒。
15.權(quán)利要求13或14的方法，其中所述IL-17RA-IL-17RB拮抗物部分或完全降低或改 善所述自身免疫或炎性疾病的病征或癥狀。
全文摘要
本發(fā)明涉及白介素-17配體和受體家族成員，以及IL-17受體A和IL-17受體C形成有生物活性的異聚受體復(fù)合體的發(fā)現(xiàn)。公開了IL-17RA-IL-17RB異聚受體復(fù)合體的拮抗物以及各種使用方法。
文檔編號C07K16/28GK102037017SQ200980115731
公開日2011年4月27日 申請日期2009年2月20日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月21日
發(fā)明者A·L·布德爾斯基, J·E·托克, M·R·科莫 申請人:安姆根有限公司