專利名稱：N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化學(xué)醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻 唑-6-)-2-甲酰胺衍生物及其制備方法和用途。高效安全抗腫瘤藥物的開發(fā)一直是世界性的難題。近年，隨著對惡性腫瘤發(fā)病機(jī) 制的深入研究，針對腫瘤特異性分子靶點(diǎn)設(shè)計(jì)抗腫瘤治療藥物因其確切療效和低毒副作用 而成為抗腫瘤藥物開發(fā)的新方向和熱點(diǎn)。腫瘤血管在實(shí)體瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用，腫瘤新生血管靶向新藥的研發(fā) 已成為當(dāng)今腫瘤研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域。目前研究已證實(shí)許多與腫瘤血管生成密切相關(guān)的細(xì)胞因 子，如Tie2就是其中一個(gè)典型的受體酪氨酸激酶。Tie2是1992年在人的內(nèi)皮細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn) 一種新的受體型酪氨酸激酶，它是血管生成素(angiopoietin，Ang)l，2，3，4的受體。當(dāng)配 體Angl與Tie2結(jié)合后，能通過一系列生化反應(yīng)，使基底膜與細(xì)胞外基質(zhì)降解，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì) 胞遷移，從而誘導(dǎo)新生血管生成。在多種腫瘤中均可檢測到腫瘤組織血管中Ang-I和Tie2 受體的表達(dá)增高，抑制Tie2的活性可以破壞腫瘤的血管生成，從而達(dá)到抑制腫瘤生長的目 的。故Tie2已經(jīng)成為近年抗腫瘤藥物開發(fā)的一個(gè)新的靶點(diǎn)，針對Tie2受體的小分子拮抗 劑有可能為腫瘤治療提供新的希望。本發(fā)明的發(fā)明人使用分子對接(Docking)技術(shù)，對小分子化合物數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行虛 擬篩選基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了具有Tie2抑制效果的新型的骨架結(jié)構(gòu)，然后通過有機(jī)合成獲得了實(shí) 體化合物，通過體外抗腫瘤活性測試發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問題是為抗腫瘤血管生成藥物提供一類新的化合 物，該類化合物為式I所示的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物
背景技術(shù)：
優(yōu)選的，R1為-(CH2)nC6H5、-(CH2)nC6H5_m (CH3) m、- (CH2)nC6H5_m (CH2CH3) m、-(CH2) I1C6H5-D1Fm> “ (CH2) nC6H5_mClm、- (CH2) nC6H5_mBrm、- (CH2) nC6H5_m (OCH3) m、- (CH2) nC6H5_m (OCH2CH3) m，η = 1 8,m=l 5;R2 為-CxH(2x+1)、-CxH(2x+1)_yFy、-CxH(2x+1)_yCly、-CxH(2x+1)_yBry、-C6H5_c (OCH3) c、-C6H5_c (CF3) c、-C6H5_c (OCH2CH3)c, χ = 1 8，y = 1 16，c = 1 5。進(jìn)一步的，R1為-CH2C6H5、-CH2C6H4F、-CH2C6H5Cl、-CH2C6H5Br、-CH2C6H4OCH3 ；R2 為-CH2 F、-CH2Cl、-CH2Br、-C6H4OCH3^ -C6H4CF3O更進(jìn)一步的，R1為 _CH2C6H5、-CH2C6H5Cl 或-CH2C6H4OCH3 ；R2 為-CH2Cl、-C6H4OCH3 或-C6H4CF315最優(yōu)的，所述N-(2_(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物為式II VII所示化合物 本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問題是提供上述式I所示的N-(2-(2-胺)氧乙硫 基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物的制備方法，其反應(yīng)路線如下所示 即6-氨基-2-巰基苯并噻唑在堿性條件下與R1NHCOCH2CI進(jìn)行烷基化反應(yīng)得到 6_氨基I-Q-N-R1)氧乙硫基)苯并噻唑，然后再與R2COCl反應(yīng)得到產(chǎn)物。本發(fā)明所要解決的第三個(gè)技術(shù)問題是提供上述式I所示的N-(2_(2-胺)氧乙硫 基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物在制備抗腫瘤藥物中的用途。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，是由上述式I所示的N-(2_(2-胺)氧乙硫基苯 并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物添加藥學(xué)上可以接受的輔助性成分制備而成的。該藥物組合 物可用于制備抗腫瘤藥物。本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明在大量篩選的基礎(chǔ)上得到N-(2_(2-胺)氧乙硫基苯 并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物，具有抗腫瘤活性，為抗腫瘤藥物的開發(fā)和應(yīng)用提供了新的 選擇。
具體實(shí)施例方式式I所示的N-(2_(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)_2-甲酰胺衍生物的制備方法
反應(yīng)路線如下所示 R1NHCOCH2CI的合成方法為冰水浴下在R1取代胺、堿和二氯甲烷混合的反應(yīng)液中緩慢滴加氯乙酰氯，滴加完 畢后加熱回流，TLC(薄層色譜)鑒定反應(yīng)完畢后加水淬滅反應(yīng)。反應(yīng)液用水洗，水相再用 二氯甲烷萃取，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗，無水NaSO4干燥，過濾，旋干得到白色固體。R2COCl的合成方法為室溫下在R2COOH與二氯甲烷混合的溶液中滴加數(shù)滴(催化量)DMF,再緩慢滴加草 酰氯，室溫?cái)嚢?，TLC監(jiān)測反應(yīng)完畢后旋干溶劑即得。
N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物的合成方法為將6-氨基-2-巰基苯并噻唑jiNHCOa^Cl、堿和丙酮混合并加熱回流，TLC鑒定反 應(yīng)完畢后減壓除去有機(jī)溶劑，殘余物用乙酸乙酯溶解后加水分液，水層用乙酸乙酯萃取，合 并有機(jī)相用飽和食鹽水洗，無水NaSO4干燥，然后再減壓除去有機(jī)溶劑，殘余物經(jīng)快速硅膠 柱層析純化得到反應(yīng)中間體。將制備好的R2COCl用二氯甲烷溶解后，滴加到上述反應(yīng)中間體和NaHCO3的二氯 甲烷反應(yīng)液中，室溫?cái)嚢瑁琓LC鑒定反應(yīng)完畢，飽和NaHCO3溶液洗，二氯甲烷萃取，合并有機(jī) 相，飽和食鹽水洗，硅膠柱層析分離純化，得到的樣品經(jīng)重結(jié)晶純化，HPLC測定含量> 95% 后進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述。實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不是以 任何方式來限制本發(fā)明。本實(shí)施例所用的6-氨基-2-巰基苯并噻唑購買自Sigma-Aldrich公司，鄰三氟甲
基苯 冰水浴下在溶有芐胺(60g，0.56mol)和 K2CO3 (90g, 1. 18mol)的二氯甲烷(550ml) 反應(yīng)液中緩慢滴加氯乙酰氯(52. llml，0.65mol)，滴加完畢后加熱回流，TLC鑒定(Rf = 0.53，展開劑石油醚乙酸乙酯=2 1)反應(yīng)完畢后加水淬滅反應(yīng)。反應(yīng)液用水洗，水相 再用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗，無水NaSO4干燥，過濾，旋干得到白色固體 82. 2g，產(chǎn)率為80. 0%，產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下1H-WrGOOMHz, CDCl3) δ 4. 10 (s，2Η)，4. 50 (d，J = 5. 6Hz,2H) ,6. 88 (s, broad, 1H)，7. 26-7. 38 (m, 5H)ESI-MS (m/z, % ) 184. O(M-H)+實(shí)施例2 N-對氯芐基-2-氯乙酰胺的合成冰水浴下在溶有4-氯代芐胺30克和K2CO3 34. 6克的二氯甲烷(270ml)反應(yīng)液中 緩慢滴加氯乙酰氯19. 79ml，滴加完畢后加熱回流，TLC鑒定反應(yīng)完畢后加水淬滅反應(yīng)。反 應(yīng)液用水洗，水相再用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗，無水NaSO4干燥，過濾，旋 干得到白色固體32. lg。產(chǎn)率為69. 2%，產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下1HwrGOOMHz, DMS0-d6) δ 4. 13 (s，2Η)，4. 29 (d，J = 6. 0Hz,2H) ,7. 28 (d, J =4. 4Hz，2H)，7. 39 (d, J = 8. OHz, 2H) ,8. 77 (s, 1H)ESI-MS (m/z, % ) 218. O(M-H)+實(shí)施例3 N-對甲氧芐基-2-氯乙酰胺的合成 冰水浴下在溶有4-甲氧基芐胺50克和K2CO3 80克的二氯甲烷(450ml)反應(yīng)液中 緩慢滴加氯乙酰氯45ml，滴加完畢后加熱回流，TLC鑒定反應(yīng)完畢后加水淬滅反應(yīng)。反應(yīng)液 用水洗，水相再用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗，無水NaSO4干燥，過濾，旋干得 到白色固體66. 2g。產(chǎn)率為85%，產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下1HNMR (400MHz, CDCl3) δ 3. 81 (s, 3H), 4. 09 (s, 2H), 4. 43 (d, J = 5·6Ηζ，2Η)， 6. 80 (s，1Η)，6· 88 (d, J = 8. 8Ηζ，2Η)，7· 23 (d, J = 8. 4Hz，2H)ESI-MS(m/z, % ) 214. O(M-H)+實(shí)施例4鄰甲氧基苯甲酰氯的合成 室溫下在溶有鄰甲氧基苯甲酸(0. 152g，lmmol)的二氯甲烷4ml溶液中滴加數(shù)滴 DMF，再緩慢滴加草酰氯(0.4ml，4mmol)，室溫?cái)嚢?，TLC監(jiān)測反應(yīng)完畢后旋干溶劑即得。該 化合物不穩(wěn)定，須立即投人后續(xù)反應(yīng)。實(shí)施例5 2- (2- (2-芐胺)_氧乙硫基)-6-氨基苯并噻唑的合成 6-氨基-2-巰基苯并噻唑0. 728g(4mmol)、實(shí)施例1制備的N-芐基_2_氯乙酰胺 1.468g(8mmol)和K2CO3 LKMg(Snmol)加入20ml丙酮中回流4小時(shí)，TLC鑒定反應(yīng)完畢 后旋干丙酮，再用乙酸乙酯溶解并水洗，萃取，飽和食鹽水洗，硅膠柱層析分離，依次用石油 醚乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脫，TLC檢測產(chǎn)品的Rf = 0.24，展 開劑石油醚乙酸乙酯=2 1，得到淺黃色固體1.26g，產(chǎn)率為95%。產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù) 據(jù)如下1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ 4. 08(s,2H) ,4. 31 (d, J = 5. 6Hz，2H)，5. 36 (s，2H)， 6. 72 (dd, J = 8. 8,2. OHz, 1H) ,7. 00 (d, J = 2. 4Hz，1H)，7· 20-7. 28 (m，5H)，7· 49 (d，J = 8. 8Hz, 1Η)，8. 75 (t, J = 6. OHz, 1Η)ESI-MS(m/z, % ) 330. O(M-H)+實(shí)施例6 2- (2- (Ν-4-氯芐氨)_2_氧乙硫基)_6_氨基苯并噻唑的合成
6-氨基-2-巰基苯并噻唑0. 091g(0. 5mmol)、實(shí)施例2制備的N-對氯芐基_2_氯 乙酰胺0. 218g(lmmol) ,K2CO3 0. 138g(Immol)和丙酮5ml混合后回流4小時(shí)，TLC鑒定反應(yīng) 完畢。旋干丙酮，再用乙酸乙酯溶解并水洗，萃取，飽和食鹽水洗，硅膠柱層析分離，依次用 石油醚乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脫，TLC檢測產(chǎn)品的Rf = 0.26， 展開劑石油醚乙酸乙酯=2 1，得到淺黃色固體0. 1619g，產(chǎn)率為89%。產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒 定數(shù)據(jù)如下1H-WrgoomHzjDmso-CI6) δ 4. 09(s,2H) ,4. 29 (d, J = 5· 6Ηζ，2Η)，5· 72(s，2H)， 6. 76 (dd, J = 8. 8,2. OHz, 1H), 7. 05 (d, J = 2. 0Hz，1H)，7. 24-7. 231 (m，4H)，7. 50 (d，J = 8. 8Hz, 1H)，8· 80 (t, J = 5. 6Hz, 1H)ESI-MS (m/z, % ) 362. O(M-H)實(shí)施例7 2-(2-(N-(4-甲氧基)芐氨)_2_氧乙硫基)_6_氨基苯并噻唑的合成6-氨基-2-巰基苯并噻唑0. 182g (lmmol)、實(shí)施例3制備的N-對甲氧芐基-2-氯 乙酰胺0. 427g (2mmol) ,K2CO3 0. 276g (2mmol)和丙酮IOml混合后回流4小時(shí)，TLC鑒定反應(yīng) 完畢。旋干丙酮，再用乙酸乙酯溶解并水洗，萃取，飽和食鹽水洗，硅膠柱層析分離，依次用 石油醚乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脫，TLC檢測產(chǎn)品的Rf = 0.23， 展開劑石油醚乙酸乙酯=2 1，得到黃色固體0.316g，產(chǎn)率為89%。產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù) 據(jù)如下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 3. 70 (s, 3H), 4. 08 (s, 2H), 4. 30 (d, J = 5·6Ηζ，2Η)， 5. 36(s，2H)，6· 73(dd，J = 8. 8，2. 0Hz，1H)，7. 00 (d，J = 2. 4Hz，1H)，7. 20-7. 27 (m，4H)， 7. 49 (d, J = 8. 8Hz, 1H)，8. 78 (t, J = 6. OHz, 1H)ESI-MS(m/z, % ) 360. O(M-H)+實(shí)施例8 N-(2-(2-(4-氯芐胺)-2-氧乙硫基)苯并噻唑-6_)-2-甲氧基苯甲酰 胺的制備氮?dú)獗Ｗo(hù)下，實(shí)施例6制備的2- (2- (N-4-氯芐胺)_2_氧乙硫基)_6_氨基苯并噻 唑0. 1269g(0. 33mmol)、碳酸氫鈉0. 14g(l. 7mmol)和二氯甲烷15混合后，滴加實(shí)施例4制 備的鄰甲氧基苯甲酰氯0. 17g(lmm0l)。室溫?cái)嚢?，TLC鑒定反應(yīng)完畢。用飽和碳酸氫鈉溶 液洗滌收得的反應(yīng)溶液，再用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗滌，硅膠柱層析分 離純化，依次用石油醚乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1，TLC檢測產(chǎn)品的 Rf = 0.21，展開劑石油醚乙酸乙酯=2 1，洗脫最終得到淺黃色固體0. 154g。產(chǎn)率為 89%。產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 3. 91 (s, 3H), 4. 19 (s, 2H), 4. 31 (d, J = 6·0Ηζ，2Η)，7. 08 (t, J = 7. 6Hz, 1H) ,7. 20 (d, J = 8. 4Hz，1H)，7. 27-7. 34 (m，4H)，7. 50-7. 54 (m，1H)，
7.65 (dd, J = 7. 6,1. 6Hz, 1H), 7. 70 (dd, J = 8. 8，2. 0Hz，1H)，7. 78 (d，J = 8. 8Ηζ，1Η)，
8.53 (d, J = 2. OHz, 1H)，8· 85 (t, J = 6. OHz, 1H)，10. 35 (s, 1H)ESI-MS (m/z, % ) 520. O (M-Na) +實(shí)施例9 N-(2-(2-(4-甲氧基芐胺)-2-氧乙硫基)苯并噻唑-6_)-2-甲氧基苯
甲酰胺的制備 氮?dú)獗Ｗo(hù)下，實(shí)施例7制備的2-(2-(N_(4-甲氧基)芐氨)_2_氧乙硫基)_6_氨 基苯并噻唑0. 215g (0. 6mmol)、碳酸氫鈉0. 252g (3mmol)和二氯甲烷30ml混合后，滴加實(shí)施 例4制備的鄰甲氧基苯甲酰氯0.21g(1.2mmOl)。室溫?cái)嚢?，TLC鑒定反應(yīng)完畢。飽和碳酸 氫鈉溶液洗滌，二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗滌，硅膠柱層析分離純化，依次用 石油醚乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脫，TLC檢測產(chǎn)品的Rf = 0. 18， 展開劑石油醚乙酸乙酯=2 1，最終得到淺黃色固體0.26g，產(chǎn)率為88%。產(chǎn)品的結(jié)構(gòu) 鑒定數(shù)據(jù)如下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 3. 70(s，3H)，3· 91(s，3H)，4· 17(s，2H)，4· 246 (d，J = 6. 0Hz，2H)，6· 82 (d, J = 8. 4Hz，2H)，7· 08 (t, J = 7. 6Hz, 1H)，7. 15-7. 20 (m，3H)，7. 52 (t, J =7. OHz, 1H), 7. 64 (d, J = 7. 2Hz, 1H)，7. 69 (d, J = 7. 2Hz, 1H)，7. 78 (d, J = 8. 4Hz, 1H)， 8. 53 (s，1H)8. 74 (t, J = 5. 6Hz, 1H)，10. 35 (s, 1H)ESI-MS (m/z, %) :494. 0 (M-H)516. 0 (M-Na)+實(shí)施例10 N-芐基-2- (6- (2-氯乙酰胺)苯并噻唑_2_硫)乙酰胺的制備 氮?dú)獗Ｗo(hù)下，實(shí)施例5制備的2- (2- (N-芐氨)-2-氧乙硫基)-6-氨基苯并噻 唑0. 1316g(0. 4mmol)、碳酸氫鈉0. lg(1.2mmol)和二氯甲烷20ml混合后，滴加氯乙酰氯 0.06ml。室溫?cái)嚢瑁琓LC鑒定反應(yīng)完畢。飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，二氯甲烷萃取，合并有機(jī) 相，飽和食鹽水洗滌，硅膠柱層析分離純化，依次用石油醚乙酸乙酯=2 1和石油醚 乙酸乙酯=1 1洗脫，TLC檢測產(chǎn)品的Rf = 0.22，展開劑石油醚乙酸乙酯=2 1。最 終得到白色固體0. 146g，產(chǎn)率為90%。產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 4. 19 (s, 2H), 4. 30 (s, 2H), 4. 33 (d, J = 5·6Ηζ，2Η)， 7. 21-7. 29(m，5H)，7. 56(dd，J = 8. 8，2. 2Hz，1Η)，7. 79 (d，J = 8. 8Hz，1H)，8. 37 (d，J = 2. OHz, 1H)，8. 82 (t, J = 5. 8Hz, 1H)，10. 54 (s，1H)
ESI-MS (m/z, % ) 404. O(M-H)實(shí)施例11 N-(2-(2-(4-芐胺)-2-氧乙硫基)苯并噻唑-6-)-2-三氟甲基苯甲
酰胺的制備 氮?dú)獗Ｗo(hù)下，實(shí)施例5制備的2-(2_(N-芐氨)-2_氧乙硫基)-6_氨基苯并噻唑 0. 1316g(0. 4mmol)、碳酸氫鈉0. lg(l. 2mmol)和二氯甲烷20ml混合，滴加鄰三氟甲基苯甲 酰氯0. 125g(0. 6mmol)。室溫?cái)嚢?，TLC鑒定反應(yīng)完畢。飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，二氯甲烷萃 取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗滌，硅膠柱層析分離純化，依次用石油醚乙酸乙酯=2 1 和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脫，TLC檢測產(chǎn)品的Rf = 0.2，展開劑石油醚乙酸乙酯= 2 1，最終得到白色固體0. 19g，產(chǎn)率為90%。產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 4. 20(s，2H)，4· 33 (d, J = 6. 4Ηζ，2Η)，7· 22-7. 30 (m, 5H)，7· 64(dd, J = 8. 8,2. 4Hz, 1Η)，7. 71-7. 84(m，4H)，8· 49 (d, J = 2. OHz, 1Η)，8· 83 (t，J = 5. 8Hz, 1Η)，10. 82 (s，1Η)ESI-MS (m/z, % ) 524. 0 (M-Na) +實(shí)施例12 N-(2-(2-(4-氯芐胺)_2_氧乙硫基)苯并噻唑-6_)-2_三氟甲基苯 甲酰胺的制備 氮?dú)獗Ｗo(hù)下，實(shí)施例6制備的2-(2-(N-(4-氯)芐氨)_2_氧乙硫基)_6_氨基苯 并噻唑0. 27g(0. 74mmol)、碳酸氫鈉0. 189g(2. 2mmol)和二氯甲烷50ml混合后，滴加鄰三 氟甲基苯甲酰氯0.235g(l. lmmol)。室溫?cái)嚢?，TLC鑒定反應(yīng)完畢。飽和碳酸氫鈉溶液洗 滌，二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗滌，硅膠柱層析分離純化，依次用石油醚乙 酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脫，TLC檢測產(chǎn)品的Rf = 0. 19，展開劑石 油醚乙酸乙酯=2 1，最終得到白色固體0.39g，產(chǎn)率為96%。產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如 下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 4. 20 (s，2H)，4. 31 (d，J = 5. 6Hz,2H) ,7. 26-7. 33 (m, 4H)，7· 63(dd, J = 8. 8,2. OHz, 1Η)，7. 71-7. 88(m，5H)，8· 50 (d, J = 1. 6Hz, 1H)，8· 85 (t，J = 5. 8Hz, 1H)，10. 82 (s，1H)ESI-MS(m/z, % ) 534. O(M-H)實(shí)施例13 N-(2-(2-(4-甲氧基芐胺)_2_氧乙硫基)苯并噻唑_6-)-2_三氟甲 基苯甲酰胺的制備
氮?dú)獗Ｗo(hù)下，實(shí)施例7制備的2-(2-(N_(4-甲氧基)芐氨)_2_氧乙硫基)_6_氨 基苯并噻唑0. 2g(0. 55mmol)、碳酸氫鈉0. 14g(l. 65mmol)和二氯甲烷40ml混合后，滴加鄰 三氟甲基苯甲酰氯0. 175g(0.825mmol)。室溫?cái)嚢?，TLC鑒定反應(yīng)完畢。飽和碳酸氫鈉溶液 洗滌，二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗滌，硅膠柱層析分離純化，依次用石油醚 乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脫，TLC檢測產(chǎn)品的Rf = 0.16，展開劑 石油醚乙酸乙酯=2 1。最終得到白色固體0.29g，產(chǎn)率為97%。產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù) 如下1H-NMR (400MHz, DMS0-d6) δ 3. 71 (s, 3H) , 4. 18(s,2H),4. 25 (d, J = 6. OHz, 2H) ,6. 82 (d, J = 9. 6Hz,2H) ,7. 17 (d, J = 8. 8Hz,2H) ,7. 63 (dd, J = 8. 8，2. 0Hz，1H)， 7. 71-7. 88 (m, 5H) 8. 49 (d, J = 2. OHz, 1H)，8. 74 (t, J = 5. 8Hz, 1H)，10. 81 (s, 1H)ESI-MS (m/z, % ) 530. O(M-H)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)部分試驗(yàn)例細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料RPMI-1640, DMEM、胎牛血清、胰酶等購自 Gibco BRL 公司(Invitrogen Corporation，USA)，溴化噻唑藍(lán)四唑(MTT)、二甲亞砜(DMSO)為Sigma公司(USA)產(chǎn)品。實(shí) 施例8 13制備得到的化合物在體外實(shí)驗(yàn)時(shí)用DMSO配制成IOmM儲(chǔ)存液，置于4°C冰箱避 光保存?zhèn)溆茫R用時(shí)再用培養(yǎng)基稀釋至所需濃度。細(xì)胞系及培養(yǎng)本實(shí)驗(yàn)所用的人肝癌細(xì)胞株0fepG2)、人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HCT116) 均購于美國ATCC公司。人肝癌細(xì)胞株0fepG2)，用含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μ g/mL鏈霉素的 DMEM完全培養(yǎng)基、5% C02、37°C培養(yǎng)。人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HCT116)用含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、ΙΟΟμ g/mL鏈霉素 的RPMI-1640完全培養(yǎng)基、5% C02、37°C培養(yǎng)。2、實(shí)驗(yàn)方法(MTT法)用完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為2X 104/mL，接種于96孔板，每孔200 μ L，培養(yǎng)過 夜，次日分別用不同劑量的實(shí)施例8 13制備得到的化合物(終濃度分別為20，10，5，2. 5， 1. 25，0. 625,0. 312μ g/ml)處理細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)用等體積的空白溶劑作為對照組，對 照組的DMSO濃度為0. 1 % (0. 1 %的DMSO對細(xì)胞增殖無影響)。每個(gè)組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，37°C， 5% CO2培養(yǎng)。分別于培養(yǎng)48、72小時(shí)后，取1個(gè)培養(yǎng)板，每孔加入5mg/mL MTT試劑20 μ L， 繼續(xù)培養(yǎng)2h，棄上清，再加DMSO 150 μ L，振蕩混勻15min，用酶標(biāo)儀(λ = 570nm)測定吸光 度(A)值(A值與活細(xì)胞數(shù)成正比)，取其平均值。相對細(xì)胞增殖抑制率(％ )=(溶劑對 照組A57tl-實(shí)驗(yàn)組A57tl) /溶劑對照組A57tlX 100%。同時(shí)，根據(jù)相對細(xì)胞增殖抑制率計(jì)算出半 數(shù)抑制濃度(IC50)來表示化合物對腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)施例8 13制備得到的化合物在不同腫瘤細(xì)胞株上的相對細(xì)胞增殖抑制作用 見表1 表1體外抑制H印G2細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(相對細(xì)胞增殖抑制率，％ ) 表2體外抑制HCTl 16細(xì)胞增殖試驗(yàn)(相對細(xì)胞增殖抑制率，％ ) 表1說明了實(shí)施例8 13制備得到的化合物作用人肝癌細(xì)胞H印G2后，隨化合物 濃度增高，抑制作用增強(qiáng)，其中實(shí)施例8、9、10、13制得的化合物有明顯的抗H印G2細(xì)胞增殖 活性。表2說明了實(shí)施例8 13制備得到的化合物作用人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116后，隨 化合物濃度增高，抑制作用增強(qiáng)，其中實(shí)施例8，9，13有明顯的抑制HCT116細(xì)胞增殖作用， 各劑量組與溶劑對照組相比，相對細(xì)胞增殖抑制率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)。其中 尤其以實(shí)施例8、9制得的化合物的體外抑制效果明顯。實(shí)施例8 13制備得到的化合物處理H印G2及HCTl 16細(xì)胞48h的半數(shù)抑制濃度 (IC50)見表 3。
表3體外抑制H印G2和HCTl 16細(xì)胞增殖試驗(yàn)(IC50, μ Μ)
權(quán)利要求
式I所示的N (2 (2 胺)氧乙硫基苯并噻唑 6 ) 2 甲酰胺衍生物其中，R1為 (CH2)nC6H5、 (CH2)nC6H5 m(CH3)m、 (CH2)nC6H5 m(CH2CH3)m、 (CH2)nC6H5 mFm、 (CH2)nC6H5 mClm、 (CH2)nC6H5 mBrm、 (CH2)nC6H5 m(OCH3)m或 (CH2)nC6H5 m(OCH2CH3)m，n＝1～8，m＝1～5；R2為 F、 Cl、 Br、 CxH(2x+1)、 CxH(2x+1) yFy、 CxH(2x+1) yCly、 CxH(2x+1) yBry、 C6H5 c(OCH3)c、 C6H5 c(CF3)c或 C6H5 c(OCH2CH3)c，x＝1～8，y＝1～16，c＝1～5。F2009103025230C0000011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-(2- (2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-) -2-甲酰胺衍 生物，其特征在于=R1 為-(CH2)nC6H5, -(CH2)nC6H5_m(CH3)m、_(CH2)nC6H5_m(CH2CH3)m、-(CH2) nC6H5_mFm、- (CH2) nC6H5_mClm、- (CH2) nC6H5_mBrm、_ (CH2) nC6H5_m (OCH3) m 或 _ (CH2) nC6H5_m (OCH2CH3) m，η =1 8,m=l 5;R2 為-CxH(2x+1)、-CxH(2x+1)_yFy、-CxH(2x+1)_yCly、-CxH(2x+1)_yBry、_C6H5_c (OCH3) c、_C6H5_c (CF3) c 或-C6H5_c (OCH2CH3)c, χ = 1 8，y = 1 16，c = 1 5。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物，其 特征在于=R1 為 _CH2C6H5、-CH2C6H4F, -CH2C6H5Cl、-CH2C6H5Br 或-CH2C6H4OCH3 ；R2 為-CH2F、-CH2Cl、-CH2Br、-C6H4OCH3 或 _C6H4CF3。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物，其 特征在于:Ri 為-CH2C6H5, -CH2C6H5Cl 或-CH2C6H4OCH3 ；R2 為-CH2Cl、-C6H4OCH3 或-C6H4CF30
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物，其 特征在于所述N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物為式II VII所 示化合物
6.制備權(quán)利要求1 5任一項(xiàng)所述的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰 胺衍生物的方法，其特征在于6_氨基-2-巰基苯并噻唑在堿性條件下與R1NHCOCH2CI進(jìn)行 烷基化反應(yīng)得到6-氨基-2-(2-N-Rl)氧乙硫基)苯并噻唑，然后再與R2COCl反應(yīng)得到產(chǎn) 物，路線如下所示
7.權(quán)利要求1 5任一項(xiàng)所述的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍 生物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
8.藥物組合物，其特征在于是由權(quán)利要求1 5任一項(xiàng)所述式I所示的N-(2-(2-胺) 氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物添加藥學(xué)上可以接受的輔助性成分制備而成的。
9.權(quán)利要求8所述藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬于化學(xué)醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物及其制備方法和用途。本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是為抗腫瘤血管生成藥物提供一類新的化合物，具體為式I所示的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物，其中，R1為-(CH2)nC6H5、-(CH2)nC6H5-m(CH3)m、-(CH2)nC6H5-m(CH2CH3)m、-(CH2)nC6H5-mFm、-(CH2)nC6H5-mClm、-(CH2)nC6H5-mBrm、-(CH2)nC6H5-m(OCH3)m或-(CH2)nC6H5-m(OCH2CH3)m，n＝1～8，m＝1～5；R2為-F、-Cl、-Br、-CxH(2x+1)、-CxH(2x+1)-yFy、-CxH(2x+1)-yCly、-CxH(2x+1)-yBry、-C6H5-c(OCH3)c、-C6H5-c(CF3)c或-C6H5-c(OCH2CH3)c，x＝1～8，y＝1～16，c＝1～5。該類衍生物可用于制備抗腫瘤藥物。
文檔編號(hào)C07D277/74GK101891704SQ20091030252
公開日2010年11月24日 申請日期2009年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月22日
發(fā)明者余洛汀, 楊勝勇, 楊黎, 趙瀛蘭, 魏于全 申請人:四川大學(xué)