專利名稱：去氫克林霉素磷酸酯,其分析制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分析化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及藥物分析化學(xué)領(lǐng)域，特別涉及克林霉素磷酸 酯的雜質(zhì)去氫克林霉素磷酸酯及其分析和制備方法。
背景技術(shù)：
克林霉素磷酸酯在體外無抗菌活性，進(jìn)入體內(nèi)后在磷酸酯酶的作用下迅速水解為 克林霉素，在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成具有強(qiáng)抗菌活性的N-去甲基克林霉素，主要作用于細(xì)菌核糖體的 50S亞基，從而阻止肽鏈的延長而干擾細(xì)菌DNA和細(xì)菌蛋白的合成，尚可清除細(xì)菌表面的A 蛋白和絨毛狀外衣，使細(xì)菌容易被吞噬和殺滅?？肆置顾亓姿狨ブ饕獙Ω锾m氏陽性球菌及 厭氧菌有很強(qiáng)的抗菌活性，其作用及用途與克林霉素鹽酸鹽相似，但吸收迅速，作用持久， 血藥濃度較鹽酸鹽高兩倍，是一個(gè)兼有抗厭氧菌與需氧菌作用的廣譜抗生素。目前市場上 已有水針劑、輸液劑、注射劑、無菌分裝粉針劑、凍干粉針劑等，臨床應(yīng)用以注射劑為主。任何影響藥物純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)，一般而言，雜質(zhì)是指在生產(chǎn)和儲存過程中 引進(jìn)或產(chǎn)生的藥物以外的其他化學(xué)物質(zhì)。藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的雜質(zhì)是指在按照經(jīng)國家有關(guān)藥 品監(jiān)督管理部門依法審查批準(zhǔn)的規(guī)定工藝和規(guī)定原輔料生產(chǎn)的藥品中，由其生產(chǎn)工藝和原 輔料帶入的雜質(zhì)，或經(jīng)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)確證的在存儲過程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中 的雜質(zhì)不包括變更生產(chǎn)工藝或變更原輔料而產(chǎn)生的新的雜質(zhì)，也不包括滲入或污染的外來 物質(zhì)。藥品生產(chǎn)企業(yè)變更生產(chǎn)工藝或原輔料，并由此帶進(jìn)新的雜質(zhì)對原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂，均 應(yīng)依法向有關(guān)藥品監(jiān)督管理部門申報(bào)批準(zhǔn)。藥物的雜質(zhì)一般與特定的藥物有關(guān)，源于以下幾個(gè)方面1.源自于藥品生產(chǎn)過程中普遍使用的溶酶、催化劑等；2.反應(yīng)不完全而存在的反應(yīng)原料，反應(yīng)初始復(fù)合物、合成中間產(chǎn)品、副產(chǎn)品等與合 成過程相關(guān)的物質(zhì)；3.貯存過程中的氧化、分解、水解產(chǎn)物；4.手性化合物中的光學(xué)異構(gòu)體；5.藥物的多種晶型；6.動植物藥物提取物中除有效成分生物堿揮發(fā)油、有機(jī)酸等小分子外，還存在分 子量較大的蛋白質(zhì)、蹂質(zhì)、淀粉、樹脂等雜質(zhì)； 7.放射藥品中的衰減物質(zhì)；8.生物工程制品中異常表達(dá)的蛋白質(zhì)；9.重金屬及無機(jī)鹽。藥物雜質(zhì)按化學(xué)類別和特性可分為有機(jī)雜質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)、有機(jī)揮發(fā)性雜質(zhì)。按來 源可分為有關(guān)物質(zhì)(包括化學(xué)反應(yīng)的前體、中間體、副產(chǎn)物和降解產(chǎn)物等)、其他雜質(zhì)和外 來雜質(zhì)等。按結(jié)構(gòu)關(guān)系，雜質(zhì)又可分為其他留體、其他生物堿、幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體和 聚合物等。按毒性，又可分為毒性雜質(zhì)和普通雜質(zhì)等。普通雜質(zhì)即為在存在量下無顯著不 良生物作用的雜質(zhì)，而毒性雜質(zhì)為具有強(qiáng)烈不良生物作用的雜質(zhì)。
雜質(zhì)檢測是藥品質(zhì)量控制的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，藥品質(zhì)量當(dāng)中的含量測定是指原料藥 和制劑中主要成分的含量，有關(guān)物質(zhì)是指原料藥和制劑當(dāng)中的有機(jī)雜質(zhì)。通過有關(guān)物質(zhì)檢 查，弄清有關(guān)物質(zhì)的來源、性質(zhì)、檢測方法及其限量，可以優(yōu)化合成路線、實(shí)驗(yàn)條件等因素， 進(jìn)而避免其產(chǎn)生有關(guān)物質(zhì)或其降到最低限度，從多方面保證和提高藥品質(zhì)量，減少藥物的 不良反應(yīng)。藥物雜質(zhì)檢查分析方法應(yīng)靈敏、專屬。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，分離、分析手段的不 斷提高，藥物雜質(zhì)的檢測方法得到了不斷的改進(jìn)。檢測藥物雜質(zhì)的方法很多，能較好的進(jìn) 行分離，鑒定藥物的雜質(zhì)，如高效液相色譜、氣相色譜、紫外、紅外光譜、薄層色譜分析、毛細(xì) 管區(qū)帶電泳、薄層毛細(xì)管電泳等，這些分析方法廣泛應(yīng)用于藥品含量測定和雜質(zhì)檢測。近年 來，質(zhì)譜技術(shù)在藥物雜質(zhì)分析方面應(yīng)用日益廣泛，氣相色譜聯(lián)用技術(shù)、液相色譜聯(lián)用技術(shù)已 經(jīng)成為藥物雜質(zhì)分析的重要手段。開發(fā)新原料藥和新制劑過程中的雜質(zhì)研究，應(yīng)嚴(yán)格按照國家有關(guān)新藥申報(bào)的要求 進(jìn)行研究，也可以參照ICH的文本Q3A(新原料藥中的雜質(zhì))和Q3B(新制劑中的雜質(zhì))進(jìn) 行研究，并對雜質(zhì)的安全性和降解產(chǎn)物進(jìn)行安全性評價(jià)。其具體要求有如下幾點(diǎn)1.對合成、純化和儲存中實(shí)際存在的雜質(zhì)和潛在的雜質(zhì)，應(yīng)采用有效的分離分析 方法進(jìn)行檢測；2.對于表觀含量在0. 及其以上的雜質(zhì)以及表觀含量在在0. 以下的具有強(qiáng) 烈生物作用的雜質(zhì)或毒性雜質(zhì)予以定性或確證其結(jié)構(gòu)；3.對在穩(wěn)定性試驗(yàn)中出現(xiàn)的降解產(chǎn)物，也應(yīng)按上述要求進(jìn)行研究；4.新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的雜質(zhì)檢查項(xiàng)目應(yīng)包括經(jīng)研究和穩(wěn)定性考察檢出的，并在批量 生產(chǎn)中出現(xiàn)的雜質(zhì)和降解產(chǎn)物，并包括相應(yīng)的限度；5.除降解產(chǎn)物和毒性雜質(zhì)外，在原料藥中已經(jīng)控制的雜質(zhì)，在制劑中一般不再控 制；6.原料藥和制劑中的無機(jī)雜質(zhì)，應(yīng)根據(jù)其生產(chǎn)工藝、起始原料情況確定檢查項(xiàng)目， 但對于毒性無機(jī)雜質(zhì)，應(yīng)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定其檢查項(xiàng)。在仿制藥的研制和生產(chǎn)中，如發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)的種類與原始開發(fā)藥品不同或與已有法定 雜質(zhì)不同，必須增加新的雜質(zhì)項(xiàng)檢查項(xiàng)目，應(yīng)該嚴(yán)格按照上述方法進(jìn)行研究，申報(bào)新的藥品 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或?qū)υ|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂，并報(bào)有關(guān)藥品監(jiān)督管理部門審批。共存的異構(gòu)體和抗生素多組分一般不作為雜質(zhì)檢查項(xiàng)目，作為共存物質(zhì)，必要時(shí) 在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定其比例，以保證生產(chǎn)用的原料藥與申報(bào)注冊時(shí)的一致性。但當(dāng)共存時(shí)的 物質(zhì)為毒性雜質(zhì)時(shí)，該物質(zhì)就不再認(rèn)為是共存物質(zhì)。單一對映體藥物，其可能共存的其他對 映體應(yīng)作為雜質(zhì)檢查。消旋藥物，當(dāng)已有其單一對映體藥物的法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)在該消旋 體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中設(shè)旋光度檢查項(xiàng)目。有機(jī)揮發(fā)性雜質(zhì)，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝中所用有機(jī)溶劑及其殘留情況，確定檢查項(xiàng)目。 可參考中國藥典關(guān)于有機(jī)揮發(fā)性雜質(zhì)的要求，或參考ICH文本Q3C(殘留溶劑指導(dǎo)原則)。 對殘留的毒性溶劑，應(yīng)規(guī)定其檢查項(xiàng)目。為了保證用藥安全，原料藥/制劑中的每一個(gè)雜質(zhì)都必須進(jìn)行安全性評估也就是 說必須建立保證安全性的雜質(zhì)限度，ICH準(zhǔn)則要求藥物中雜質(zhì)的限度為0. 1% (對毒性藥 物限度更低)，高于此水平的所有未知雜質(zhì)應(yīng)鑒別出來，而更重要的是，所有高于0. 的雜質(zhì)應(yīng)研究其毒性。ICH在2007年2月7日修訂的“新原料藥中的雜質(zhì)”指導(dǎo)原則，根據(jù) 原料藥的每日最大劑量將原料藥分為兩類，并分別制定了雜質(zhì)的報(bào)告閾值、鑒定閾值與合 理限度。其中的報(bào)告閾值是指所有高于此閾值的雜質(zhì)及含量均應(yīng)記入每批產(chǎn)品的檢驗(yàn)報(bào)告 中，并反應(yīng)在申報(bào)資料中。而鑒定閾值是指所有高于此閾值的雜質(zhì)均應(yīng)對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。 合理限度是指只要質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中制定的雜質(zhì)限度不高于此限度，就不需要提供該限度的制定 依據(jù)，均認(rèn)為該限度是合理的。對于新制劑，ICH在2003年2月5日修訂的“新制劑中的雜質(zhì)”指導(dǎo)原則中也做了 明確規(guī)定，該指導(dǎo)原則同樣根據(jù)不同的用藥劑量制訂了雜質(zhì)的報(bào)告閾值、鑒定閾值和合理 限度。歐盟藥品主管部門要求生產(chǎn)企業(yè)(1)應(yīng)在穩(wěn)定性研究中設(shè)立未知雜質(zhì)(0. ) 的限度；2)應(yīng)對限度大于或等于0.1%的未知雜質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確定和安全性驗(yàn)證。對于某些 抗生素類藥物要求更高，例如發(fā)酵產(chǎn)品紅霉素，該品種已經(jīng)EP收載，并規(guī)定雜質(zhì)的可忽略 限度為0.06%，且任何雜質(zhì)不得超過3.0%。歐盟藥品主管部門要求，任何大于可忽略限度 0. 06%的未知峰給予結(jié)構(gòu)確定并提出適當(dāng)?shù)碾s質(zhì)限度建議，當(dāng)雜質(zhì)達(dá)到該限度即對其進(jìn)行 安全性評價(jià)。FDA也尤其關(guān)注藥物生產(chǎn)中藥物的純度和劑量的安全性，要求藥品生產(chǎn)者對雜 質(zhì)進(jìn)行全面的分析，并盡可能的提供較多的結(jié)構(gòu)信息。通常，超過0. 的雜質(zhì)需鑒定出來 并且用選擇性好的方法進(jìn)行定量分析，而且對0.01% 0. 的雜質(zhì)也表示濃厚的興趣。盡管雜質(zhì)限度的確定對于藥品研發(fā)非常重要，但國內(nèi)藥品研發(fā)的現(xiàn)實(shí)情況并不令 人樂觀。從近幾年的新藥申報(bào)情況分析，在雜質(zhì)的研究和限度確定方面存在著較多的問題， 主要表現(xiàn)為部分藥品研究單位對雜質(zhì)研究的重要性了解不深；標(biāo)準(zhǔn)中對雜質(zhì)的控制不夠 全面和準(zhǔn)確；制訂雜質(zhì)限度時(shí)考慮問題不夠全面，很少考慮雜質(zhì)對藥品安全性的不良影響； 即使在雜質(zhì)的含量明顯超出正常工藝所允許的范圍時(shí)，也不注意對現(xiàn)在的處方和工藝進(jìn)行 必要的優(yōu)化，以降低雜質(zhì)的限度?！吨袊幍洹贰ⅰ睹绹幍洹?、《歐洲藥典》和《英國藥典》均有克林霉素磷酸酯相關(guān)物 質(zhì)項(xiàng)的收載，而《英國藥典》和《歐洲藥典》的收載更為全面，《英國藥典》和《歐洲藥典》根 據(jù)生產(chǎn)工藝和克林霉素磷酸酯的降解途徑在“可能的雜質(zhì)”項(xiàng)收載了林可霉素、克林霉素 B2-磷酸酯、克林霉素3-磷酸酯、克林霉素4-磷酸酯和克林霉素五個(gè)雜質(zhì)。《中國藥典》中對克林霉素磷酸酯僅僅對雜質(zhì)的總量進(jìn)行了限定，對單一雜質(zhì)研究 不具體，而歐盟藥品主管部門和FDA均要求對克林霉素磷酸酯原料藥中表觀含量0. 1 %及 其以上的雜質(zhì)，進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和安全性驗(yàn)證。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于對克林霉素磷酸酯原料藥的雜質(zhì)進(jìn)行研究，主要在于分離制備雜 質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品并且鑒定原料藥中的雜質(zhì)結(jié)構(gòu)。根據(jù)本發(fā)明的方法對原料藥中的雜質(zhì)進(jìn)行分 析、制備和結(jié)構(gòu)鑒定，可以為雜質(zhì)的毒理學(xué)研究和闡明不良反應(yīng)發(fā)生機(jī)制提供基礎(chǔ)，同時(shí)也 可以為工藝合成實(shí)驗(yàn)條件的選擇提供參考，有利于生產(chǎn)過程中藥品質(zhì)量的控制。根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)方面，其提供如下式I所示的去氫克林霉素磷酸酯
權(quán)利要求
1.去氫克林霉素磷酸酯，其結(jié)構(gòu)式如下式I所示
2.如權(quán)利要求1所述去氫克林霉素磷酸酯的分析制備方法，其特征在于對克林霉素磷 酸酯原料進(jìn)行分析，并從中分離制備所述去氫克林霉素磷酸酯，包括下列步驟a)用LC-MS法測定所述克林霉素磷酸酯原料，根據(jù)被分析成分的相對保留時(shí)間和/或 分子量確定所述原料中的去氫克林霉素磷酸酯；b)根據(jù)步驟a)中所述的去氫克林霉素磷酸酯的相對保留時(shí)間所顯示的色譜保留行為 確定制備色譜法的條件，用制備色譜法收集和所述相對保留時(shí)間對應(yīng)的被分析成分。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟a)中，所述的LC-MS法測定所采用的 流動相PH值為4. 00 5. 00。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟a)中，所述的LC-MS法測定所采用的 柱溫為20°C 40°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟a)中，所述的LC-MS法測定所采用的 流動相包含15% 25%乙腈。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟a)中，所述的LC-MS法測定所采用的 流動相包含0. 0. 3%氨水。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟a)中，所述的LC-MS法測定所采用 HPLC條件為流動相20%乙腈，0. 氨水;PH甲酸調(diào)pH至4. 90 ；柱溫25°C ；流速 1. Oml/min ；檢測波長2IOnm ；色譜柱 Diamonsil ODS C18，5 μ m，250 X 4. 6mm 柱。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟b)中，所述的制備色譜法所采用條件 包括流動相15% 25%乙腈，0. 1 0. 3%氨水；pH甲酸調(diào)pH至4. OO 5. OO ；柱溫20°C 40°C ；色譜柱Waters μ Bondapak ODS C18，5 μ m，7. 8mmX 300mm柱，或者Agela Venusil ODS XBP C18，5 μ m，IOmmX 250mm 柱。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟b)中，所述的制備色譜法所采用條件為
10.如權(quán)利要求1所述的去氫克林霉素磷酸酯用于制備抗革蘭氏陽性菌藥物的用途。
11.如權(quán)利要求10所述用途，其中所述革蘭氏陽性菌包括抗枯草桿菌和金黃色葡萄球菌。
12.如權(quán)利要求2 9中任一項(xiàng)所述方法制備的雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，其特征在于，所述雜質(zhì)具 有如下結(jié)構(gòu)式I
13.如權(quán)利要求12所述的雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品用于分析克林霉素磷酸酯原料的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供去氫克林霉素磷酸酯，及其分析制備方法，用于對克林霉素磷酸酯原料進(jìn)行分析，并從中分離制備所述去氫克林霉素磷酸酯，包括下列步驟用LC-MS法測定所述克林霉素磷酸酯原料，根據(jù)被分析成分的相對保留時(shí)間和/或分子量確定所述原料中的去氫克林霉素磷酸酯；根據(jù)步驟a)中所述的去氫克林霉素磷酸酯的相對保留時(shí)間所顯示的色譜保留行為確定制備色譜法的條件，用制備色譜法收集和所述相對保留時(shí)間對應(yīng)的被分析成分。
文檔編號C07H15/16GK102060882SQ20091019898
公開日2011年5月18日 申請日期2009年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月18日
發(fā)明者吳彤, 孫秋實(shí), 李志敏, 李悅, 王慧敏, 陳述增 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院