專利名稱：一種從桑葉中快速提取白藜蘆醇的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種從桑葉中快速提取白藜蘆醇的工藝技術，屬于天然產物化學的技術領域。
背景技術：
白黎蘆醇是一種含有芪類結構的非黃酮類多酚化合物，有順、反兩種構型，其中反式是穩(wěn)定結構，而且生物活性更加廣泛。近些年來，國內外很多學者對白藜蘆醇的生物學功能進行了深層研究，結果表明白藜蘆醇具有抗腫瘤、抗心血管疾病、抗氧化等多方面有益于人類健康的生物活性，因此受到生物醫(yī)學界的重視。
到目前為止，已在多種植物中發(fā)現(xiàn)了白藜蘆醇，如葡萄科的葡萄屬、蛇葡萄屬，豆科的落花生屬，百合科的藜蘆屬，蓼科的蓼屬等。含有白藜蘆醇的植物許多是常見的藥用植物，如虎杖、何首烏等，有的甚至是食物，如葡萄、花生等。目前白藜蘆醇的來源主要是從葡萄皮和某些豆類中提取，含量極為有限。葡萄皮中的白藜蘆醇的含量被認為是最高的，也僅達0.5 1/萬。中國四川出產的中藥虎杖中以甙的形式存在的白藜蘆醇含量，理論值為葡萄皮的200倍。因此，公開號為CN99115156.9、 CN01126769.0、 CN03147908.1的中國專利介紹了一種從中藥虎杖中提取白藜蘆醇的工藝的方法，是將虎杖根粉碎，用乙醇提取；過大孔樹脂柱，減壓濃縮，萃取得白藜蘆醇精品。這些專利都是以虎杖根為原材料進行提取白藜蘆醇，現(xiàn)在資源面臨潰乏，價格從原來的l元/kg漲到了3.5元/kg。原材料的成本急劇上漲，98%白藜蘆醇的價格從18000元/ kg降低到了6000元左右/ kg。
公開號為CN200510040625.1的中國專利介紹了 一種從花生根提取白藜蘆醇的生產方法，是將花生根粉碎，用乙醇提??；過大孔樹脂柱，減壓濃縮，萃取得白藜蘆醇精品。雖然能緩解虎杖資源潰乏，但是白藜蘆醇在花生中含量很低，成本比用虎杖根提取白藜蘆醇的價格還要高，不利于工業(yè)化生產。
我國桑樹種類、品種以及桑椹產量均位居世界首位，除青藏高原外，全國各地均有栽培。目前大部分地區(qū)將桑作為飼用栽培，每年除了詞養(yǎng)桑蠶外，桑樹的很多部位都沒得到利用。盡管許多研究已經報道桑有多種藥理作用，抗過敏作用的研究也鮮有報道。迄今為止的文獻均著重于桑中新化合物的發(fā)現(xiàn)及結構的確定，而對桑葉中白藜蘆醇的快速提取工藝沒有研究。而且白藜戸醇在桑葉中含量較高，取材方便，分布廣泛，價格便宜，更有利于替代虎杖。因而，對桑進行深加工意義非凡。探索從桑中提取白藜蘆醇，其意義相當遠大，不但可以解決白藜蘆醇生產原料問題，還可以增加農民收入，服務地方經濟。

發(fā)明內容
本發(fā)明采用的技術方案包括干燥過后的桑葉經用乙醇溶液提取、過濾、減壓濃縮，然后用樹脂吸附、乙醇洗脫、將洗脫液濃縮，萃取、減壓濃縮，脫色制得白藜戸醇純品。因此，本發(fā)明提供一種從桑葉提取白藜蘆醇的方法，步驟包括
1、 粉碎干燥桑葉，并將桑葉、70。/c乙醇按重量(kg)/體積比(V)-l:l-3進行混合，加熱回流提取;
過濾除渣后，減壓濃縮至無乙醇味；
2、 將濃縮液用2-3倍體積的乙酸乙酯萃取三次，分離乙酸乙酯層并進行濃縮，直至獲得干燥物；
3、 加入70%乙醇進行加熱溶解，然后加入活性碳進行脫色，再進行濃縮直至獲得干燥物；
4、 加入90%乙醇進行加熱溶解，然后加入熱水調節(jié)乙醇終濃度為40-50%,室溫過夜結晶，得白藜蘆醇純品。
在一個實施方案中，步驟5的乙醇終濃度為45%。
在另一個實施方案中，步驟2的過濾過程是紗布過濾、陶瓷膜過濾。其中，優(yōu)選是三層紗
布過濾2次、陶瓷膜過濾l次。
在一個實施方案中，步驟4中所加入的70%乙醇、活性碳，其體積(V)/重量(kg)比-20-10:l。在另一個實施方案中，步驟4中不加入70%乙醇，只加入活性碳脫色，再進行濃縮直至獲
得干燥物。
技術效果-
1、 本發(fā)明方法中所用的原料、設備均為常見的普通原料、設備，避免了工業(yè)化生產過程中對于昂貴原材料、儀器的依賴，大大地降低了生產成本；
2、 桑樹種植容易，扦插、籽播均可，產量高、價格低，來源方便，后續(xù)資源有保障。使用桑葉作為虎杖等藥材的替代，既大大提高了桑葉的利用效率，提高桑葉的附加值，又擺脫了對于虎杖等藥材的依賴，完全緩解了市場對虎杖等藥材的大量需求，同時又能對廢棄桑葉充分利用，保護了虎杖等藥用資源。
3、 本發(fā)明方法操作簡單，不必使用樹脂層析過濾技術，也不需要精密儀器或自動化設備，可在桑葉資源豐富的鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)進行生產，這極大的降低了白藜蘆醇的生產成本，簡化了生產過程。
4、 本發(fā)明所用的試劑均為無毒、廉價、量產的化學試劑，整個過程中可利用成熟的試劑回收的常規(guī)技術，這極大地降低了向環(huán)境排放廢棄物。5、經過長期摸索，本發(fā)明確定了采用40-50%(優(yōu)選45%)乙醇終濃度在室溫條件下進行結晶，白藜蘆醇的純度是最高，可達至的8.57-99.53%。
具體實施例方式
下面，本發(fā)明將用實施例進行進一步的說明，但是它并不限于這些實施例的任一個或類似實例。實施例1:
粉碎干燥桑葉100kg，加入70。/。乙醇300L， 8(TC加熱回流提取2h，三層紗布過濾兩次、陶瓷膜過濾，減壓濃縮至50L (無乙醇味)，然后濃縮液用50L乙酸乙酯進行萃取，取上層(乙酸乙酯層)，下層溶液再用50L乙酸乙酯進行萃取，取上層，下層溶液再用50L乙酸乙酯進行萃取，合并三次乙酸乙酯萃取液共150L左右，用旋轉蒸發(fā)儀進行濃縮至干，再用70W乙醇80L加熱溶解，力B5kg顆?；钚蕴歼M行脫色30min，再濃縮至干，90。/o乙醇2L加熱溶解后，再加熱水混勻，直至乙醇終濃度50%，然后室溫結晶24h，得到白藜蘆醇樣品。
經檢測，AgilentllOO高效液相色譜儀，色譜柱為Hypersil ODS (150mmX4.6mm， 5p)，流動相為60%甲醇的水溶液；檢測波長為298nm;流速為l ml / min;進樣量為20nL。白藜戸醇樣品的純度為95.57%,結果如表l所示。
實施例2:
粉碎干燥桑葉500kg，加入70。/。乙醇600L， 80。C加熱回流提取2h，三層紗布過濾兩次、陶瓷膜過濾，減壓濃縮至100L (無乙醇味)，然后濃縮液用100L乙酸乙酯進行萃取，取上層(乙酸乙酯層)，下層溶液再用100L乙酸乙酯進行萃取，取上層，下層溶液再用100L乙酸乙酯進行萃取，合并三次乙酸乙酯萃取液共300L左右，用旋轉蒸發(fā)儀進行濃縮至干，再用70%乙醇150L加熱溶解，加15kg活性碳進行脫色30min，再濃縮至干，90。/。乙醇6L加熱溶解后，再加熱水直至乙醇終濃度47%，室溫結晶24h,得到白藜蘆醇樣品。按照實施例l的方法進行純度檢測，純度為96.32%，結果如表l所示。
實施例3:
粉碎干燥桑葉200kg，加入70。/q乙醇200L， 80'c加熱回流提取2h，三層紗布過濾兩次、陶瓷膜過濾，減壓濃縮至50L (無乙醇味)，然后濃縮液用50L乙酸乙酯進行萃取，取上層(乙酸乙酯層)，下層溶液再用50L乙酸乙酯進行萃取，取上層，下層溶液再用50L乙酸乙酯進行萃取，合并三次乙酸乙酯萃取液共150L左右，用旋轉蒸發(fā)儀進行濃縮至干，再用70。/。乙醇100L加熱溶解，力口8kg活性碳進行脫色30min，再濃縮至干，90。/。乙醇3L加熱溶解后，再加熱水直至乙醇終濃度40%，室溫結晶24h，得到白藜蘆醇樣品。按照實施例l的方法進行純度檢測，純度為93.55%，結果如表l所示。
實施例4:
粉碎干燥桑葉300kg，加入70。/。乙醇300L， 80。C加熱回流提取2h，三層紗布過濾兩次、陶瓷膜過濾，減壓濃縮至80L (無乙醇味)，然后濃縮液80L乙酸乙酯進行萃取，取上層(乙酸乙酯層)，下層溶液再用80L乙酸乙酯進行萃取，取上層，下層溶液再用80L乙酸乙酯進行萃取，合并三次乙酸乙酯萃取液共150L左右，用旋轉蒸發(fā)儀進行濃縮至干，再用70。/。乙醇120L加熱溶解，加10kg活性碳進行脫色30min，再濃縮至干，90。/。乙醇4L加熱溶解后，再加熱水4亡混勻，室溫結晶24h，得到白藜蘆醇固體，90。/。乙醇2L加熱溶解后，再加熱水混勻直至乙醇終濃度45%，室溫結晶24h，得到白藜蘆醇純品。按照實施例l的方法進行純度檢測，純度為99.53%，結果如表l所示。
表1
實施例桑葉原料 (kg)70%乙醇和活性 碳的體積(vy重 量(kg)比乙醇終濃度眾
110080: 55095.57
2500150: 154796.32
3200跳84093.55
4300120: 104599.53
結合以上實例，本發(fā)明與現(xiàn)行技術相比具有以下優(yōu)點
1. 采用常規(guī)方法進行制備，所需設備簡單，操作方便、安全。
2. 未采用超聲波操作或酶法提取、層析等精提技術，因此有機溶劑損失小，對環(huán)境沒有污染。
權利要求
1、一種從桑葉提取白藜蘆醇的方法，步驟包括(1)粉碎干燥桑葉，并將桑葉、70％乙醇按重量(kg)/體積比(V)＝1∶1-3進行混合，加熱回流提?。?2)過濾除渣后，減壓濃縮至無乙醇味；(3)將濃縮液用2-3倍體積的乙酸乙酯萃取三次，分離乙酸乙酯層并進行濃縮，直至獲得干燥物；(4)加入70％乙醇進行加熱溶解，然后加入活性碳進行脫色，再進行濃縮直至獲得干燥物；(5)加入90％乙醇進行加熱溶解，然后加入熱水調節(jié)乙醇終濃度為40-50％，室溫過夜結晶，得白藜蘆醇純品。
2、 權利要求l的方法，其中步驟5的乙醇終濃度為45%。
3、 權利要求1或2的方法，其中步驟2的過濾過程是紗布過濾、陶瓷膜過濾。
4、 權利要求3的方法，其中過濾實是三層紗布過濾2次、陶瓷膜過濾l次。
5、 權利要求1或2的方法，其中步驟4中所加入的70°/。乙醇、活性碳，其體積(V)/重量(kg)比 =20-10:1。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從桑葉中快速提取白藜蘆醇的方法，大大地提高白藜蘆醇得率和純度。提出了一整套從桑葉分離提取得到高純度的白藜蘆醇，采用醇回流提取，膜過濾，濃縮，萃取，活性碳脫色，乙醇結晶和重結晶，得到白藜蘆醇純品。整個分離過程中對環(huán)境條件要求不高，分離時間最短，純度最高。分離材料易得便宜，分離操作過程簡單，易控制，采用結晶和重結晶，純化效率高，使用試劑無毒。
文檔編號C07C39/00GK101648852SQ200910170070
公開日2010年2月17日 申請日期2009年9月2日 優(yōu)先權日2009年9月2日
發(fā)明者唐忠海 申請人:唐忠海