專利名稱：參與皰疹病毒的潛伏感染的因子及其利用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種參與皰疹病毒的潛伏感染的因子及其利用，尤其涉及一種在皰疹 病毒的潛伏感染時(shí)進(jìn)行特異性表達(dá)的新穎蛋白質(zhì)、及編碼此蛋白質(zhì)的基因、以及其利用。
背景技術(shù)：
皰疹病毒科的病毒是如下的病毒在核心蛋白質(zhì)的周圍，分子量為80 150X106 道爾頓的多鏈線狀DNA進(jìn)入由162個(gè)殼粒所構(gòu)成的直徑約為IOOnm的20面體的衣殼中，且 包膜包圍此核衣殼(nucleocapsid)而成的整體大小約為150 200nm的病毒。皰疹病毒 幾乎在所有哺乳動(dòng)物或兩棲類中均有發(fā)現(xiàn)，尤其是以人類為宿主的皰疹病毒科的病毒被稱 為人類皰疹病毒(HHV，human herpesvirus) 0 HHV被分類為α (單純皰疹病毒、水痘、帶狀 皰疹病毒等)、β (巨細(xì)胞病毒等)、以及Y (EB病毒(Epstein-Barr virus)等)亞科。此種皰疹病毒以“潛伏感染”為特征。所謂“潛伏感染”是指病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)不 產(chǎn)生感染性病毒粒子而持續(xù)存在的感染狀態(tài)，但在此潛伏感染中，病毒基因以及輔助此病 毒基因存在的基因產(chǎn)物也保存在宿主細(xì)胞內(nèi)。已知當(dāng)宿主由于某種原因(例如年齡增加、 身體不適(包括疲勞))而發(fā)生異常時(shí)，表現(xiàn)為潛伏感染的皰疹病毒會(huì)再次開始產(chǎn)生病毒粒 子并復(fù)制大量的病毒(再活化)。即，皰疹病毒具有如下的特異的性質(zhì)如果宿主無異常，那么繼續(xù)潛伏感染，一旦 宿主的身體發(fā)生異常，并察覺到宿主的危機(jī)，則為了尋找其他健康的宿主而再活化。對(duì)于病毒的潛伏感染、再活化的理解，是研究此種皰疹科的病毒的生態(tài)所不可或 缺的。但是，皰疹病毒之中，關(guān)于潛伏感染的見解較多的只有屬于Y-皰疹病毒的EB病毒， 而其他病毒尚有許多不明之處。尤其是，關(guān)于參與皰疹病毒的潛伏感染的因子，目前除本發(fā)明者先前所揭示 的見解以外尚無其他信息。例如非專利文獻(xiàn)1中揭示了 HHV-6在末梢血液中分化度較高的 巨噬細(xì)胞中潛伏感染，從而明確了 HHV-6在宿主體內(nèi)的潛伏感染部位。另外非專利文獻(xiàn)2 中記載有HHV-6于初感染時(shí)以非常高的比率轉(zhuǎn)移到腦內(nèi)，并產(chǎn)生持續(xù)感染、潛伏感染。非專 利文獻(xiàn)3中揭示有在HHV-6的潛伏感染時(shí)進(jìn)行表達(dá)的基因(潛伏感染基因)，且提示此基因 具有控制病毒的潛伏感染與再活化的作用。另外，非專利文獻(xiàn)4中揭示了 HHV-6的潛伏感染狀態(tài)中存在比較穩(wěn)定且基因表達(dá) 活躍的狀態(tài)即“中間階段intermediate stage”，潛伏感染基因與由此基因編碼的蛋白質(zhì) (潛伏感染蛋白質(zhì))在此中間階段大量表達(dá)。此外非專利文獻(xiàn)5中記載有于慢性疲勞癥候 群患者的血清中存在針對(duì)在中間階段表達(dá)亢進(jìn)的潛伏感染蛋白質(zhì)的抗體。[非專利文獻(xiàn)1]Kondo. K et al. Latent human herpesvirus 6 infection of human monocytes/ macrophages(J Gen Virol 72 :1401—1408，1991)[非專利文獻(xiàn)2]Kondo. K et al. Association of human herpesvirus 6 infection of thecentralnervous system with recurrence of febrile convulsions. (J Infect Disl67 1197-1200，1993.)[非專利文獻(xiàn)3]Kon do. K e t al. Identification of human herpesvirus 6 latency-associatedtranscripts. (J Virol. 76 :4145_4151,2002)[非專利文獻(xiàn)4]Kondo K et al.Recognition of a Novel Stage of Beta-Herpesvirus Latencyin Human Herpesvirus 6. (J Virol. 77 :2258_2264，2003)[非專利文獻(xiàn)5]近藤一博著，“皰疹病毒感染與疲勞”，病毒，第55卷第1號(hào)p9-18 2005

發(fā)明內(nèi)容
但是，與疾病有特異性相關(guān)的潛伏感染基因以及潛伏感染蛋白質(zhì)尚未得到鑒定， 其功能或與慢性疲勞癥候群的發(fā)病機(jī)理的關(guān)系也不明確。此外，HHV-6有可能也參與慢性 疲勞癥候群以外的疾病。因此，業(yè)界強(qiáng)烈期待明確HHV-6的感染與疾病的關(guān)聯(lián)性，并且開發(fā)出有助于疾病 的客觀診斷或模型動(dòng)物的建立的技術(shù)。本發(fā)明是鑒于所述問題研究而成，其目的在于確定參與HHV-6的潛伏感染的因 子，并且提供此因子的利用方法。本發(fā)明者為解決所述課題而進(jìn)行了努力研究的結(jié)果，基于如下的獨(dú)自觀點(diǎn)由于 HHV-6具有潛伏感染、再活化這種特征性質(zhì)，因此通過鑒定參與此潛伏感染、再活化的因 子，應(yīng)可獲得關(guān)于HHV-6的感染與精神障礙的關(guān)聯(lián)性的見解，本發(fā)明者基于所述觀點(diǎn)反復(fù) 進(jìn)行高度復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果鑒定出在HHV-6的潛伏感染中于特異性基因活躍表達(dá)的中間階 段(intermediatestage)進(jìn)行表達(dá)的新穎基因、以及由此新穎基因所編碼的新穎蛋白質(zhì) SITH-I (Small protein encoded by the Intermediate Transcript of HHV-6-1，由 HHV-6 的中間轉(zhuǎn)錄物編碼的小蛋白-1)。而且，對(duì)這些基因以及由此基因所編碼的蛋白質(zhì)SITH-I 的功能進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)如下的新的事實(shí)(i)SITH-l蛋白質(zhì)具有使細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上 升的功能，(ii)另外，在情緒障礙患者體內(nèi)有意義地檢測(cè)出針對(duì)這些SITH-I蛋白質(zhì)的抗 體，另一方面，在健康者體內(nèi)幾乎未檢測(cè)出此種抗體，從而完成本發(fā)明。本發(fā)明是基于所述 新的見解而成的，其包含以下的發(fā)明。(1) 一種基因，其特征在于其編碼以下(a)或(b)中所記載的蛋白質(zhì)。(a)由序列編號(hào)1所示的氨基酸序列所構(gòu)成的蛋白質(zhì)。(b)由序列編號(hào)1的氨基酸序列中，一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸經(jīng)取代、缺失、插入及/或附 加的氨基酸序列所構(gòu)成，且具有使細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升的活性的蛋白質(zhì)。(2) 一種基因，其特征在于其含有序列編號(hào)2所示的堿基序列作為開放閱讀框 (open reading frame)區(qū)域。(3) 一種基因，其特征在于其是在嚴(yán)格的雜交條件下與由下述堿基序列構(gòu)成的DNA雜交，且編碼具有使細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升的活性的蛋白質(zhì)，其中，所述堿基序列與由序列 編號(hào)2或者3所示的堿基序列所構(gòu)成的DNA互補(bǔ)。。
(4) 一種蛋白質(zhì)，其特征在于其由根據(jù)⑴ ⑶中任一項(xiàng)所述的基因所編碼。(5) 一種蛋白質(zhì)，其特征在于其是以下(a)或(b)中所記載的蛋白質(zhì)(a)由序列編號(hào)1所示的氨基酸序列所構(gòu)成的蛋白質(zhì)，
(b)由序列編號(hào)1的氨基酸序列中，一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸經(jīng)取代、缺失、插入及/或附 加的氨基酸序列所構(gòu)成，且具有使細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升的活性的蛋白質(zhì)。(6) 一種抗體，其特征在于其可識(shí)別根據(jù)⑷或(5)所述的蛋白質(zhì)。(7) 一種重組表達(dá)載體，其包含根據(jù)⑴ (3)中任一項(xiàng)所述的基因。(8) 一種轉(zhuǎn)化體，其特征在于其是導(dǎo)入根據(jù)(1) (3)中任一項(xiàng)所述的基因或根 據(jù)(7)所述的重組表達(dá)載體而成。(9) 一種基因檢測(cè)工具，其特征在于使用根據(jù)⑴ ⑶中任一項(xiàng)所述的基因中 的至少一部分堿基序列或其互補(bǔ)序列作為探針。(10) 一種檢測(cè)工具，其特征在于使用具有根據(jù)(4)或(5)所述的蛋白質(zhì)中的至 少一部分氨基酸序列的多肽作為探針。(11) 一種判定方法，其特征在于判定被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物體內(nèi)是否存在根據(jù)(6)所 述的抗體。(12)根據(jù)(11)所述的判定方法，其特征在于所述判定方法是使用根據(jù)(4)或
(5)所述的蛋白質(zhì)或者其部分片段，從免疫學(xué)上檢測(cè)是否存在根據(jù)(6)所述的抗體。(13)根據(jù)(11)或(12)所述的判定方法，其特征在于所述判定方法是使用從被 實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物體內(nèi)分離出的生物學(xué)樣本來進(jìn)行。(14) 一種判定套件，其特征在于其是用于根據(jù)(11) (13)中任一項(xiàng)所述的判
定方法。(15)根據(jù)(14)所述的判定套件，其特征在于其包含選自以下所示的(i) (iii)的物質(zhì)中的至少一種物質(zhì)(i)根據(jù)(4)或(5)所述的蛋白質(zhì)，(ii)⑴的部分片段，(iii)將(i)或(ii)固定化而得到的工具。(16) 一種診斷方法，其診斷被實(shí)驗(yàn)者是否有精神障礙，其特征在于包括判定步 驟，使用根據(jù)(11) (13)中任一項(xiàng)所述的判定方法，判定所述被實(shí)驗(yàn)者體內(nèi)是否存在根據(jù)
(6)所述的抗體；以及判斷步驟，在所述判定步驟中判定存在根據(jù)(6)所述的抗體時(shí)，判斷 所述被實(shí)驗(yàn)者患有精神障礙。(17)根據(jù)(16)所述的診斷方法，其特征在于所述診斷方法是使用從被實(shí)驗(yàn)者體 內(nèi)分離出的生物學(xué)樣本來進(jìn)行。(18) 一種診斷方法，其診斷被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否有精神障礙，其特征在于包括判定 步驟，使用根據(jù)(11) (13)中任一項(xiàng)所述的判定方法，判定所述被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)是否存在 根據(jù)(6)所述的抗體；以及判斷步驟，在所述判定步驟中判定存在根據(jù)(6)所述的抗體時(shí)， 判斷所述被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有精神障礙。(19) 一種診斷套件，其特征在于其是用于根據(jù)(16) (18)中任一項(xiàng)所述的診 斷方法。(20)根據(jù)(19)所述的診斷套件，其特征在于其包含選自以下所示的(i) (iii)的物質(zhì)中的至少一種物質(zhì)⑴根據(jù)(4)或(5)所述的蛋白質(zhì)，(ii)⑴的部分片段，(iii)將(i)或(ii)固定化而得到的工具。(21) 一種模型動(dòng)物的判定方法，其判定被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否可用作精神障礙的模型動(dòng)物，其特征在于包括診斷步驟，通過根據(jù)(18)所述的診斷方法，診斷所述被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否 有精神障礙；以及判定步驟，在所述診斷步驟中，以被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有精神障礙作為指標(biāo)，判定 所述被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可用作精神障礙的模型動(dòng)物。(22) 一種模型動(dòng)物，其特征在于其是導(dǎo)入根據(jù)所述(1) (3)中任一項(xiàng)所述的 基因、此基因產(chǎn)物、或者根據(jù)所述(7)所述的重組表達(dá)載體而成。(23) 一種篩選方法，其篩選精神治療藥物的候選物質(zhì)，其特征在于包括對(duì)精神 障礙的模型動(dòng)物給予被實(shí)驗(yàn)物質(zhì)的步驟；通過根據(jù)(18)所述的診斷方法，診斷所述模型動(dòng) 物的精神障礙是否得到治愈或改善的步驟；以及以所述模型動(dòng)物的精神障礙得到治愈或改 善作為指標(biāo)，判定所述被實(shí)驗(yàn)物質(zhì)是精神治療藥物的候選物質(zhì)的步驟。此外，在所述(23)的篩選方法中，更優(yōu)選結(jié)合根據(jù)(18)所述的診斷方法，進(jìn)行例 如采用(迄今為止已知的)動(dòng)物的異常行動(dòng)或恐怖反應(yīng)等的診斷方法。本發(fā)明的基因或蛋白質(zhì)是在皰疹病毒的潛伏感染時(shí)進(jìn)行特異性表達(dá)，且具有控制 潛伏感染與再活化的功能。另外，如下所述，由于明確本發(fā)明的蛋白質(zhì)的抗體有意義地存在 于精神障礙患者體內(nèi)，因此通過檢測(cè)有無此抗體，可發(fā)揮客觀診斷精神障礙的效果。另外，本發(fā)明的基因或蛋白質(zhì)除用于本文中所記載用途以外，也可用于對(duì)各種疾 病的診斷，還可用于藥劑的篩選方法、模型動(dòng)物的制作方法、以及各種套件等。本發(fā)明的其他目的、特征、以及優(yōu)點(diǎn)可以通過以下所記載的內(nèi)容而充分理解。另 夕卜，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)可以通過參照隨附圖式的以下說明而明了。


圖1是示意性地表示潛伏感染特異性基因的結(jié)構(gòu)與分析用引物的位置的圖。圖2是表示通過PCR法對(duì)HHV-6基因產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增的結(jié)果的圖。圖3是表示通過RACE法對(duì)新穎潛伏感染特異性基因mRNA進(jìn)行分析的結(jié)果的圖。圖4是表示通過酵母雙雜交(Yeast Two-hybrid)法，鑒定與蛋白質(zhì)SITH-1結(jié)合 的宿主蛋白質(zhì)的結(jié)果的圖。圖5是表示利用蛋白質(zhì)SITH-I使星形膠質(zhì)細(xì)胞樣神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞株內(nèi)的CAML增加 的圖。圖6是表示由SITH-I所引起的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的上升的圖。圖7是表示對(duì)于具有精神障礙的患者的SITH-I的抗體效價(jià)的圖。圖8是表示通過懸尾實(shí)驗(yàn)所獲得的SITH-I的效果的研究結(jié)果的圖。圖9是表示通過強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)所獲得的SITH-I的效果的研究結(jié)果的圖。圖10是表示通過恐怖反應(yīng)(Pr印ulse inhibition，前脈沖抑制)所獲得的SITH-1 的效果的研究結(jié)果的圖。圖11是表示利用腺病毒載體使SITH-I在小鼠的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，3周后通過轉(zhuǎn)輪旋轉(zhuǎn)來測(cè)定自主活動(dòng)量的結(jié)果的圖。圖12是表示利用慢病毒載體使SITH-I在小鼠的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，8周后通過 轉(zhuǎn)輪旋轉(zhuǎn)來測(cè)定自主活動(dòng)量的結(jié)果的圖。圖13是表示以SITH-I作為指標(biāo)，對(duì)并發(fā)抑郁癥的其他疾病進(jìn)行診斷的結(jié)果的圖。
具體實(shí)施例方式以下，對(duì)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說明，但本發(fā)明并不限定于以下所記載 的內(nèi)容。首先，為了有助于理解本發(fā)明，對(duì)本發(fā)明者完成本發(fā)明的經(jīng)過進(jìn)行簡(jiǎn)單說明。本發(fā) 明者推測(cè)人類皰疹病毒中HHV-6的感染很可能是導(dǎo)致精神障礙、特別是伴有情緒障礙的 精神障礙的原因之一。其理由如下(i)在先前認(rèn)為HHV-6是其致病原因之一的慢性疲勞 癥候群(CFS，chronic fatiguesyndrome)的癥狀中，可見抑郁癥狀等在精神障礙中常見的 癥狀；(ii)HHV-6在腦內(nèi)產(chǎn)生潛伏感染；(iii)此外在CFS患者的血清中，高比率地檢測(cè)出 與目前為止所鑒定出的HHV-6的潛伏感染特異性基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)的抗體，或者雖然 基因或蛋白質(zhì)尚未鑒定，但與在HHV-6的潛伏感染細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)的未知蛋白質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng) 的抗體。另外，本發(fā)明者根據(jù)HHV-6在腦內(nèi)主要在負(fù)責(zé)人類的思考或情感的額葉或海馬區(qū) 域等中潛伏感染這一事實(shí)、及在腦內(nèi)產(chǎn)生潛伏感染的病毒包括HHV-6在內(nèi)僅有幾種這一事 實(shí)，推測(cè)出HHV-6與精神障礙的關(guān)系。此外，已知HHV-6在星形膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中 產(chǎn)生潛伏感染，而此星形膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在血清素等與抑郁癥有關(guān)的腦內(nèi)物質(zhì)的 代謝中具有重要作用，就此方面而言，本發(fā)明者也獨(dú)自認(rèn)為HHV-6有可能與情緒障礙等精 神障礙有關(guān)。因此，本發(fā)明者推測(cè)在CFS患者中，因HHV-6在腦中的潛伏感染而導(dǎo)致產(chǎn)生精神癥 狀的患者應(yīng)占相當(dāng)大的比率。其中，本發(fā)明者尤其懷疑HHV-6與抑郁癥或躁郁癥等情緒障 礙有關(guān)。情緒障礙是可見于抑郁癥或躁郁癥等精神障礙的癥狀，其代表為僅可見抑郁癥 狀的“抑郁癥”、以及反復(fù)可見躁狂狀態(tài)與抑郁狀態(tài)的“躁郁癥”。原因可以列舉壓力、基因 異常、感染等各種原因，但尚未確定。情緒障礙最近有增加的傾向，成為嚴(yán)重的社會(huì)問題，因 而期待盡早辨明病因、病態(tài)，并開發(fā)出診斷方法以及治療方法。其中，也存在情緒障礙傾向 于定性上的診斷，而客觀診斷較困難的問題。另外，有助于情緒障礙的研究或治療法的開發(fā) 的模型動(dòng)物的開發(fā)也不充分，而延緩原因查明或治療方法的開發(fā)。因此，本發(fā)明者認(rèn)為有必要明確HHV-6的感染與情緒障礙、精神障礙的關(guān)聯(lián)性，并 且開發(fā)出一種有助于情緒障礙、精神障礙的客觀的診斷或模型動(dòng)物的建立的技術(shù)。再者，當(dāng)然這些推測(cè)是本發(fā)明者長(zhǎng)年在本研究領(lǐng)域進(jìn)行努力研究才摸索到的獨(dú)自 推測(cè)，不是一般的從業(yè)人員能夠容易想到的。以下，依序?qū)Ρ景l(fā)明的蛋白質(zhì)、基因等進(jìn)行詳細(xì)說明。(1)本發(fā)明的蛋白質(zhì)、基因
(1-1)結(jié)構(gòu)本發(fā)明提供一種參與皰疹病毒的潛伏感染的因子，更詳細(xì)而言提供一種在皰疹病毒的潛伏感染時(shí)進(jìn)行特異性表達(dá)的蛋白質(zhì)以及編碼此蛋白質(zhì)的基因。此處，所謂“在皰疹病 毒的潛伏感染時(shí)進(jìn)行特異性表達(dá)”是指在感染皰疹病毒的宿主中，當(dāng)皰疹病毒潛伏感染(未 增殖感染)時(shí)，源自皰疹病毒的基因或基因產(chǎn)物進(jìn)行特異性表達(dá)。作為所述蛋白質(zhì)以及基因，例如可以列舉(a)由序列編號(hào)1所示的氨基酸序列所 構(gòu)成的蛋白質(zhì)、以及編碼此蛋白質(zhì)的基因。由序列編號(hào)1所示的氨基酸序列所構(gòu)成的蛋白質(zhì)，如下述實(shí)施例所示，是被分離、 鑒定出其是在人類皰疹病毒-6(HHV-6)的潛伏感染時(shí)進(jìn)行特異性表達(dá)的蛋白質(zhì)，以下將其 禾爾為 SITH-1(Small protein encoded by thelntermediate Transcript of HHV-6-1)蛋 白質(zhì)。SITH-l蛋白質(zhì)是具有序列編號(hào)1所示的氨基酸序列，由159個(gè)氨基酸所構(gòu)成，且分子 量約為17. 5kDa的蛋白質(zhì)。SITH-1蛋白質(zhì)是由SITH-1基因進(jìn)行編碼。此SITH-1基因的cDNA如序列編號(hào)3 所示，具有1795個(gè)堿基對(duì)(約1.79kbp)的長(zhǎng)度，第954位至第956位的堿基序列為起始 密碼子(Kozak ATG)，第1431位至第1433位的堿基序列為終止密碼子(TAA)。因此，所述 SITH-1基因具有序列編號(hào)3所示的堿基序列中的第954位至第1430位為止的堿基序列作 為開放閱讀框(0RF)區(qū)域，此0RF具有477個(gè)堿基對(duì)(約0. 48kbp)的長(zhǎng)度。將SITH-1的 cDNA之中表示0RF區(qū)域的堿基序列示于序列編號(hào)2。再者，序列編號(hào)2所示的堿基序列是 以包含終止密碼子的3個(gè)堿基的形式進(jìn)行記載。另外，作為本發(fā)明的蛋白質(zhì)以及基因，可以列舉(b)由序列編號(hào)1的氨基酸序列 中，一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸經(jīng)取代、缺失、插入及/或附加的氨基酸序列所構(gòu)成，且在皰疹病毒 的潛伏感染時(shí)進(jìn)行特異性表達(dá)的蛋白質(zhì)，以及編碼此蛋白質(zhì)的基因。所述“一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸經(jīng)取代、缺失、插入及/或附加”，是指通過部位特異性突 變誘發(fā)法等公知的變異肽制作法，使可以取代、缺失、插入及/或附加的程度的數(shù)量(優(yōu)選 10個(gè)以下，更優(yōu)選7個(gè)以下，再更優(yōu)選5個(gè)以下)的氨基酸經(jīng)取代、缺失、插入及/或附加。 如此，所述(b)的蛋白質(zhì)可以稱為所述(a)的蛋白質(zhì)的變異蛋白質(zhì)。再者，此處的“變異”主 要是指通過公知的變異蛋白質(zhì)制作法而人為導(dǎo)入的變異，但也可以是將天然存在的相同的 變異蛋白質(zhì)分離純化者。此外，作為本發(fā)明的基因，可以列舉(c)在嚴(yán)格的雜交條件下與由下述堿基序列 構(gòu)成的DNA雜交，且編碼在皰疹病毒的潛伏感染時(shí)進(jìn)行特異性表達(dá)的蛋白質(zhì)，其中，所述堿 基序列與由序列編號(hào)2所示的堿基序列所構(gòu)成的DNA互補(bǔ)。。所述“在嚴(yán)格的雜交條件下雜交”是指只當(dāng)在序列間存在至少90%的同源性，優(yōu)選 至少95%的同源性，最優(yōu)選至少97%的同源性時(shí)產(chǎn)生雜交。作為“嚴(yán)格的雜交條件”的具體 例，例如可以列舉如下條件在雜交溶液(包含50 %的甲酰胺、5 X SSC(150mM的NaCl、15mM 的檸檬酸三鈉)、50mM的磷酸鈉(pH為7. 6) ,5XDenhardt溶液、10 %的硫酸葡聚糖、以及 20 u g/ml的變性剪切鮭魚精子DNA)中于42°C下培養(yǎng)一晚后，在約65°C下于0. 1XSSC中清 洗過濾器。另夕卜，所述雜交可以通過J. Sambrook et al. Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d Ed.，Cold Spring Harbor Laboratory (1989)中所記載的方法等先前公知的方 法來進(jìn)行，并無特別限定。通常，溫度越高、鹽濃度越低，則嚴(yán)格度越高(變得難以雜交)。此外，在本說明書中，術(shù)語“基因”可以與“多核苷酸”、“核酸”或“核酸分子”交換 使用?！岸嗪塑账帷笔侵负塑账岬木酆衔?。因此，本說明書中的術(shù)語“基因”中不僅包括雙鏈DNA，也包括構(gòu)成其的正義鏈(sensestrand)以及反義鏈(antisense strand)之類的各 單鏈DNA或RNA(mRNA等)。反義鏈可以用作探針或反義藥劑?！癉NA”例如包括通過克隆 (cloning)或化學(xué)合成技術(shù)、或者這些技術(shù)的組合而獲得的cDNA或基因組DNA等。即，DNA 可以是包括作為動(dòng)物的基因組中所含有的形態(tài)的內(nèi)含子等非編碼序列的“基因組”型DNA， 也可以是利用逆轉(zhuǎn)錄酶或聚合酶并經(jīng)由mRNA而獲得的cDNA，即不含有內(nèi)含子等非編碼序 列的“轉(zhuǎn)錄”型DNA。此外，本發(fā)明的基因也可以是除了編碼所述(a)或(b)中所記載的氨 基酸的序列以外，還包含非翻譯區(qū)域(UTR)的序列或載體序列(包含表達(dá)載體序列)等序 列的基因。另外，這些mRNA或者cDNA的翻譯區(qū)域的末端及/或內(nèi)部也可以包含調(diào)節(jié)序列或 聚腺苷酸序列等任意多核苷酸。另外，當(dāng)本發(fā)明的蛋白質(zhì)可以由多個(gè)等位基因編碼時(shí)，所有 等位基因、其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、以及cDNA包括在所述核酸的范疇內(nèi)。此外，在本說明書中，“核酸” 這一術(shù)語包括任意單純核苷酸及/或包含修飾核苷酸的多核苷酸，例如cDNA、mRNA、全RNA、 hnRNA等?！靶揎椇塑账帷背撕屑≤?inosine)、乙酰胞苷(acetylcytidine)、甲基胞苷 (methylcytidine)、甲基腺昔(methyladenosine)、甲基鳥昔(methylguanosine)的憐酸酉旨 以外，還包括可以在紫外線或化學(xué)物質(zhì)的作用下后天生成的核苷酸。
術(shù)語“堿基序列”可以與“核酸序列，，交換使用，其是以脫氧核糖核苷酸(分別簡(jiǎn) 寫為A、G、C以及T)的序列來表示。另外，多核苷酸或多核苷酸的“堿基序列”是指相對(duì)于 DNA分子或多核苷酸的脫氧核糖核苷酸的序列，并且是指相對(duì)于RNA分子或多核苷酸的核 糖核苷酸(A、G、C以及U)的對(duì)應(yīng)序列(此處所確定的脫氧核苷酸序列中的各胸腺嘧啶脫氧 核苷酸(T)可以被核糖核苷酸的尿苷(U)取代)。例如，使用脫氧核糖核苷酸的略語所表示的“具有序列編號(hào)2或4的序列的RNA分 子”是指具有序列編號(hào)2或4的各脫氧核苷酸A、G或C被對(duì)應(yīng)的核糖核苷酸A、G或C取代， 而且脫氧核苷酸T被核糖核苷酸U取代的序列的RNA分子。另外，“包含序列編號(hào)2或4中 所示的堿基序列的多核苷酸或其片段”是指包含序列編號(hào)2或4的各脫氧核苷酸A、G、C及 /或T所示的序列的多核苷酸或其片段部分。另外，本發(fā)明的基因的片段(部分序列)例如可以用作聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的引 物、或者雜交探針。所述片段(多核苷酸)可以將本發(fā)明的基因的同系物(homolog)、直系 同源物(ortholog)特異性地PCR擴(kuò)增，另外也可以用作將本發(fā)明的基因的同系物、直系同 源物特異性雜交的雜交探針。即，在優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明的基因的片段可以作為用于通 過聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增靶序列的引物、或者作為根據(jù)先前的DNA雜交技術(shù)的探針中的 任意者而用于診斷。另外，作為本發(fā)明的基因的片段的其他用途，可以列舉Verma等人所著的Human Chromosomes :a Manual of Basic Techniques, Pergamon Press, New York(1988)中所記 載的針對(duì)用于提供正確的染色體位置的分裂中期染色體展開物的原位(in situ)雜交(例 如FISH)；以及用于檢測(cè)本發(fā)明的mRNA在特定組織中的表達(dá)的北方墨點(diǎn)分析。另外，本發(fā)明的基因中可以包含以下的物質(zhì)，但并不限定于這些物質(zhì)由其本身編 碼成熟蛋白質(zhì)的氨基酸序列的多核苷酸；成熟的蛋白質(zhì)的編碼序列以及進(jìn)一步的序列(例 如編碼前導(dǎo)序列(leader sequence)的序列)(例如前蛋白(pr印rotein)序列或蛋白原 (proprotein)序列或前蛋白原(pr印roprotein)序列)；內(nèi)含子、非編碼5'序列以及非編 碼3'序列(例如在轉(zhuǎn)錄、mRNA加工(包含重組以及聚腺苷酸化信號(hào))中承擔(dān)作用的轉(zhuǎn)錄非
10翻譯序列)；對(duì)如提供進(jìn)一步的功能性的進(jìn)一步的氨基酸進(jìn)行編碼的進(jìn)一步的編碼序列。因此，例如編碼蛋白質(zhì)的序列可以與標(biāo)記序列(marker sequence)(例如對(duì)使經(jīng)融 合的蛋白質(zhì)的純化變得容易的肽進(jìn)行編碼的序列)融合。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，標(biāo) 記氨基酸序列可以是6X組氨酸肽(例如pQE載體(Qiagen，INC.)中所提供的標(biāo)簽)。如 Gentz 等人所著的 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 =821-824(1989)中所記載般，6 X 組氨酸肽 可用于融合蛋白質(zhì)的簡(jiǎn)便純化。另外，除所述以外，也能夠利用許多公共的及/或可以從商 業(yè)途徑獲得的標(biāo)記氨基酸序列。例如，如Wilson等人所著的Cell 37:767(1984)中所記載 般，“HA”標(biāo)簽是與源自流感血凝素(HA)蛋白質(zhì)的抗原表位對(duì)應(yīng)的用于純化的肽。除此以 外，使本發(fā)明的蛋白質(zhì)的N末端或C末端融合Fc而成的融合蛋白質(zhì)也可以用于純化。另外，本發(fā)明也包括本發(fā)明的基因的變異體。所述變異體如天然等位基因變異體 般，可以天然形成。利用“等位基因變異體”可謀求占據(jù)生物的染色體上的特定的基因座的 基因的幾個(gè)可交換形態(tài)之一。另外，天然中不存在的變異體例如可以使用此領(lǐng)域中公知的 誘變技術(shù)來生成。此種變異體如上所述般，包含通過一個(gè)或數(shù)個(gè)核苷酸取代、缺失或附加而 生成的變異體。取代、缺失或附加可以包含一個(gè)以上的核苷酸。變異體可以在編碼或非編 碼區(qū)、或者此兩者間變化。編碼區(qū)中的變異可以生成保存性或非保存性氨基酸取代、缺失或 附加。另外，作為本發(fā)明中所含有的優(yōu)選蛋白質(zhì)，除成熟蛋白質(zhì)以外，可以列舉包含細(xì)胞 外區(qū)域、跨膜區(qū)域、細(xì)胞內(nèi)區(qū)域、或者跨膜區(qū)域的全部或一部分缺失的細(xì)胞外及細(xì)胞內(nèi)區(qū)域 的蛋白質(zhì)。在本說明書中，術(shù)語“蛋白質(zhì)”可以與“多肽”或“肽”交換使用。此外，本發(fā)明 提供由序列編號(hào)2所示的堿基序列所編碼的蛋白質(zhì)的一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸經(jīng)取代、附加或缺 失的多肽。優(yōu)選保存性或非保存性氨基酸取代、缺失或附加，特別優(yōu)選沉默取代(silent substitution)、附加以及缺失，這些不會(huì)使本發(fā)明的蛋白質(zhì)或其一部分的特性以及活性發(fā) 生變化。就這些方面而言，特別優(yōu)選保存性取代。此外，本發(fā)明的蛋白質(zhì)不僅可為從天然中分離出的蛋白質(zhì)，也可以化學(xué)合成或重 組生成。即，本發(fā)明的蛋白質(zhì)可以是從細(xì)胞、組織等中分離純化的狀態(tài)，也可以是編碼蛋白 質(zhì)的基因?qū)氲剿拗骷?xì)胞中，并使該蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的狀態(tài)。另外，本發(fā)明的蛋白質(zhì)也 可以是包含附加多肽的蛋白質(zhì)。另外，本發(fā)明涉及具有本說明書中所記載的蛋白質(zhì)的抗原表位保有部分的氨基酸 序列的多肽。具有本發(fā)明的蛋白質(zhì)的抗原表位保有部分的氨基酸序列的多肽，只要包含具 有至少6個(gè)、7個(gè)、8個(gè)、9個(gè)、10個(gè)氨基酸的多肽的部分即可，此外，也可包含至由序列編號(hào)2 或4所示的堿基序列編碼的蛋白質(zhì)、或者具有序列編號(hào)1所示的氨基酸序列的蛋白質(zhì)的所 有氨基酸序列的長(zhǎng)度為止的任意長(zhǎng)度(包含整體)的抗原表位保有部分多肽。S卩，本發(fā)明提供本發(fā)明的蛋白質(zhì)的抗原表位保有肽。如下述的實(shí)施例所示，本發(fā)明 的蛋白質(zhì)是免疫原性蛋白質(zhì)。因此，在本發(fā)明的蛋白質(zhì)中，引起抗體應(yīng)答的抗原表位部分可 以通過該領(lǐng)域中公知的方法鑒定。例如在Geysen，H. M.等人所著的Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 =3998-4002(1984)中揭示有充分純化至可以用于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的反應(yīng)的程 度的數(shù)百個(gè)肽在固體支持體上的迅速同時(shí)合成的順序。繼而，合成肽與抗體的相互作用可 以不將其從支持體上去除而容易地檢測(cè)出。在此方式中，保有所需的蛋白質(zhì)的免疫原性表 位的肽可以由從業(yè)人員日常性地鑒定。例如Geysen等人通過合成可包括蛋白質(zhì)的全部213個(gè)氨基酸序列的所有208種六肽的重復(fù)組進(jìn)行7氨基酸的辨明，而對(duì)口蹄疫病毒的外殼蛋 白質(zhì)中在免疫學(xué)上較重要的抗原決定部位進(jìn)行了定位。繼而，合成所有20個(gè)氨基酸依次在 抗原表位內(nèi)的各位置被取代的肽的完整的取代組，然后確定賦予用以與抗體的反應(yīng)的特異 性的特定氨基酸。因此，本發(fā)明的抗原表位保有肽的肽類似物可以通過該方法而日常性地 制作。在GeySen(1987)的美國專利第4，708，781號(hào)中，更加詳細(xì)地記載了對(duì)保有所需的蛋 白質(zhì)的免疫原性表位的肽進(jìn)行鑒定的此方法。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)整體為免疫原時(shí)，將“免疫原性表位”定義為引起抗體應(yīng)答的蛋白質(zhì)的一 部分。一般認(rèn)為這些免疫原性表位被分子上的2、3的焦點(diǎn)所限制。另一方面，能夠結(jié)合抗 體的蛋白質(zhì)分子的區(qū)域可以定義為“抗原性表位”。蛋白質(zhì)的免疫原性表位的數(shù)量通常少 于抗原性表位的數(shù)量。例如參照Geysen，H.M.等人所著的Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 3998-4002(1984)。本發(fā)明的抗原性表位保有肽在引發(fā)產(chǎn)生包含與本發(fā)明的蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的單 克隆抗體的抗體方面有用。因此，通過使來自經(jīng)抗原之抗原表位保有肽進(jìn)行免疫化的供體 的脾臟細(xì)胞融合而獲得的雜交瘤(hybridoma)的大部分，通常會(huì)分泌出與天然的蛋白質(zhì)具 有反應(yīng)性的抗體。由抗原性表位保有肽引發(fā)產(chǎn)生的抗體可用于檢測(cè)模擬蛋白質(zhì)，而且針對(duì) 不同的肽的抗體可以用于追蹤接受翻譯后加工的蛋白質(zhì)前體的各區(qū)域的最終結(jié)果。已知在 免疫沉淀分析法中，連較短的肽(例如約9個(gè)氨基酸)也可以與更長(zhǎng)的肽結(jié)合并且取代，因 此肽以及抗肽抗體可以用于有關(guān)模擬蛋白質(zhì)的各種定性或定量的分析法，例如競(jìng)爭(zhēng)性分析 法。例如參照Wilson，I.A.等人所著的Cell 37:767-778(1984)777。另外，本發(fā)明的抗蛋 白質(zhì)抗體也可用于模擬蛋白質(zhì)的純化(例如使用該領(lǐng)域中眾所周知的方法，并采用吸附層 析法)。根據(jù)所述的準(zhǔn)則而設(shè)計(jì)的本發(fā)明的抗原性表位保有肽，優(yōu)選包含本發(fā)明的蛋白質(zhì) 的氨基酸序列內(nèi)所含有的至少7個(gè)、更優(yōu)選至少9個(gè)、最優(yōu)選約15個(gè) 約30個(gè)氨基酸之間 的序列。但是，包含本發(fā)明的蛋白質(zhì)的氨基酸序列的約30個(gè) 約50個(gè)氨基酸或乃至全部 的任意長(zhǎng)度以及整體的，包含本發(fā)明的蛋白質(zhì)的氨基酸序列的更大部分的肽或多肽也認(rèn)為 是本發(fā)明的抗原表位保有肽，而且其在誘導(dǎo)與模擬蛋白質(zhì)反應(yīng)的抗體方面有用。優(yōu)選以在 水性溶劑中提供實(shí)質(zhì)性的溶解性的方式選擇抗原表位保有肽的氨基酸序列(即，抗原表位 保有肽的序列包含相對(duì)親水性的殘基，而且優(yōu)選避免為高度疏水性序列)；而且特別優(yōu)選 包含脯氨酸殘基的序列。本發(fā)明的抗原表位保有肽可以通過使用本發(fā)明的基因制造重組蛋白質(zhì)的任意先 前方法來產(chǎn)生。例如，較短的抗原表位保有氨基酸序列可以在重組體產(chǎn)生及純化期間、以及 用于產(chǎn)生抗蛋白質(zhì)抗體的免疫化期間與作為載體而發(fā)揮作用的更大的多肽融合。另外，抗 原表位保有肽可以使用化學(xué)合成的公知方法來合成。另外，本發(fā)明還包括如下者為了實(shí)現(xiàn)向經(jīng)翻譯的蛋白質(zhì)的小胞體的管腔內(nèi)、或者 周質(zhì)空間內(nèi)、或者細(xì)胞外環(huán)境內(nèi)的分泌，而將適當(dāng)?shù)姆置谛盘?hào)編入所表達(dá)的蛋白質(zhì)中。所述 分泌信號(hào)可以相對(duì)于多肽而為內(nèi)因性，這些信號(hào)也可以是異種信號(hào)。因此，本發(fā)明的蛋白質(zhì)能夠以如融合蛋白質(zhì)般經(jīng)改造的形態(tài)進(jìn)行表達(dá)，而且不僅 可以包含分泌信號(hào)，也可以包含附加的異種的功能性區(qū)域。例如，為了改善附加的氨基酸， 特別是帶電氨基酸的區(qū)域在宿主細(xì)胞內(nèi)的于純化期間、或者連續(xù)操作及保存期間的穩(wěn)定性以及持續(xù)性，可以將其附加在蛋白質(zhì)的N末端。另外，為了使純化變得容易，可以將肽部分 附加在蛋白質(zhì)上。此種區(qū)域可以在最終制備蛋白質(zhì)之前去除。尤其是為了產(chǎn)生分泌或排 出、改善穩(wěn)定性、以及使純化變得容易而進(jìn)行的肽部分對(duì)蛋白質(zhì)的附加，是在本領(lǐng)域中已眾 所周知且日常性的技術(shù)。優(yōu)選的融合蛋白質(zhì)，包含源自對(duì)蛋白質(zhì)的可溶化有用的免疫球蛋白的異種區(qū)域。 例如，EP A 0 464 533(另外，加拿大對(duì)應(yīng)申請(qǐng)案2045869)中揭示有包含其他人類蛋白 質(zhì)或其一部分，并且包含免疫球蛋白分子中的恒定區(qū)的各種部分的融合蛋白質(zhì)。在大多 數(shù)情況下，融合蛋白質(zhì)中的Fc部分十分有利于在治療以及診斷中使用，因此例如產(chǎn)生經(jīng) 改善的藥物動(dòng)力學(xué)的特性(EP A 0232 262)。另一方面，在幾種應(yīng)用中，較理想的是融合 蛋白質(zhì)以所記載的有利的形態(tài)獲得表達(dá)、檢測(cè)以及純化后可缺失Fc部分。此種情形是判 明Fc部分是在治療以及診斷中的使用的妨礙的情形(例如將融合蛋白質(zhì)用作免疫抗原 的情形)。在藥物篩選中，例如hIL-5之類的人類蛋白質(zhì)以用于鑒定hIL-5的拮抗劑的高 處理能力篩選分析法為目的而與Fc部分融合。參照D. Bennett等人所著的Journal of Molecular Recognition Vol. 8 :52_58 (1995)、以及 K. Johanson 等人所著的 The Journal of Biological Chemistry Vol. 270，No.16,9459-9471 頁(1995)。(1-2)功能關(guān)于本發(fā)明的蛋白質(zhì)的功能，列舉上述的SITH-1蛋白質(zhì)為例進(jìn)行詳細(xì)說明。SITH-1基因如下述實(shí)施例所示，常在HHV-6潛伏感染的細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行表 達(dá)，另一方面，在增殖感染細(xì)胞中未見其表達(dá)。編碼SITH-1蛋白質(zhì)的基因，是由與目前為止 所報(bào)告的HHV-6潛伏感染特異性基因(H6LT)具有互補(bǔ)鏈關(guān)系的DNA所編碼，其表達(dá)會(huì)在 HHV-6的潛伏感染的中間階段增強(qiáng)。根據(jù)這些事實(shí)，可以認(rèn)為SITH-1蛋白質(zhì)是在HHV-6的潛伏感染時(shí)進(jìn)行特異性表達(dá) 的蛋白質(zhì)，且可知其是與目前為止鑒定出的參與HHV-6的潛伏感染的蛋白質(zhì)明顯不同的蛋 白質(zhì)。此外，本發(fā)明者進(jìn)行SITH-1蛋白質(zhì)的功能分析的結(jié)果，可知SITH-1蛋白質(zhì)與作為 宿主蛋白質(zhì)的CAML(calcium-modulating cyclophilin ligand，鈣離子信號(hào)調(diào)節(jié)親環(huán)素配 體，Accessions ；U18242)結(jié)合，并使星形膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升。 CAML是如下的蛋白質(zhì)已知其在宿主生物體內(nèi)大量存在于腦與淋巴球中，且使細(xì)胞內(nèi)的鈣 濃度上升。另外，可以認(rèn)為由SITH-1蛋白質(zhì)的表達(dá)所引起的細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的上升會(huì)帶來潛 伏感染細(xì)胞內(nèi)的全面的信號(hào)傳遞活化，并有助于HHV-6的有效率的再活化。此處所謂“神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞”是指包含星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte)、少突膠質(zhì)細(xì)胞 (oligodendrocyte)、小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia)以及室管膜細(xì)胞(印endymalcell)之類的中 樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的成熟細(xì)胞、前體細(xì)胞的所有神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，除此以外，還可包 括末梢神經(jīng)系統(tǒng)中的衛(wèi)星細(xì)胞(satellite cell)、雪旺細(xì)胞(Schwann cell)以及末梢神經(jīng) 膠質(zhì)細(xì)胞(terminal gliocyte)。已知HHV-6在腦內(nèi)的星形膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中潛伏感染，可認(rèn)為如果潛伏 感染時(shí)或處于活性較高的潛伏感染狀態(tài)即中間階段的HHV-6使SITH-1獲得表達(dá)，則星形膠 質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的鈣濃度會(huì)上升。根據(jù)最近的精神科學(xué)領(lǐng)域的研究，一般認(rèn)為使 腦的細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升與情緒障礙等精神障礙有很大的關(guān)系。
另外，實(shí)際上已知如實(shí)施例所示，如果使SITH-1蛋白質(zhì)在小鼠的星形膠質(zhì)細(xì)胞等 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，則會(huì)產(chǎn)生作為精神障礙的情緒障礙樣癥狀與過敏性亢進(jìn)。此現(xiàn)象強(qiáng) 烈顯示在星形膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中潛伏感染的HHV-6可以經(jīng)由SITH-1蛋白質(zhì)而引 起精神障礙。另外，HHV-6不僅可以在星形膠質(zhì)細(xì)胞中潛伏感染，也可以在小膠質(zhì)細(xì)胞等其他神 經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中潛伏感染，因此抑郁癥或躁郁癥等精神障礙的原因不僅在于星形膠質(zhì)細(xì)胞， 也可能是其他神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。根據(jù)以上的見解，本發(fā)明的蛋白質(zhì)是保持與作為宿主蛋白質(zhì)的CAML的結(jié)合活性， 并具有使細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升的功能的蛋白質(zhì)。另外，已判明通過使本發(fā)明的蛋白質(zhì)在被認(rèn) 為是此蛋白質(zhì)會(huì)最強(qiáng)烈地進(jìn)行表達(dá)的星形膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，可以誘導(dǎo)精神 障礙。因此，可以認(rèn)為本發(fā)明的蛋白質(zhì)會(huì)在皰疹病毒的潛伏感染時(shí)或者再活化早期進(jìn)行表 達(dá)，并具有使宿主產(chǎn)生精神障礙的功能。(1-3)基因以及蛋白質(zhì)的獲得方法本發(fā)明的基因以及蛋白質(zhì)的獲得方法(或者生產(chǎn)方法)并無特別限定，可以列舉 以下所示的各方法作為代表性方法。〈蛋白質(zhì)的獲得方法〉獲得本發(fā)明的蛋白質(zhì)的方法(或者蛋白質(zhì)的生產(chǎn)方法)如上所述并無特別限定， 首先可以列舉從含有本發(fā)明的蛋白質(zhì)的生物學(xué)樣本(例如細(xì)胞、組織、生物個(gè)體等)等中單 純純化的方法。另外，純化方法也無特別限定，只要利用公知方法從細(xì)胞或組織中制備細(xì)胞 提取液，然后通過公知方法，例如使用管柱等對(duì)該細(xì)胞提取液進(jìn)行純化即可。例如可以將從 細(xì)胞或組織中提取的粗蛋白質(zhì)分層注入高效液相色譜儀(HPLC)中，來純化、分離本發(fā)明的 蛋白質(zhì)。另外，作為其他獲得本發(fā)明的蛋白質(zhì)的方法，也可列舉使用基因重組技術(shù)等的方 法。于此種情況時(shí)，例如可以采用如下的方法等將本發(fā)明的基因裝在載體等之上，然后通 過公知方法，將其可表達(dá)地導(dǎo)入到宿主細(xì)胞中，然后對(duì)在細(xì)胞內(nèi)被翻譯而獲得的所述蛋白 質(zhì)進(jìn)行純化。關(guān)于基因的導(dǎo)入(轉(zhuǎn)化)或基因的表達(dá)等的具體方法見下文。此外，當(dāng)如上所述般將外源基因?qū)胨拗髦袝r(shí)，由于結(jié)合外源基因表達(dá)之用而于 宿主內(nèi)發(fā)揮功能的啟動(dòng)子(promoter)的表達(dá)載體、以及宿主存在多樣的選擇，因此只要選 擇符合目的者即可。對(duì)所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)進(jìn)行純化的方法因所使用的宿主、蛋白質(zhì)的性質(zhì)而 各異，但可以通過利用標(biāo)簽等而較容易地純化目標(biāo)蛋白質(zhì)。關(guān)于制作變異蛋白質(zhì)的方法也無特別限定。例如可以使用以下等眾所周知的變異 蛋白質(zhì)制作法利用部位特異性突變誘發(fā)法(Hashimoto-Gotoh，Gene 152,271-275(1995) 等)、PCR法將點(diǎn)突變導(dǎo)入堿基序列中來制作變異蛋白質(zhì)的方法，或者通過插入轉(zhuǎn)座子來制 作突變株的方法。通過使用這些方法，針對(duì)編碼所述(a)的蛋白質(zhì)的cDNA的堿基序列，以 使一個(gè)或數(shù)個(gè)堿基被取代、缺失、插入及/或附加的方式對(duì)其加以改變，由此可制作變異蛋 白質(zhì)。另外，變異蛋白質(zhì)的制作也可以利用市售的套件。本發(fā)明的蛋白質(zhì)的獲得方法并不限定于上述，例如也可以是使用市售的肽合成器 等進(jìn)行化學(xué)合成的方法。另外，作為其他例，也可以利用無細(xì)胞類的蛋白質(zhì)合成液，由本發(fā) 明的基因合成本發(fā)明的肽。
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〈基因的獲得方法〉獲得本發(fā)明的基因的方法(或者基因的生產(chǎn)方法)也如上所述般并無特別限定，例如可以列舉利用差異篩選(differential screening)(消減克隆(subtraction cloning))的方法。在該方法中，只要根據(jù)公知的技術(shù)，反復(fù)進(jìn)行試驗(yàn)管內(nèi)的直接雜交，然后 對(duì)目標(biāo)cDNA(本發(fā)明的基因)進(jìn)行濃縮即可。關(guān)于所述差異篩選中的各步驟，只要在通常使用的條件下進(jìn)行即可。由此所獲得 的克隆體可以通過制作限制酶圖譜以及確定其堿基序列(測(cè)序)而進(jìn)一步詳細(xì)分析。通過 這些分析，可以容易地確認(rèn)是否獲得了包含本發(fā)明的基因序列的DNA片段。另外，作為獲得本發(fā)明的基因的方法，可以列舉利用公知技術(shù)將包含本發(fā)明的基 因的DNA片段分離，并進(jìn)行克隆的方法。例如只要制備與所述cDNA序列的一部分序列特異 性雜交的探針，然后篩選基因組DNA庫或cDNA庫即可。作為此種探針，只要是與所述各cDNA 序列或其互補(bǔ)序列的至少一部分特異性雜交的探針，則可以使用任意的序列、任意的長(zhǎng)度。另外，作為獲得本發(fā)明的基因的方法，可以列舉使用PCR等擴(kuò)增方法的方法。例如 從本發(fā)明的基因的cDNA序列中的5'側(cè)以及3'側(cè)的序列(或者其互補(bǔ)序列)中分別制備 引物，使用這些引物將基因組DNA(或者cDNA)等制成模板后進(jìn)行PCR等，并將夾在兩引物 之間的DNA區(qū)域擴(kuò)增，由此可以大量獲得包含本發(fā)明的基因的DNA片段。另外，也可以依據(jù)基因序列信息，使用公知的化學(xué)合成來合成具有該序列的多核 苷酸。(2)本發(fā)明的抗體本發(fā)明的抗體，是以本發(fā)明的蛋白質(zhì)、例如所述(a)或(b)中所記載的蛋白質(zhì)、 或者其部分肽作為抗原，通過公知方法而以多克隆抗體或單克隆抗體的形式獲得的抗 體。作為公知方法，例如可以列舉文獻(xiàn)(Harlow等人所著的“Antibodies :A laboratory manual (Cold Spring Harbor Laboratory，NewYork (1988))、巖崎等人所著的“單克隆抗體 雜交瘤與ELISA，講談社(1991)”)中所記載的方法。以所述方式獲得的抗體可以用于本發(fā) 明的蛋白質(zhì)的檢測(cè)、測(cè)定等。例如，所述(1-1)欄中所記載的本發(fā)明的抗原表位保有肽是用于通過此領(lǐng)域中 眾所周知的方法誘導(dǎo)抗體。例如參照Chow，M.等人所著的Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 910-914 ；以及 Bittle，F(xiàn). J.等人所著的 J. Gen. Virol. 66 =2347-2354 (1985) 通常，動(dòng)物可 以利用游離肽而免疫化，但是抗蛋白質(zhì)抗體效價(jià)可以通過將肽耦合于高分子載體(例如， 匙孔笠貝血藍(lán)蛋白(KLH，keyhole limpet hemocyanin)或破傷風(fēng)類毒素)上而追加免疫。 例如，含有半胱氨酸的肽可以使用如間馬來酰亞胺苯甲酰-N-羥基丁二酰亞胺酯(MBS)之 類的連接子而耦合于載體上，另一方面，其他肽可以使用如戊二醛之類的更普通的連結(jié)劑 而耦合于載體上。如兔子、大鼠、以及小鼠之類的動(dòng)物，是利用游離肽或載體-耦合肽中的 任意者，通過例如約IOOyg的包含肽或載體蛋白質(zhì)以及福氏佐劑(freimd adjuvant)的乳 液的腹腔內(nèi)及/或皮內(nèi)注射而免疫化。為了提供例如使用吸附在固體表面的游離肽并通過 ELISA法而可以檢測(cè)出的有用的效價(jià)的抗蛋白質(zhì)抗體，需要以例如約2周的間隔進(jìn)行幾次 追加免疫注射。來自免疫化動(dòng)物的血清中的抗蛋白質(zhì)抗體的效價(jià)可以通過選擇抗蛋白質(zhì)抗 體，例如通過利用該領(lǐng)域中眾所周知的方法在固體支持體上吸附肽、以及使所選擇的抗體 溶析而增加。
另外，在本說明書中，術(shù)語“抗體”是指免疫球蛋白(IgA、IgD、IgE、IgG、IgM以及它們的Fab片段、F(ab' )2片段、Fc片段)，作為例子可以列舉多克隆抗體、單克隆抗體、單 鏈抗體、抗個(gè)體基因型抗體以及人源化抗體，但并不限定于這些抗體。在本說明書中，術(shù)語“識(shí)別本發(fā)明的蛋白質(zhì)的抗體”是指包含可以與所述本發(fā)明的 蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的完整的分子以及抗體片段(例如Fab以及F(ab' )2片段)。Fab以及 F(ab' )2片段欠缺完整抗體的Fc部分，其通過循環(huán)可更加迅速地被去除，而且可以幾乎不 具有完整抗體的非特異性組織結(jié)合(Wahl等人所著的J. Nucl. Med. 24 :316_325 (1983))。因 此優(yōu)選這些片段?；蛘撸軌蜃R(shí)別本發(fā)明的蛋白質(zhì)的進(jìn)一步的抗體可以通過使用抗個(gè)體基因型抗體 而由兩個(gè)步驟產(chǎn)生。此種方法是利用抗體本身是抗原這一事實(shí)，因此可以獲得與二次抗體 結(jié)合的抗體。根據(jù)該方法，本發(fā)明的蛋白質(zhì)特異性抗體用于使動(dòng)物(優(yōu)選小鼠)免疫。繼 而，此種動(dòng)物的脾細(xì)胞用于產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，而雜交瘤細(xì)胞為了鑒定如下的克隆體而受到 篩選，此克隆體可產(chǎn)生與本發(fā)明的蛋白質(zhì)特異性抗體結(jié)合的能力可以被本發(fā)明的蛋白質(zhì)抗 原阻斷的抗體。此種抗體包含針對(duì)本發(fā)明的蛋白質(zhì)特異性抗體的抗個(gè)體基因型抗體，而且 為了誘導(dǎo)本發(fā)明的蛋白質(zhì)特異性抗體的進(jìn)一步形成，其可用于使動(dòng)物免疫。已明確Fab及F(ab' )2以及本發(fā)明的抗體的其他片段可以根據(jù)本說明書所揭示 的方法來使用。此種片段具有代表性的是通過使用如木瓜蛋白酶(產(chǎn)生Fab片段)或胃蛋 白酶(產(chǎn)生F(ab' )2片段)之類的酶的蛋白質(zhì)分解進(jìn)行切斷而產(chǎn)生?；蛘?，本發(fā)明的蛋白 質(zhì)結(jié)合片段可以通過重組DNA技術(shù)的應(yīng)用或合成化學(xué)而產(chǎn)生。為了對(duì)人進(jìn)行診斷，而使用體內(nèi)(in vivo)的成像來檢測(cè)上升水平的本發(fā)明的蛋 白質(zhì)時(shí)，可以優(yōu)選使用“人源化”嵌合單克隆抗體。此種抗體可以使用源自生成所述單克 隆抗體的雜交瘤細(xì)胞的遺傳構(gòu)建物而生成。用于生成嵌合抗體的方法在此領(lǐng)域中眾所周 知?？傉搮⒄?Morrison，Science 229:1202(1985) ；Oi 等，BioTechniques 4:214(1986)； Cabilly 等，美國專利第 4，816，567 號(hào)；Taniguchi 等，EP 171496 ；Morrison 等，EP 173494 ； Neuberger 等，WO 8601533 ；Robinson 等,WO 8702671 ；Boulianne 等,Nature 312 643(1984) ；Neuberger 等，Nature 314:268(1985)。(3)本發(fā)明的重組表達(dá)載體本發(fā)明的重組表達(dá)載體是包含編碼所述(a)或(b)中所記載的蛋白質(zhì)的本發(fā)明的 基因的重組表達(dá)載體。例如可以列舉插入有cDNA的重組表達(dá)載體。在重組表達(dá)載體的制 作中，可以使用質(zhì)粒(plasmid)、噬菌體(phage)、或者粘粒(cosmid)等，但并無特別限定。 另外，制作方法只要使用公知方法來進(jìn)行即可。載體的具體種類并無特別限定，只要適當(dāng)選擇可以在宿主(host)細(xì)胞中表達(dá)的 載體即可。S卩，為了對(duì)應(yīng)于宿主細(xì)胞的種類使基因確實(shí)地表達(dá)而選擇適當(dāng)?shù)膯?dòng)子序列， 將其與本發(fā)明的基因組入各種質(zhì)粒等中，并使用所獲得者作為表達(dá)載體即可。所述表達(dá) 載體例如可以利用噬菌體載體、質(zhì)粒載體、病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、染色體載體、游離 基因載體、以及源自病毒的載體(例如細(xì)菌質(zhì)粒、細(xì)菌噬菌體、酵母游離基因、酵母染色體 外因子)、病毒(例如桿狀病毒(baculovirus)、乳頭多瘤空泡病毒(papovavirus)、痘苗 病毒(vaccinia virus)、腺病毒(adenovirus)、胃||| 病毒(avipoxvirus)、偽狂；^病病毒 (pseudorabies virus)、皰疹病毒、慢病毒(Ientivirus)以及逆轉(zhuǎn)錄病毒)、以及源自這些病毒的組合的載體(例如粘粒以及噬粒(phagemid))。通常將質(zhì)粒載體導(dǎo)入如磷酸鈣沉淀物之類的沉淀物中、或者與帶電脂質(zhì)的復(fù)合物中。當(dāng)載體為病毒時(shí)，可以使用適當(dāng)?shù)陌b細(xì)胞株在體內(nèi)包裝載體，繼而將其性狀導(dǎo)入宿主 細(xì)胞中。另外，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體為可以復(fù)制、或者可以復(fù)制缺陷。當(dāng)為后者時(shí)，病毒的增殖 通常只在互補(bǔ)宿主細(xì)胞中產(chǎn)生。另外，優(yōu)選包含針對(duì)目標(biāo)基因的順式作用(cis-acting)控制區(qū)域的載體。適當(dāng)?shù)?反式作用(trans-acting)因子可以由宿主供給、或者可以由互補(bǔ)載體供給、或者可以在導(dǎo) 入宿主中時(shí)由載體本身供給。作為與這方面有關(guān)的優(yōu)選實(shí)施方式，較合適的是載體是提供 可為誘導(dǎo)性及/或細(xì)胞型特異性的特異性表達(dá)的載體。此種載體中特別優(yōu)選的載體是通過 如溫度以及營(yíng)養(yǎng)添加物之類的易于操作的環(huán)境因素而具有誘導(dǎo)性的載體。在細(xì)菌中使用時(shí)，優(yōu)選的載體例如包括pQE70、pQE60、以及pQE_9(可以從Qiagen 公司獲得)；PBS 載體、Phagescript 載體、Bluescript 載體、pNH8A、pNH16a、pNH18A、 pNH46A(可以從 Stratagene 公司獲得)；以及 ptrc99a、pKK223_3、pKK233_3、pDR540、 PRIT5 (可以從Phrmacia公司獲得)。另外，優(yōu)選的真核生物載體包括pWLNEO、pSV2CAT、 pOG44、pXTl、以及 pSG (可以從 Stratagene 公司獲得)；以及 pSVK3、pBPV、pMSG 及 pSVL (可 以從Phrmacia公司獲得)。為了確認(rèn)本發(fā)明的基因是否已導(dǎo)入宿主細(xì)胞中，進(jìn)而確認(rèn)其是否確實(shí)在宿主細(xì)胞 中表達(dá)，可以使用各種標(biāo)記。即，表達(dá)載體優(yōu)選包含至少一個(gè)選擇標(biāo)記。作為此種選擇標(biāo) 記，例如關(guān)于真核生物細(xì)胞培養(yǎng)，可以列舉二氫葉酸還原酶或新霉素耐性基因；關(guān)于大腸桿 菌以及其他細(xì)菌中的培養(yǎng)，可以列舉四環(huán)素耐性基因或氨芐西林(ampicillin)耐性基因 等耐藥性基因。另外，除此以外也可以使用宿主細(xì)胞中所缺失的基因作為標(biāo)記，將包含此 標(biāo)記與本發(fā)明的基因的質(zhì)粒等作為表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞中。由此，可以根據(jù)標(biāo)記基因的 表達(dá)確認(rèn)本發(fā)明的基因的導(dǎo)入?；蛘咭部梢允贡景l(fā)明的蛋白質(zhì)以融合蛋白質(zhì)的形式獲得 表達(dá)，例如也可以使用源自碗水母(aequoreacoerulescens)的綠色熒光蛋白質(zhì)GFP (Green Fluorescent Protein)作為標(biāo)記，使本發(fā)明的蛋白質(zhì)以GFP融合蛋白質(zhì)的形式獲得表達(dá)。 另外，本發(fā)明的基因也可以與包含用于在宿主細(xì)胞中的增殖的選擇標(biāo)記的載體結(jié)合。另外，DNA插入優(yōu)選可活動(dòng)地連結(jié)于適當(dāng)?shù)膯?dòng)子(例如噬菌體λ PL啟動(dòng)子、大 腸桿菌Iac啟動(dòng)子、trp啟動(dòng)子及tac啟動(dòng)子、SV40早期啟動(dòng)子及后期啟動(dòng)子、以及逆轉(zhuǎn)錄 病毒LTR的啟動(dòng)子)上。作為其他適當(dāng)?shù)膯?dòng)子，也可以利用從業(yè)人員周知的啟動(dòng)子。在本發(fā)明中，適合使用的周知的細(xì)菌啟動(dòng)子之中包括大腸桿菌IacI及IacZ啟動(dòng) 子、T3啟動(dòng)子及T7啟動(dòng)子、gpt啟動(dòng)子、λ PR啟動(dòng)子及λ PL啟動(dòng)子、以及trp啟動(dòng)子。作 為適當(dāng)?shù)恼婧松飭?dòng)子，可以列舉CMV前早期啟動(dòng)子、IISV胸腺嘧啶脫氧核苷激酶啟動(dòng) 子、早期SV40啟動(dòng)子及后期SV40啟動(dòng)子、逆轉(zhuǎn)錄病毒LTR的啟動(dòng)子(例如勞氏肉瘤病毒 (RSV, RousSarcoma Virus)的啟動(dòng)子)、以及金屬硫蛋白啟動(dòng)子(例如小鼠金屬硫蛋白I啟 動(dòng)子)。重組表達(dá)載體更優(yōu)選包含用于轉(zhuǎn)錄開始、轉(zhuǎn)錄結(jié)束的部位，以及在轉(zhuǎn)錄區(qū)域中用 于翻譯的核糖體結(jié)合部位。利用載體構(gòu)建物而獲得表達(dá)的成熟轉(zhuǎn)錄物的編碼部分在應(yīng)翻譯 的多肽的起始部位包含轉(zhuǎn)錄開始AUG，而且在結(jié)束部位包含位于適當(dāng)位置的終止密碼子。另外，利用高等真核生物的DNA的轉(zhuǎn)錄，可以通過向載體中插入增強(qiáng)子(enhancer)序列而增大。增強(qiáng)子以增大特定的宿主細(xì)胞型的啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性的方式發(fā)揮 作用，通常為約10 300bp的DNA的順式作用外因子。作為增強(qiáng)子的例子，可以列舉SV40 增強(qiáng)子(其位于復(fù)制起點(diǎn)的后期側(cè)上的100 270bp處)、巨細(xì)胞病毒的早期啟動(dòng)增強(qiáng)子、 復(fù)制起點(diǎn)的后期側(cè)上的多瘤增強(qiáng)子、以及腺病毒增強(qiáng)子。另外，所述宿主細(xì)胞并無特別限定，可以優(yōu)選使用先前公知的各種細(xì)胞。作為適 當(dāng)?shù)乃拗鞯拇砝?，可以列舉菌體(例如大腸桿菌細(xì)胞、鏈霉菌(streptomyces)細(xì)胞、以 及鼠傷寒沙門氏桿菌(salmonella typhimurium)細(xì)胞)；真菌細(xì)胞(例如酵母細(xì)胞)；昆 蟲細(xì)胞(例如果蠅(drOSOphila)S2細(xì)胞以及甜菜夜蛾(spodoptera) Sf9細(xì)胞)；動(dòng)物細(xì)胞 (例如CHO細(xì)胞、COS細(xì)胞、以及Bowes黑色素瘤細(xì)胞)；以及植物細(xì)胞。更具體而言，不僅可 以列舉人類或小鼠等哺乳類的細(xì)胞，而且例如以源自家蠶的細(xì)胞為首，可以列舉果蠅等昆 蟲、大腸菌(Escherichia coli)等細(xì)菌、酵母(作為出芽酵母的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或作為裂殖酵母的粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe))、作為線蟲 的秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditiselegans)、滑爪蟾(Xenopus laevis，非洲爪蟾)的卵母 細(xì)胞等，但并無特別限定。用于所述宿主細(xì)胞的適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基以及條件可以利用該領(lǐng)域中 周知者。將所述表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞中的方法，即轉(zhuǎn)化方法也無特別限定，可以優(yōu)選使 用電穿孔法、磷酸鈣法、脂質(zhì)體法、DEAE葡聚糖法、顯微注射法、陽離子性脂質(zhì)媒介轉(zhuǎn)染、性 狀導(dǎo)入、感染等先前公知的方法。這些方法記載在如Davis等人所著的Basic Methods In Molecular Biology(1986)之類的許多標(biāo)準(zhǔn)研究室手冊(cè)中。再者，本發(fā)明也可以提供用于重組性地生成本發(fā)明的蛋白質(zhì)的部分片段的包含編 碼本發(fā)明的蛋白質(zhì)的部分片段的多核苷酸的重組表達(dá)載體，在重組表達(dá)載體中經(jīng)基因操作 的轉(zhuǎn)化體(宿主細(xì)胞)。此外，本發(fā)明也可包括關(guān)于通過上述重組技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明的蛋白質(zhì)、或者其片段 的發(fā)明。即，在本發(fā)明中，也可包括利用重組技術(shù)生產(chǎn)本發(fā)明的蛋白質(zhì)或其片段的方法。通 過所述技術(shù)而生產(chǎn)的重組蛋白質(zhì)，可以通過包括硫酸銨沉淀或乙醇沉淀、酸萃取、陰離子或 陽離子交換色譜法、磷酸纖維素色譜法、疏水性相互作用色譜法、親和色譜法、羥基磷灰石 色譜法、以及凝集素色譜法在內(nèi)的眾所周知的方法從重組細(xì)胞培養(yǎng)物中回收，然后加以純 化。最優(yōu)選將高效液相色譜法(“HPLC”)用于純化。(4)本發(fā)明的轉(zhuǎn)化體本發(fā)明的轉(zhuǎn)化體是導(dǎo)入有本發(fā)明的基因的轉(zhuǎn)化體，即導(dǎo)入有所述(3)項(xiàng)中所記載 的重組表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化體。此處，所謂“導(dǎo)入有基因”是指通過公知的基因工程學(xué)方法(基 因操作技術(shù))，可表達(dá)性地導(dǎo)入對(duì)象細(xì)胞(宿主細(xì)胞)內(nèi)。另外，所述“轉(zhuǎn)化體”不僅包括細(xì) 胞、組織、器官，還包括生物個(gè)體。本發(fā)明的轉(zhuǎn)化體的制作方法(生產(chǎn)方法)可以列舉上述將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的方法。另外，成為轉(zhuǎn)化對(duì)象的生物也無特別限定，可以列舉所述宿主細(xì)胞中所例示的各種微生 物或動(dòng)物(例如轉(zhuǎn)基因小鼠)。另外，只要選擇適當(dāng)?shù)膯?dòng)子或載體，則植物也可以作為轉(zhuǎn) 化的對(duì)象。(5)本發(fā)明的基因檢測(cè)工具本發(fā)明的基因檢測(cè)工具是將本發(fā)明的基因中的至少一部分堿基序列或其互補(bǔ)序列用作探針者?；驒z測(cè)工具可以在各種條件下用于本發(fā)明的基因的表達(dá)譜的檢測(cè)、測(cè)定等。作為本發(fā)明的基因檢測(cè)工具，例如可以列舉將與本發(fā)明的基因特異性雜交的所述 探針固定在基板(載體)上的DNA芯片。此處的“DNA芯片”主要是指將所合成的寡核苷酸 用于探針的合成型DNA芯片，但也包括將PCR產(chǎn)物等cDNA用于探針的粘附型DNA微陣列。用作探針的序列可以通過從cDNA序列中確定特征序列的先前公知方法來決 定。具體而言，例如可以列舉SAGE 基因表達(dá)系列分析(SerialAnalysis of Gene Expression)法(Science 276 1268,1997 ；Cell 88 243,1997 ；Science 270:484,1995; Nature 389 :300，1997 ；美國專利第 5，695，937 號(hào))等。此外，制造DNA芯片時(shí)采用公知的方法即可。例如當(dāng)使用合成寡核苷酸作為寡核 苷酸時(shí)，通過光刻(photolithography)技術(shù)與固相法DNA合成技術(shù)的組合，在基板上合成 該寡核苷酸即可。另一方面，當(dāng)使用cDNA作為寡核苷酸時(shí)，使用陣列機(jī)將其粘附在基板上 即可。另外，與一般的DNA芯片相同，可以配置完全匹配探針(寡核苷酸)與在該完全匹 配探針中一個(gè)堿基經(jīng)取代而成的錯(cuò)配探針來進(jìn)一步提升基因的檢測(cè)精度。此外，為了使不 同的基因同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，也可以將幾種寡核苷酸固定在同一個(gè)基板上來構(gòu)成DNA芯片。以下，對(duì)本發(fā)明的基因檢測(cè)工具進(jìn)行更詳細(xì)的說明。〈基板〉作為本發(fā)明的基因檢測(cè)工具中所使用的基板的材質(zhì)，只要是可以穩(wěn)定固定寡核苷 酸的材質(zhì)即可。例如可以列舉聚碳酸酯或塑料等合成樹脂、玻璃等，但并不限定于這些?；?板的形態(tài)也無特別限定，例如可以優(yōu)選使用板狀、膜狀等的基板。<固定在基板表面的寡核苷酸>固定在本發(fā)明的基因檢測(cè)工具的基板表面的寡核苷酸，只要是以本發(fā)明的基因的 至少一部分堿基序列為基礎(chǔ)的寡核苷酸即可。通過在此寡核苷酸與來自樣本的核酸之間形 成雜交，可以檢測(cè)樣本中所包含的基因。再者，以下有時(shí)也將所述以本發(fā)明的基因的至少一 部分堿基序列為基礎(chǔ)的寡核苷酸稱為“捕捉寡核苷酸(capture oligo) ”。捕捉寡核苷酸只要以本發(fā)明的基因的堿基序列為基礎(chǔ)進(jìn)行設(shè)計(jì)即可。因此，可以 是所述堿基序列本身，且只要與由檢測(cè)對(duì)象的樣本所制備的核酸形成特異性雜交，則可以 包含變異。變異的位置并無特別限定。捕捉寡核苷酸的長(zhǎng)度(堿基數(shù))并無特別限定，但如果過短，則雜交的檢測(cè)變得困 難，如果過長(zhǎng)，則會(huì)允許非特異性雜交。本發(fā)明者對(duì)捕捉寡核苷酸的最佳長(zhǎng)度進(jìn)行反復(fù)研究 后，將標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)度設(shè)為12 50個(gè)堿基長(zhǎng)度。優(yōu)選12 40個(gè)堿基長(zhǎng)度，更優(yōu)選12 30個(gè)堿 基長(zhǎng)度，再更優(yōu)選13 22個(gè)堿基長(zhǎng)度，但并不限定于這些。堿基長(zhǎng)度主要依存于序列特性 (特定堿基的含有率，相同堿基的重復(fù))，發(fā)明者確認(rèn)結(jié)合性較佳者即使為短鏈也可以特異 性雜交。當(dāng)捕捉寡核苷酸具有妨礙與來自樣本的核酸的雜交的發(fā)夾結(jié)構(gòu)、環(huán)結(jié)構(gòu)、或者其 以外的立體結(jié)構(gòu)時(shí)，通過將構(gòu)成捕捉寡核苷酸的一種以上的核苷酸取代為肌苷或者與任何 核苷酸均不配對(duì)的核酸，可解除其立體結(jié)構(gòu)。捕捉寡核苷酸的合成法并無特別限定，通過公知方法(例如Maniatis，Τ. etal. , Molecular Cloning A Laboratory Manual, Second Edition, Cold SpringHarbor Laboratory Press (1989)中所記載的方法等)進(jìn)行合成即可。一般可使用市售的DNA合成 機(jī)進(jìn)行化學(xué)合成。在本發(fā)明的基因檢測(cè)工具中，優(yōu)選不僅將所述基于本發(fā)明的基因的至少一部分堿 基序列的寡核苷酸固定在基板表面，而且將所謂的對(duì)照、捕捉寡核苷酸固定在基板表面。對(duì) 照、捕捉寡核苷酸包括陽性對(duì)照、捕捉寡核苷酸以及陰性對(duì)照、捕捉寡核苷酸。陽性對(duì)照、捕 捉寡核苷酸用于判定在下述探針制備步驟中擴(kuò)增反應(yīng)是否順利進(jìn)行。陰性對(duì)照、捕捉寡核 苷酸用于確認(rèn)未產(chǎn)生非特異性雜交，即未產(chǎn)生疑似陽性的雜交信號(hào)。本發(fā)明也包括將這些 陽性對(duì)照、捕捉寡核苷酸以及陰性對(duì)照、捕捉寡核苷酸固定在基板表面而成的基因檢測(cè)工 具。陽性對(duì)照、捕捉寡核苷酸以由檢測(cè)對(duì)象的樣本所制備的探針中所包含的堿基序列 為基礎(chǔ)進(jìn)行設(shè)計(jì)即可。另外，當(dāng)使用同一個(gè)基因檢測(cè)工具同時(shí)檢測(cè)幾個(gè)檢測(cè)對(duì)象樣本時(shí)，可 以針對(duì)各檢測(cè)對(duì)象的樣本來設(shè)計(jì)陽性對(duì)照、捕捉寡核苷酸，也可以根據(jù)由幾個(gè)檢測(cè)對(duì)象的 樣本所制備的探針中共通的堿基序列來進(jìn)行設(shè)計(jì)。當(dāng)所有由檢測(cè)對(duì)象的樣本所制備的探針 中不存在共通的堿基序列時(shí)，也可以針對(duì)幾組來設(shè)計(jì)陽性對(duì)照、捕捉寡核苷酸。或者，也可 以設(shè)計(jì)引物序列部分相同，且與成為對(duì)象的細(xì)菌的序列不同的人工序列，并將此序列的一 部分作為陽性對(duì)照、捕捉寡核苷酸。將所述人工序列作為模板來制備探針(在本說明書中， 將此種探針稱為對(duì)照探針)，并將其添加至由樣本所制備的探針中，由此可以驗(yàn)證雜交的特 異性。此外，關(guān)于所述探針見下文。陰性對(duì)照、捕捉寡核苷酸優(yōu)選設(shè)計(jì)為如下者在陽性對(duì)照、捕捉寡核苷酸的堿基序 列中，在1個(gè)堿基以上、且未滿此序列所具有的堿基數(shù)的20%的范圍內(nèi)包含人為的堿基取 代的堿基序列。進(jìn)行堿基取代的堿基數(shù)是由與雜交條件的關(guān)系所決定，選擇源自檢測(cè)對(duì)象 樣本的探針不會(huì)產(chǎn)生雜交的堿基數(shù)即可。檢測(cè)對(duì)象的樣本并無特別限定。另外，固定在1個(gè)基板上的捕捉寡核苷酸為至少 一種以上即可，并無特別上限。最優(yōu)選將本發(fā)明的基因檢測(cè)工具也制成如下的工具，即將多 個(gè)本發(fā)明的基因的部分片段(分別具有不同的堿基序列者)作為捕捉寡核苷酸固定在1個(gè) 基板上的所謂微陣列型的工具。<寡核苷酸(捕捉寡核苷酸)的固定化>將寡核苷酸固定在基板表面的固定化方法并無特別限定，適當(dāng)選擇使用公知方法 即可。例如可以利用物理性吸附、電性結(jié)合或者分子共價(jià)結(jié)合等一般雜交法中所使用的方 法。在本發(fā)明的基因檢測(cè)工具中，優(yōu)選使用表面具有碳二亞胺基或異氰酸酯基的基材(美 國專利US5，908，746、日本專利特開平8-23975號(hào))來進(jìn)行固定化。當(dāng)對(duì)寡核苷酸進(jìn)行點(diǎn)樣(spotting)時(shí)，如果寡核苷酸的點(diǎn)量過少，則無法充分確 保寡核苷酸與探針之間的反應(yīng)性，判定變得困難。另外，高集成度的點(diǎn)樣不僅在技術(shù)方面 存在問題，同時(shí)也耗費(fèi)成本，進(jìn)而在使用探針的熒光標(biāo)識(shí)或化學(xué)發(fā)色等的雜交信號(hào)的檢測(cè) 中也需要更精密且昂貴的檢測(cè)裝置(例如掃描儀)。因此，優(yōu)選將寡核苷酸以直徑為10 1，000 ym的尺寸固定在基板的表面。將寡核苷酸點(diǎn)樣在基板上的點(diǎn)樣方法并無特別限定。 例如可以使用點(diǎn)樣機(jī)將寡核苷酸溶液在基板上點(diǎn)樣，由此來進(jìn)行。由此，寡核苷酸溶液通常 點(diǎn)樣為大致圓形。
(6)使用本發(fā)明的蛋白質(zhì)或其部分片段的檢測(cè)工具本發(fā)明的檢測(cè)工具是將本發(fā)明的蛋白質(zhì)中的至少一部分氨基酸序列用作探針的 檢測(cè)工具。即，也可以稱之為將本發(fā)明的蛋白質(zhì)或其部分片段固定化的檢測(cè)工具。所述檢 測(cè)工具可以在各種條件下用于與本發(fā)明的蛋白質(zhì)相互作用的物質(zhì)(多肽、核酸、抗體等)的 檢測(cè)、測(cè)定等。作為本發(fā)明的檢測(cè)工具，例如可以列舉將與識(shí)別本發(fā)明的蛋白質(zhì)的抗體特異性結(jié) 合的所述探針固定在基板(載體)上而成的檢測(cè)工具等。用作探針的氨基酸序列優(yōu)選使用 本發(fā)明的蛋白質(zhì)中的與本發(fā)明的抗體特異性相互作用的部分，即本發(fā)明的蛋白質(zhì)的抗原表 位保有肽。作為本發(fā)明的檢測(cè)工具中所使用的基板的材質(zhì)，只要是可以穩(wěn)定固定寡肽的材質(zhì) 即可。例如可以列舉聚碳酸酯或塑料等合成樹脂、玻璃等，但并不限定于這些。基板的形態(tài) 也無特別限定，例如可以優(yōu)選使用板狀、膜狀等的基板。另外，將寡肽固體在基板上的方法可以利用先前公知方法，并無特別限定。例如可 以列舉利用共價(jià)結(jié)合法或吸附法使寡肽與不溶性載體結(jié)合的方法、利用高分子物質(zhì)將寡 肽的四周包圍的包埋固定化方法(entrappingimmobilization method)、使用交聯(lián)劑等將 寡肽固定在支持體上的方法等。再者，可以根據(jù)欲固定化的基板與寡肽的配合性、固定化物 的利用目的而選擇最佳固定化方法。(7)本發(fā)明的基因、蛋白質(zhì)等的有用性如上所述，本發(fā)明的基因以及蛋白質(zhì)是在皰疹病毒的潛伏感染時(shí)進(jìn)行特異性表達(dá) 者，可認(rèn)為該蛋白質(zhì)具有如下功能通過在腦內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)， 能夠誘發(fā)宿主的精神障礙。此外，令人感興趣的是明確本發(fā)明的基因以及蛋白質(zhì)具有與精神障礙患者的關(guān) 聯(lián)性。更詳細(xì)而言，如下述實(shí)施例所示，在約5成的以情緒障礙為中心的各種精神障礙患者 體內(nèi)檢測(cè)出抗SITH-1抗體，另一方面，在健康者體內(nèi)幾乎未檢測(cè)出抗SITH-1抗體(在健康 者中檢測(cè)出抗SITH-1抗體的比率約小于2% )。如上所述，本發(fā)明者獨(dú)自發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的蛋白質(zhì)的特異性抗體有意義地存在于以情 緒障礙為中心的精神障礙患者體內(nèi)，而在健康者體內(nèi)幾乎未檢測(cè)出此種抗體這一現(xiàn)象。此 外，由于精神障礙是指意識(shí)、智力、記憶、情感、思考、行動(dòng)之類的精神功能的障礙，因此本發(fā) 明中的“精神障礙”是指在日常生活或者社會(huì)生活中受到相當(dāng)大的限制的狀態(tài)。另外，“情 緒障礙”是指持續(xù)的情緒或者情感的變化，異常地體驗(yàn)抑郁或者高漲的情感，并給日常生活 功能或社會(huì)功能帶來障礙的狀態(tài)。關(guān)于此種“本發(fā)明的蛋白質(zhì)的特異性抗體有意義地存在于精神障礙患者體內(nèi)，而 在健康者體內(nèi)幾乎未檢測(cè)出”的現(xiàn)象的詳細(xì)原因，目前正在努力研究中，但本發(fā)明的蛋白質(zhì) 具有在潛伏感染被誘導(dǎo)再活化的中間階段會(huì)活躍地生成的性質(zhì)。可認(rèn)為皰疹病毒(例如 HHV-6)是通過壓力來誘導(dǎo)其再活化，從而制作本發(fā)明的蛋白質(zhì)?？烧J(rèn)為占精神障礙患者約 5成的具有針對(duì)本發(fā)明的蛋白質(zhì)的抗體的患者，由于壓力或某種遺傳性因素，而導(dǎo)致本發(fā)明 的蛋白質(zhì)在作為HHV-6的潛伏感染細(xì)胞的腦內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中大量地長(zhǎng) 時(shí)間地進(jìn)行表達(dá)。其結(jié)果為可認(rèn)為星形膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的鈣濃度長(zhǎng)時(shí)間地持 續(xù)上升，血清素的代謝等星形膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的重要的功能受到阻礙，由此引發(fā)精神障礙。另外，可認(rèn)為在慢性疲勞癥候群(CFS)患者的精神障礙中，針對(duì)本發(fā)明的蛋白質(zhì) 的抗體的保有率較高的原因是因?yàn)镃FS患者與健康人相比，大量的HHV-6在體內(nèi)潛伏感染 的情況更多，且也容易產(chǎn)生本發(fā)明的蛋白質(zhì)(SITH-1蛋白質(zhì))。此外，根據(jù)迄今為止所報(bào)告 的潛伏感染特異性基因產(chǎn)物與CFS患者的抗體反應(yīng)的結(jié)果，也反應(yīng)了 CFS患者與健康人相 比有更多HHV-6在體內(nèi)潛伏感染這一事實(shí)(參照非專利文獻(xiàn)5)。如上所述，雖然只在精神障礙患者體內(nèi)檢測(cè)出針對(duì)本發(fā)明的蛋白質(zhì)的抗體這一現(xiàn) 象的詳細(xì)的機(jī)理尚不明確，但通過利用所述現(xiàn)象，可以提供有助于客觀判斷精神障礙的判 定方法或診斷方法。另外，同時(shí)本發(fā)明也涉及判定套件、診斷套件、模型動(dòng)物的制作方法、藥 劑篩選方法。以下，對(duì)各方法進(jìn)行詳細(xì)說明。(7-1)本發(fā)明的判定方法本發(fā)明的判定方法只要是可判定在被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物體內(nèi)是否存在識(shí)別本發(fā)明的 蛋白質(zhì)的抗體、即識(shí)別所述(a)或(b)中所記載的蛋白質(zhì)的抗體的方法即可。再者，術(shù)語 “被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物”是指人類以及人類以外的哺乳類動(dòng)物。對(duì)于抗體的測(cè)定，例如可以通過與此抗體所識(shí)別的蛋白質(zhì)或其部分片段的結(jié)合反 應(yīng)而檢測(cè)。即，在本判定方法中，優(yōu)選使用此抗體所識(shí)別的蛋白質(zhì)或其部分片段，判定此抗 體在免疫學(xué)(利用抗原抗體反應(yīng))上是否存在。此外，“部分片段”優(yōu)選至少包含抗原表位 保有肽。作為本判定方法的一例，可以列舉如下方法使固定有本發(fā)明的蛋白質(zhì)或其部分 片段的不溶性載體與從被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物體內(nèi)所采集的生物學(xué)樣本接觸后，加以清洗，然后 檢測(cè)與此不溶性載體上的蛋白質(zhì)或其部分片段特異性結(jié)合的抗體。而且，與該不溶性載體 上的蛋白質(zhì)或其部分片段特異性結(jié)合的抗體例如是來自被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物的抗體，因此可以 使用針對(duì)被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物的抗體的特異性抗體、即所謂的2次抗體而容易地檢測(cè)。此時(shí)，通 過使2次抗體含有染料、酶或者放射性或熒光標(biāo)識(shí)來增強(qiáng)檢測(cè)，可使檢測(cè)變得更加容易。S卩，作為本判定方法中所使用的抗體測(cè)定法，可以列舉利用如熒光抗體法、斑點(diǎn)雜 交測(cè)定法、西方墨點(diǎn)法、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(包括ELISA、夾心ELISA法)、放射性免疫測(cè) 定法(RIA)、以及免疫擴(kuò)散測(cè)定法之類的傳統(tǒng)免疫組織學(xué)方法的測(cè)定法。這些測(cè)定法為了分 子的固定化及檢測(cè)而利用如親和素(avidin)以及生物素(biotin)之類的分子，制備這些 試劑的技術(shù)以及使用其的方法可以利用從業(yè)人員所公知的技術(shù)。此外，作為本判定方法的 結(jié)果，可以獲得用于病理學(xué)試驗(yàn)的組織切片的免疫組織學(xué)染色。另外，本判定方法優(yōu)選使用從被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物體內(nèi)分離出的生物學(xué)樣本來進(jìn)行。 術(shù)語“分離出的生物學(xué)樣本”只要是包含從被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物體內(nèi)采集的細(xì)胞、組織或者其殘 片等的樣本即可，除末梢血液、唾液、尿、糞便以外，還包含細(xì)胞樣本等，并無特別限定，就皰 疹病毒在末梢血液中的巨噬細(xì)胞中也潛伏感染這一事實(shí)而言，特別優(yōu)選使用從被實(shí)驗(yàn)對(duì)象 生物體內(nèi)采集的末梢血液。在此情況下，還具有被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物的侵襲度低這一優(yōu)點(diǎn)。生物學(xué)樣本中存在的抗體的量，例如可使用線性回歸計(jì)算機(jī)運(yùn)算法，通過與標(biāo)準(zhǔn) 制備物(例如健康者的標(biāo)準(zhǔn)樣本或者典型精神障礙患者的標(biāo)準(zhǔn)樣本)中所存在的量的比較 而簡(jiǎn)單地計(jì)算出。用于檢測(cè)抗體的此種測(cè)定法，例如ELISA在Iacobelli等人所著的Breast Cancer Research and Treatment 11 :19-30 (1988)中有所記載。作為適合的酶標(biāo)識(shí)，例如可以列舉來自可通過與基質(zhì)反應(yīng)催化生成過氧化氫的氧
22化酶群的酶標(biāo)識(shí)。葡萄糖氧化酶由于具有良好的穩(wěn)定性，而且其基質(zhì)(葡萄糖)容易獲得， 因此特別優(yōu)選。氧化酶標(biāo)識(shí)的活性可以通過測(cè)定由酶_標(biāo)識(shí)抗體/基質(zhì)反應(yīng)所形成的過 氧化氫的濃度來測(cè)定。除酶以外，作為其他適合的標(biāo)識(shí)，可以列舉放射性同位素(例如碘 (1251、1211)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(112In)、以及锝("mTc))，以及熒光標(biāo)識(shí)(例如熒光 素及羅丹明)及生物素。從被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物體內(nèi)獲得的生物學(xué)樣本中的抗體(針對(duì)本發(fā)明的蛋白質(zhì)的抗 體)水平，除可利用上述免疫測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè)以外，例如也可以利用圖像分析在體內(nèi)進(jìn)行 檢測(cè)。即，由于針對(duì)本發(fā)明的蛋白質(zhì)的抗體也是蛋白質(zhì)，因此通過使用可特異性識(shí)別此抗體 的抗體，可以利用圖像分析在體內(nèi)檢測(cè)從被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物體內(nèi)獲得的生物學(xué)樣本中的抗體 (針對(duì)本發(fā)明的蛋白質(zhì)的抗體)水平。作為用于抗體的體內(nèi)圖像分析的抗體標(biāo)識(shí)或者標(biāo)記，可以列舉能夠通過X射 線照相術(shù)、NMR(Nuclear Magnetic Resonance,核磁共振)、或者 ESR(Electron Spin Resonance,電子自旋共振)進(jìn)行檢測(cè)者。關(guān)于X射線照相術(shù)，作為適合的標(biāo)識(shí)，可以列舉可 發(fā)射能夠檢測(cè)的放射線，但對(duì)被檢測(cè)體并無明顯傷害的鋇或者銫之類的放射性同位素。作 為適用于NMR以及ESR的標(biāo)記，可以列舉能夠利用相關(guān)聯(lián)的雜交瘤的營(yíng)養(yǎng)成分的標(biāo)識(shí)而導(dǎo) 入抗體中的如氘之類的具有可檢測(cè)的特征性自旋的元素。利用如放射性同位素(例如131I、mIn、99mTC)、射線不透性(radio-opaque)基質(zhì)、 或者通過核磁共振能夠檢測(cè)的物質(zhì)之類的適當(dāng)?shù)目蓹z測(cè)的圖像分析部分，標(biāo)識(shí)針對(duì)本發(fā)明 的蛋白質(zhì)的抗體的特異性抗體或抗體片段，再將其導(dǎo)入被用于障礙試驗(yàn)的哺乳動(dòng)物體內(nèi) (例如非經(jīng)口的、皮下、或者靜脈內(nèi))。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解用于產(chǎn)生診斷用的圖 像所必需的圖像分析部分的量是由被檢測(cè)體的大小以及所使用的圖像分析系統(tǒng)來決定。在 放射性同位素部分的情況下，對(duì)于人類被檢測(cè)體，所注射的放射活性的量通常約為5 20 毫居里的范圍的"mTc。繼而，標(biāo)識(shí)抗體或者抗體片段優(yōu)先儲(chǔ)存在包含針對(duì)本發(fā)明的蛋白 質(zhì)的抗體的細(xì)胞的位置。此外，關(guān)于體內(nèi)的腫瘤的圖像分析，在S.W.Burchiel等人所著的 “Immunopharmacokinetics ofRadiolabeled Antibodies and Their Fragments，， (Turner Imaging 第 13 章TheRadiochemical Detection of Cancer, Burchiel, S. ff.以及 Rhodes, B. A.編，Masson Publishing Inc. (1982))中有所記載。關(guān)于可以在本發(fā)明中利用的標(biāo)識(shí)，以下揭示具體例。作為適合的酶標(biāo)識(shí)的 例子，可以列舉蘋果酸脫氫酶(malate dehydrogenase)、金黃色葡萄球菌核酸酶 (staphylococcus nuclease)、_母乙醇月兌MBI (yeast alcoholdehydrogenase)、a _ 甘油 石舞酸月兌fiBI ( a -glycerophosphate dehydrogenase)、石舞酸丙||異構(gòu)SI (triose phosphate isomerase)、過氧化物酶(peroxidase)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase)、天冬酉先胺酶 (asparaginase)、葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase)、3 -半乳糖苷酶(3 -galactosidase)、 核糖核酸酶(ribonuclease)、脲酶(urease)、過氧化氫酶(catalase)、葡萄糖_6_磷酸脫 氧酶(glucose-6-phosphatedehydrogenase)、糖化酶(glucoamylase)、以及乙酉先膽堿酉旨酶 (acetylcholinesterase)。作為適合的放射性同位素標(biāo)識(shí)的例子，可以列舉3H、mIn、125I、131I、32P、35S、14C、 51Cr、57T0、58C0、59Fe、75Se、152EU、9°Y、67CU、217Ci、211At、212Pb、47SC、1(l9Pd 等。mIn 是采用體內(nèi)成像 時(shí)優(yōu)選的同位素。其原因在于其可避免因利用1251或者1311所標(biāo)識(shí)的單克隆抗體會(huì)被肝臟脫鹵化的問題。此外，此放射性核素具有更優(yōu)選用于成像的、射線放射能(Perkins等 人所著的 Eur. J. Nucl. Med. 10 :296_301 (1985) ；Carasquillo 等人所著的 J. Nucl. Med. 28 281-287(1987))。例如，使用1_(P_異硫氰酸酯芐基)-DPTA與單克隆抗體耦合的mIn幾 乎未表現(xiàn)出進(jìn)入非腫瘤性組織(特別是肝臟)的情況。因此，增強(qiáng)腫瘤局部化的特異性 (Esteban 等人所著的 J. Nucl. Med. 28 861-870 (1987))。作為適合的非放射性同位素標(biāo)識(shí)的例子，可以列舉157Gd、55Mn、162Dy、52Tr、以及
56Fe0作為適合的熒光標(biāo)識(shí)的例子，可以列舉152Eu標(biāo)識(shí)、熒光素標(biāo)識(shí)、異硫氰酸酯標(biāo)識(shí)、 羅丹明標(biāo)識(shí)、藻紅蛋白標(biāo)識(shí)、藻藍(lán)蛋白標(biāo)識(shí)、別藻藍(lán)蛋白標(biāo)識(shí)、鄰苯二醛標(biāo)識(shí)、以及熒光胺 (fluorescamine)標(biāo)識(shí)。作為適合的毒素標(biāo)識(shí)的例子，可以列舉白喉毒素、賴氨酸、以及霍亂毒素。作為化學(xué)發(fā)光標(biāo)識(shí)的例子，可以列舉魯米諾(luminal)標(biāo)識(shí)、異魯米諾 (isoluminal)標(biāo)識(shí)、芳香族吖啶酯標(biāo)識(shí)、咪唑標(biāo)識(shí)、吖啶鹽標(biāo)識(shí)、草酸酯標(biāo)識(shí)、蟲熒光素 (luciferin)標(biāo)識(shí)、熒光素酶(luciferase)標(biāo)識(shí)、以及水母發(fā)光蛋白(aequorin)標(biāo)識(shí)。作為核磁共振造影劑的例子，可以列舉如Gd、Mn、以及Fe之類的重金屬原子核。用于使所述標(biāo)識(shí)與抗體結(jié)合的代表性技術(shù)是由Kennedy等人所著的(Clin. Chim. Acta 70:1-31(1976))以及 Schurs 等人所著的(Clin. Chim. Acta81 :1_40(1977))所提供。 后者中所提及的耦合技術(shù)是戊二醛方法、過碘酸方法、二馬來酰亞胺方法、間馬來酰亞胺芐 基-N-羥基-丁二酰亞胺酯方法，這些方法均作為參考而引用至本說明書中。(7-2)診斷方法本發(fā)明的診斷方法只要使用所述判定方法即可，其他具體的構(gòu)成、條件等并無特 別限定。例如在被實(shí)驗(yàn)對(duì)象的患者或被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)，可以將存在本發(fā)明的抗體的情況作 為指標(biāo)，判定此被實(shí)驗(yàn)對(duì)象的患者或被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物患有精神障礙。另外，當(dāng)將本發(fā)明的抗體的 定量值作為指標(biāo)進(jìn)行診斷時(shí)，也能夠以健康者的定量值(正常值)或典型精神障礙患者的 定量值(疾病值)為參考設(shè)定適當(dāng)?shù)呐R界值，如果超過或者低于此臨界值，則診斷為患有精 神障礙的可能性高。在本發(fā)明中，精神障礙的發(fā)病會(huì)導(dǎo)致所述抗體的量增加，因此例如將健 康者的定量值(正常值)設(shè)定為臨界值時(shí)，如果被實(shí)驗(yàn)者的測(cè)定值超過此臨界值，則可判定 為患有精神障礙的可能性高。此外，在本說明書中，術(shù)語“被實(shí)驗(yàn)者”是指人類，“被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物”是指人類以外的動(dòng) 物，例如包括小鼠、大鼠、以及猴子等，只要是人類以外的動(dòng)物，任何動(dòng)物均可成為“被實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物”。因此，根據(jù)本診斷方法，可以簡(jiǎn)便且正確地診斷被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物是否患有精神障 礙、或者被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物是否有患上精神障礙的可能性。另外，針對(duì)被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的診斷方 法，在例如開發(fā)精神障礙的治療藥時(shí)的藥劑篩選、或者用于試驗(yàn)藥劑效果的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等中 非常有用。(7-3)判定套件、診斷套件本發(fā)明的判定套件或診斷套件只要是用于實(shí)施所述(7-1)項(xiàng)中所說明的判定方 法、或者所述(7-2)項(xiàng)中所說明的診斷方法者即可，其所包含的具體的構(gòu)成、材料、機(jī)器等 并無特別限定。具體而言，為了從免疫學(xué)上檢測(cè)本發(fā)明的抗體，優(yōu)選包含以下的(i) (iii)中的任意物質(zhì)。(i)本發(fā)明的蛋白質(zhì)，(ii) (i)的部分片段(優(yōu)選包含抗原表位保有 肽)，(iii)將⑴或(ii)固定化的檢測(cè)工具。如果使用如上所述的構(gòu)成的套件，則可簡(jiǎn)便且可靠地實(shí)施本發(fā)明的判定方法或診 斷方法，因此此套件非常有用。另外，除所述構(gòu)成以外，也可包含用于實(shí)施所述判定方法或診斷方法的各步驟的 物質(zhì)。例如為了從被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物體內(nèi)采集樣本，也可以包含例如注射器等作為用于采集 末梢血液的器械，還可列舉用于實(shí)施本判定方法或診斷方法的所需物，例如各種試劑(例 如用于進(jìn)行ELISA等免疫學(xué)反應(yīng)的試劑類等)或?qū)嶒?yàn)工具。另外，還可包含為了更加簡(jiǎn)便 且正確地進(jìn)行所述判定而需要的各種運(yùn)算裝置(例如計(jì)算機(jī)等)或軟件。(7-4)模型動(dòng)物的制作方法、判定法、篩選方法、評(píng)價(jià)方法本發(fā)明的診斷方法可以在除人類以外的精神障礙模型動(dòng)物的制作法、判定有用性 的方法、以及使用此種模型動(dòng)物的藥物篩選中，應(yīng)用于判定藥物的有效性的方法。即，當(dāng)制 作精神障礙模型動(dòng)物時(shí)，如實(shí)施例中所述，可以利用載體等將SITH-1蛋白質(zhì)導(dǎo)入動(dòng)物的腦 內(nèi)來制作精神障礙模型。另外，當(dāng)判定精神障礙模型動(dòng)物的有用性時(shí)，與所述判定方法或診 斷方法相同，可以根據(jù)有無本發(fā)明的抗體，判斷被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否出現(xiàn)精神障礙的癥狀，如果 此動(dòng)物出現(xiàn)精神障礙的癥狀，則判定其可用作精神障礙模型動(dòng)物。在所述各種方法中，更優(yōu)選結(jié)合利用目前為止已知的動(dòng)物的行為障礙或恐怖反應(yīng) 等的診斷方法來作為評(píng)價(jià)方法。具體而言，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的診斷可以使用懸尾實(shí)驗(yàn)或強(qiáng)迫游泳 實(shí)驗(yàn)等行為障礙相關(guān)試驗(yàn)或、者恐怖反應(yīng)等已知的腦功能試驗(yàn)。另外，此處的“被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物”只要是人類以外的動(dòng)物即可，優(yōu)選特別適合用作實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物的小鼠、大鼠、豚鼠、狗、兔子、猴子、黑猩猩等。由于對(duì)于人類以外的動(dòng)物的精神障礙的 判定(診斷)更加困難，所以此方法極為有用。此外，向此種模型動(dòng)物給予精神治療藥物或 者抗精神病藥(治療或改善精神障礙的藥劑)的候選物質(zhì)后，除行為障礙的檢查以外，如上 所述般檢測(cè)本發(fā)明的抗體，如果精神障礙得到治愈或改善，則可判斷所述候選物質(zhì)具有抗 精神障礙作用。即，只要利用本發(fā)明的診斷方法，便可容易且可靠地篩選精神治療藥物的候 選物質(zhì)。此處所謂“精神治療藥物的候選物質(zhì)”可以是試驗(yàn)者所期望的任意物質(zhì)。此外，本發(fā)明的判定方法或診斷方法等的主題在于，通過檢測(cè)針對(duì)在皰疹病毒的 潛伏感染時(shí)進(jìn)行特異性表達(dá)的蛋白質(zhì)的抗體，提供用于判定是否患有精神障礙的客觀判定 方法，而并不在于本說明書中所具體記載的各個(gè)操作。因此，使用所述各操作以外的操作的 判定方法或診斷方法也屬于本發(fā)明的范圍。除此以外，由于皰疹病毒的感染與實(shí)施例中也提到的CFS等伴有免疫不全的疾 病(例如克羅恩病(Crohn disease)等自身免疫性疾病等)、或者藥物誘導(dǎo)超敏癥候群 (Drug-induced hypersensitivity syndrome)等被認(rèn)為與HHV-6有關(guān)的皮膚疾病、或者由 HHV-6所引起的腦炎、腦病的關(guān)聯(lián)性，因此可認(rèn)為本發(fā)明針對(duì)這些疾病也能夠客觀地診斷、 評(píng)價(jià)。即，通過利用本發(fā)明的蛋白質(zhì)以及基因等，可將其用作提示HHV-6有參與的各種 疾病的疾病標(biāo)記。另外，本發(fā)明也包括導(dǎo)入上述本發(fā)明的基因、此基因產(chǎn)物(例如由基因所編碼的 蛋白質(zhì))或者具有此基因的重組表達(dá)載體而成的模型動(dòng)物。如上所述，本發(fā)明的基因與精神障礙相關(guān)，因此導(dǎo)入本基因、本基因產(chǎn)物(例如被基因編碼的蛋白質(zhì)等)、或者具有該本 基因的重組表達(dá)載體而成的模型動(dòng)物表現(xiàn)出精神障礙的癥狀。作為所述精神障礙的癥狀， 除躁郁癥樣癥狀、狂躁癥樣癥狀、抑郁癥樣癥狀以外，例如基于檢查方法還可列舉精神分裂 癥樣癥狀。成為對(duì)象的動(dòng)物只要可用作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，則并無特別限定，特別優(yōu)選哺乳動(dòng)物，例如 可以列舉小鼠、大鼠、猴子等。另外，所述基因、基因產(chǎn)物以及重組表達(dá)載體的導(dǎo)入方法可利用先前公知方法，并 無特別限定。例如，此蛋白質(zhì)在腦內(nèi)的表達(dá)方法可以是利用腺病毒載體的方法，也可以是利 用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的方法(參照下述實(shí)施例)，當(dāng)然也可以是利用除此以外的載體的方法。 另外，可以是通過一般的轉(zhuǎn)基因(制作轉(zhuǎn)基因小鼠)來導(dǎo)入基因的方法。此外，也可以是直 接將該蛋白質(zhì)接種于腦內(nèi)的方法。此種精神障礙模型動(dòng)物可以較好地用于精神障礙的治療法的研究，藥劑效果的研 究、判定，藥劑以外的治療方法(溫?zé)岑煼ǖ?的評(píng)價(jià)等，且非常有用。此外，也可以進(jìn)行關(guān)于精神障礙的發(fā)病原因的研究。例如通過研究疲勞或壓力在 何種程度上對(duì)誘導(dǎo)精神障礙產(chǎn)生作用，而可用于精神障礙的發(fā)病預(yù)防的研究。以下揭示實(shí)施例來對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行更詳細(xì)的說明。當(dāng)然，本發(fā)明并不限 定于以下的實(shí)施例，且詳細(xì)部分可能有各種形態(tài)。此外，本發(fā)明并不限定于上述實(shí)施方式， 可以在權(quán)利要求所示的范圍內(nèi)進(jìn)行各種變更，適當(dāng)組合所揭示的各種技術(shù)方法而獲得的實(shí) 施方式也包括在本發(fā)明的技術(shù)范圍內(nèi)。[實(shí)施例]<1.編碼潛伏感染蛋白質(zhì)SITH-1的基因產(chǎn)物(mRNA)的鑒定>從非專利文獻(xiàn)1中所示的HHV-6潛伏感染的巨噬細(xì)胞中分離出信使RNA(mRNA)， 使用IE4RB作為隨機(jī)引物以及正義轉(zhuǎn)錄物(sense transcripts)的逆轉(zhuǎn)錄用引物，并使用 IE2FB作為反義轉(zhuǎn)錄物(anti-sense transcript)的逆轉(zhuǎn)錄用引物來進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。其 后使用引物IE4RB與IE2FB并利用PCR法使逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(cDNA)擴(kuò)增，然后使用內(nèi)側(cè)的引物 IE4RA與IE2FA并通過雙巢式(double-nested) PCR法使此產(chǎn)物擴(kuò)增。圖1表示公知的增殖 感染時(shí)的mRNA與正義轉(zhuǎn)錄物(H6LT)與新穎潛伏感染特異性基因的位置關(guān)系、以及潛伏感 染特異性蛋白質(zhì)SITH-1的開放閱讀框。SITH-1以及新穎潛伏感染特異性基因的序列信息 參照序列表。其結(jié)果為與由在HHV-6增殖感染的MT_4細(xì)胞中表達(dá)的mRNA擴(kuò)增的351bp的產(chǎn) 物、以及非專利文獻(xiàn)3中所示的由HHV-6在巨噬細(xì)胞(MO)內(nèi)的潛伏感染時(shí)所檢測(cè)出的潛 伏感染特異性基因產(chǎn)物(HHV-61atency-associated transcript :H6LT)擴(kuò)增的351bp的產(chǎn) 物均不同的925bp的產(chǎn)物獲得擴(kuò)增。由于與來自HHV-6DNA的擴(kuò)增產(chǎn)物1241bpt不同，僅由HHV-6潛伏感染細(xì)胞的反義 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增，因此顯示其為目前尚未發(fā)現(xiàn)的新穎潛伏感染特異性基因 產(chǎn)物(參照?qǐng)D2)。圖2中，“R”表示隨機(jī)引物，“S”表示正義轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，“anti-S”表示反義 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。為了確定此新穎潛伏感染特異性基因mRNA的結(jié)構(gòu)，實(shí)施5' -cDNA末端快速擴(kuò)增 (5' -rapid amplification of cDNA ends) (RACE)法與 3' -RACE 法來確定 5'-末端與
263'-末端，同時(shí)確定整個(gè)堿基序列(參照?qǐng)D3)。IE4RB 5' GATGCTCCTTCTTCCACATTACTGG 3‘IE2FB 5' CATCCCATCAATTATTGGATTGCTGG 3‘IE2FA 5' GAAACCAC-CACCTGGAATCAATCTCC 3‘.
IE4RA 5 ‘ GACACATTCTTGGAAGCGATGTCG 3‘Nl 5' GCTGGGTAGTCCCCACCTTTCTAGA 3‘.α Fl 5' CTGAAGCATGTAAGCACATCTCTTGC 3‘α Rl 5' GCTTCGAGATCAGTAGTGGTACG 3‘<2.新穎潛伏感染特異性基因蛋白質(zhì)SITH-I的功能分析>為了研究蛋白質(zhì)SITH-I的功能，進(jìn)行蛋白質(zhì)SITH-I在細(xì)胞內(nèi)所結(jié)合的宿主蛋白 質(zhì)的鑒定。其方法為將蛋白質(zhì)SITH-I作為誘餌蛋白(bait)，并通過酵母雙雜交法進(jìn)行 人類胎兒腦cDNA庫的篩選。將其結(jié)果示于圖4。圖4中，A是通過SITH-I與CAML的結(jié) 合，而可見較強(qiáng)的半乳糖苷酶表達(dá)的酵母的克隆體。B是通過西方墨點(diǎn)法與抗CAML抗 體的染色，來確認(rèn)可以通過體外的沉淀實(shí)驗(yàn)(pull-down assay)并利用在大腸菌中表達(dá)的 GST-SITH-I融合蛋白質(zhì)使在大腸菌中表達(dá)的CAML共沉淀的圖。C是表示通過西方墨點(diǎn)法與 抗FLAG抗體的染色確認(rèn)利用表達(dá)載體將貼有FLAG標(biāo)簽的SITH-I與CAML導(dǎo)入到293T細(xì) 胞中，通過抗CAML抗體可以使SITH-I共沉淀的結(jié)果的圖。如圖4所示，顯示蛋白質(zhì)SITH-I 與 CAML(Calcium-signalmodulating cyclophilin ligand)強(qiáng)力結(jié)合(圖 4)。有報(bào)告稱，CAML是在淋巴球或腦內(nèi)表達(dá)較強(qiáng)的蛋白質(zhì)，已知其具有使細(xì)胞內(nèi)鈣濃 度上升的功能。因此，對(duì)蛋白質(zhì)SITH-I是否經(jīng)由CAML使細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升進(jìn)行了研究。具 體而言，利用抗SITH-I抗體與抗CAML抗體，通過熒光抗體法對(duì)SITH-I獲得表達(dá)的星形膠 質(zhì)細(xì)胞樣神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞株(U373)與未處理的U373細(xì)胞進(jìn)行染色。其結(jié)果為如果使蛋白 質(zhì)SITH-I在星形膠質(zhì)細(xì)胞株(U373)中獲得表達(dá)，則可觀察到CAML的量與未處理的U373 細(xì)胞相比有所增加(圖5)。此外，U373細(xì)胞中的CAML表達(dá)水平在未處理時(shí)并不強(qiáng)，但通過 使SITH-I表達(dá)，觀察到CAML的量增加。另外，利用毒胡蘿卜素(TGjhapsigargin)來刺激使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將SITH-1 導(dǎo)入星形膠質(zhì)細(xì)胞樣神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞株(U373)中所得者、以及僅導(dǎo)入載體者，再使用Fura2 測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鈣濃度。其結(jié)果為實(shí)際測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鈣濃度時(shí)，與僅導(dǎo)入載體的細(xì)胞相比， SITH-I獲得表達(dá)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)鈣濃度會(huì)因毒胡蘿卜素(TG)刺激而顯著上升 (圖 6)。由此可知，蛋白質(zhì)SITH-I具有通過在蛋白質(zhì)HHV-6的潛伏感染時(shí)進(jìn)行表達(dá)，并使細(xì)胞內(nèi)CAML的量增加，而使星形膠質(zhì)細(xì)胞樣神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞株的細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升的功能。<3. SITH-I與精神障礙的關(guān)系>其次，對(duì)SITH-I與精神障礙的關(guān)系進(jìn)行了調(diào)查。將其結(jié)果示于圖7。針對(duì)SITH-I 的抗體與非專利文獻(xiàn)5等中所報(bào)告的潛伏感染基因蛋白質(zhì)不同，與慢性疲勞癥候群患者本 身的關(guān)聯(lián)性較低，但在具有精神障礙的患者中有高比率的抗體攜帶者。伴有精神癥狀的慢 性疲勞癥候群(CFS)患者主要表現(xiàn)出抑郁癥狀的情況居多，而兒童的CFS患者主要表現(xiàn)出 異常的興奮性的情況居多。雙極I型表示癥狀較強(qiáng)的躁郁病患者。另外，健康成人幾乎未 攜帶針對(duì)SITH-I的抗體。此外，以SITH-I獲得表達(dá)的293T細(xì)胞作為抗原，通過熒光抗體法來測(cè)定抗體效價(jià)。<4.通過SITH-I的表達(dá)制作精神障礙模型小鼠>利用腺病毒載體或者逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，將在SITH-I的開放閱讀框上游附加有 于星形膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中進(jìn)行特異性表達(dá)的膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP，glial fibrillary acidic protein)啟動(dòng)子所成者注射到新生小鼠的腦內(nèi)。在約4 5周后觀察 小鼠的行動(dòng)，確認(rèn)通過導(dǎo)入SITH-I而建立了精神障礙模型小鼠。有關(guān)精神障礙的試驗(yàn)，是采用在抑郁癥或躁郁癥等的觀察中經(jīng)常使用的通過懸尾實(shí)驗(yàn)與強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。具體而言，首先進(jìn)行利用腺病毒載體而導(dǎo)入有SITH-I的小 鼠的懸尾實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果為導(dǎo)入有SITH-I的小鼠的不動(dòng)時(shí)間顯著減少，可知此小鼠為躁狂 狀態(tài)(圖8)。繼而，進(jìn)行利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體而導(dǎo)入有SITH-I的小鼠的強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。其 結(jié)果為以高效價(jià)(high)導(dǎo)入有SITH-I逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的小鼠與作為對(duì)照的導(dǎo)入有增強(qiáng) 型綠色熒光蛋白(EGFP, enhanced green fluorescence protein)基因的小鼠相比，不動(dòng)時(shí) 間延長(zhǎng)，顯示呈抑郁狀態(tài)。相對(duì)于此，可知以低效價(jià)(low)導(dǎo)入有SITH-I逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 的小鼠的不動(dòng)時(shí)間縮短，且呈躁狂狀態(tài)(圖9)。即，在懸尾實(shí)驗(yàn)中觀察到躁狂狀態(tài)，而通過 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)觀察到躁狂狀態(tài)與抑郁狀態(tài)。另外，通過導(dǎo)入SITH-I時(shí)的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的 效價(jià)觀察到躁狂狀態(tài)與抑郁狀態(tài)兩者的情況，不僅表示此模型可以成為抑郁癥與躁郁癥兩 者的模型，還提示SITH-I的表達(dá)量會(huì)影響精神障礙的癥狀。此外，通過測(cè)定前脈沖抑制(Pr印ulse inhibition)來研究在躁郁癥或精神分裂 癥中可觀察到異常的恐怖反應(yīng)異常。具體而言，對(duì)利用腺病毒載體而導(dǎo)入有SITH-I的小 鼠的恐怖反應(yīng)(前脈沖抑制)進(jìn)行了調(diào)查。其結(jié)果如圖10所示可知導(dǎo)入有SITH-I的小 鼠的前脈沖抑制顯著減少，且小鼠對(duì)于刺激非常過敏。因此，在恐怖反應(yīng)中也觀察到顯著異 常，顯示SITH-I對(duì)與精神障礙相關(guān)的腦功能有較大影響。<5.通過SITH-I的表達(dá)制作精神障礙模型小鼠2>其次，將SITH-I的開放閱讀框連結(jié)在GFAP啟動(dòng)子下，并利用腺病毒載體使其在 小鼠的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，3周后通過轉(zhuǎn)輪活動(dòng)(Wheelrurming activity)(轉(zhuǎn)輪旋 轉(zhuǎn))測(cè)定自主活動(dòng)量。將結(jié)果示于圖11。如該圖所示，SITH-I獲得表達(dá)的小鼠與作為對(duì)照的EGFP (enhancedgreen fluorescence protein)獲得表達(dá)的小鼠相比，自主活動(dòng)亢進(jìn)，顯示變成躁狂狀態(tài)的傾向。<6.通過SITH-I的表達(dá)制作精神障礙模型小鼠3>接著，將SITH-I的開放閱讀框連結(jié)在GFAP啟動(dòng)子下，并利用慢病毒載體使其在小 鼠的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，8周后通過轉(zhuǎn)輪活動(dòng)(轉(zhuǎn)輪旋轉(zhuǎn))測(cè)定自主活動(dòng)量。將其結(jié) 果示于圖12。 如該圖所示，SITH-I獲得表達(dá)的小鼠與作為對(duì)照的EGFP (enhancedgreen fluorescence protein)獲得表達(dá)的小鼠相比，自主活動(dòng)量受到抑制，顯示變成抑郁狀態(tài)的 傾向。 如圖11與圖12所示，可知相同的SITH-I表現(xiàn)出躁狂狀態(tài)與抑郁狀態(tài)這一相反的 現(xiàn)象。認(rèn)為其原因是存在以下的不同1)腺病毒載體中的SITH-I的表達(dá)量多于慢病毒載 體；2)由于慢病毒載體可以使SITH-I更長(zhǎng)時(shí)間地獲得表達(dá)，因此觀察到SITH-I長(zhǎng)時(shí)間表 達(dá)的影響。
這些通過SITH-I的表達(dá)可以制作躁狂狀態(tài)與抑郁狀態(tài)的模型小鼠的事實(shí)，與從 郁癥患者與抑郁癥患者兩者體內(nèi)檢測(cè)出針對(duì)SITH-I的抗體這一臨床結(jié)果相符。
<7.以SITH-I作為指標(biāo)的診斷〉針對(duì)利用SITH-I的診斷也可用于并發(fā)抑郁癥的其他疾病的診斷行了調(diào)查。將其 結(jié)果示于圖13。如圖13所示利用抗SITH-I抗體的診斷對(duì)于抑郁癥、躁郁癥、慢性疲勞癥候群之 類的情緒障礙具有非常高的特異性，在迄今為止的研究中，意外地發(fā)現(xiàn)所述診斷對(duì)于克羅 恩病患者也顯示較高的陽性率。但對(duì)于類似疾病的潰瘍性大腸炎未顯示出陽性。但是，已知克羅恩病是“抑郁癥狀”的并發(fā)非常多的疾病，圖13中的抗SITH-I抗 體陽性者是克羅恩病本身是重癥，且產(chǎn)生抑郁癥狀的并發(fā)的例子。此例子表示，在作為被分 類為自身免疫性疾病的慢性疾病的克羅恩病患者中，即使是表現(xiàn)出抑郁癥狀的重癥例，也 可以進(jìn)行利用SITH-I的“抑郁癥”的診斷，可以認(rèn)為利用抗SITH-I抗體的檢查“也可用于 由非精神科疾病的其他疾病所引起的抑郁癥的診斷”。[產(chǎn)業(yè)上的利用可能性]如上所述，本發(fā)明的基因以及蛋白質(zhì)是參與皰疹病毒的潛伏感染的因子，通過以 其作為指標(biāo)，可以客觀判定否患有精神障礙。因此，本發(fā)明不僅在學(xué)術(shù)、基礎(chǔ)研究上有價(jià)值， 在臨床醫(yī)學(xué)上也非常有意義。因此，在各方面具有產(chǎn)業(yè)上的可利用性。
權(quán)利要求
一種基因，其特征在于其編碼以下(a)或(b)中所記載的蛋白質(zhì)，(a)由序列編號(hào)1所示的氨基酸序列所構(gòu)成的蛋白質(zhì)，(b)由序列編號(hào)1的氨基酸序列中，一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸經(jīng)取代、缺失、插入及/或附加的氨基酸序列所構(gòu)成，且具有使細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升的活性的蛋白質(zhì)。
2.一種基因，其特征在于其含有序列編號(hào)2所示的堿基序列作為開放閱讀框區(qū)域。
3.一種基因，其特征在于其是在嚴(yán)格的雜交條件下與由下述堿基序列構(gòu)成的DNA雜 交，且編碼具有使細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升的活性的蛋白質(zhì)，其中，所述堿基序列與由序列編號(hào)2 所示的堿基序列所構(gòu)成的DNA互補(bǔ)。
4.一種蛋白質(zhì)，其特征在于其由根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的基因所編碼。
5.一種蛋白質(zhì)，其特征在于其是以下(a)或(b)中所記載的蛋白質(zhì)，(a)由序列編號(hào)1所示的氨基酸序列所構(gòu)成的蛋白質(zhì)，(b)由序列編號(hào)1的氨基酸序列中，一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸經(jīng)取代、缺失、插入及/或附加的 氨基酸序列所構(gòu)成，且具有使細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升的活性的蛋白質(zhì)。
6.一種抗體，其特征在于其可識(shí)別根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的蛋白質(zhì)。
7.—種重組表達(dá)載體，其特征在于其包含根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的基因。
8.一種轉(zhuǎn)化體，其特征在于其是導(dǎo)入根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的基因或根 據(jù)權(quán)利要求7所述的重組表達(dá)載體而成。
9.一種基因檢測(cè)工具，其特征在于使用根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的基因中 的至少一部分堿基序列或其互補(bǔ)序列作為探針。
10.一種檢測(cè)工具，其特征在于使用具有根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的蛋白質(zhì)中的至少 一部分氨基酸序列的多肽作為探針。
11.一種判定方法，其特征在于判定被實(shí)驗(yàn)對(duì)象生物體內(nèi)是否存在根據(jù)權(quán)利要求6所 述的抗體。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的判定方法，其特征在于所述判定方法是使用根據(jù)權(quán)利要 求4或5所述的蛋白質(zhì)或者其部分片段，從免疫學(xué)上檢測(cè)是否存在根據(jù)權(quán)利要求6所述的 抗體。
13.根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的判定方法，其特征在于所述判定方法是使用從被實(shí) 驗(yàn)對(duì)象生物體內(nèi)分離出的生物學(xué)樣本來進(jìn)行。
14.一種判定套件，其特征在于其是用于根據(jù)權(quán)利要求11至13中任一項(xiàng)所述的判定方法。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的判定套件，其特征在于其包含選自以下所示的(i) (iii)的物質(zhì)中的至少一種物質(zhì)，(i)根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的蛋白質(zhì)，(ii)(i)的部分片段，(iii)將⑴或( )固定化而得到的工具。
16.一種診斷方法，其診斷被實(shí)驗(yàn)者是否有精神障礙，其特征在于包括判定步驟，使用根據(jù)權(quán)利要求11至13中任一項(xiàng)所述的判定方法，判定所述被實(shí)驗(yàn)者體 內(nèi)是否存在根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗體；以及判斷步驟，在所述判定步驟中判定存在根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗體時(shí)，判斷所述被實(shí)驗(yàn)者患有精神障礙。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的診斷方法，其特征在于所述診斷方法是使用從被實(shí)驗(yàn)者 體內(nèi)分離出的生物學(xué)樣本來進(jìn)行。
18.—種診斷方法，其診斷被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否有精神障礙，其特征在于包括判定步驟，使用根據(jù)權(quán)利要求11至13中任一項(xiàng)所述的判定方法，判定所述被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 體內(nèi)是否存在根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗體；以及判斷步驟，在所述判定步驟中判定存在根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗體時(shí)，判斷所述被實(shí) 驗(yàn)動(dòng)物有精神障礙。
19.一種診斷套件，其特征在于其是用于根據(jù)權(quán)利要求16至18中任一項(xiàng)所述的診斷方法。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的診斷套件，其特征在于包含選自以下所示的(i) (iii) 的物質(zhì)中的至少一種物質(zhì)，(i)根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的蛋白質(zhì)，(ii)(i)的部分片段，(iii)將⑴或( )固定化而得到的工具。
21.—種模型動(dòng)物的判定方法，其判定被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否可用作精神障礙的模型動(dòng)物，其 特征在于包括診斷步驟，通過根據(jù)權(quán)利要求18所述的診斷方法，診斷所述被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否有精神障 礙；以及判定步驟，在所述診斷步驟中，以被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有精神障礙的情況作為指標(biāo)，判定所述被 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可用作精神障礙的模型動(dòng)物。
22.—種模型動(dòng)物，其特征在于其是導(dǎo)入根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的基因、 此基因產(chǎn)物、或者根據(jù)權(quán)利要求7所述的重組表達(dá)載體而成。
23.—種篩選方法，其篩選精神治療藥物的候選物質(zhì)，其特征在于包括 對(duì)精神障礙的模型動(dòng)物給予被實(shí)驗(yàn)物質(zhì)的步驟；通過根據(jù)權(quán)利要求18所述的診斷方法，診斷所述模型動(dòng)物的精神障礙是否得到治愈 或改善的步驟；以及以所述模型動(dòng)物的精神障礙得到治愈或改善作為指標(biāo)，判定所述被實(shí)驗(yàn)物質(zhì)是精神治 療藥物的候選物質(zhì)的步驟。
全文摘要
本發(fā)明的蛋白質(zhì)以及基因是參與皰疹病毒的潛伏感染的因子。在約50％的精神障礙患者體內(nèi)檢測(cè)出針對(duì)此因子的抗體，而在健康者體內(nèi)幾乎未檢測(cè)出此種抗體。另外，導(dǎo)入有SITH-1的小鼠表現(xiàn)出躁郁癥或抑郁癥樣的精神障礙。因此，基于所述事實(shí)，可以提供一種能夠客觀地判定精神障礙的方法以及精神障礙模型動(dòng)物。
文檔編號(hào)C07K14/03GK101809153SQ200880108759
公開日2010年8月18日 申請(qǐng)日期2008年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月27日
發(fā)明者小林伸行, 近藤一博 申請(qǐng)人:日本煙草產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社;株式會(huì)社威魯斯醫(yī)科學(xué)研究所