專利名稱：一種5′－核苷三磷酸鈉鹽的結(jié)晶方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分離純化工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種利用5’-核苷三磷酸水溶液生產(chǎn)高純5’-核苷三磷酸鈉晶體的結(jié)晶方法。
背景技術(shù)：
5’-核苷三磷酸(ATP、CTP、GTP、UTP，以下簡稱UTP)是重要的磷?；衔铮呛怂岷铣傻闹苯忧绑w、重要的輔酶和能量載體，在細胞的生命代謝中起著十分重要的作用，其鈉鹽臨床上可用于心、腦、血管和神經(jīng)等疾病的治療和輔助治療，也是合成核苷酸衍生物的重要原料。
目前商業(yè)得到的5’-核苷三磷酸主要是凍干粉的形式(歐洲專利EP 1 362 862 A1)，純度低于85％，這種凍干產(chǎn)品在正常室溫環(huán)境下極易吸濕和潮解，從而限制了它的應用范圍和用量，同時對產(chǎn)品的包裝和運輸提出了更高的要求。中國專利CN99113707.8提出用乙醇沉淀法，經(jīng)過濾和真空干燥得到5’-核苷三磷酸。該方法操作簡單，但產(chǎn)品收率不高，更重要的是成品質(zhì)量無法保證，乙醇沉淀大大加劇了初級非均相成核，導致產(chǎn)品粉狀無定性，吸濕性強，穩(wěn)定性差。應國清等于2004年在5’-胞苷三磷酸的分離純化中采用加入3倍乙醇，于冰箱靜置過夜的方法結(jié)晶，液譜純度僅有75％。
5’-核苷三磷酸在水溶液中的溶解度都很大，介穩(wěn)區(qū)相當寬，常溫下采用有機溶劑溶析結(jié)晶，晶核的誘導期會很長。同時結(jié)晶溶液中由于含有少量無機磷酸、磷酸核糖等極性雜質(zhì)以及無機鹽，在5’-核苷三磷酸鈉鹽晶核形成和生長過程中均表現(xiàn)出復雜特性，極易出現(xiàn)油狀物或粘膠物而無法結(jié)晶。
另外，5’-核苷三磷酸水溶液容易分解形成相應的二磷酸酯和單磷酸酯(中國專利CN 1238012A)，因此5’-核苷三磷酸溶液的穩(wěn)定性也是結(jié)晶過程中需要注意的關(guān)鍵問題。由于5’-核苷三磷酸鈉鹽溶液的pH范圍隨著溶質(zhì)自身的濃度變化而變化，另外，雜質(zhì)的存在也影響著溶液pH值。通過無機鈉鹽有效控制pH盡量接近生理環(huán)境，不僅有利于溶液穩(wěn)定性提高，而且有效改善了5’-核苷三磷酸溶液的微觀離子環(huán)境。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對目前5’-核苷三磷酸常規(guī)溶析方法結(jié)晶困難，產(chǎn)品質(zhì)量差、收率較低的缺點，提供一種利用5’-核苷三磷酸水溶液生產(chǎn)高純5’-核苷三磷酸鈉晶體的結(jié)晶方法。
本發(fā)明的目的可以通過以下措施來達到一種5’-核苷三磷酸鈉鹽的結(jié)晶方法，該方法是在pH值為5.0～9.5和質(zhì)量百分數(shù)為25～60％濃度的5’-核苷三磷酸水溶液中，加入溶質(zhì)質(zhì)量百分數(shù)1～10％的無機鈉鹽和起始5’-核苷三磷酸水溶液體積0.5～10倍的溶析劑，結(jié)晶溫度控制在15℃～40℃溫度范圍中，攪拌轉(zhuǎn)速控制在20～200rpm，結(jié)晶完全后抽濾，乙醇洗滌，真空干燥，即得5’-核苷三磷酸鈉鹽。
所述的結(jié)晶方法，其中無機鈉鹽指醋酸鈉、碳酸鈉、硫酸鈉、氯化鈉中的一種或多種。
所述的結(jié)晶方法，其中溶析劑指乙醇、甲醇、丙酮、乙醚等有機溶劑中的一種或多種。
所述的結(jié)晶方法，其中pH值優(yōu)選為6.5～8.0。
所述的結(jié)晶方法，其中結(jié)晶溫度控制優(yōu)選在20℃～35℃。
所述的結(jié)晶方法，其中溶析劑加入量優(yōu)選為起始5’-核苷三磷酸水溶液體積的1～4倍。
所述的結(jié)晶方法，其中溶析劑的加入方式為一次性加入方式或流加方式。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明提供的5’-核苷三磷酸鈉鹽結(jié)晶方法，最終產(chǎn)品質(zhì)量能明顯改善，結(jié)晶收率得到穩(wěn)定提高，并且通過控制結(jié)晶工藝條件和流場狀態(tài)可以獲得5’-核苷三磷酸鈉鹽晶體，操作簡單重復性好，適合5’-核苷三磷酸的工業(yè)化結(jié)晶。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點1、結(jié)晶產(chǎn)品粒徑均勻，純度超過96％。由于無機鈉鹽的加入可以有效地控制結(jié)晶過程的酸堿度，影響5’-核苷三磷酸的電離平衡，對其鈉鹽晶體成核與生長的微觀環(huán)境有極大地改善，確保最終產(chǎn)品高純質(zhì)量和良好的藥用性質(zhì)，產(chǎn)品吸濕性得到明顯改善。
2、結(jié)晶收率穩(wěn)定在90％以上。由于鈉離子的同離子效應影響，結(jié)晶收率得到穩(wěn)定提高。通過合理控制結(jié)晶工藝條件和流場狀態(tài)可以得到5’-核苷三磷酸鈉鹽粒狀晶體，有效改善后序的抽濾和洗滌狀況，進一步保證了最終的產(chǎn)品質(zhì)量和結(jié)晶收率。
3、工藝穩(wěn)定，重復性好。結(jié)晶操作時間短，生產(chǎn)過程在常溫下進行，減少了結(jié)晶過程中5’-核苷三磷酸的生物降解和色素雜質(zhì)增加，而且無需特殊的加熱和冷卻裝置，節(jié)約投資成本，操作過程更加易于控制，重復性好。
4、安全性高。采用合適的有機溶劑作為溶析劑，可以確保最終產(chǎn)品的微生物指標要求。
5、成品美觀。利用本方法結(jié)晶5’-核苷三磷酸，其鈉鹽產(chǎn)品為粒狀晶體，顆粒大小均勻，光澤度好，呈流沙狀。
具體實施例方式
以下實施例將對本發(fā)明作進一步說明，但對本發(fā)明沒有限制。
實施例1將濃度為100g/L的5’-尿苷三磷酸水溶液兩份，各10L，分別采用常規(guī)溶析結(jié)晶和本專利制備方法進行結(jié)晶。前者用氫氧化鈉直接調(diào)pH至8.5，緩慢加入乙醇10L，后者用氫氧化鈉調(diào)至pH7.0，加入醋酸鈉30g和乙醇10L。兩者結(jié)晶工藝條件一致，都控制在25℃，攪拌轉(zhuǎn)速70rpm。結(jié)晶后將懸濁液分別抽濾，用85％的乙醇洗滌，真空干燥。表1為兩種結(jié)晶體系產(chǎn)品質(zhì)量和結(jié)晶收率比較。
表1 兩種結(jié)晶體系產(chǎn)品質(zhì)量和結(jié)晶收率比較

實施例2將濃度為300g/L的5’-尿苷三磷酸水溶液50L，用氫氧化鈉調(diào)至pH7.0，加入醋酸鈉400g和乙醚75L，在20℃下控制攪拌速度100rpm。結(jié)晶后將懸濁液抽濾，用85％的乙醇洗滌所得的白色晶體，真空干燥，可以得到5’-尿苷三磷酸鈉晶體16.5kg。成品檢測純度為96.3％，水分9.8％，最后結(jié)晶收率為91.2％。檢測結(jié)果見表2。
表2 成品質(zhì)量檢測分析結(jié)果C9H12N2O15P3Na3(分子量為550.1)

<p>2.1名稱KNT-1、KNT-2和加替沙星。
2.2溶劑KNT-1的溶劑為注射用葡萄糖生理鹽水，其余兩個化合物的溶劑均為注射用葡萄糖溶液。
3動物Beagle犬，6只，體重6-9kg。
4劑量4.1劑量設(shè)置50mg/kg4.2給藥容積200ml/犬5給藥途徑靜滴，靜滴時間大約1.5小時。
6方法單次靜滴給藥。
7結(jié)果

利提出的制備方法可以穩(wěn)定保證5’-胞苷三磷酸鈉鹽的結(jié)晶收率和產(chǎn)品質(zhì)量。
表4 攪拌轉(zhuǎn)速對5’-胞苷三磷酸鈉晶體顆粒分布的影響

實施例5將濃度為100g/L的5’-腺苷三磷酸水溶液6L，用氫氧化鈉調(diào)至pH7.5，加入氯化鈉45g和乙醇12L，待體系均勻穩(wěn)定后等分3份，每份6L。分別放置在20℃、25℃、30℃水浴中結(jié)晶，攪拌轉(zhuǎn)速都控制在100rpm。結(jié)晶后將懸濁液抽濾，乙醇洗滌，真空干燥。表5給出了5’-腺苷三磷酸鈉產(chǎn)品粒度分布。
表5 溫度對5’-腺苷三磷酸鈉晶體顆粒分布的影響

溫度對5’-腺苷三磷酸結(jié)晶的影響較大，尤其是對5’-核苷三磷酸鈉晶體顆粒大小的影響。結(jié)晶溫度從20℃增加到30℃，而晶體顆粒可以從125μm增加到191μm，因此，可以通過調(diào)節(jié)結(jié)晶溫度的方法來生產(chǎn)不同顆粒大小的晶體。另外，本專利提出的制備方法可以穩(wěn)定保證5’-腺苷三磷酸鈉鹽的結(jié)晶收率和產(chǎn)品質(zhì)量。
權(quán)利要求
1.一種5’-核苷三磷酸鈉鹽的結(jié)晶方法，其特征是在pH值為5.0～9.5和質(zhì)量百分數(shù)為25～60％濃度的5’-核苷三磷酸水溶液中，加入溶質(zhì)質(zhì)量百分數(shù)1～10％的無機鈉鹽和起始水溶液體積0.5～10倍的溶析劑，結(jié)晶溫度控制在15℃～40℃溫度范圍中，攪拌轉(zhuǎn)速控制在20～200rpm，結(jié)晶后抽濾，乙醇洗滌，真空干燥，即得5’-核苷三磷酸鈉鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)晶方法，其特征是無機鈉鹽指醋酸鈉、碳酸鈉、硫酸鈉、氯化鈉中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)晶方法，其特征是溶析劑指乙醇、甲醇、丙酮、乙醚等有機溶劑中的一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)晶方法，其特征是pH值為6.5～8.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)晶方法，其特征是結(jié)晶溫度控制在20℃～35℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)晶方法，其特征是溶析劑加入量為起始5’-核苷三磷酸水溶液體積的1～4倍。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)晶方法，其特征是溶析劑的加入方式為一次性加入方式或流加方式。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種5′－核苷三磷酸鈉鹽的結(jié)晶方法。該方法是在pH值為5.0～9.5和質(zhì)量百分數(shù)為25～60％濃度的5′－核苷三磷酸水溶液中，加入溶質(zhì)質(zhì)量百分數(shù)1～10％的無機鈉鹽和起始5′－核苷三磷酸水溶液體積0.5～10倍的溶析劑，結(jié)晶溫度控制在15℃～40℃溫度范圍中，攪拌轉(zhuǎn)速控制在20～200rpm，結(jié)晶后抽濾，乙醇洗滌，真空干燥，即得5′－核苷三磷酸鈉鹽。根據(jù)本發(fā)明方法得到的最終產(chǎn)品質(zhì)量能明顯改善，結(jié)晶收率得到穩(wěn)定提高，并且通過控制結(jié)晶工藝條件和流場狀態(tài)可以獲得大小可控的5′－核苷三磷酸鈉鹽晶體，操作簡單重復性好，適合5′－核苷三磷酸鈉的工業(yè)化結(jié)晶。
文檔編號C07H19/20GK1861625SQ20061008538
公開日2006年11月15日 申請日期2006年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月12日
發(fā)明者應漢杰, 呂浩, 趙谷林 申請人:南京工業(yè)大學