專利名稱：N－α－(2,4,6－三異丙基苯基磺酰基)－3－羥基脒基－(L)－苯丙氨酸－4－乙氧基羰基 ...的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及可用作藥劑的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和/或其鹽的新晶體變型體(kristalline Modifikationen)，以及含有所述新晶體變型體的藥物組合物和藥物用途。
背景技術：
來自已知化學名稱為N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基-羰基-piperazid的化合物的本發(fā)明新晶體變型體是絲氨酸蛋白酶尿激酶的有效抑制劑，因此特別適于治療與尿激酶有關的疾病，例如腫瘤和轉移，尤其適于口服應用。游離堿形式被記為WX-671。
尿激酶型的纖溶酶原激活物(uPA)在腫瘤侵入和轉移形成中起著關鍵作用(Schmitt等人，J.Obst.Gyn.21(1995)，151-165)。uPA在眾多不同類型的腫瘤細胞中表達(Kwaan，Cancer Metastasis Rev.11(1992)，291-311)，并與腫瘤相關性uPA受體(uPAR)結合，在那里發(fā)生纖溶酶原活化為纖溶酶。纖溶酶能夠使胞外基質(ECM)的各種成分如纖連蛋白、層粘連蛋白和IV型膠原蛋白發(fā)生降解。還能激活幾種其它ECM降解性酶，尤其是基質-金屬蛋白酶。大量腫瘤相關的uPA與癌癥患者的較高轉移風險有關(Harbeck等人，Cancer Research62(2002)，4617-4622)。因此，抑制uPA的蛋白水解活性對于抗腫瘤轉移的治療來說是一個好的出發(fā)點。
以前已經(jīng)報道過一些活性和選擇性的尿激酶抑制劑。例如EP 1098 651公開了芐脒型uPA抑制劑，WO 01/96286和WO 02/14349公開了芳基胍型uPA抑制劑。這些合成抑制劑的共同特征是由脒基和/或胍基組成的堿性基團。
國際專利申請WO 03/072559公開了WX-671作為合成尿激酶抑制劑N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid時的中間產(chǎn)物。WO 03/072559還公開一種以游離堿或以與酸形成的鹽形式制備化合物WX-671的方法。具體的鹽，尤其是硫酸氫鹽和硫酸鹽形式?jīng)]有被提及。同樣沒有描述結晶方法。在所述方法中，游離堿WX-671以無定形產(chǎn)物形式得到，該產(chǎn)物是熱輕微不穩(wěn)定的和吸濕性的，并且具有不合適的過濾和干燥性能。由于該原因，所以不適于大規(guī)模制備，必須首先防熱和防潮。
WO 2004/011449同樣公開了制備苯丙氨酸衍生物的方法，該衍生物也可以以鹽例如無機酸鹽或者有機酸鹽存在。所制得的一種化合物是WX-671。該文也沒有暗示所公開化合物還可以以穩(wěn)定的晶體形式得到。
PCT/EP2004/005682公開了作為尿激酶抑制劑的羥基胺化合物和羥基胍。所公開的藥物尤其包括WX-671作為活性物質，并且所述活性物質可以以鹽，例如以鹽酸鹽或硫酸氫鹽或者以有機酸鹽存在。對于在該專利中要求保護的藥物，在口服給藥時可產(chǎn)生較好的生物利用度。不過該公開文本沒有公開所述尿激酶抑制劑的硫酸鹽化合物。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和/或其鹽的晶體變型體，所述晶體變型體相對于現(xiàn)有技術的化合物具有有利的性能。
本發(fā)明提供N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和/或其鹽的晶體變型體。
根據(jù)本發(fā)明，發(fā)現(xiàn)了上述尿激酶抑制劑的新晶體變型體，該晶體變型體相對于該化合物的無定形形式具有明顯的優(yōu)點。本發(fā)明的晶體變型體在加工、貯存和配制中具有顯著優(yōu)點。
令人驚訝地，化合物N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和/或其鹽可以結晶，而這在本發(fā)明之前是不可能的，因此在其性能上超過了現(xiàn)有技術的無定形化合物。因此本發(fā)明晶體變型體的特征在于具有很小的吸濕性。此外，所述晶體變型體非常耐分解，因此還適于較長時間的貯存。此外，本發(fā)明的晶體變型體具有改善的過濾和干燥性能。此外，N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid及其鹽的晶體變型體還理想地適于配制藥物組合物。
如文中所使用的，WX-671表示N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid的游離堿。WX-671.1表示所述化合物的硫酸氫鹽，WX-671.2表示所述化合物的硫酸鹽。
如開頭已經(jīng)提及的，WX-671及其鹽的本發(fā)明的變型體主要是晶體的。在本發(fā)明之前還不能以晶體形式制備這種羥基脒化合物?，F(xiàn)有技術中已經(jīng)公開的化合物也是不可結晶的。
N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid及其鹽的本發(fā)明晶體變型體優(yōu)選包括硫酸氫鹽(WX-671.1)和硫酸鹽(WX-671.2)，以及游離堿(WX-671)。
本發(fā)明的晶體變型體可以包括游離堿和鹽的混合物或者鹽的混合物。本發(fā)明的晶體變型體優(yōu)選各自包括游離堿或硫酸鹽或硫酸氫鹽作為晶體變型體。特別優(yōu)選地，本發(fā)明的晶體變型體包括各晶體變型體的單晶。
通過X射線衍射法研究本發(fā)明的晶體變型體，并優(yōu)選具有表3.1(對硫酸鹽WX-671.2而言)、表7.1(對硫酸氫鹽WX-671.1而言)和表11.1(對游離堿而言)所示的峰。本發(fā)明的晶體變型體主要具有在圖5(對硫酸鹽WX-671.2而言)、13(對硫酸氫鹽WX-671.1而言)和19(對游離堿而言)中所示的峰。
如以下實施例所述，除了X射線衍射法分析外，還可以進行熱分析研究(差示掃描量熱法，DSC，和熱重量分析法，TGA)。在此表明，硫酸氫鹽WX-671.1的晶體化合物在約175℃-195℃的溫度下分解，更準確地說，在自約185℃起的范圍內發(fā)生分解(加熱速率為2K/分鐘)。
本發(fā)明的WX-671.2晶體變型體優(yōu)選具有摩爾比約2∶1的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和硫酸根-陰離子，其中所述比值在1.5～2.5∶1的范圍內變化。優(yōu)選的比值為約1.25～2.25∶1，更優(yōu)選1.1～2.1∶1，最優(yōu)選的比值為約2∶1。
該WX-671.2的晶體變型體優(yōu)選具有各自由2個分子N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和一個硫酸根-陰離子組成的單元，其中在每個所述單元中，2個分子N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid可以以相同的構象存在，或者它們還可以優(yōu)選地以不同的構象存在。
此外，WX-671.2的晶體變型體優(yōu)選以水合物存在，尤其是以三水合物存在，即每摩爾鹽中有約3摩爾水。該比值自然還可以發(fā)生小的波動，即每摩爾鹽平均可以有2.5至3.5摩爾的水，優(yōu)選2.25至3.25，更優(yōu)選2.2至3.2，更加優(yōu)選2.1至3.1。
實驗表明，N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid的硫酸鹽是熱力學穩(wěn)定的化合物，而與結晶度無關。因此，本發(fā)明還提供N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸鹽的新化合物。非晶體硫酸鹽WX-671.2也適于制備藥物，如以下對該晶體變型體所述。
在WX-671.1的晶體變型體中，N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和硫酸氫根-陰離子優(yōu)選以摩爾比為0.5～1.5∶1存在，更優(yōu)選0.8～1.2∶1，更加優(yōu)選0.9～1.1∶1，更為優(yōu)選約1∶1。
WX-671.1的晶體變型體也可以以水合物存在。
WX-671(游離堿)的晶體變型體優(yōu)選不以水合物存在。不過也可以是水合物形式。
本發(fā)明的晶體變型體任選地可以與合適的藥物助劑和/或載體一起用于制備藥物。在此可以與其他活性物質一起組合給藥，例如其他尿激酶抑制劑，如抗體和/或肽，也可以與化療劑和細胞抑制劑和/或其他細胞抑制性和細胞毒性活性物質一起組合給藥。
因此，本發(fā)明的晶體變型體可以被配制成合適的藥物制劑，例如配制成片劑、包衣片劑、膠囊、錠劑、粉劑、糖漿、懸浮液、溶液等。尤其優(yōu)選用于口服給藥的藥物制劑。
本發(fā)明的晶體變型體適于防治與uPA和/或尿激酶-纖溶酶原激活物受體(uPAR)的病理學過度表達有關的疾病。該晶體變型體例如能夠高效抑制惡性腫瘤的生長和/或擴散以及腫瘤轉移。對此實例為腫瘤疾病，例如乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、宮頸癌、卵巢癌、腎癌、前列腺癌和軟組織肉瘤，尤其是與高轉移率相關的腫瘤。
本發(fā)明的變型體可以單獨使用或者與其他生理上有效的物質組合使用，例如與放療劑組合使用或者與細胞毒性和/或細胞抑制性藥物組合使用，例如化療劑，如順鉑、多柔比星、5-氟尿嘧啶、紫杉醇衍生物和/或其他化療試劑，例如選自烷化劑、代謝拮抗藥、抗生素、表鬼臼毒素和長春花生物堿。同樣也可以與放療和/或外科手術組合使用。
此外，本發(fā)明的晶體變型體對于與uPA有關的其他疾病也是有效的。這類疾病的實例為肺動脈高壓和/或心臟病(例如WO 02/00248)，胃和腸疾病，如炎性腸病，惡變前結腸腺瘤，炎性疾病，如膿毒性關節(jié)炎，或其他疾病，如骨質疏松癥、膽脂瘤、皮膚病和眼病，例如年齡相關性黃斑變性(AMD)，以及病毒或細菌感染，其中在此特別參考在EP-A-0 691 350、EP-A-1 182 207和美國專利US 5,712,291中所述的疾病。
本發(fā)明的另一主題是包含本發(fā)明的晶體變型體作為活性物質的藥物。這種藥物任選還可以包含藥物相容的載體和/或助劑。該藥物可以向人或動物局部給藥、口服給藥、直腸給藥或腸胃外給藥，例如靜脈內、皮下、肌內、腹膜內、或舌下、鼻和/或吸入給藥。合適的給藥劑型為例如片劑、包衣片劑、膠囊、錠劑、小丸劑、粉劑，栓劑、溶液、糖漿、乳液、懸浮液、脂質體、可吸入噴霧劑或透皮系統(tǒng)如藥膏。特別優(yōu)選的藥物組合物是適于口服給藥的，例如還作為緩釋長效制劑。
此外，本發(fā)明還提供本發(fā)明晶體變型體在制備用于防治疾病的藥物組合物中的用途，所述疾病與尿激酶和/或尿激酶受體的病理學過度表達有關。含有本發(fā)明活性物質的這種藥物尤其適于腫瘤治療和/或預防，還尤其適于治療或預防轉移形成，適于治療原發(fā)性腫瘤和繼發(fā)性腫瘤。
本發(fā)明提供了一種在活生物體，特別是人類中抑制尿激酶的可能性，其是通過給予有效量的本發(fā)明變型體而實現(xiàn)的。給藥劑量取決于待治療的疾病的類型和嚴重程度。例如日劑量在以活性物質/體重進行表示時為0.01-100mg/kg，更優(yōu)選0.1-50mg/kg，更優(yōu)選0.5-40mg/kg，更加優(yōu)選1-30mg/kg，更為優(yōu)選5-25mg/kg。
本發(fā)明的另一主題是一種制備N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid鹽的基本上晶體變型體的方法，包括以下步驟(a)提供化合物N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid或其鹽，(b)將來自步驟(a)的化合物或其鹽溶解和/或懸浮在適合形成晶體變型體的溶劑中，(c)分離該晶體變型體。
令人驚訝地表明，WX-671、WX-671.1和WX-671.2的晶體變型體可以采用簡單方式以晶體形式制得。作為起始材料，優(yōu)選使用N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid的鹽，特別優(yōu)選硫酸氫鹽。
不過也可以考慮其他鹽化合物作為形成晶體變型體的起始化合物，例如苯磺酸鹽、鹽酸鹽、甲磺酸鹽、酒石酸鹽等。
優(yōu)選可以使用各種不同的有機溶劑作為步驟(b)的溶劑。合適的例如為水以及各種醇，如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇及其同種型(Isoformen)，如異丙醇、異丁醇等，以及還有二醇，醚，二醇醚，丙酮等。其他合適的溶劑是四氫呋喃(THF)和乙腈。尤其優(yōu)選丙酮和乙腈作為溶劑。
不過也可以使用水作為溶劑。尤其優(yōu)選使用水進行重結晶(參見步驟(d))。
為制備N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid的鹽的晶體變型體，使用游離堿作為起始材料，因此還向步驟(b)中加入合適的鹽或酸，以便得到N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid的各個所希望的鹽。
本發(fā)明方法還可以包括對來自步驟(c)的晶體化合物進行重結晶的另一步驟(d)。這尤其適合于從WX-671.1制備WX-671.2。在此，在步驟(c)中形成的晶體變型體優(yōu)選再次在合適的溶劑或溶劑混合物中進行重結晶。這里也可以使用上述溶劑作為溶劑。尤其優(yōu)選水，或者說優(yōu)選以足夠形成所希望的晶體變型體的水量進行重結晶。水是尤其優(yōu)選的，例如在WX-671.2的情況下，形成水合物(在WX-671.2的情況下形成三水合物)。
將通過以下附圖和實施例更詳細地解釋本發(fā)明。
附圖描述
圖1表示分子A(WX-671.2)的帶有標記圖式的Ortep-Plot(50％)。
圖2表示分子B(WX-671.2)的帶有標記圖式的Ortep-Plot(50％)。
圖3表示由兩個分子WX-671.2和硫酸根陰離子組成的單元的單位晶胞內的獨立分子。
圖4表示使用WX-671.2單晶數(shù)據(jù)的模擬X射線衍射圖。
圖5表示W(wǎng)X-671.2的實驗X射線衍射圖。
圖6a表示W(wǎng)X-671.2的根據(jù)圖4和圖5的模擬X射線衍射樣式和實驗X射線衍射樣式的重疊。
圖6b表示在水中攪拌后WX-671.2的DSC-和TGA-熱分析圖。
圖7顯示了WX-671.2的晶體數(shù)據(jù)和結構精細化。
圖8表示W(wǎng)X-671.2的鍵長[]和角度[°]。
圖9表示W(wǎng)X-671.2的扭角[°]。
圖10表示W(wǎng)X-671.1(變型體A)的DSC-和TGA-熱分析圖。
圖11表示W(wǎng)X-671.1樣品(中間相B)的DSC-和TGA-熱分析圖。
圖12表示W(wǎng)X-671.1的中間相C的DSC-和TGA-熱分析圖。
圖13表示W(wǎng)X-671.1的變型體A的X射線衍射圖。
圖14表示W(wǎng)X-671.1的中間相B的X射線衍射圖。
圖15表示W(wǎng)X-671.1的中間相C的X射線衍射圖。
圖16表示游離堿WX-671的無定形起始物質的DSC-和TGA-熱分析圖。
圖17表示在冰箱中從乙腈中結晶的游離堿WX-671樣品的DSC-和TGA-熱分析圖。
圖18表示在冰箱中從乙腈中結晶之后的游離堿WX-671的顯微鏡照片。
圖19表示在冰箱中從乙腈中結晶之后的游離堿WX-671的X射線衍射圖。
圖20表示22℃下游離堿WX-671的水蒸氣吸著等溫線。
實施例實施例1N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid的各種鹽的制備通過將6.0g WX-671溶于50ml丙酮中而制備這些鹽。所使用的酸在沒有稀釋情況下以25％過量加入其中，并在室溫攪拌2小時。
結晶條件表1.1
MsOH甲磺酸；BsOH苯磺酸在第二步驟中，鹽在合適的溶劑中懸浮7天，過濾，并在室溫下干燥。
結晶度研究方法X射線衍射法(XRD)；顯微鏡法表1.2
吸濕性研究方法貯存1周/85％相對濕度；熱重量分析(TGA)表1.3
實施例2WX-671.2(硫酸鹽)的結晶和單晶X射線結構分析N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸鹽的新形式是通過將化合物WX-671的硫酸氫鹽(WX-671.1)懸浮于水中并通過分離所形成的晶體化合物而得到的。
以兩種不同的方式得到晶體WX-671.2a)約50mg WX-671.1懸浮于約0.5ml水中。該懸浮液在室溫下靜置。6天后過濾該懸浮液，并將殘留物在室溫下在空氣中干燥。
b)約0.2g WX-671.1懸浮于約2ml水中。該懸浮液在25℃下?lián)u動。3天后過濾出殘留物，并使WX-671.2的晶體在室溫下在空氣中干燥。
從在此制得的晶體材料(WX-671.2)中測定X射線結構。在此也得到單晶。
使用Bruker-Nonius衍射儀測定晶體結構，該衍射儀配備有Proteum-CCD表面檢測儀、FR591旋轉陽極(帶有CuKα-輻射)、作為單色儀的Montel鏡、和Kryoflex低溫設備(T＝90K)。全方位數(shù)據(jù)測量Ω和Φ掃描。所使用的程序數(shù)據(jù)采集Proteum V.1.37(Bruker-Nonius2002)，數(shù)據(jù)簡化Saint+版本6.22(Bruker-Nonius2001)，和吸收校正SADABS V.2.03(2002)。晶體結構解析是通過直接方法如在SHELXTL版本6.10(Sheldrick，Universitt Gttingen)中實施并通過XP-程序可視化而實現(xiàn)的。
通過微分傅里葉合成而定位缺失的原子，并添加到原子列表上。就所有測量的強度，用程序SHELXTL版本6.10(Sheldrick，Universitt Gttingen，2000)對F2進行″最小二乘精細化″。在考慮到″各向異性置換參數(shù)″下對所有非氫原子進行″精細化″。
表2.1
*H.D.Flack，Acta Cryst.，1983，A39，876-881H.D.Flack，G.Bernardinelli，Acta Cryst.，1999，A55，908-915H.D.Flack，G.Bernardinelli，J.Appl.Cryst.，2000，33，1143-1148X射線結構分析的結果顯示在圖1-3和圖7-9中。
實施例3WX-671.2(硫酸鹽)的X射線衍射法使用Debye-Scherrer衍射儀STOE STADI-P得到X射線衍射圖，該衍射儀配備有位置敏感性檢測儀(PSD，5°)、鍺[1 1 1]-一次單色儀(primr Monochromator)和CuKα 1.6kW陶瓷X射線管(1.5406)。所使用的程序Stoe WinXpow，版本2.03(2003)。
表3.1WX-671.2的X射線衍射法-峰列表
實施例4WX-671.1(硫酸氫鹽)的重結晶將WX-671.1溶于不同極性的溶劑(異丙醇、乙醇、甲醇)中。過濾溶液，分成四份，并以不同速度除去溶劑。
WX-671.1以其晶體形式(變型體A)和兩種中間相B和C存在。其在自約185℃(變型體A和中間相B)或156℃(中間相C)起分解。為了檢測變型體A的結晶度，進行X射線結構測定。變型體A在室溫下是熱力學穩(wěn)定的形式。
實施例5WX-671.1(硫酸氫鹽)的差示掃描量熱法(DSC)和熱重量分析法(TGA)在該實施例中通過差示掃描量熱法(DSC)和熱重量分析法(TGA)繪制熱分析圖。圖10表示在25℃下在異丙醇中攪拌一周的WX-671.1(變型體A)的DSC-和TGA-熱分析圖。自約180℃起發(fā)生分解(在相應溫度范圍內，DSC-熱分析圖中的放熱峰，TGA-熱分析圖中的質量損失)。分解溫度強烈依賴于加熱速率，其在加熱速率為2K/分鐘下在DSC-量熱器中測得。所繪制出的DSC-概要測量值是以2K/分鐘的加熱速率獲取的。相應地記錄在更高溫度下的分解。
在150℃下沒有記錄到明顯的質量損失。在分解峰之前，可以通過逐步熔化或部分轉化而引起不太顯著的吸熱效應。
圖11表示為了該篩選所使用的WX-671.1樣品(中間相B)的DSC-熱分析圖。變型體A和中間相B是熱分析相同的。從異丙醇(室溫/冰箱)和乙醇(室溫)中得到中間相A。
圖12表示在室溫下進行從甲醇中的結晶實驗之后，活性物質的DSC-和TGA-熱分析圖(中間相C)。其自約156℃起發(fā)生分解(加熱速率為2K/分鐘)。直到175℃記錄的質量損失為4.5％。在DSC-熱分析圖中，在分解峰之前沒有吸熱效應。該形式以比變型體A和中間相B更差的有序狀態(tài)存在。其是在從甲醇(室溫，冰箱)和乙醇(冰箱)中的結晶實驗之后形成的。記錄這些樣品的質量損失為4.5至4.8重量％。關于每個活性物質分子2分子水的質量損失，化學計量值為4.7％。不過所述形式不是水合物。
實施例6WX-671.1(硫酸氫鹽)的熱顯微鏡法拍攝WX-671.1樣品的熱顯微鏡照片(未畫出)。觀察團聚體，沒有顯示出特別的外部特征?；钚晕镔|自約197℃起發(fā)生分解，形成氣泡。與DSC-量熱器中觀察到的分解溫度的差別是由不同的加熱速率造成。從溶劑中得到非特定形式的WX-671.1?；钚晕镔|部分表現(xiàn)出雙折射，如對于晶體和介晶物質而言是特征性的。
實施例7WX-671.1(硫酸氫鹽)的X射線衍射法變型體A的X射線衍射圖(圖13)顯示出對于晶體相而言為特征性的樣式，其在較大的2θ角處有大量尖銳峰。為了確認存在晶體相而進一步研究，例如進行X射線結構分析。
在中間相B的X射線衍射圖(圖14)中，在約5°的2θ角觀察到較尖銳的峰以及在約8°至約25°之間觀察到強度較小的其他反射。峰的位置和數(shù)目類似變型體A。在小θ角的情況下存在的峰表明存在分子的長程有序，低強度的峰證實了存在短程有序。由此可以推斷，中間相B或者以晶體形式或者以無定形形式，甚至可能以中間相存在。
中間相C的X射線衍射圖(圖15)同樣表現(xiàn)出對于介晶化合物而言為特征性的樣式在小2θ角的情況下的強峰。X射線衍射圖證明，中間相C不是晶體相，并且由于存在長程有序，也不能歸入無定形相。與中間相B的X射線衍射圖比較表明，中間相C可能形成具有較小有序度的相。這暗示了，在中間相B的情況下更顯著和更強的反射在約8°和約25°的2θ角之間。
通過在室溫下在異丙醇中攪拌一周，中間相B轉化為變型體A。通過在水∶乙醇(1∶1)中攪拌，其不發(fā)生變化。通過機械應力(用研缽研磨，以9kbar施壓)，其同樣不發(fā)生轉化。
表7.1WX-671.1(硫酸氫鹽)的晶體變型體的X射線衍射法-峰列表
實施例8WX-671(游離堿)的重結晶以熱分析方法(DSC，TGA)，通過X射線衍射法以及通過從有機溶劑中結晶，就多形性對于活性物質WX-671進行研究。WX-671結晶成一種變型體(變型體A)。活性物質表現(xiàn)出很小的結晶傾向。
變型體A在室溫下是熱力學穩(wěn)定的形式。在進行多形性研究后，才可能最終評價WX-671的多形性和假多形性。
WX-671溶于不同極性的溶劑(四氫呋喃、乙腈、甲醇)中。將溶液過濾，分成四份，并以不同的速度使活性物質結晶。在室溫下干燥后記錄熱分析圖(DSC，TGA)和X射線衍射圖。
用于多形性篩選的起始物質可以主要以晶體形式制得。在約-18℃的冰箱中，從乙腈中成功結晶出來。
實施例9WX-671(游離堿)的差示掃描量熱法(DSC)和熱重量分析法(TGA)
圖16表示無定形起始物質的DSC-和TGA-熱分析圖。同樣如大部分其余經(jīng)研究的樣品的DSC-/TGA-熱分析圖那樣，在45℃至85℃的范圍內表現(xiàn)出熱效應。在多形性篩選的范圍內，不能對該熱效應進行歸類。在此可以是玻璃轉化。由此可以作出關于熔點為約190℃的晶體形式的推斷。所述物質自約155℃起發(fā)生分解，與加熱速率無關。由于該原因，不能確定晶體樣品的熔點(GBA 190903-8c)。因此，無定形物質和晶體物質的熱分析圖很大部分相同(圖16和圖17)。
實施例10WX-671(游離堿)的顯微鏡法在冰箱中，從乙腈中結晶出棱柱形的WX-671(圖18)。從其他溶劑中不能結晶出活性物質或者僅能結晶出很少量，從熔融體中不能結晶。
實施例11WX-671(游離堿)的X射線衍射法圖19表示，在冰箱中從乙腈中結晶之后，活性物質的X射線衍射圖(變型體A)。
表11.1WX-671(游離堿)的X射線衍射法-峰列表樣品是在冰箱中從乙腈中結晶出來的。
實施例12WX-671(游離堿)的吸濕圖20表示22℃下WX-671的水蒸氣吸著等溫線。無定形活性物質從0％相對濕度至95％相對濕度連續(xù)吸收水。干燥時又放出這些水。在等溫線的大多數(shù)點處，在各個停留時間內沒有達到平衡狀態(tài)。樣品重量升高或者進一步減少。在該實驗中沒有提示說明形成水合物。
實施例13WX-671(游離堿)的穩(wěn)定性通過在室溫下在二異丙基醚和乙醇/水(1∶1)中攪拌一周，活性物質沒有或者以很少量結晶成變型體A。其沒有轉化為其他多形形式。通過機械應力(用研缽研磨，以9kbar施壓)，同樣沒有發(fā)生轉化，只是結晶度進一步降低。
權利要求
1.N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和/或其鹽的晶體變型體。
2.根據(jù)權利要求1的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體包括N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸鹽的晶體變型體。
3.根據(jù)權利要求2的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體包括單晶的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸鹽。
4.根據(jù)權利要求1～3之一的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸鹽的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體根據(jù)X射線衍射法分析主要具有以下峰3.710.312.113.816.419.222.2。
5.根據(jù)前述權利要求之一的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸鹽的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體主要具有按照圖5根據(jù)X射線衍射法分析所測得的峰。
6.根據(jù)權利要求1～3之一的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體包括N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸氫鹽的晶體變型體。
7.根據(jù)權利要求6的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體包括單晶的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸氫鹽。
8.根據(jù)權利要求1和6～7之一的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸氫鹽的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體根據(jù)X射線衍射法分析主要具有以下峰4.310.120.221.424.0。
9.根據(jù)權利要求1和6～8之一的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸氫鹽的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體主要具有按照圖13根據(jù)X射線衍射法分析所測得的峰。
10.根據(jù)權利要求1和6～9之一的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸氫鹽的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體自175℃-195℃的溫度起發(fā)生分解(DSC，加熱速率為2K/分鐘)。
11.根據(jù)權利要求1～3之一的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體包括作為游離堿的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid的晶體變型體。
12.根據(jù)權利要求11的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體包括單晶的作為游離堿的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid的晶體變型體。
13.根據(jù)權利要求1和11～12之-的作為游離堿的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體根據(jù)X射線衍射法分析主要具有以下峰3.26.410.219.7。
14.根據(jù)權利要求1和11～13之一的作為游離堿的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體主要具有按照圖19根據(jù)X射線衍射法分析所測得的峰。
15.根據(jù)前述權利要求之一的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體具有摩爾比為1.5～2.5∶1的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和硫酸根-陰離子。
16.根據(jù)權利要求15的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體具有摩爾比為2∶1的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和硫酸根-陰離子。
17.根據(jù)前述權利要求之一的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體具有摩爾比為0.5～1.5∶1的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和硫酸氫根-陰離子。
18.根據(jù)權利要求17的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體具有摩爾比為1∶1的N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和硫酸氫根-陰離子。
19.根據(jù)前述權利要求之一的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體包括分別由約兩個分子N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和一個硫酸根-陰離子形成的單元。
20.根據(jù)權利要求19的晶體變型體，其特征在于，所述兩個分子N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid在單元中以不同構象存在。
21.根據(jù)前述權利要求之一的晶體變型體，其特征在于，所述晶體變型體每摩爾鹽約含有三摩爾水。
22.一種制備N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和/或其鹽的基本上為晶體的變型體的方法，包括以下步驟(a)提供化合物N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid或其鹽，(b)將來自步驟(a)的化合物或其鹽溶解和/或懸浮在適合形成晶體變型體的溶劑中，(c)分離該晶體變型體。
23.根據(jù)權利要求22的方法，還包括以下步驟(d)來自步驟(c)的晶體變型體在合適的溶劑或溶劑混合物中進行重結晶。
24.根據(jù)權利要求22或23的方法，其中在步驟(a)中提供N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid-硫酸氫鹽。
25.藥物，含有根據(jù)權利要求1～21之一的晶體變型體作為活性物質，任選與藥物相容性的載體和/或助劑一起。
26.根據(jù)權利要求25的藥物，其特征在于，所述藥物是可口服、鼻、吸入、直腸和/或腸胃外給藥的藥物。
27.N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid和/或其鹽的晶體變型體在制備用于防治與尿激酶和/或尿激酶受體的病理學過度表達有關的疾病的藥物組合物中的用途。
28.根據(jù)權利要求27的用途，用于腫瘤治療和/或預防。
29.根據(jù)權利要求28的用途，用于治療或預防轉移形成。
30.根據(jù)權利要求28的用途，用于治療原發(fā)性腫瘤。
31.根據(jù)權利要求27～30之一的用途，其中制備可口服給藥的組合物。
32.根據(jù)權利要求31的用途，所述組合物以片劑、包衣片劑、膠囊、小丸劑、粉劑、栓劑、溶液、糖漿、乳液、脂質體和/或懸浮液形式制得。
全文摘要
本發(fā)明涉及可用作藥劑的N－α－(2，4，6－三異丙基苯基磺?；?－3－羥基脒基－(L)－苯丙氨酸－4－乙氧基羰基piperazid和/或其鹽的新晶體變型體(kristalline Modifikationen)，以及含有所述新晶體變型體的藥物組合物和藥物用途。
文檔編號C07D295/185GK1989118SQ200580024944
公開日2007年6月27日 申請日期2005年11月24日 優(yōu)先權日2004年11月26日
發(fā)明者A·戈魯尼比爾格, J·倫茲 申請人:威麗克斯股份公司