專利名稱：關(guān)白附總生物堿提取物的制備方法與應(yīng)用的制作方法
發(fā)明目的在不降低藥效基礎(chǔ)上，為充分利用我國現(xiàn)有關(guān)白附資源，經(jīng)過研究，從關(guān)白附中分離得到了總生物堿提取物，其中生物堿含量達(dá)50％以上，主要成分為關(guān)附甲素和活性相當(dāng)甚至更強(qiáng)的同系物，將關(guān)白附總生物堿提取物制得制劑為臨床提供價(jià)格低廉、安全有效、服用方便的抗心律失常藥物；藥理實(shí)驗(yàn)初步研究了總生物堿提取物的抗心律失常的作用。
背景技術(shù)：
關(guān)白附總生物堿提取物是我國首次從黃花烏頭Aconitum coreanum(Lèvl.)Rapaics塊根關(guān)白附中提取得到的總生物堿含量大于50％的有效部位；關(guān)白附為屬常用中藥，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明關(guān)白附中主要成分關(guān)附甲素、關(guān)附庚素、關(guān)附壬素等具有抗心律失常、抗炎和鎮(zhèn)痛作用。鹽酸關(guān)附甲素已開發(fā)成我國的原創(chuàng)新藥，是一種療效顯著的新型抗心律失常藥物。由于關(guān)附甲素提取得率為0.1％左右，提取工藝周期較長，原料藥損耗大，未能充分利用關(guān)白附資源。經(jīng)過研究，首次從關(guān)白附中分離得到了總生物堿提取物，其中生物堿含量達(dá)50％以上，主要成分為關(guān)附甲素和活性更強(qiáng)的同系物。藥理實(shí)驗(yàn)初步研究了總生物堿提取物的抗心律失常的作用；在不降低藥效基礎(chǔ)上，充分利用了我國現(xiàn)有關(guān)白附資源，將總生物堿制得制劑為臨床提供價(jià)格低廉、安全有效、服用方便的抗心律失常藥物，具有很好的開發(fā)前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為充分利用我國現(xiàn)有關(guān)白附資源，為臨床提供價(jià)格低廉、安全有效、服用方便的抗心律失常藥物提供了如下技術(shù)方案關(guān)白附總生物堿提取物的制備方法及其在治療抗心律失常等方面的應(yīng)用；關(guān)白附總生物堿提取物的制備方法取黃花烏頭Aconitum coreanum(Lèvl.)Rapaics干燥塊根，粉碎，用有機(jī)溶劑回流提取2～4次，合并提取液，回收乙醇并濃縮至適量，加酸酸化至pH2～5，乙酸乙酯萃取2～5次，得提取物A和酸水液B，酸水液B加堿堿化至pH8～11，再用乙酸乙酯萃取2～5次，得提取物C。將提取物C加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，依次用水、50％～95％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓蒸餾至干，即得總生物堿提取物；提取用的有機(jī)溶劑可以是正丁醇、異丙醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚、乙醚；酸化的溶劑可以是鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸、甲酸、醋酸、丁酸或它們的混合物；
萃取用的有機(jī)溶劑可以是正丁醇、乙酸乙酯、甲酸乙酯、甲酸乙酯、氯仿、丙酮、石油醚、乙醚；堿化的溶劑可以是氨水、碳酸鈉、碳酸氫納或它們的混合物；大孔吸附樹脂可以選用D101、D605、D140、D100等型號(hào)。
試驗(yàn)儀器與材料薄層色譜硅膠GF254(10～40μ)，青島海洋化工廠生產(chǎn)。色譜用溶劑均為AR級(jí)，南京化學(xué)試劑廠生產(chǎn)；D101型大孔樹脂，南開大學(xué)化工廠；藥材采自遼寧西豐地區(qū)，由沈陽藥科大學(xué)吳維春教授鑒定為毛茛科烏頭屬植物黃花烏頭(Aconitum coreanum(Lèvl.)Rapaics)的塊根。
關(guān)白附總生物堿提取物的藥理活性研究1.材料關(guān)白附總生物堿提取物，實(shí)驗(yàn)室自制；鹽酸利多卡因注射液，山東省泗水希爾康制藥有限公司；實(shí)驗(yàn)用大鼠和家兔由中國藥科大學(xué)動(dòng)物室提供。
2.關(guān)白附總生物堿對(duì)電刺激家兔心臟誘發(fā)的心律失常的保護(hù)作用家兔12只，體重2.2±0.5kg，分為兩組，每組6只，♂♀各半，一組為關(guān)白附總生物堿組，另一組為利多卡因組。烏拉坦1.2g/kg耳緣iv麻醉，在人工呼吸下開胸暴露心臟，并用顧氏心動(dòng)杠桿連于壓力換能器，從JL-3型三道生理儀描記心臟舒縮曲線.將刺激電極置于心尖部(正極)與房室交界處左側(cè)(負(fù)極)并連于DGQ-2型刺激器，以波寬lms、頻率20Hz的方法刺激10s，每隔2min刺激一次，逐次增加刺激強(qiáng)度(mV).測(cè)得兔心致室顫值作為對(duì)照值.然后由兔耳靜脈分別注入關(guān)白附總生物堿或利多卡因，不同劑量給藥相隔10min，于每次給藥后5min測(cè)定致顫閾，與給藥前進(jìn)行比較(見表1).結(jié)果表明iV關(guān)白附總生物堿4，8mg/kg均能明顯提高兔心致室顫值(P＜0.05，P＜0.01)，且隨劑量增大而作用加強(qiáng)，說明關(guān)白附總生物堿對(duì)電刺激兔心引起的室顫有明顯提高致顫閾作用.在iv8mg/kg后30-40min內(nèi)致顫閾又回復(fù)至給藥前水平。
表1關(guān)白附總生物堿對(duì)兔心電致顫閡值的影響(N＝6)(X±S)

*P＜0.05，**P＜0.01(與給藥前比較)
3.關(guān)白附總生物堿對(duì)烏頭堿誘發(fā)大鼠室性心律失常的保護(hù)作用大鼠40只，體重200±15g，♂♀各半，隨機(jī)分為5組，用1.2g/kg烏拉坦ip麻醉后，分別由頸外靜脈給以關(guān)白附總生物堿4，8，16mg/kg及利多卡因15mg/kg。對(duì)照組iv等量生理鹽水。2分鐘后用WSQ-A型微量輸液器由頸外靜脈恒速注入烏頭堿溶液(1μg/ml，0.2ml/min)，并由心電示波器監(jiān)視出現(xiàn)室早，室速，室顫時(shí)記錄烏頭堿的用量，結(jié)果表明中，高劑量的關(guān)白附總生物堿能明顯增加烏頭堿誘發(fā)室早，室速，室顫的劑量，其作用隨關(guān)白附總生物堿劑量的加大而增加(P＜0.05，P＜0.01)，說明iv關(guān)白附總生物堿對(duì)烏頭堿誘發(fā)的室性心律失常有明顯的保護(hù)作用(見表2)。
表2iv關(guān)白附總生物堿對(duì)烏頭堿誘發(fā)大鼠室性心律失常的保護(hù)作用

*p＜0.05，**p＜0.01藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明1.iv關(guān)白附總生物堿(4，8mg/kg)均能明顯提高電刺激家兔心臟引起室顫閾值(P＜0.05，P＜0.01)。
2.iv關(guān)白附總生物堿(8，16mg/kg)均對(duì)烏頭堿誘發(fā)的大鼠室性心律失常有明顯的保護(hù)作用(P＜0.05，P＜0.01)。
關(guān)白附總生物堿或者其鹽可以與一般輔助劑和/或賦形劑混合，制成各種劑型，用于治療或預(yù)防心律失常，劑型可以是肌肉注射劑、靜脈注射劑、粉針、凍干粉、膠囊、顆粒劑或片劑。
本發(fā)明技術(shù)方案首次對(duì)傳統(tǒng)中藥黃花烏頭塊根關(guān)白附中的總生物堿提取物進(jìn)行制備研究，藥理實(shí)驗(yàn)表明關(guān)白附總生物堿具有抗心律失常作用。該方法具有簡(jiǎn)便快速，分離效率高的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)促進(jìn)植物活性成分的開發(fā)和傳統(tǒng)中草藥的現(xiàn)代化研究，達(dá)到了良好效果。
實(shí)施例1取黃花烏頭Aconitum coreanum(Lèvl.)Rapaics干燥塊根粉末500g，95％乙醇回流提取2次，回收提取液，得到浸膏84g，加2％鹽酸酸化至pH4，用乙酸乙酯萃取3次，得萃取液A和酸水母液，酸水母液用氨水堿化至pH10，再用乙酸乙酯萃取3次，得萃取液B和堿水母液，將萃取液B濃縮，得到浸膏23g，將浸膏加于已處理好的D605大孔吸附樹脂柱上，依次用水、80％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓蒸餾至干，即得總生物堿提取物15g。
實(shí)施例2取黃花烏頭Aconitum coreanum(Lèvl.)Rapaics干燥塊根粉末600g，甲醇回流提取3次，回收提取液，得到浸膏95g，加醋酸酸化至pH3，用氯仿萃取2次，得萃取液A和酸水母液，酸水母液用碳酸納堿化至pH11，再用氯仿萃取3次，得萃取液B和堿水母液，將萃取液B濃縮，得到浸膏35g，將浸膏加于已處理好的D140大孔吸附樹脂柱上，依次用水、甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，減壓蒸餾至干，即得總生物堿提取物24g。
根據(jù)授權(quán)號(hào)為CN1039198C的專利申請(qǐng)，并按照藥劑學(xué)的基本方法，關(guān)白附總生物堿可被制備成肌肉注射劑、靜脈注射劑、粉針、凍干粉、膠囊、顆粒劑或片劑。
權(quán)利要求
1.關(guān)白附總生物堿提取物制備方法取黃花烏頭Aconitum coreanum(Lèvl.)Rapaics干燥塊根，粉碎，用有機(jī)溶劑回流提取2～4次，合并提取液，回收乙醇并濃縮至適量，加酸酸化至pH2～5，乙酸乙酯萃取2～5次，得提取物A和酸水液B，酸水液B加堿堿化至pH8～11，再用乙酸乙酯萃取2～5次，得提取物C。將提取物C加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，依次用水、50％～95％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓蒸餾至干，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的關(guān)白附總生物堿提取物的制備方法，其特征在于提取用的有機(jī)溶劑可以是正丁醇、異丙醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚、乙醚；酸化的溶劑可以是鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸、甲酸、醋酸、丁酸或它們的混合物；萃取用的有機(jī)溶劑可以是正丁醇、乙酸乙酯、甲酸乙酯、甲酸乙酯、氯仿、丙酮、石油醚、乙醚；堿化的溶劑可以是氨水、碳酸鈉、碳酸氫納或它們的混合物；大孔吸附樹脂可以選用D101、D605、D140、D100等型號(hào)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的關(guān)白附總生物堿提取物在治療抗心律失常的藥物的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含有關(guān)白附總生物堿提取物的藥物，其特征在于該生物堿提取物可以是以游離堿或生理上可接受的鹽的形式存在。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含有關(guān)白附總生物堿提取物的藥物，其特征在于該生物堿提取物或其鹽可以是與一般輔助劑和/或賦形劑混合。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的關(guān)白附總生物堿提取物的藥物，其特征在于劑型可以是肌肉注射劑、靜脈注射劑、粉針、凍干粉、膠囊、顆粒劑或片劑。
全文摘要
在不降低藥效基礎(chǔ)上，為充分利用我國現(xiàn)有關(guān)白附資源，經(jīng)過研究，從關(guān)白附中分離得到了總生物堿提取物，其中生物堿含量達(dá)50％以上，主要成分為鹽酸關(guān)附甲素和活性相當(dāng)甚至更強(qiáng)的同系物，將關(guān)白附總生物堿提取物制得制劑為臨床提供價(jià)格低廉、安全有效、服用方便的抗心律失常藥物；藥理實(shí)驗(yàn)初步研究了總生物堿提取物的抗心律失常的作用。
文檔編號(hào)C07D471/00GK1709892SQ200510040909
公開日2005年12月21日 申請(qǐng)日期2005年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月6日
發(fā)明者劉靜涵, 蔣凱, 楊春華, 湯慶發(fā), 王嚇長 申請(qǐng)人:中國藥科大學(xué)