專利名稱：5'-核苷酸二鈉的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種強(qiáng)力助鮮劑的制備工藝，具體涉及的是一種簡(jiǎn)便易行的5’-核苷酸二鈉的制備工藝的后處理工藝。
背景技術(shù)：
核苷酸及其衍生物在醫(yī)藥，食品，農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域已得到廣泛的應(yīng)用。5’-肌苷酸二鈉和5’-鳥苷酸二鈉均是強(qiáng)力助鮮劑，將二者用于混合味精，其鮮味比一般味精高出40-100倍，而且風(fēng)味更好，該產(chǎn)品投入市場(chǎng)后得到消費(fèi)者的歡迎。胞苷酸二鈉和尿苷酸二鈉可用于補(bǔ)充牛乳中的核酸，以生產(chǎn)出接近人乳的母乳化牛奶，能增強(qiáng)嬰兒的免疫力。
如上所述5’-核苷酸二鈉在食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域都是非常重要的，其制備工藝多年來也有了不斷的發(fā)展，現(xiàn)回顧如下1. 將相應(yīng)的核苷與三氯氧磷在吡啶，三乙胺等堿性介質(zhì)的存在下，在一定極性有機(jī)溶劑如二甲基甲酰胺，二甲基亞砜，乙腈中進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后倒入水中，然后①將此水解液調(diào)至適當(dāng)?shù)腜H值，直接用活性碳柱吸附，堿液洗脫；或②用其他水不溶有機(jī)溶劑抽提水解液中的有機(jī)溶劑，水相調(diào)至適當(dāng)?shù)腜H值，用陰離子交換樹脂柱或活性碳柱進(jìn)行分離精制。(Gulland et al.，J.Chem.Soc.，1940；Tsurushima Masaaki et al.，JP59167599，1984)。
2.將核苷的2’-和3’-位羥基保護(hù)起來，用磷酸三烷基酯作溶劑，與三氯氧磷反應(yīng)，磷?；笤倜摫Ｗo(hù)，成鹽，加乙醇使結(jié)晶析出，再重結(jié)晶得到5’-核苷酸二鈉(Masaharu Yoshikawa et al.，US 3347846，1967)。
3.將相應(yīng)的核苷與三氯氧磷在磷酸三烷基酯中直接磷?；?，反應(yīng)結(jié)束后倒入冰水中，水解液中和后經(jīng)陰離子交換柱吸附，洗脫，濃縮結(jié)晶得到5’-核苷酸二鈉(Masaharu Yoshikawa et al.，US 3413282，1968)。
4.用肌苷和鳥苷的堿金屬鹽，或至少含其中之一的鹽，混合進(jìn)行磷?；?，以磷酸三烷基酯為溶劑。反應(yīng)結(jié)束后倒入冰水中水解，用有機(jī)溶劑萃取磷酸三烷基酯，水溶液經(jīng)活性碳柱吸附，洗脫，濃縮結(jié)晶得到5’-肌苷酸二鈉和5’-鳥苷酸二鈉混合物(Shigemitsu Abe et al.，EP 453597，1991)。
5.將相應(yīng)的核苷與磷酸三烷基酯先反應(yīng)形成一種復(fù)合物，然后加三氯氧磷進(jìn)行磷?；７磻?yīng)結(jié)束后水解，用活性碳柱或離子交換樹脂柱分離提純，最后結(jié)晶出產(chǎn)品(Tomomi Ikemoto et al.，Chem.Pharm.Bull.，1995；Akira Haze et al.，CA2100027，1994)。
以上工藝中1是比較經(jīng)典的酰化反應(yīng)工藝，對(duì)5’-位的選擇性不好，收率受到影響。用吡啶，三乙胺等作催化劑，這類化合物水溶性極好，因此會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的水污染。2是先將核苷的2’-和3’-位羥基保護(hù)起來，再進(jìn)行5’-位的磷?；詈筮€要脫保護(hù)，步驟煩瑣。后來發(fā)現(xiàn)即使不將2’-和3’-位羥基保護(hù)起來，在磷酸三烷基酯溶劑體系中5’-位的磷酰化也有很高的選擇性(3和5)，因此目前5’-核苷酸二鈉的生產(chǎn)工藝中磷?；磻?yīng)均采用在磷酸三烷基酯溶劑體系中進(jìn)行。
盡管磷?；磻?yīng)的工藝有了很大的改善，反應(yīng)后處理工藝卻一直沒有太大的改變將反應(yīng)液倒入冰水中水解，然后要么水解后直接用活性碳柱吸附，堿液洗脫，流出液中有大量有機(jī)溶劑需進(jìn)一步處理；要么將溶劑用水不溶性有機(jī)溶劑萃取出來后，再用活性碳柱或離子交換樹脂柱分離提純。此外還有硼酸硅膠柱分離法(Analytical Biochem.，1982)，離子對(duì)反相置換層析法(Chem.Eng.Sci.，1992)。但以上方法均操作煩瑣，費(fèi)時(shí)多，分離柱再生將產(chǎn)生大量廢水。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)便的5’-核苷酸二鈉的制備工藝，將以往復(fù)雜的操作簡(jiǎn)化，設(shè)備簡(jiǎn)化，并降低消耗，減少污染。
技術(shù)方案本發(fā)明的5’-核苷酸二鈉的制備工藝具體如下a、以核苷為原料，磷酸三烷基酯為溶劑進(jìn)行磷?；磻?yīng)；核苷∶磷酸三烷基酯＝1∶8-20(w/w)，核苷∶三氯氧磷＝1∶1.5-4.0(mol/mol)；b、將磷?；磻?yīng)液在冰鹽水中進(jìn)行水解，得到含有磷酸三烷基酯、水、磷酸、鹽酸、5’-核苷酸以及鹽和少量付產(chǎn)物的水解液；c、水解液經(jīng)靜置自然分層，分離為磷酸三烷基酯層和含有磷酸，鹽酸，5’-核苷酸以及少量付產(chǎn)物的水溶液層；d、將以上水溶液層用氫氧化鈉中和至所有的酸完全成鹽，冷卻過濾除去絕大多數(shù)磷酸鹽，得到含有氯化鈉，5’-核苷酸二鈉和少量付產(chǎn)物、少量磷酸鹽的水溶液；e、將以上水溶液用鹽酸調(diào)至PH＝8，濃縮結(jié)晶即得5’-核苷酸二鈉。
核苷與磷酸三烷基酯進(jìn)行磷?；磻?yīng)時(shí)，反應(yīng)溫度為-10℃～+20℃。
將磷酰化反應(yīng)液在冰鹽水中進(jìn)行水解時(shí)，水解溫度為-5℃～+10℃；鹽水的濃度為5～15％(w/w)，所用的鹽為氯化鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、硫酸鈉中的一種。水解液中的磷酸三烷基酯可經(jīng)靜置自然與水相分層，而不需使用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取。
利用溶解度的差別，將絕大多數(shù)磷酸鹽過濾分離，而不需用層析柱或離子交換柱進(jìn)行分離。當(dāng)水溶液被調(diào)節(jié)至PH≥13時(shí)，由于溶解度的差別，絕大多數(shù)磷酸鹽將從水溶液中析出，并過濾分離。
關(guān)于以磷酸三烷基酯為溶劑進(jìn)行核苷的磷?；磻?yīng)的報(bào)道和專利國外已有許多。如“背景技術(shù)”3，4，5中提到的文獻(xiàn)和專利，這里就不再累述。
有益效果本發(fā)明是提供一種簡(jiǎn)單的5’-核苷酸二鈉的制備工藝，特別是簡(jiǎn)單的后處理工藝，從而降低消耗，減少污染。
磷酰化反應(yīng)結(jié)束后，本發(fā)明者經(jīng)過反復(fù)研究和實(shí)驗(yàn)，改良了以往在冰水中水解的方法，采用冰鹽水進(jìn)行水解，結(jié)果水解液靜置后分層，可直接將水層和有機(jī)溶劑分離，從而免去了用另外水不溶有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取的過程，況且這樣的過程必然增加成本而且會(huì)導(dǎo)致另一種溶劑殘留的問題。本發(fā)明采用的鹽水為5-20％的氯化鈉，磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉或其他無機(jī)鹽溶液。
分離除去磷酸三烷基酯的水解液以往大都是用活性碳柱吸附5’-核苷酸，用水洗去無機(jī)鹽，然后再用堿液脫附，或用離子交換樹脂進(jìn)行分離，最后濃縮結(jié)晶出5’-核苷酸二鈉。本發(fā)明者經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)和分析發(fā)現(xiàn)在一定的酸堿度下，可以利用溶解度的差別很容易地將水解液中的無機(jī)鹽與5’-核苷酸二鈉分離。具體的方法是先在強(qiáng)堿性條件下將磷酸鈉與水解液中的其他成分分離，然后在弱堿性條件下將5’-核苷酸二鈉與水解液中的其他成分分離，從而得到產(chǎn)品。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳述。
實(shí)施例1
將50克肌苷，500克磷酸三乙酯，3.4克水分別加入反應(yīng)釜中，攪拌降溫，于約5℃滴加87.5克三氯氧磷，滴完繼續(xù)反應(yīng)1.5小時(shí)；900克10％的氯化鈉溶液降溫至0℃以下，攪拌下將上述反應(yīng)液倒入其中進(jìn)行水解，1小時(shí)后靜置分層20-60分鐘；水解液自然分為磷酸三乙酯和水溶液層，將水溶液層冷卻下用50％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至PH≥13，于0℃結(jié)晶2-3小時(shí)，過濾；濾得的固體主要為磷酸鈉，濾液用濃鹽酸中和至PH＝8～9，減壓濃縮至剩余約600克，冷卻至0～5℃，過濾；濾得的固體為肌苷酸二鈉粗品，用水重結(jié)晶，得到肌苷酸二鈉。
實(shí)施例226.8克肌苷，32.5克鳥苷，650克磷酸三乙酯，3.6克水分別加入反應(yīng)釜中，降溫，于約5℃滴加92克三氯氧磷，滴完繼續(xù)反應(yīng)3小時(shí)；1000克10％的氯化鈉溶液降溫至0℃以下，攪拌下將上述反應(yīng)液倒入其中進(jìn)行水解，1小時(shí)后靜置分層；水解液自然分為磷酸三乙酯層和水溶液層，將水溶液層冷卻下用50％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至PH≥13，于0℃結(jié)晶2-3小時(shí)，過濾；濾得的固體主要為磷酸鈉，濾液用濃鹽酸中和至PH＝8～9，減壓濃縮至剩余約650克，冷卻至0～5℃，過濾；濾得的固體為肌苷酸二鈉和鳥苷酸二鈉粗品，用水重結(jié)晶，得到肌苷酸二鈉和鳥苷酸二鈉。
權(quán)利要求
1.一種5’-核苷酸二鈉的制備工藝，其特征在于具體的制備工藝如下a、以核苷為原料，磷酸三烷基酯為溶劑進(jìn)行磷酰化反應(yīng)；核苷∶磷酸三烷基酯＝1∶8-20(w/w)，核苷∶三氯氧磷＝1∶1.5-4.0(mol/mol)；b、將磷酰化反應(yīng)液在冰鹽水中進(jìn)行水解，得到含有磷酸三烷基酯、水、磷酸、鹽酸、5’-核苷酸以及鹽和少量付產(chǎn)物的水解液；c、水解液經(jīng)靜置自然分層，分離為磷酸三烷基酯層和含有磷酸，鹽酸，5’-核苷酸以及少量付產(chǎn)物的水溶液層；d、將以上水溶液層用氫氧化鈉中和至所有的酸完全成鹽，冷卻過濾除去絕大多數(shù)磷酸鹽，得到含有氯化鈉，5’-核苷酸二鈉和少量付產(chǎn)物、少量磷酸鹽的水溶液；e、將以上水溶液用鹽酸調(diào)至PH＝8，濃縮結(jié)晶即得5’-核苷酸二鈉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的5’-核苷酸二鈉的制備工藝，其特征在于核苷與磷酸三烷基酯進(jìn)行磷?；磻?yīng)時(shí)，反應(yīng)溫度為-10℃～+20℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的5’-核苷酸二鈉的制備工藝，其特征在于將磷?；磻?yīng)液在冰鹽水中進(jìn)行水解時(shí)，水解溫度為-5℃～+10℃；鹽水的濃度為5～15％(w/w)，所用的鹽為氯化鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、硫酸鈉中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的5’-核苷酸二鈉的制備工藝，其特征在于水解液中的磷酸三烷基酯經(jīng)靜置自然與水相分層。
全文摘要
5’－核苷酸二鈉制備工藝是一種強(qiáng)力助鮮劑的制備工藝，具體涉及的是一種簡(jiǎn)便易行的5’－核苷酸二鈉的制備工藝的后處理工藝。其制備工藝如下以核苷為原料，磷酸三烷基酯為溶劑進(jìn)行磷?；磻?yīng)；將磷?；磻?yīng)液在冰鹽水中進(jìn)行水解，得到含有磷酸三烷基酯、水、磷酸、鹽酸、5’－核苷酸以及鹽和少量副產(chǎn)物的水解液；水解液經(jīng)靜置可自然分層，分為磷酸三烷基酯層和含有磷酸，鹽酸，5’－核苷酸以及少量副產(chǎn)物的水溶液層；將以上水溶液層用氫氧化鈉中和至所有的酸完全成鹽，冷卻過濾除去絕大多數(shù)磷酸鹽，得到含有氯化鈉，5’－核苷酸二鈉和少量副產(chǎn)物、少量磷酸鹽的水溶液；將以上水溶液用鹽酸調(diào)至pH＝8，濃縮結(jié)晶即得5’－核苷酸二鈉。
文檔編號(hào)C07H19/20GK1539846SQ20031010615
公開日2004年10月27日 申請(qǐng)日期2003年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月29日
發(fā)明者金抒, 徐昌洪, 金 抒 申請(qǐng)人:徐昌洪