含有枯草芽孢桿菌的生物有機(jī)肥及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種含有枯草芽孢桿菌的生物有機(jī)肥，特別 適用于茄科類作物根結(jié)線蟲病害防治。 技術(shù)背景
[0002] 根結(jié)線蟲是危害農(nóng)作物的重要病害。在線蟲侵入植物根系后，會在植物的細(xì)根及 粗根各部位產(chǎn)生大小不一的不規(guī)則瘤狀物，即根結(jié)。植物根系在線蟲寄生后，其功能受到破 壞，使植株地上部生長衰弱、變黃，從而影響作物產(chǎn)量。同樣，茄科類作物根結(jié)線蟲病害也是 主要發(fā)生在作物的根部。須根或側(cè)根上產(chǎn)生肥腫畸形瘤狀結(jié)節(jié)，常成糖萌蘆狀；根結(jié)初期為 白色，表面光滑；后期變?yōu)楹稚?，并且表面粗糙；剖開根結(jié)可見乳白色線蟲。病情嚴(yán)重時(shí)，植 株生長不良，植株矮小、萎蔫或枯死。一般發(fā)病地塊減產(chǎn)20%左右，發(fā)病嚴(yán)重地塊減產(chǎn)50% 以上，有的甚至造成絕產(chǎn)。
[0003] 根結(jié)線蟲病害在我國種植茄科類作物的地區(qū)廣有發(fā)生。利用化學(xué)藥物滅殺根結(jié) 線蟲會造成作物農(nóng)藥殘留增加；長期施用會使根結(jié)線蟲產(chǎn)生抗藥性，進(jìn)一步增加防治難度； 而且化學(xué)殺線劑對環(huán)境污染嚴(yán)重，對環(huán)境威脅大、對人畜不安全。為保證植茄科類作物生產(chǎn) 的安全性和農(nóng)業(yè)土地的可持續(xù)性使用，生物防治方法作為一種安全、有效的方法日益受到 重視。
[0004] 近些年根際微生物群落的研宄是根結(jié)線蟲生物防治研宄的熱點(diǎn)之一。目前常采用 的方法是將拮抗菌制成濃縮液體制劑或者符合固體粉劑，在作物移栽前施用。但是由于用 于根結(jié)線蟲防治的菌株在復(fù)雜的土壤生態(tài)因子的影響下，其防治的穩(wěn)定性得不到保證，從 而防治效果不明顯。并且由于侵染不同作物的根結(jié)線蟲的種類不同，需要有針對性的拮抗 菌株；而目前還沒有用于茄科類作物根結(jié)線蟲病害防治的拮抗菌和其作為主要成分的生物 有機(jī)肥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種茄科類作物根結(jié)線蟲病害的拮抗菌和其作為主要成分 的生物有機(jī)肥，通過聯(lián)合作用提高拮抗菌在土壤中定植能力，提高其對根結(jié)線蟲的防治效 果。這對改善茄科作物根際微環(huán)境、促進(jìn)生物防治技術(shù)的發(fā)展具有重要的意義。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案通過以下方法實(shí)施： 枯草芽孢桿菌的復(fù)蘇培養(yǎng)是采用固體LB培養(yǎng)基培養(yǎng)，37°C靜置培養(yǎng)24小時(shí)。固體LB培養(yǎng)基的成分為：瓊脂20g、蛋白胨10g、酵母浸出物5g，NaCl10g，加水至1000mL，pH=7。 將上述混合物，在120°C高溫高壓滅菌處理30分鐘，40°C下冷卻并凝固。
[0007] 將枯草芽孢桿菌單克隆菌落接種到一級液體培養(yǎng)基中，37°c搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為200 轉(zhuǎn)/分鐘，過夜培養(yǎng)后得到液體菌種?？莶菅挎邨U菌的一級液體培養(yǎng)基的成分為：豆餅粉 4g/L，玉米粉 3g/L，Na2HP04 0 . 8g/L，（NH4)2S04 0 . 4g/L，NH4C1 0.15g/L，加水至 1000mL， pH=7。將上述混合物，在120°C高溫高壓滅菌處理30分鐘。
[0008] 將液體菌種接種到二級發(fā)酵培養(yǎng)基中，37°C搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分鐘，過 夜，進(jìn)行放大培養(yǎng)?？莶菅挎邨U菌的二級發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為：豆餅粉6g/L，玉米粉8g/ L，Na2HP04 0 . 8g/L，（NH4)2S04 0 . 4g/L，NH4C1 0.12g/L，CaCl2 0.12g/L，加水至 1000mL， pH=7。將上述混合物，在120°C高溫高壓滅菌處理30分鐘。
[0009] 所述的枯草芽孢桿菌是芽孢桿菌屬的一種，菌體大小為（0. 7~0.8um)X( 2~3 um)，無莢膜，周生鞭毛，能運(yùn)動，革蘭氏染色呈陽性。
[0010] 將通過二級發(fā)酵培養(yǎng)得到的枯草芽孢桿菌二級培養(yǎng)菌液按照重量配比與以下物 質(zhì)混合堆肥，其組成為2~3%枯草芽孢桿菌二級培養(yǎng)菌液（10 9CFU/mL每毫升的菌落形成單 位)、15~25%豆渣、35~45%泥炭、8~12%動物糞便、2~4%木肩、20~30%秸桿。優(yōu)選配方為2%枯 草芽孢桿菌二級培養(yǎng)菌液（10 9CFU/mL)、20%豆渣、40%泥炭、10%雞糞、3%木肩、25%秸桿。在 各物料按照比例混合均勻后，加入一定比例的枯草芽孢桿菌菌液，同時(shí)加入總體積10%的 水進(jìn)行堆捂。每隔5天翻堆，堆捂發(fā)酵30天后若觀察到物料疏松、溫度下降、無明顯異味， 則表明發(fā)酵完全。對發(fā)酵物料取樣，依照國家有機(jī)肥標(biāo)準(zhǔn)NY525-2011檢測。
[0011] 將生產(chǎn)得到的生物有機(jī)肥通過聯(lián)合用藥的方式防治茄科類作物的根結(jié)線蟲。具體 的方法為：將該生物有機(jī)肥作為底肥施用，在移栽時(shí)每株作物施用20~50g。將二級發(fā)酵菌 液稀釋10000倍，在移栽后澆灌每株作物根部20~50mL。將稀釋后的菌液通過噴灌系統(tǒng)在 作物生長期噴施到作物葉面、根部，每30天噴施一次，要求每次噴施均勻浸透。
[0012] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明針對茄科作物，采用聯(lián)合用藥的方式，施用特定的微生 物，并使其在植物根際形成優(yōu)勢菌群，達(dá)到對根結(jié)線蟲較好的防治。
[0013] 具體實(shí)施效果 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。以下所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并 非對本發(fā)明作任何形式上的限制；任何熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案 范圍情況下，都可利用上述揭示的方法和技術(shù)內(nèi)容對本發(fā)明技術(shù)方案做出許多可能的變動 和修飾，或修改為等同變化的等效實(shí)施例。因此，凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案的內(nèi)容，依據(jù) 本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以上實(shí)施例所做的任何簡單修改、等同替換、等效變化及修飾，均仍屬 于本發(fā)明技術(shù)方案保護(hù)的范圍內(nèi)。
[0014] 實(shí)施例1 一種含有枯草芽孢桿菌的生物有機(jī)肥，由枯草芽孢桿菌二級培養(yǎng)菌液2kg、豆渣20kg、 泥炭40kg、雞奠10kg、木肩3kg和稻桿25kg制成。
[0015] 該生物有機(jī)肥通過以下方式制備： (1)分別稱取瓊脂20g、蛋白胨10g、酵母浸出物5g、NaCl10g，溶解在水中，并加水定容 至1000mL，調(diào)節(jié)pH為7。將上述混合物，在120°C高溫高壓滅菌處理30分鐘，冷卻、鋪平 板、凝固后待用。
[0016] (2)將枯草芽孢桿菌在上述的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)，37°C，靜置培養(yǎng)24小 時(shí)。
[0017] (3)分別稱取豆餅粉 4g、玉米粉 3g、Na2HP040. 8g、（NH4)2S040. 4g和NH4C10?15g， 用水溶解，并加水至1000mL，調(diào)節(jié)pH為7。將上述混合物，在120°C高溫高壓滅菌處理30 分鐘，制成一級液體培養(yǎng)基。
[0018] (4)從固體培養(yǎng)基上挑取復(fù)蘇的枯草芽孢桿菌單克隆在一級液體培養(yǎng)基中，37°C 搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)12小時(shí)。
[0019] (5)分別稱取豆餅粉 6g、玉米粉 8g、Na2HP04 0 . 8g、（NH4)2S04 0 . 4g、NH4C1 0? 12g 和CaCl2 0. 12g，溶解在水中，并加水至1000mL，調(diào)節(jié)pH為7。將上述混合物，在120°C高 溫高壓滅菌處理30分鐘，制成二級發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0020] (6)從一級液體培養(yǎng)基中量取培養(yǎng)產(chǎn)物10mL加入到二級發(fā)酵培養(yǎng)基中。37°C搖 床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)12小時(shí)，形成二級培養(yǎng)菌液。
[0021] (7)將制備的枯草芽孢桿菌二級培養(yǎng)菌液2kg，分別與豆渣20kg、泥炭40kg、雞 糞10kg、木肩3kg和秸桿25kg均勻混合，加入總體積10%的水后進(jìn)行堆捂，堆內(nèi)溫度為 30-65C°，每隔5天翻堆，堆捂發(fā)酵30天后觀察到物料疏松、溫度下降30C°以下、無明顯 異味，發(fā)酵完全，制得該生物有機(jī)肥。
[0022] 實(shí)施例2生物有機(jī)肥進(jìn)行檢測和鑒定 按照實(shí)施例1配方制備的生物有機(jī)肥，在同等條件下與傳統(tǒng)型的有機(jī)肥進(jìn)行檢測，對 比兩種肥料各組分的含量。
[0023] 表1含有枯草芽孢桿菌生物有機(jī)肥和傳統(tǒng)有機(jī)肥檢測結(jié)果比較
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 含有枯草芽孢桿菌的生物有機(jī)肥，其特征在于由以下重量配比的原料制成：2~3%枯 草芽孢桿菌二級培養(yǎng)菌液，其中枯草芽孢桿菌10 9CFU/mL、15~25%豆渣、35~45%泥炭、8~12% 動物糞便、2~4%木肩、20~30%秸桿。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有枯草芽孢桿菌的生物有機(jī)肥，其特征在于由以下重量配 比的原料制成：2%枯草芽孢桿菌二級培養(yǎng)菌液、20%豆渣、40%泥炭、10%雞糞、3%木肩、25% 稻桿。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含有枯草芽孢桿菌的生物有機(jī)肥的制備方法，其特征在 于：將上述原料按配比混合均勻后，加入混合原料總體積10%的水，堆捂發(fā)酵；每隔5天翻 堆1次，發(fā)酵30天后，物料疏松、溫度下降，發(fā)酵完全，從而制得該生物有機(jī)肥。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含有枯草芽孢桿菌的生物有機(jī)肥的應(yīng)用，其特征在于： a. 將該生物有機(jī)肥作為底肥在移栽茄科類作物時(shí)使用，在移栽時(shí)每株茄科類作物施生 物有機(jī)肥20~50g; b. 將枯草芽孢桿菌二級培養(yǎng)菌液稀釋10000倍形成的菌液稀釋液，在移栽后澆灌每株 茄科類作物根部20~50mL，將菌液稀釋液在茄科類作物生長期噴施到作物葉面、根部，每30 天噴施一次，要求每次噴施均勻浸透。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種含有枯草芽孢桿菌的生物有機(jī)肥及其應(yīng)用，特別適用于茄科類作物根結(jié)線蟲病害防治，其組成為2~3%枯草芽孢桿菌菌液、15~25%豆渣、35~45%泥炭、8~12%動物糞便、2~4%木屑、20~30%秸稈，優(yōu)選配方為2%枯草芽孢桿菌菌液、20%豆渣、40%泥炭、10%雞糞、3%木屑、25%秸稈。上述原料混合均勻后，加入總體積10%的水，堆捂發(fā)酵。每隔5天翻堆1次，發(fā)酵30天后，制得該生物有機(jī)肥。將該生物有機(jī)肥作為底肥在移栽時(shí)使用，并且將枯草芽孢桿菌菌液稀釋10000倍，在移栽后灌根和噴施在葉面和根部，能夠有效的防治茄科類作物根結(jié)線蟲病害。
【IPC分類】A01C21-00, C05G3-02
【公開號】CN104692957
【申請?zhí)枴緾N201510093102
【發(fā)明人】高宇
【申請人】安徽遠(yuǎn)大機(jī)械制造有限公司
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年3月3日