專(zhuān)利名稱：體液細(xì)胞塊石蠟切片制作的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞及細(xì)胞分子標(biāo)記檢測(cè)方法之一。
背景技術(shù)：
人體的細(xì)胞在致癌因素的作用下，細(xì)胞的性質(zhì)會(huì)逐漸發(fā)生質(zhì)的改變而成為癌細(xì)胞，其細(xì)胞在長(zhǎng)期致癌因素的影響下，細(xì)胞所形成的腫瘤細(xì)胞增加到一定數(shù)量時(shí)就發(fā)展成惡性腫瘤，為了確診病情，以便對(duì)癥下藥，爭(zhēng)取最佳的治療，時(shí)間和效果，目前醫(yī)療部門(mén)對(duì)患者采用的方法之一，是體液內(nèi)查找癌細(xì)胞，一般使用離心機(jī)制作離心沉定涂片，或使用瓊脂包埋細(xì)胞塊石蠟切片，使用涂片離心機(jī)簡(jiǎn)單快捷，但設(shè)備較貴，不能用于免疫組織化學(xué)染色檢查、不能進(jìn)行細(xì)胞分子標(biāo)記物檢測(cè)、不能對(duì)腫瘤病人進(jìn)行更加準(zhǔn)確的檢測(cè)，有時(shí)遇到疑難涂片，很難對(duì)腫瘤類(lèi)型進(jìn)行分類(lèi)，有時(shí)難以區(qū)分是退變的腫瘤細(xì)胞還是增生退變的間皮細(xì)胞，使用瓊脂細(xì)胞塊石蠟包埋切片程序較多，又需要事先制作瓊脂較為麻煩，故需改進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種方法簡(jiǎn)單，不易出差錯(cuò)，結(jié)果穩(wěn)定的體液細(xì)胞塊石蠟切片制作。
本發(fā)明的制作步驟如下1)離心沉淀前處理將體液加入40％的甲醛其比例為體液40％的甲醛等于9∶1，靜止5分鐘至5小時(shí)后，加入NaCl使體液內(nèi)NaCl濃度達(dá)到0.9％，沉淀30分鐘至72小時(shí)；2)離心沉淀將上述沉淀物搖勻后注入到5ml-20ml離心管進(jìn)行離心處理，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為3000-5000轉(zhuǎn)/分，每次時(shí)間為5-15分鐘，每次離心處理后棄去上部清液，再注入沉淀物，反復(fù)進(jìn)行2-8次，直到獲得較多的細(xì)胞數(shù)量；3)固定將上述離心沉淀的產(chǎn)物棄去上部清液注入10％中性福爾馬林，固定2小時(shí)。使組織細(xì)胞的結(jié)構(gòu)保持，保持細(xì)胞塊中細(xì)胞與生活時(shí)的形態(tài)相似，防止細(xì)胞自溶；4)脫水、透明、浸蠟將上述固定處理后的沉淀物用雙層紗布包裹，在生物組織自動(dòng)脫水進(jìn)行脫水，或采用人工脫水，脫水時(shí)酒精溫度為攝氏45度，75％酒精脫水60min，85％酒精脫水120min，95％酒精脫水120min，無(wú)水乙醇I脫水90min，無(wú)水乙醇II脫水90min，無(wú)水乙醇III脫水90min，采用有親水性又有親脂性的二甲苯或TO透明試劑進(jìn)行透明、浸蠟，達(dá)到石蠟浸入細(xì)胞的目的；5)包埋將浸蠟后的細(xì)胞塊冷卻、粉碎，粉碎后混勻、放入石蠟包埋框底部，聚合在一起，緩緩沿著包埋框邊緣加入溶化石蠟這樣使細(xì)胞成份在細(xì)胞塊內(nèi)部更均勻，容易包埋好；6)切片脫蠟切片厚度為3-5微米。進(jìn)行脫蠟具體步驟如下①切片在恒溫干燥箱內(nèi)脫蠟50min，溫度為攝氏60度；②二甲苯I脫蠟10min；③二甲苯II脫蠟5min；④無(wú)水乙醇洗去二甲苯1min×2；⑤95％酒精1min⑥90％酒精1min⑦85％酒精1min；7)HE染色先將脫蠟切片里流水或靜水中沖洗1-3分鐘，按常規(guī)進(jìn)行染色，對(duì)部分細(xì)胞塊切片可根據(jù)需要進(jìn)行免疫組織的化學(xué)染色，其方法與普通免疫組織化學(xué)染色相同，才可以進(jìn)行細(xì)胞分子標(biāo)記物檢測(cè)；最后將采用中性樹(shù)脂膠封片完成制作過(guò)程。
本發(fā)明與其他制作切片相比較，方法簡(jiǎn)單，操作步驟少、不易出差錯(cuò)，結(jié)果穩(wěn)定，不需要特殊的材料和設(shè)備，可與平常的日常工作一起進(jìn)行，切片背景清晰，顯色良好，效果滿意，沒(méi)有瓊脂包埋的那種模糊背景，可以進(jìn)行分子病理方面的工作，進(jìn)行細(xì)胞分子標(biāo)記物檢測(cè)，提高了體液細(xì)胞學(xué)病理診斷的準(zhǔn)確率，提高了應(yīng)用范圍，特別是對(duì)耐藥基因表達(dá)物的檢測(cè)，對(duì)臨床病人的治療效果提供更加準(zhǔn)確的治療指導(dǎo)性意見(jiàn)。
實(shí)施例本發(fā)明對(duì)50例胸腹水檢測(cè)與普通離心涂片結(jié)果相比，查見(jiàn)癌細(xì)胞5例，在腫瘤細(xì)胞檢出方面沒(méi)有顯著差異，但本發(fā)明獲得的腫瘤細(xì)胞更多，可以進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，免疫組織化學(xué)染色的背景清晰，顯色良好，特別是可以進(jìn)行耐藥基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)，對(duì)腫瘤化療具有重要的幫助，并可以通過(guò)免疫組織化學(xué)染色進(jìn)行腫瘤細(xì)胞分類(lèi)提高診斷質(zhì)量，進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記物檢測(cè)，對(duì)于退變的間皮細(xì)胞和退變的腫瘤細(xì)胞有時(shí)難以區(qū)分別，使用免疫組織化學(xué)染色標(biāo)記細(xì)胞的類(lèi)型，可以提高診斷的準(zhǔn)確性，可以進(jìn)行腫瘤分類(lèi)及提供更加準(zhǔn)確的治療指導(dǎo)性意見(jiàn)。
權(quán)利要求
1.一種體液細(xì)胞塊石蠟切片制作其步驟如下1)離心沉淀前處理將體液加入40％的甲醛靜止5分鐘至5小時(shí)后，加入NaCl使體液內(nèi)NaCl濃度達(dá)到0.9％，沉淀30分鐘至72小時(shí)；2)離心沉淀將上述沉淀物搖勻后注入到5ml-20ml離心管進(jìn)行離心處理，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為3000-5000轉(zhuǎn)/分，每次時(shí)間為5-15分鐘，每次離心處理后棄去上清液，再注入沉淀物，反復(fù)進(jìn)行2-8次，直到獲得較多的細(xì)胞數(shù)量；3)固定將上述離心沉淀的產(chǎn)物棄去上部清液注入10％中性福爾馬林，固定2小時(shí)；4)脫水、透明、浸蠟將上述固定處理后的沉淀物用雙層紗布包裹，在生物組織自動(dòng)脫水進(jìn)行脫水，或采用人工脫水，采用有親水性又有親脂性的二甲苯或TO透明試劑進(jìn)行透明、浸蠟；5)包埋將浸蠟后的細(xì)胞塊冷卻、粉碎，粉碎后混勻、放入石蠟包埋框底部，聚合在一起，緩緩沿著包埋框邊緣加入溶化石蠟均勻的包埋好；6)切片脫蠟切片厚度為3-5微米，切片置流水或靜水沖洗1～3分鐘，主要是將甲醛和氯化鈉去除；7)HE染色按常規(guī)進(jìn)行染色部分細(xì)胞塊可根據(jù)需要進(jìn)行免疫組織的化學(xué)染色；最后將采用中性樹(shù)膠封片，完成制片過(guò)程。
全文摘要
一種體液細(xì)胞塊石蠟切片制作，是通過(guò)前處理、離心沉定、固定、脫水透明浸蠟、包埋、切片、HE染色，封片等工序而完成；本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，操作步驟少，不易出差錯(cuò)，結(jié)果穩(wěn)定，不需要特殊的材料和設(shè)備，可與平常的日常工作一起進(jìn)行，HE和免疫組織化染色背景清晰，效果滿意，沒(méi)有瓊脂包埋的那種模糊背景、對(duì)進(jìn)行分子病理方面的工作，提高了體液細(xì)胞學(xué)病理診斷的準(zhǔn)確率。
文檔編號(hào)G09B23/00GK1737526SQ20051002129
公開(kāi)日2006年2月22日 申請(qǐng)日期2005年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月20日
發(fā)明者徐華 申請(qǐng)人:徐華