本發(fā)明屬于環(huán)保領域,具體涉及一種抗生素菌渣殘留抗生素酶解方法,尤其涉及一種使用漆酶對抗生素菌渣殘留抗生素酶解方法。
背景技術:
我國是抗生素類藥物生產大國。在抗生素的發(fā)酵生產中會產生大量的固體廢物,即抗生素菌渣??股鼐闹饕煞譃椋寒a生特定抗生素的微生物菌絲體、提取抗生素過程中加入的試劑、未被完全利用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)基的降解物、發(fā)酵過程中產生的代謝物、未知生長因子以及少量殘留的抗生素??股鼐诼短於逊胚^程中,一方面會造成對大氣的污染,直接影響周圍居住人群的生活;另一方面菌渣殘留的抗生素會進入到土壤中并在土壤中遷移,從而增加微生物的耐藥性,間接影響人類的健康。并且,在2008年,抗生素菌渣作為危險廢物被列入《國家危險廢物名錄》。因此,尋找一種環(huán)保經濟的方法來處理抗生素菌渣是十分必要的。
CN105457968A公開了一種抗生素菌渣的無害化處理方法,其將抗生素菌渣在pH為8~11、溫度90~100℃的條件下滅活。本方法將菌渣滅活,將其中的抗生素降解失去活性,失活的菌渣菌絲體包含有微生物的細胞、助凝劑和剩余營養(yǎng)成分,即可用于有機肥料或飼料添加劑。但如果抗生素降解不完全,易造成抗生素在有機肥料或飼料添加劑中的殘留,間接危害人體健康。
CN101380509A公開了一種大環(huán)內酯類抗生素菌渣無害化處理方法,屬固體廢棄物處理技術領域。該方法采用逆流機械攪拌有效破碎菌絲團,然后利用螺旋霉素無害化處理菌劑對大環(huán)內酯類抗生素菌渣進行無害化處理,將該處理過的抗生素菌渣作為植物肥料添加劑。但如果螺旋霉素無害化處理菌劑如果添加不當,易造成抗生素類的二次污染,且機械攪拌有一定的成本損耗。
因此,希望提出一種能夠快速、經濟、有效的方法去除抗生素菌渣中殘留抗生素。
技術實現要素:
本發(fā)明的目的主要在于提出一種抗生素菌渣處理的新方法,采用漆酶酶對抗生素菌渣進行處理,降低了抗生素菌渣中殘留的抗生素。用于解決抗生素菌渣難處理、成本高、易產生二次污染、處理周期長、操作復雜等技術難題。
本發(fā)明提供一種抗生素菌渣漆酶酶解方法,包括以下步驟:
a、配制濃度為0.001-0.005g/mL的紅霉素標準樣品;
b、配制濃度為0.01-0.04g/mL的抗生素菌渣懸濁液,調節(jié)pH為6-7;
c、在步驟b所述的菌渣懸濁液中加漆酶懸濁液,在溫度為40-55℃,時間為4-6h條件下對抗生素菌渣中殘留的抗生素進行消解;
優(yōu)選的,步驟a中所述的紅霉素標準樣品的效價為920-4600U/mL。
所述的抗生素菌渣選用硫紅霉素菌渣,其來源不作特殊要求。
優(yōu)選的,步驟b中所述菌渣懸濁液的原始效價為73.4-293.7U/mL。
優(yōu)選的,步驟c中漆酶懸濁液的酶濃度為0.005-0.02g/mL。
優(yōu)選的,步驟c中的漆酶,酶活為35-140U/mL。
步驟c中漆酶懸濁液與菌渣懸濁液的比例1:1。
其中,抗生素在瓊脂平板培養(yǎng)基中具有擴散滲透作用,根據擴散定律的推導,抗生素總量的對數值與抑菌圈直徑的平方成線性關系,比較抗生素標準品與檢品的抑菌圈大小,可計算出檢品抗生素的效價。本發(fā)明中,利用已知效價的紅霉素標準品與未知效價的硫紅霉素檢品的抑菌圈進行比較,則可計算出硫紅霉素菌渣的效價。
本發(fā)明與現有技術相比,具有以下顯著優(yōu)點:
本發(fā)明以硫紅霉素菌渣為研究對象,采用漆酶對硫紅霉素菌渣進行處理,克服了專一性酶處理專一性底物的瓶頸。一般而言,酶對所作用的底物有嚴格的選擇性。一種酶僅能作用于一種物質,或一類分子結構相似的物質,促其進行一定的化學反應,產生一定的反應產物,這種選擇性作用稱為酶的專一性。通常酶只能催化一種化學反應或一類相似的反應。我們進行了大量的實驗,尋找硫紅霉素菌渣的處理方法,然而我們吃驚的發(fā)現,漆酶對硫紅霉素菌渣中殘留的抗生素具有優(yōu)異的消解作用,可以使硫紅霉素菌渣的效價降低90%以上。
目前,國內外處理抗生素菌渣的方法主要是,對抗生素菌渣進行高溫強堿滅活處理后作為飼料添加劑或者經過物理化學處理后作為有機肥料,但若化學制劑添加不當易造成二次污染,且若菌渣內殘留的抗生素降解不完全易造成抗生素的殘留,間接危害人體健康,同時高溫強堿處理、物理處理等都有一定的能源損耗,處理成本較高??股鼐附夥椒ㄊ腔诿肝⒘扛咝У奶攸c對抗生素菌渣進行處理,不會產生二次污染,更環(huán)保,且操作簡單,反應周期短,成本低,能夠去除抗生素菌渣中大部分殘留的抗生素,便于抗生素菌渣的后續(xù)處理,同時提供一種酶處理抗生素菌渣的新方法。
具體實施方式
為更清楚的說明本發(fā)明的技術特點,下面將通過具體實施方式對本發(fā)明進行詳細闡述。
本發(fā)明的抗生素菌渣殘留抗生素漆酶酶解技術的研究,采用非專一性酶對抗生素菌渣進行處理,包括以下步驟:
a、配制濃度為0.001-0.005g/mL的紅霉素標準樣品;
b、配制濃度為0.01-0.04g/mL的抗生素菌渣懸濁液,調節(jié)pH為6-7;
c、在該菌渣懸濁液中加漆酶懸濁液,在溫度為40-55℃,時間為4-6h條件下對抗生素菌渣中殘留的抗生素進行消解。
其中,所述的抗生素菌渣選用硫紅霉素菌渣,原始效價為73.4-293.7U/mL;
其中,所述的漆酶懸濁液的酶濃度為0.005-0.02g/mL,酶活為35-140U/mL
抗生素菌渣的效價、標準品的效價用管碟法測定;酶活采用高效液相色譜法測定。
實施例1
配制濃度為0.001g/mL的紅霉素標準樣品,其效價為920U/mL;
配制濃度為0.01g/mL的硫紅霉素菌渣懸濁液,其原始效價為73.4U/mL,調節(jié)pH為6;
在該硫紅霉素菌渣懸濁液中加漆酶懸濁液,酶濃度為0.015g/mL,酶活為105U/mL;在溫度為50℃,時間為4h條件下對抗生素菌渣中殘留的抗生素進行消解,消解后,硫紅霉素菌渣的效價為3.67U/mL,硫紅霉素菌渣的效價降低95%。
實施例2
配制濃度為0.003g/mL的紅霉素標準樣品,其效價為2760U/mL;
配制濃度為0.02g/mL的硫紅霉素菌渣懸濁液,其原始效價為220.1U/mL,調節(jié)pH為7;
在該硫紅霉素菌渣懸濁液中加漆酶懸濁液,酶濃度為0.007g/mL,酶活為49U/mL;在溫度為45℃,時間為5h條件下對抗生素菌渣中殘留的抗生素進行消解,消解后,硫紅霉素菌渣的效價為15.4U/mL,硫紅霉素菌渣的效價降低93%。
實施例3
配制濃度為0.005g/mL的紅霉素標準樣品,其效價為4600U/mL;
配制濃度為0.03g/mL的硫紅霉素菌渣懸濁液,其原始效價為78.15U/mL,調節(jié)pH為7;
在該硫紅霉素菌渣懸濁液中加漆酶懸濁液,酶濃度為0.02g/mL,酶活為140U/mL;在溫度為45℃,時間為4h條件下對抗生素菌渣中殘留的抗生素進行消解,消解后,硫紅霉素菌渣的效價為3.9U/mL,硫紅霉素菌渣的效價降低95%。
實施例4
配制濃度為0.004g/mL的紅霉素標準樣品,其效價為3680U/mL;
配制濃度為0.04g/mL的硫紅霉素菌渣懸濁液,其原始效價為293.7U/mL,調節(jié)pH為6.5;
在該硫紅霉素菌渣懸濁液中加漆酶懸濁液,酶濃度為0.015g/mL,酶活為105U/mL;在溫度為55℃,時間為6h條件下對抗生素菌渣中殘留的抗生素進行消解,消解后,硫紅霉素菌渣的效價為5.9U/mL,硫紅霉素菌渣的效價降低98%。
本發(fā)明一種抗生素菌渣酶解的方法,是利用酶處理抗生素的一種新的探索。本發(fā)明從數據出發(fā),驗證了利用酶處理抗生素菌渣方法的可行性,克服了專一性酶處理專一性菌渣的瓶頸,同時該方法操作簡單,反應周期短,成本低,不產生二次污染,具有很好的環(huán)保效益。