專利名稱：化裝料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化裝料，詳細(xì)說是涉及含有具有皮膚細(xì)胞激活作用或美白作用的酵母成分的化裝料。
背景技術(shù)：
一般認(rèn)為，日曬或粉刺后出現(xiàn)的色素沉積，更年期女性頻發(fā)的肝斑，伴隨老化出現(xiàn)的老年性色斑等癥狀均是由于作為黑褐色色素的黑色素的生成而引起的。
黑色素是當(dāng)皮膚受到紫外線等外界刺激時，存在于皮膚黑色素細(xì)胞中的酪氨酸酶活化，作為一種氨基酸的酪氨酸被氧化而生成的。因此，通過抑制與黑色素生成相關(guān)的酪氨酸酶的活性，可以期待使皮膚變白的美白效果，也可以將酪氨酸酶活性抑制成分與化裝料配合使用。
但是，即使將酪氨酸酶活性抑制成分與化裝料配合使用，許多化裝料對B16黑素瘤培養(yǎng)細(xì)胞中的黑色素生成的抑制效果也不充分，實(shí)際用于皮膚上對色素的淡化效果并不充分。
這樣為了使化裝料確實(shí)發(fā)揮美白效果，僅有上述的酪氨酸酶活性抑制效果或黑色素生成抑制效果是不充分的，有必要使其發(fā)揮通過消除活性氧而抑制色素沉積的作用或通過激活表皮細(xì)胞而促進(jìn)黑色素排泄的作用。
作為以往配合使用酵母的化裝料，已知配合使用由Saccharomyces屬酵母培養(yǎng)液得到的發(fā)酵液作為有效成分的具有美白效果的化裝料。(參照特許文獻(xiàn)1)。
另外，已知有活化皮膚表層內(nèi)部表皮細(xì)胞自身的神經(jīng)酰胺合成，改善皮膚屏障機(jī)能的神經(jīng)酰胺合成促進(jìn)劑(參照特許文獻(xiàn)2)，和配合使用覆盆子酮D糖苷(β)等配糖體和酵母提取物或含有這些成分的菌培養(yǎng)物的美白化裝料(參照特許文獻(xiàn)3)。
特許文獻(xiàn)1特開平7-10734號從報特許文獻(xiàn)2特開平8-217658號公報特許文獻(xiàn)3特開2000-109408號公報上述以往的美白化裝料，雖然單獨(dú)配合使用酵母提取物，或配合使用酵母提取物和配糖體，但是除了發(fā)揮前述的酪氨酸酶活性抑制作用或黑色素生成抑制作用外，為了確實(shí)得到基于更綜合的作用的美白效果還有改良的余地。

發(fā)明內(nèi)容
因此本發(fā)明的課題就是解決上述以往技術(shù)的問題點(diǎn)，制做通過酵母提取成分具有酪氨酸酶活性抑制作用和黑色素生成抑制作用，而且具有消除活性氧或細(xì)胞激活作用，具有綜合的優(yōu)良皮膚美白效果的化裝料。
解決課題的手段發(fā)明者對通過分裂而增殖的酵母進(jìn)行遺傳學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，這一酵母與出芽酵母相比是具有與人的細(xì)胞更接近的增殖形態(tài)的分裂細(xì)胞，判斷其中含有以往酵母提取物中沒有的具有較高有效成分的可能性較高，這一分裂酵母屬于Schizosaccharomyces屬，通過將其細(xì)胞提取液或孢子提取液對皮膚的效果與其他酵母相比較進(jìn)行實(shí)際調(diào)查發(fā)現(xiàn)，只有這一屬兼?zhèn)渖鲜龈餍Ч?，由此完成了本發(fā)明。
即為解決前述課題，在本發(fā)明的化裝料中，作為有效成分含有Schizosaccharomyces屬酵母的水性溶劑提取物。
由后述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，Schizosaccharomyces屬酵母的水性溶劑提取物具有促進(jìn)纖維芽細(xì)胞分裂而生成正常新細(xì)胞的所謂的細(xì)胞激活作用的同時還有黑色素生成抑制作用，它們協(xié)同作用的結(jié)果就形成了具有優(yōu)良皮膚美白效果的化裝料。
為了使化裝料確實(shí)發(fā)揮這一優(yōu)良作用，優(yōu)選采用Schizosaccharomyces屬酵母Schizosaccharomyces pombe的化裝料。
另外，化裝料中水性溶劑提取物作為有效成分的更好的含量為0.05～10重量％。


圖1是表示涂布化裝水的皮膚的黑色素量經(jīng)時變化的圖表。
圖2是表示涂布化裝水的皮膚的角質(zhì)水分量經(jīng)時變化的圖表。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明使用的酵母屬于子囊菌類單細(xì)胞真核微生物，屬于象動物細(xì)胞進(jìn)行均等的二分裂的Schizosaccharomyces屬酵母(以下稱為分裂酵母)，作為代表可列舉出Schizosaccharomyces pombe。Schizo表示分裂的意思。Schizosaccharomyces pombe自古被應(yīng)用于食品領(lǐng)域中，1890年代由東非的pombe中分離出來而被廣泛認(rèn)識，分裂酵母廣泛應(yīng)用于葡萄汁，椰子酒，甘蔗，果汁，面包，啤酒釀造等領(lǐng)域中，可以很容易得到市售品，而且其安全性也被公眾確認(rèn)。
分裂酵母在營養(yǎng)源豐富時通過體細(xì)胞分裂過程進(jìn)行增殖，如果營養(yǎng)缺乏則在性外激素的存在下接合后形成孢子進(jìn)行有性生殖。
培養(yǎng)這樣的分裂酵母所用的培養(yǎng)基，可以是通常使用的酵母用培養(yǎng)基，如想分別得到酵母細(xì)胞或孢子，優(yōu)選使用合成培養(yǎng)基，另外孢子形成培養(yǎng)基中不加氮源。培養(yǎng)條件，例如溫度或時間，一般適用進(jìn)行酵母培養(yǎng)的條件。
分裂酵母的細(xì)胞及孢子的具體提取方法如下即，回收培養(yǎng)后的菌體，用蒸餾水等充分洗滌后以培養(yǎng)液的1/10量蒸餾水混懸。然后加入2.5mg/ml濃度的細(xì)胞壁分解酶，37℃反應(yīng)4天。另外，關(guān)于培養(yǎng)時間(天數(shù))，例如可以培養(yǎng)基的溫度等為指標(biāo)，以其達(dá)到穩(wěn)定期為目標(biāo)。
然后使酶失活，進(jìn)行離心分離等操作后過濾(利用酵母的自我消化時，加入相當(dāng)于洗滌后濕菌體10～100倍量的蒸餾水，35～45℃下，攪拌24～72小時使其自我消化，然后進(jìn)行冷凍干燥或減壓濃縮。)。在其中加入相當(dāng)于濕菌體10～100倍量的水，乙醇，丁二醇，丙二醇，甘油等水性溶劑中的一種或幾種的混合溶劑，進(jìn)行離心分離等操作后過濾。
利用酶分解法的情況中，加入相當(dāng)于洗滌后的濕菌體10～100倍量的蒸餾水，再按相對于每1kg酵母菌體20～50萬單位的程度加入蛋白水解酶，在保持酶活性的溫度下使其反應(yīng)1晝夜。
使酶失活后，添加適量的水性溶劑，或不添加，進(jìn)行離心分離等分離操作后過濾。利用酸分解法的情況中，加入相當(dāng)于洗滌后濕菌體10倍量的1～5％鹽酸，在40～60℃反應(yīng)3～8小時，經(jīng)常攪拌進(jìn)行水解反應(yīng)。然后用堿中和，再用同樣方法處理。另外，中和后最好用透析處理等方法脫鹽。
本發(fā)明中分裂酵母提取物作為有效成分的配合量，通過在化裝料處方中配合使用0.05～10重量％(優(yōu)選2～5重量％)，可以充分發(fā)揮本發(fā)明所預(yù)期的效果，即皮膚美白效果，活性氧消去效果，細(xì)胞激活效果。
另外，本發(fā)明中的分裂酵母水性溶劑提取物可以作為化裝品或浴用劑與常用的基劑，藥劑等共同組方，制成任意形態(tài)的化裝品。
例如作為可與分裂酵母的水性溶劑提取物配合的適當(dāng)?shù)挠头?，代表例為動植物油，礦物油，此外還可列舉出酯油，蠟油，高級醇，脂肪酸類，硅油，磷脂等油或油脂。
另外，作為表面活性劑，可列舉出陰離子表面活性劑，陽離子表面活性劑，兩性表面活性劑，非離子表面活性劑等。另外根據(jù)需要并用對氨基安息香酸，鄰氨基苯甲酸衍生物，苯并三唑衍生物，四唑衍生物，咪唑啉衍生物，嘧啶衍生物，二氧六環(huán)衍生物，莰烷衍生物，呋喃衍生物，吡喃衍生物，核酸衍生物，尿囊素衍生物，煙酸衍生物，紫草素，維生素B6衍生物等紫外線吸收劑，抗壞血酸及其鹽，硬脂酸酯，維生素E及其酯衍生物，去甲二氫愈創(chuàng)木酸，丁羥甲苯(BHT)，丁羥茴醚(BHA)，對羥基茴香醚，沒食子酸丙酯等抗氧化劑，羥乙基纖維素，甲基纖維素，乙基纖維素，羧甲基纖維素，羧乙基纖維素，阿拉伯膠，聚乙二醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯甲基丙烯酸酯，聚丙烯酸鹽，羧乙烯聚合物，角叉菜膠，果膠，海藻酸及其鹽，酪蛋白，明膠等增粘劑，甘油，丙二醇，1，3-丁二醇，透明質(zhì)酸及其鹽，聚乙二醇，硫酸軟骨素及其鹽，水溶性幾丁質(zhì)或脫乙酰幾丁質(zhì)衍生物，乳酸鈉等保濕劑，低級醇，多價醇，水溶性高分子，pH調(diào)節(jié)劑，螯合劑，防腐劑，防霉劑，香料，著色料，清涼劑，穩(wěn)定化劑，源于動植物的提取物，動植物蛋白質(zhì)及其分解物，源于動植物的提取物，動植物多糖類及其分解物，源于動植物的提取物，動植物糖蛋白及其分解物，血流促進(jìn)劑，消炎抗炎劑，細(xì)胞激活劑，維生素類，氨基酸及其鹽，核質(zhì)溶解劑，收斂劑，創(chuàng)傷治愈劑，增泡劑，消臭脫臭劑等，可制成前述的各種化裝品。
本發(fā)明的化裝料可作為化裝品、醫(yī)藥用外用品而預(yù)防和改善色素沉積，或以激活皮膚細(xì)胞為目的應(yīng)用，其形態(tài)可列舉出面霜，軟膏，乳液，美容液，化裝水，面膜，浴用劑，化裝用化裝料等，其劑型沒有特別限制。
實(shí)施例及比較例(分裂酵母的培養(yǎng)例1)分別配制如下組成的培養(yǎng)基1，2，向培養(yǎng)基1中加入1白金耳分裂酵母，30℃培養(yǎng)3天。該培養(yǎng)液離心分離回收菌體，將菌體全量混懸于同量的培養(yǎng)基2中，培養(yǎng)5天。該培養(yǎng)液離心分離，回收菌體以蒸餾水充分洗滌。
(培養(yǎng)基1)葡萄糖 30g酵母提取物 5g(培養(yǎng)基2)葡萄糖 10g磷酸二氫鉀 0.25g硫酸鎂 0.5g氯化鈣 0.1g硼酸 0.5mg硫酸銅 40μg碘化鉀 0.1mg氯化鐵 0.2mg硫酸錳 0.4mg鉬酸 0.16mg硫酸鋅 0.4mg生物素 1μg泛酸鈣 1mg煙酸 10mg肌醇 10mg(分裂酵母的培養(yǎng)例2)配制前述相同的培養(yǎng)基1，加入分裂酵母(1白金耳)，30℃培養(yǎng)10天。培養(yǎng)液離心分離回收菌體，以蒸餾水充分洗滌。
(分裂酵母提取物的提取例1)前述培養(yǎng)例1所得分裂酵母(0.1～1.0kg)混懸于培養(yǎng)用量1/10的蒸餾水中。向混懸液中加入終濃度為2.5mg/ml的酶(LYSING ENZYMES，LotNo.69H1557，SIGMA)30℃酶處理4天。酶處理后將混懸液超聲波處理，使全量為100ml。溶液在90℃下加熱處理1小時使酶失活，用濾過助劑，濾紙，膜濾器進(jìn)行過濾。
(分裂酵母提取物的提取例2)培養(yǎng)例2所得分裂酵母(0.1～1.0kg)混懸于培養(yǎng)用量1/10的蒸餾水中。向混懸液中加入終濃度為2.5mg/ml的酶(LYSING ENZYMES，LotNo.69H1557，SIGMA)30℃酶處理4天。酶處理后將混懸液超聲波處理，使全量為100ml。溶液在90℃下加熱處理1小時使酶失活，用濾過助劑，濾紙，膜濾器進(jìn)行過濾。
(出芽酵母提取物)市售以出芽酵母Saccharomyces cerevisiae為提取原料的甲公司制酵母提取物作為比較提取例1，乙公司制酵母提取物作為比較提取例2。
前述提取例1或2的分裂酵母提取物及市售出芽酵母提取物比較提取例1，2作為試樣，進(jìn)行黑素瘤細(xì)胞的黑色素合成抑制作用的比較實(shí)驗(yàn)。
作為實(shí)驗(yàn)方法，將B16小鼠黑素瘤細(xì)胞在含有10％FBS的MEM培養(yǎng)基中37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)，以此作為實(shí)驗(yàn)用樣品。詳細(xì)說，將1T×5個B16黑素瘤細(xì)胞植入60mm塑料培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)24小時。然后更換新鮮培養(yǎng)基，分別向培養(yǎng)基中添加終濃度為2％的實(shí)驗(yàn)樣品。添加后3天，將細(xì)胞用胰蛋白酶處理回收，以1N NaOH，10％DMSO的溶液加熱溶解，測定475nm處的吸光度。另外，將未處理細(xì)胞的黑色素合成率作為100％計(jì)算出樣品添加時的黑色素合成率。黑色素合成抑制率是由未處理的黑色素合成率(100％)中減去添加樣品時的黑色素合成率。其結(jié)果作為黑色素生成抑制率(％)如表1所示。
表1

表1的結(jié)果顯示，提取例1或提取例2所得分裂酵母提取物具有黑色素生成抑制作用，可以期待防止皺紋，雀斑等的效果，其效果與作為比較提取例1，2的市售出芽酵母提取物相比要高。
前述提取例1或提取例2的分裂酵母提取物及市售出芽酵母提取物比較提取例1，2作為試樣，進(jìn)行細(xì)胞激活作用(細(xì)胞增殖)的比較實(shí)驗(yàn)。
考察激活作用的對象細(xì)胞，使用正常人皮膚纖維芽細(xì)胞NB1RGB在含有5％FBS的MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞。另外培養(yǎng)要完全在37℃，5％CO2條件下進(jìn)行。詳細(xì)說明，首先將0.5×104個正常人纖維芽細(xì)胞接種于采用含有5％FBS的MEM培養(yǎng)基的96孔微型板中，培養(yǎng)24小時。將培養(yǎng)液交換為加入實(shí)驗(yàn)試樣的含有5％FBS的MEM培養(yǎng)基的培養(yǎng)基中培養(yǎng)9天。將培養(yǎng)液交換到含有50μg/ml中性紅和5％FBS的MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)2小時，棄去培養(yǎng)液后以1％CaCl2，1％福爾馬林液洗滌微型板一次。向其中添加1％醋酸，50％乙醇水溶液，提取含在細(xì)胞的中性紅，以微型板讀出器測定其在570nm處的吸收波長，結(jié)果如表2所示。
表2

由表2的結(jié)果可知，分裂酵母提取物具有促進(jìn)細(xì)胞增殖作用，即細(xì)胞激活作用，由這一作用可期待促進(jìn)皮膚角化細(xì)胞，纖維芽細(xì)胞的增殖，改善皮膚狀態(tài)的效果。另外，可以確認(rèn)與比較提取例1，2的出芽酵母提取物相比，其效果要高。
按表3所示配合比例，分別制造配合使用分裂酵母提取物(提取例1)的實(shí)施例1的化裝水，作為比較例1，2，配合使用比較提取例1，2的化裝水。另外，比較例3是不含酵母提取物的空白品，各實(shí)施例及比較例中配合適量的防腐劑和pH調(diào)節(jié)劑。
以上樣品用于受試小組成員(成人男女各10人)的皮膚(面部)，每日早晚兩次，使用2個月，2個月后調(diào)查功能結(jié)果。調(diào)查項(xiàng)目有如表4所示的5個項(xiàng)目，分5個等級進(jìn)行評價，其平均值如表3所示。
表3

表4
用使用表3所示組成的實(shí)施例1的分裂酵母提取物、比較例1、2、3的化裝水，進(jìn)行美白效果實(shí)驗(yàn)(皮膚黑色素量測定實(shí)驗(yàn))。即每天2次涂布于受試小組成員(成人男女各10人)的皮膚(面部)，使用3個月，用CK社制美白效果試驗(yàn)機(jī)(MEXAMETERMX18)測定黑色素量，結(jié)果如圖1所示。
由圖1的結(jié)果可知，配合使用實(shí)施例1的分裂酵母所得的提取物的化裝水，由第70天到3個月的期間，明顯地比以往的化裝水顯示優(yōu)良的黑色素量的減少效果。
以使用表3所示組成的實(shí)施例1的分裂酵母提取物、比較例1、2、3的化裝水涂布皮膚，用CK社制水分量測定試驗(yàn)機(jī)(SKICOS301)測定其角質(zhì)水分量的經(jīng)時變化(到涂布后540分鐘)，結(jié)果如圖2所示。
圖2結(jié)果表明，配合使用由實(shí)施例1的分裂酵母所得提取物的化裝水，在涂布后120分鐘明確開始顯示比以往化裝水優(yōu)良的角質(zhì)水分保持量。
應(yīng)用本發(fā)明的分裂酵母提取物的化裝料如以上說明的，是作為有效成分含有Schizosaccharomyces屬酵母的水性溶劑提取物的化裝料，具有優(yōu)良的黑色素生成抑制作用，即具有美白作用，另外還發(fā)揮顯著的細(xì)胞激活作用。這樣的效果與以往的含有出芽酵母或其提取物的化裝料的效果相比是有利的。
權(quán)利要求
1.一種化裝料，作為有效成分含有Schizosaccharomyces屬酵母的水性溶劑提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化裝料，其中，Schizosaccharomyces屬酵母是Schizosaccharomyces pombe。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化裝料，其中，作為有效成分的含量為0.05～10重量％。
全文摘要
本發(fā)明提供一種化裝料，具有基于酵母提取成分的酪氨酸酶活性抑制作用和黑色素生成抑制作用，而且具有清除活性氧或細(xì)胞激活活性，具有綜合的優(yōu)良皮膚美白效果。作為有效成分含有Scbizosaccharomyces pombe等Schizosacchar omyces屬酵母的水性溶劑提取物，含量為0.05～10重量％的。
文檔編號A61Q19/02GK1572292SQ200410048510
公開日2005年2月2日 申請日期2004年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月9日
發(fā)明者田中克昌, 永井勉 申請人:日本科瑪株式會社