用于減輕疼痛、壓力和失眠的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于減輕一種或多種疼痛、壓力和失眠癥狀的組合物，包括蕓苔(Brassica campestris)、蜂蠟和龍腦樟(Dryobalanops camphora)。本發(fā)明還提供一種包含本發(fā)明組合物的制劑，及其制備方法，其用途和治療一種或多種疼痛、壓力和失眠癥狀的方法。
【專利說明】
用于減輕疼痛、壓力和失眠的組合物
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及用于減輕至少一種疼痛、壓力和失眠癥狀的組合物，用于制備所述組 合物的方法，其用途及其治療方法。
【背景技術】
[0002] 對于治療疼痛、壓力和睡眠障礙有各種可用的藥物和制劑。疼痛是許多身體狀況 中主要的癥狀，并會顯著影響人的生活質量和一般功能。疼痛的范圍從輕度的不適或隱約 的痛苦至急性的常難以忍受的痛苦，并且可以是泛發(fā)性的或局部的。NSAID(非留體抗炎藥） 例如阿司匹林、布洛芬和萘普生，是其中最頻繁使用的處方，和在急性和慢性炎性病狀導致 的疼痛中用于緩解癥狀的非處方藥。但是患者仍面臨它們嚴重并發(fā)癥(如胃腸道(GI)和腎 的副作用）的重大挑戰(zhàn)。
[0003] 壓力正在急劇增長，特別是在城市人口中，導致各種類型的與壓力相關的障礙。大 量治療被用于克服壓力，范圍從芳香療法至施用治療藥物。芳香療法涉及吸入精油。然而， 據觀察吸入可能或可能不適用于所有人，因為它會對敏感的黏膜產生刺激，并損壞鼻內的 嗅覺感受體。長期吸入濃縮的精油會導致頭痛、眩暈、頭暈，惡心和嗜睡。因此，這種用于減 輕壓力的治療反而可能加重壓力或引起其他不良效果。經口或靜脈途徑施用治療藥物需要 醫(yī)生的監(jiān)督與干預，造成對它們應用的限制。此外，它們具有延時的作用時間和不利的副作 用，例如苯并二氮罩，其可被用于治療壓力，對患者具有潛在的上癮作用。
[0004] 失眠或睡不著，由壓力或其他病因導致的睡眠障礙是普遍流行的，并影響大約 30%的普通人群?，F(xiàn)今長期受限的睡眠已變?yōu)槲覀兩鐣V泛而嚴重的問題。失眠損害認知 和身體功能，并與范圍廣泛的受損日間功能相關，跨越許多情感、社會和身體領域，并可導 致其他障礙和健康風險。目前，對于失眠的一線治療為抗組胺劑，苯并二氮罩和非苯并二 氮罩類。這些藥物具有各種有害影響，例如用于失眠的藥物是上癮性的，因此對患者有害。 更新的睡眠誘導藥物包括唑吡坦(Zolpidem)，其也顯示許多副作用，最嚴重的為轉天的嗜 睡、反彈性失眠、依賴和濫用。
[0005] 此外，持續(xù)使用藥物導致患者對這樣的藥物發(fā)展出抗性，減少其對進一步治療的 響應。
[0006] 對于治療疼痛、壓力和失眠可用的局部制劑也不能避免任何不利的副作用。例如， 用于治療疼痛的基于水楊酸鹽和辣椒素的局部制劑對皮膚有刺激，這二者即使是微量的也 優(yōu)選避免使用。用于治療壓力的圣約翰草局部制劑可增加皮膚對陽光的敏感性并導致皮 疹。治療失眠的局部制劑不很常見，為數(shù)不多的嘗試普遍也未發(fā)現(xiàn)非常有效。
[0007] 因此，可用的局部制劑對于減輕疼痛、壓力或失眠不是非常有效。相反，可用的局 部制劑要么具有副作用，要么不能有效減輕個體的疼痛、壓力和失眠。
[0008] 因此，對更安全的能被配制為局部遞送并能減輕一種或多種選自疼痛、壓力和失 眠的癥狀的組合物存在需求。
[0009] 發(fā)明概述
[0010] 因此，一方面，本發(fā)明提供用于減輕一種或多種疼痛、壓力和失眠癥狀的組合物。
[0011] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供包含蕓苔(Brassica campestris)、蜂錯和龍腦樟 (Dryobalanops camphora)的組合物。
[0012] 在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包含蕓苔油、蜂蠟和龍腦樟油。
[0013] 在一些實施方案中，本發(fā)明提供包含蕓苔油、蜂蠟和龍腦樟的組合物，用于減輕至 少一種或多種或所有疼痛、壓力和失眠癥狀。
[0014] 在一些實施方案中，本發(fā)明提供一種組合物，其包含40-75重量份的蕓苔油、15-50 重量份的蜂蠟和1-20重量份的龍腦樟。
[0015] 另一方面，本發(fā)明提供用于制備減輕一種或多種疼痛、壓力和失眠癥狀的組合物 的方法。
[0016] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供用于制備減輕至少一種疼痛、壓力和失眠癥狀的 制劑的方法，包括:在60°C-225°C的溫度下將40-75重量份的蕓苔油加熱特定的時間段；向 熱蕓苔油中混合15-50重量份的蜂蠟，至少直至蜂蠟溶解;并向蕓苔油和蜂蠟的混合物中混 合1-20重量份的龍腦樟。
[0017] 在本發(fā)明的一個實施方案中，提供用于制備減輕至少一種疼痛、壓力和失眠癥狀 的制劑的方法，其包括:在60 °C -225 °C的溫度下將40-75重量份的蕓苔油加熱特定的時間 段；向熱蕓苔油中混合15-50重量份的蜂蠟，至少直至蜂蠟溶解;將混合物從熱源移除，并混 合入1-20重量份的龍腦樟。
[0018] 在一個實施方案中，用于加熱蕓苔油的時間段為足以使溫度達到60°C-225°C的時 間段。
[0019] 在一個實施方案中，加熱蕓苔油在60°C_100°C的溫度下進行。在這樣的實施方案 中，用于加熱蕓苔油的時間段為足以使溫度達到60°C-100°C的時間段。
[0020] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供包含蕓苔油、蜂蠟和龍腦樟油的組合物在減輕至 少一種或多種或全部疼痛、壓力和失眠癥狀中的用途。
[0021] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供治療至少一種疼痛、壓力和失眠癥狀的方法，包括 在受影響區(qū)域、發(fā)炎區(qū)域、頭部或全部身體應用本發(fā)明的組合物。
【附圖說明】
[0022] 當參考附圖閱讀以下說明書時，本發(fā)明的其他目的、特征和優(yōu)勢將是明顯的。
[0023]圖1說明匪-2 (本發(fā)明的制劑)與其單個成分相比，對卡拉膠(Carrageenan)誘導的 大鼠爪水腫(odema)的功效，所述NM-2的單個成分為芥末油、樟腦、蜂蠟和可商購的制劑雙 氯芬酸。
[0024]圖2說明雙氯芬酸、匪_2(本發(fā)明的制劑)與其單個成分相比，對卡拉膠誘導的爪水 腫體積百分數(shù)改變的功效，所述單個成分為芥末油、樟腦、蜂蠟和可商購的制劑雙氯芬酸。 [0025]圖3說明雙氯芬酸、匪-2(本發(fā)明的制劑）與其單個成分相比，對在REM睡眠剝奪誘 導的痛覺過敏中爪回縮時間的功效，所述單個成分為芥末油、樟腦、蜂蠟和可商購的制劑雙 氯芬酸。
[0026]圖4說明雙氯芬酸、匪-2(本發(fā)明的制劑）與其單個成分相比，對在REM睡眠剝奪誘 導的痛覺過敏中爪回縮時間增加的功效，所述單個成分為芥末油、樟腦、蜂蠟和可商購的制 劑雙氯芬酸。
[0027] 發(fā)明詳述
[0028] 當介紹本公開或其優(yōu)選的實施方案的要素時，冠詞"一個/一種(a、an、theVlP"m 述"意在表示一個/一種或多個/多種要素。術語"包含"、"包括"和"具有"（comprising、 including和having)意為包含的，指在所列要素外會有額外的要素。
[0029] 本發(fā)明公開了可減輕至少一種疼痛、壓力和失眠癥狀的組合物。
[0030] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供包含蕓苔、蜂蠟和龍腦樟的組合物。
[0031] 本發(fā)明的組合物中可包含晶體形式或油形式的龍腦樟。龍腦樟油和晶體形式的龍 腦樟在本發(fā)明的組合物中可替換使用。
[0032] 在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包括蕓苔油、蜂蠟和龍腦樟油。
[0033] 在一些實施方案中，本發(fā)明提供包含蕓苔油、蜂蠟和龍腦樟的組合物，用于減輕至 少一種或多種或全部疼痛、壓力和失眠癥狀。
[0034] 組合物的活性成分可通過任意數(shù)目的方式組合，以最優(yōu)化預期效果。根據一些實 施方案，本發(fā)明的組合物包含40-75重量份的蕓苔油、15-50重量份的蜂蠟和1-20重量份的 龍腦樟。
[0035]根據還進一步的實施方案，本發(fā)明的組合物包含55-65重量份的蕓苔油、25-35重 量份的蜂蠟和3-13重量份的龍腦樟。
[0036] 在一個實施方案中，蕓苔油、蜂蠟和龍腦樟的比例大約為約1:0.5:0.1。
[0037] 然而，基于本文的教導本領域普通技術人員可知曉，可以任何方式變化確切的組 成及變化活性成分的相對比例，以提供特定功效的增加或降低。
[0038] 以上實施方案的組合物可任選包含一種或多種其他成分，以提供額外的減輕或其 他益處。例如，組合物可進一步包含一種或多種其他的活性成分，例如天然活性成分，例如 提取物、酊、精油、浸泡油或任意其他油。優(yōu)選地，這樣的天然活性成分選自丁香油、生姜提 取物或油、芝麻油、蓖麻油、印度香膠(guggul)、天然香料或其組合。其他的活性成分可以是 合成的活性的成分。這樣的可包含入本發(fā)明組合物的天然或合成的活性試劑選自但不限于 由以下組成的組:循環(huán)增加劑、關節(jié)或肌肉舒緩劑和肌膜穩(wěn)定劑。
[0039] 在其他的實施方案中，組合物可任選地包括一種或多種藥學可接受的賦形劑。這 種任選的藥學可接受的賦形劑的實例包括:載體;基礎組分例如水、丙二醇、甘油、聚乙二 醇、聚硅氧烷(si I icone)和/或油，例如植物油、花生油、蓖麻油和可可油和液體石蠟;表明 活性劑;增稠劑例如硬脂酸鋁和氫羊毛脂(hydrogen Iano I in);凝膠劑;穩(wěn)定劑;乳化劑;分 散劑;懸浮劑;保濕劑;潤膚劑;冷卻組分、循環(huán)增加組分、酸性或堿性物質；緩沖劑;抗結晶 劑;潤滑劑;著色劑;香水或香精;發(fā)泡劑;稀釋劑;填料;結合劑或防腐劑。
[0040]在還進一步的實施方案中，本發(fā)明提供包含以上實施方案中組合物的制劑。在一 些實施方案中，制劑可包含可接受的賦形劑，以將組合物配制為局部制劑，所述局部制劑選 自一個或多個由以下組成的組:基于水的制劑、基于聚硅氧烷的制劑、基于石油的制劑和基 于天然油的制劑。在優(yōu)選的實施方案中，制劑包括用于基于天然油制劑的賦形劑。
[0041] 根據另一個實施方案，可向制劑中加入額外的添加劑以增強穩(wěn)定性、質地、顏色、 氣味和其他性質。
[0042] 在一些實施方案中，包含以上實施方案的組合物的制劑可以配制為油、凝膠、乳 霜、洗液、香膏或噴霧的形式。
[0043] 在另一方面，本發(fā)明提供用于制備減輕一種或多種疼痛、壓力和失眠癥狀的組合 物的方法。
[0044] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供用于制備減輕至少一種疼痛、壓力和失眠癥狀的 制劑的方法，所述方法包括:在60 °C_225°C的溫度下將40-75重量份的蕓苔油加熱特定的時 間段；向熱蕓苔油中混合15-50重量份的蜂蠟，至少直至蜂蠟溶解;并混合入1-20重量份的 龍腦樟。
[0045] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供用于制備減輕至少一種疼痛、壓力和失眠癥狀的 制劑的方法，所述方法包括:在60 °C_225°C的溫度下將40-75重量份的蕓苔油加熱特定的時 間段；向熱蕓苔油中混合15-50重量份的蜂蠟，至少直至蜂蠟溶解;將混合物從熱源移開，并 混合入1-20重量份的龍腦樟。
[0046] 在一個實施方案中，在60°C_225°C的溫度下的蕓苔油的加熱進行約一分鐘至約十 五分鐘的時間段。這樣的時間段可以依賴于在其下制備制劑的量和規(guī)模而變化，以實現(xiàn)60 。(:-225 °C 的溫度。
[0047]在一個實施方案中，加熱蕓苔油在60°C-100°C的溫度下進行。在這樣的實施方案 中，用于加熱蕓苔油的時間段是足以使溫度達到60°C-100°C的時間段。
[0048]在一個實施方案中，蕓苔油為制劑的55-65重量份。
[0049] 在一個實施方案中，蜂蠟為制劑的25-35重量份。
[0050] 在一個實施方案中，晶體形式的龍腦樟或龍腦樟油為制劑的3-13重量份。
[0051]根據另一個實施方案，方法進一步涉及加入防腐劑、乳化劑、其他添加劑和藥學可 接受的試劑和/或賦形劑。
[0052] 在實施方案中，本發(fā)明提供包含蕓苔油、蜂蠟和龍腦樟的組合物在減輕至少一種 或多種或全部疼痛、壓力和失眠癥狀中的用途。
[0053] 在實施方案中，本發(fā)明提供治療至少一種疼痛、壓力和失眠癥狀的方法，包括根據 個體的需要，以足以覆蓋受影響區(qū)域、發(fā)炎區(qū)域、頭部或全部身體的量應用本發(fā)明的組合 物。將根據醫(yī)師、藥劑師、助理醫(yī)師、醫(yī)學草藥醫(yī)師、自然療法醫(yī)師或獸醫(yī)的需要、期望或建 議向個體施用所述組合物。
[0054]將理解，給藥劑量、給藥時期和一般給藥方式在個體間會不同，取決于變量例如癥 狀的嚴重程度以及個體的年齡和/或一般健康狀況。通常，當組合物轉化為適用于局部給藥 的制劑時，局部治療的給藥方案為一天或數(shù)天中，向受影響區(qū)域每天應用1次或2次或3-4次 或多于4次，取決有疼痛、壓力和失眠的嚴重程度。
[0055] 在一個實施方案中，在個體具有疼痛的情況下，將制劑在受影響區(qū)域上或附近輕 柔地按摩約2分鐘至10分鐘或直至受影響區(qū)域感覺到溫暖的時間。
[0056] 在一個實施方案中，為了減輕壓力，將制劑在額頭上輕柔按摩10秒至1分鐘和/或 進行約5分鐘至20分鐘的膝蓋以下的腿部，特別是腳底的按摩。
[0057]在一個實施方案中，在個體失眠的情況下，進行約5分鐘至20分鐘的制劑于膝蓋以 下的腿部，特別是腳底的按摩，同樣發(fā)現(xiàn)在個體中誘導睡眠。
[0058]在一些實施方案中，在睡覺前應用制劑或組合物。
[0059]所述制劑或組合物使身體和思維從壓力中放松，并幫助獲得酣睡。已發(fā)現(xiàn)制劑或 組合物在減輕疼痛和炎癥中有效。本發(fā)明的組合物或制劑可被用于治療炎性區(qū)域減少疼 痛，以及和肌肉拉傷、扭傷、關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎、粘液囊炎、神經痛、肌炎、腕管綜合癥、 內傷和其他造成疼痛的癥狀相關的腫脹。其在運動、其他任何活動或事故中的肌肉損傷中 也是有用的。
[0060] 根據另一個實施方案，在進行劇烈的身體活動前應用所述組合物，所述身體活動 例如為可引起疼痛或壓力或導致失眠的馬拉松比賽、賽車、長距離散步或駕車、劇烈的工作 或任何其他劇烈活動。因此，組合物可被用于預防與這樣的疼痛或壓力或失眠相關的疼痛、 壓力和失眠。
[0061] 本發(fā)明的組合物在減輕疼痛、壓力和失眠中是有效的，所述組合物包括非常少的 組分，也就是說在一個是實施方案中，本發(fā)明的組合物僅含有三種成分。同時，用于制備制 劑的方法不需要復雜的步驟、設備、機械裝備、裝置或非常高的能量。因此，本發(fā)明的組合物 和方法是非常有優(yōu)勢的，是因為它們對于治療多于一種的疼痛、壓力和失眠癥狀是非常簡 單、經濟和有效的。
[0062] 現(xiàn)將詳細參考本發(fā)明的某些實施方案。雖然本發(fā)明將結合所列舉的實施例加以描 述，但應理解，它們只用于說明本發(fā)明而其并非意欲將本發(fā)明限制于那些實施方案。相反， 本發(fā)明意在涵蓋所有替代方式、修改及等價物，其可被包含在如由權利要求所限定的本發(fā) 明范圍內。因為本領域普通技術人員可發(fā)現(xiàn)能被用于本發(fā)明實踐的，包含本發(fā)明的精神和 主旨的，公開的實施方案的變化，類似于或等同于本文中所描述的那些的公開的實施方案 的許多方法和材料，因此本發(fā)明應解釋為涵蓋公開范圍內的所有。本領域普通技術人員將 認識到本發(fā)明絕非受限于所述的方法與物質。
【具體實施方式】
[0063]實施例1-局部油制劑的制備
[0064]按如下制備作為示例性實施方案的局部油制劑。
[0065]將62.50ml蕓苔油在100°C的溫度下加熱約3-10分鐘。將31.25gm的蜂蠟混合入熱 蕓苔油中以完全溶解蜂蠟。將混合物從熱源移走，加入6.25gm的龍腦樟并混合。使混合物冷 卻至室溫。然后將其裝瓶。
[0066] 實施例2-對于局部油制劑與其單個成分相比，抗炎和鎮(zhèn)痛效果的評估：
[0067] 本研究的目的是評估用于減輕疼痛和相關炎癥的根據實施例1制備的局部油性制 劑(在此稱為NM-2)和其單個成分。
[0068] 材料和方法：
[0069] 使用卡拉膠誘導的爪水腫以檢測NM-2及其單個成分的急性抗炎和鎮(zhèn)痛性能。
[0070] 基本原理：
[0071] 該模型檢測了藥物抑制炎性試劑(刺激劑）（例如卡拉膠)注射后大鼠后爪中產生 的水腫的能力。在應用刺激劑之前和之后測量注射爪的體積，并將治療的動物的爪體積與 疾病對照組的那些比較。
[0072] 步驟：
[0073]研究中使用重150_200g的雄性白化Wistar大鼠。將動物養(yǎng)護于具有谷殼墊和不銹 鋼蓋的聚丙烯籠內。使用商購的大鼠飼料、Aquaguard水隨意喂養(yǎng)大鼠。在經孟買T N醫(yī)學院 (T N Medical College)和BYL耐爾醫(yī)院（BYL Nair Hospital)的機構動物倫理委員會 (Institutional Animal Ethical Committee)批準后，根據由印度政府的社會公平和賦權 部(Ministry of Social Justices and Empowerment)批準的動物倫理規(guī)范設計和進行試 驗。
[0074]在氯胺酮-甲苯噻嗪麻醉下，使用無菌剃刀移除大鼠背部的毛發(fā)。然后隨機將動物 分成6個不同的組，每組含有6只動物，如下表1所示。評估局部油制劑NM-2與單個成分蕓苔 油(芥末油）、蜂錯、龍腦樟(樟腦)和可商購制劑Vo veran乳膠劑相比的功效。
[0075]表1:用于研究的動物分組
[0077]將研究藥物連續(xù)7天局部應用于動物
的剃除毛發(fā)的后背上。在第8天，如常應用試 驗藥物，30分鐘后，將卡拉膠溶液(0.1ml的l%w/v溶液)皮下注射至所有組的動物的右后爪 的足底面。將爪用墨水在外踝的水平標記，并將爪浸入水銀中，直至該標記。在緊隨注射卡 拉膠之前(0小時），及隨后在1小時、2小時、3小時、4小時、5小時和24小時體積描記測量爪體 積?？寡谆钚缘闹当硎緸槿缦滤镜淖w積百分數(shù)變化：
[0078] 爪體積百分數(shù)變化=((Vt_Vo)/Vo) X 100
[0079]其中Vt =卡拉膠注射5小時后的爪體積 [0080] Vo = O小時的爪體積
[0081] 統(tǒng)計學分析：
[0082] 所有值被表不為平均值土 SD。使用Graph pad PRISM 5軟件（Graph pad Software lnc，圣地亞哥，加州）應用統(tǒng)計學分析。為了確定爪體積百分數(shù)改變，進行單向方差分析 (ANOVA)，隨后是圖基事后檢驗(Tukey's post-hoc test)，以確定組間的顯著差異。
[0083]表2雙氯芬酸、NM-2和單個成分對卡拉膠誘導的大鼠爪水腫的功效：
[0085] 值被表示為平均值土SD(每組n = 6)。當與疾病對照組比較時，*P〈0.05、#P〈0.01 和*#P〈0.001。當與匪-2組比較時，###p〈〇. 001。當與雙氯芬酸組比較時，@ρ〈〇. 〇5、_P〈 0.01和_粑〈0.001。
[0086] 上表2以及圖1顯示動物爪中最大炎癥見于卡拉膠注射后2小時。與疾病對照（P〈 0.05)、雙氯芬酸和NM-2制劑中的單個成分相比，用NM-2治療后大鼠的爪體積顯著下降。
[0087] 表 3
[0088] 雙氳芬酸、NM-2和單個成分對卡枋胺諉導的女鼠爪7tC腫功效的百分數(shù)改奪：
[0090] 值被表示為平均值土SD(每組n = 6)。當與疾病對照組比較時，*P〈0.05、#P〈0.01 和*#P〈0 · 001。當與NM-2組比較時，##p〈0 · 01。當與雙氯芬酸組比較時，@ρ〈0 · 05、_P〈0 · 01 和_粑〈0.001。
[0091] 上表3以及圖2顯示當與疾病對照、雙氯芬酸組(P〈0.05)和單個成分組相比時，匪_ 2組(P〈0.001)中爪體積的百分減少是顯著的。同樣，最大和最早的益處見于NM-2制劑中。
[0092] 總結：
[0093]匪_2制劑顯示爪體積的顯著減少，從而表示炎癥的減輕，其表明為鎮(zhèn)痛功效。在 NM-2的三種成分中，僅有芥末油顯示出統(tǒng)計學顯著的抗炎功效。然而該功效，以及結合所有 為芥末油、蜂蠟和樟腦的三種成分的功效比匪-2制劑所見的要小很多。因此匪-2的抗炎和 鎮(zhèn)痛活性源于其單個成分的協(xié)同作用。總之，NM-2制劑已在緩解炎癥和疼痛上顯示出重大 的希望。
[0094]實施例3-對于局部油制劑與其單獨成分相比，在REM睡眠剝奪誘導的痛覺過敏中 的功效的評估
[0095] 現(xiàn)今長期受限的睡眠已變?yōu)槲覀兩鐣V泛而嚴重的問題。睡眠剝奪經常被認為是 緊張性刺激，因為各種研究已顯示經典壓力系統(tǒng)的活化和提高的壓力激素(例如腎上腺素 和皮質醇）的血漿水平。睡眠本身似乎對壓力系統(tǒng)具有抑制作用，因此，睡眠剝奪將這些系 統(tǒng)的活性保持在清醒時出現(xiàn)的更高的水平。壓力可對疼痛相關的癥狀具有雙邊作用。雖然 急性壓力可在動物和人中產生疼痛;但慢性和反復的壓力也已被報道產生痛覺過敏(對疼 痛刺激增加的敏感性)和痛覺超敏（由無害刺激引起的疼痛）。快速眼動(REM)睡眠剝奪大鼠 模型是一種已顯示出睡眠剝奪導致對疼痛電刺激的疼痛響應增加的模型，其是壓力的間接 指示。
[0096]因此，該實驗研究旨在評估匪-2制劑及其單獨成分改善或減輕REM睡眠剝奪（失 目民)相關的壓力誘導的痛覺過敏的潛質。
[0097]材料和方法：
[0098]研究中使用兩種技術;改進的花盆技術和熱板法。
[0099]改進的花盆技術的基本原理：
[0100]使用改進的花盆技術誘導REM睡眠剝奪。在該方法中，將大鼠置于水箱中的高平臺 上96個小時。在REM睡眠期間出現(xiàn)肌肉松弛，作為其結果當動物進入REM睡眠時其從平臺落 入水中。因此，動物醒來，并再次爬上平臺。該方法防止REM睡眠并允許其他的睡眠階段。當 使這樣睡眠剝奪的動物經受有害刺激例如熱板時，與未剝奪睡眠的動物相比，它們對于疼 痛顯示出降低的疼痛閾限，和增加的敏感性。
[0101]熱板法的基本原理：
[0102] 大鼠的爪對于不會損傷皮膚的溫度下的熱是非常敏感的。置于熱板上的大鼠顯示 的反應為跳躍、爪回縮和舔爪。因此，該試驗被用于評估疼痛閾限，以及動物對于溫和疼痛 刺激的響應。
[0103] 研究步驟：
[0104] 研究使用重150-200g的雄性白化Wistar大鼠。將動物養(yǎng)護于具有谷殼墊和不銹鋼 蓋的聚丙烯籠內。使用商購的大鼠飼料、Aquaguard水隨意喂養(yǎng)大鼠。將動物房設施的溫度 條件保持在25±2°C，相對濕度保持在65±5%。在經孟買T N醫(yī)學院（T N Medical Co liege)和BYL耐爾醫(yī)院（BYL Nair Hospital)的機構動物倫理委員會（Institutional Animal Ethical Committee)批準后，根據由印度政府的社會公平和賦權部(Ministry of Social Justices and Empowerment)批準的動物倫理規(guī)范設計和進行試驗。
[0105] 在氯胺酮-甲苯噻嗪麻醉下，使用無菌剃刀移除大鼠背部的毛發(fā)。然后隨機將動物 分成6個不同的組，每組含有6只動物，如下表4所示。使用非留體抗炎劑(NSAID)二氯芬酸作 為陽性對照有兩個原因：第一，沒有已知可用的局部抗壓或失眠試劑，第二，評估的參數(shù)對 傷害性刺激有響應。
[0106] 進行研究，以評估匪-2制劑與其單個成分芥末油、蜂蠟和樟腦以及可商購制劑二 氯芬酸相比的功效。
[0107] 表4用于研究的動物分組
[0110] 使用具有高9cm、直徑為6cm平臺的有機玻璃盒子(24cmX18cmX 18cm)誘導睡眠剝 奪。將水充填于盒中至平臺以下Icm的水平。將6只動物于每個平臺放置96小時。將一個平臺 保持為空的以減少束縛應激。在96小時的終點，將動物從盒中移出，并使其經歷熱板試驗。 將熱板的溫度設置為50±2°C。觀察動物對疼痛刺激的反應(舔爪、跳躍、爪回縮），并記錄動 物可在熱板上保持的持續(xù)時間。然后將試驗物質應用于各動物的背部。在應用試驗物質一 小時后，又使動物經歷熱板，并評估響應。截止時間設定為60s。結果報道為應用試驗物質之 前和之后的爪回縮時間，并按如下計算疼痛閾限的百分數(shù)變化：
[0111] 疼痛閾限的％變化=Rt~Roxl0° Ro
[0112] 其中Rt =應用試驗物質后的爪回縮時間 [0113] R0 =應用試驗物質前的爪回縮時間 [0114]統(tǒng)計學分析：
[0115] 所有值被表不為平均值土 SD。使用Graph pad PRISM 5軟件（Graph pad Software lnc，圣地亞哥，加州）應用統(tǒng)計學分析。為了確定疼痛閾限百分數(shù)變化，進行單向方差分析 (ANOVA)，隨后是圖基事后檢驗，以確定組間的顯著差異。為了確定爪回縮時間，使用雙向 AN0VA，隨后是邦費羅尼事后分析(Bonferroni post-hoc analysis)，其中以治療和時間為 兩個變量。P〈〇. 05的值被認為是統(tǒng)計學顯著的。
[0116]結果：
[0117]雙氯芬酸、匪-2制劑與其單個成分對REM睡眠剝奪誘導的痛覺過敏中爪回縮時間 的影響。
[0118]表5
[0120] 值被表示為平均值土SD(每組n = 6)。當與疾病對照組比較時，*P〈0.05、#P〈0.01 和*#P〈0.001。當與雙氯芬酸組比較時，@P〈0.05、_p〈0.01和_粑〈0.001。當與匪2組比較 時，#Ρ〈0 · 05、##P〈0 · 01 和###P〈0 · 001。
[0121] 上表5以及圖3和4顯示:與對照組、雙氯芬酸(P〈0.05)和單個成分組(見表5和圖3) 相比，匪-2組(P〈0.001)中大鼠疼痛閾限顯著增加;此外，表現(xiàn)為爪回縮時間增加的匪-2組 的疼痛閾限增加百分數(shù)，與雙氯芬酸和單個成分組(見表5和圖4)相比，在匪-2組中是顯著 最尚的。
[0122] 總結：
[0123]當與疾病對照組比較時，用匪-2制劑治療顯示出爪回縮時間的顯著增加，從而是 疼痛閾限百分數(shù)的顯著增加?？闯鯪M-2制劑的功效大于其每個單個的成分，表明NM-2克服 REM睡眠剝奪誘導的痛覺過敏的活性源于其單個成分的協(xié)同效果。因此，匪-2制劑在緩解睡 眠剝奪誘導的痛覺過敏中的功效表明其可具有壓力減輕性能。
[0124] 鑒于以上結果，看出本發(fā)明制劑取得的多種功效源于其單個成分的協(xié)同活性。
[0125] 已詳細描述了本公開，將明顯的是，在不偏離所附權利要求中限定的公開范圍的 情況下，對于以上組合物、產品和方法的修改和變化是可能的。
【主權項】
1. 用于減輕一種或多種疼痛、壓力和失眠癥狀的組合物，包括蕓苔、蜂蠟和龍腦樟。2. 如權利要求1所述的組合物，其中所述龍腦樟處于晶體形式或油形式。3. 如權利要求1所述的組合物，其中所述蕓苔油為所述組合物的40-75重量份，蜂蠟為 所述組合物的15-50重量份，以及龍腦樟為所述組合物的1 -20重量份。4. 如權利要求1所述的組合物，其中所述蕓苔油為所述組合物的55-65重量份，蜂蠟為 所述組合物的25-35重量份，以及龍腦樟為所述組合物的3-13重量份。5. 如權利要求1所述的組合物，進一步包括一種或多種其他天然的或合成的活性成分 和/或藥學可接受的賦形劑。6. -種局部制劑，包含如權利要求1-6中任一項所述的組合物。7. -種用于制備減輕至少一種疼痛、壓力和失眠癥狀的制劑的方法，包括:在60°C_225 °C的溫度下將40-75重量份的蕓苔油加熱特定的時間段；向所述熱蕓苔油中混合15-50重量 份的蜂蠟直至所述蜂蠟溶解;將所述混合物從熱源移開；向所述混合物中加入1-20重量份 的龍腦樟并混合。8. 權利要求7的方法，其中所述用于加熱蕓苔油的時間段為足以使溫度達到60°C-225 °C的時間段。9. 權利要求7的方法，其中將所述蕓苔油在60°C-100°C的溫度下加熱足以使溫度達到 60°C_100°C的時間段。10. 權利要求7的方法，其中所述蜂蠟為所述制劑的25-35重量份。11. 權利要求7的方法，其中所述龍腦樟為所述制劑的3-13重量份。12. 權利要求7的方法，其中所述方法進一步包括加入一種或多種其他天然的或合成的 活性成分和/或藥學可接受的賦形劑。13. 包含蕓苔油、蜂蠟和龍腦樟的組合物在減輕至少一種或多種或全部疼痛、壓力和失 眠癥狀中的用途。14. 治療至少一種疼痛、壓力和失眠癥狀的方法，包括根據個體的需要，應用足以覆蓋 受影響區(qū)域、炎性區(qū)域、頭部或全部身體的量的如權利要求6所述的制劑。
【文檔編號】A61K35/644GK105979953SQ201580007127
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2015年2月4日
【發(fā)明人】阿什瓦尼·庫馬爾·邦薩
【申請人】阿什瓦尼·庫馬爾·邦薩