直腸腺癌的分子標(biāo)記物grik3的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地設(shè)及直腸腺癌的分子標(biāo)記物GRIK3。
【背景技術(shù)】
[0002] 直腸腺癌是消化道常見的惡性腫瘤之一。在美國(guó)及西方國(guó)家，其發(fā)病率位居惡性 腫瘤的第3位，也是腫瘤導(dǎo)致死亡的第=大常見原因。在中國(guó)，其發(fā)病率和死亡率居各種惡 性腫瘤的前列，且呈逐年上升的趨勢(shì)，可能與W下幾點(diǎn)原因相關(guān)：（1)飲食結(jié)構(gòu)的調(diào)整，生活 質(zhì)量提高后人們攝入的動(dòng)物脂肪蛋白質(zhì)增多使糞便中的甲基膽蔥等能誘發(fā)直腸癌的物質(zhì) 增多，而能增加大便體積、加快大便通過(guò)速度并能減少有害物質(zhì)吸收的飲食纖維物質(zhì)攝入 相對(duì)減少；（2)目前食物中致癌添加劑的增多也使各種有毒物質(zhì)在體內(nèi)積累，大大增加了直 腸癌的發(fā)病率；（3)因各種普查的實(shí)施與醫(yī)療水平的提高，使直腸腺癌的檢出率也有所增 加。直腸腺癌患者中青年人所占比例比較高，可達(dá)12%-15%，因其早期臨床癥狀不明顯，臨 床發(fā)現(xiàn)時(shí)多數(shù)患者已發(fā)展為中晚期。
[0003] 目前臨床上直腸腺癌早期診斷主要依賴于直腸指檢、血CEA檢測(cè)、糞便隱血檢查、 直腸鏡或結(jié)腸鏡檢查、盆腔磁共振檢查、腹盆腔CT、直腸鏡內(nèi)B超、胸部CT或胸部X線檢查。而 臨床上的治療外科手術(shù)為主，輔W化療、放療或祀向治療等的綜合治療。手術(shù)治療主要是根 據(jù)癌腫所在部位、大小、活動(dòng)度、細(xì)胞分化程度、術(shù)前的排便控制能力及術(shù)前臨床分期等因 素進(jìn)行局部切除，腹會(huì)陰聯(lián)合直腸癌根治術(shù)，永久性乙狀結(jié)腸造口、經(jīng)腹直腸癌切除術(shù)，經(jīng) 腹直腸癌切除、近端造口、遠(yuǎn)端封閉手術(shù)。直腸腺癌患者即使進(jìn)行手術(shù)切除，其五年生存率 也明顯不高。因此迫切需要除手術(shù)W外新的有效治療方法，來(lái)提高患者的生存率或生存質(zhì) 量。
[0004] 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，國(guó)內(nèi)外研究者不斷探索直腸腺癌新的生物標(biāo)志物， W對(duì)傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行有效補(bǔ)充，從而對(duì)直腸腺癌患者的病情監(jiān)測(cè)、預(yù)后判斷W及實(shí)施 個(gè)體化綜合治療、新型抗腫瘤藥物的研發(fā)和應(yīng)用，具有重要的理論意義和臨床價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種直腸腺癌的分子標(biāo)記物， 為直腸腺癌的診斷和治療提供一種分子手段。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0007] 本發(fā)明提供了 GRIK3基因在制備治療直腸腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[000引進(jìn)一步，所述的藥物包含GRIK3基因和/或其表達(dá)產(chǎn)物的抑制劑。所述抑制劑包括 抑制GRIK3基因表達(dá)的物質(zhì)、抑制GRIK3基因表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定性的物質(zhì)、和/或抑制GRIK3基因 表達(dá)產(chǎn)物活性的物質(zhì)。
[0009] 進(jìn)一步，本發(fā)明所述抑制劑包括:通過(guò)干擾RNA抑制GRIK3基因表達(dá)的雙鏈核糖核 酸，或基于GRIK3抗原蛋白的腫瘤疫苗，或用于抑制GRIK3蛋白活性的蛋白質(zhì)。
[0010] 優(yōu)選的，所述抑制劑是針對(duì)GRIK3基因的siRNA。
[0011] 本發(fā)明還提供了一種用于治療直腸腺癌的藥物，所述藥物包含GRIK3基因和/或其 表達(dá)產(chǎn)物抑制劑。所述抑制劑包括抑制GRIK3基因表達(dá)的物質(zhì)、抑制GRIK3基因表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn) 定性的物質(zhì)、和/或抑制GRIK3基因表達(dá)產(chǎn)物活性的物質(zhì)。
[0012] 進(jìn)一步，本發(fā)明所述抑制劑包括:通過(guò)干擾RNA抑制GRIK3基因表達(dá)的雙鏈核糖核 酸，或基于GRIK3抗原蛋白的腫瘤疫苗、或用于抑制GRIK3蛋白活性的蛋白質(zhì)。
[0013] 本發(fā)明的藥物還可與其他治療直腸腺癌的藥物聯(lián)用，多種藥物聯(lián)合使用可W實(shí)現(xiàn) 協(xié)同效應(yīng)，大大提高治療的成功率，同時(shí)也會(huì)因減少個(gè)別藥物的劑量從而減少毒副反應(yīng)。
[0014] 本發(fā)明所述的"治療直腸腺癌的藥物"包括能夠括抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞調(diào)亡的 物質(zhì)。
[0015] 本發(fā)明提供了 GRIK3在制備診斷直腸腺癌的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0016] 進(jìn)一步，上面所提到的產(chǎn)品能夠通過(guò)檢測(cè)直腸組織中GRIK3基因的表達(dá)水平來(lái)診 斷直腸腺癌。
[0017] 進(jìn)一步，所述通過(guò)檢測(cè)直腸腺癌組織中GRIK3基因的表達(dá)水平:通過(guò)RT-PCR、實(shí)時(shí) 定量PCR、免疫檢測(cè)、原位雜交或忍片進(jìn)行檢測(cè)。
[0018] 其中，所述用RT-PCR來(lái)診斷直腸腺癌的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增GRIK3基因的 引物;所述用實(shí)時(shí)定量PCR診斷直腸腺癌的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增GRIK3基因的引物； 所述用免疫檢測(cè)診斷直腸腺癌的產(chǎn)品包括:與GRIK3蛋白特異性結(jié)合的抗體;所述用原位雜 交診斷直腸腺癌的產(chǎn)品包括:與GRIK3基因的核酸序列雜交的探針;所述用忍片診斷直腸腺 癌的產(chǎn)品包括:蛋白忍片和基因忍片；其中，蛋白忍片包括與GRIK3蛋白特異性結(jié)合的抗體， 基因忍片包括與GRIK3基因的核酸序列雜交的探針。
[0019] 優(yōu)選地，所述產(chǎn)品包括忍片、試劑盒。
[0020] 本發(fā)明提供了一種診斷直腸腺癌的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品能夠通過(guò)檢測(cè)直腸組織中 GRIK3基因的表達(dá)水平來(lái)診斷直腸腺癌。
[0021] 進(jìn)一步，所述產(chǎn)品包括忍片、試劑盒。其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白質(zhì)忍片； 所述基因忍片包括固相載體W及固定在固相載體的寡核巧酸探針，所述寡核巧酸探針包括 用于檢測(cè)GRIK3基因轉(zhuǎn)錄水平的針對(duì)GRIK3基因的寡核巧酸探針;所述蛋白質(zhì)忍片包括固相 載體W及固定在固相載體的GRIK3蛋白的特異性抗體;所述試劑盒包括基因檢測(cè)試劑盒和 蛋白免疫檢測(cè)試劑盒;所述基因檢測(cè)試劑盒包括用于檢測(cè)GRIK3基因轉(zhuǎn)錄水平的試劑;所述 蛋白免疫檢測(cè)試劑盒包括GRIK3蛋白的特異性抗體。
[0022] 進(jìn)一步，所述固相載體包括無(wú)機(jī)載體和有機(jī)載體，所述無(wú)機(jī)載體包括但不限于有 娃載體、玻璃載體、陶瓷載體等;所述有機(jī)載體包括聚丙締薄膜、尼龍膜等。
[0023] 進(jìn)一步，所述試劑包括使用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢測(cè)、原位雜交或忍片方法 檢測(cè)GRIK3基因表達(dá)水平過(guò)程中所需的試劑。優(yōu)選地，所述試劑包括針對(duì)GRIK3基因的引物 和/或探針。根據(jù)SEQ ID NO. 1所示的核巧酸序列信息設(shè)計(jì)出可W用于檢測(cè)GRIK3基因表達(dá) 水平的引物和探針。
[0024] 與GRIK3基因的核酸序列雜交的探針可W是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它 衍生物。所述探針的長(zhǎng)度沒(méi)有限制，只要完成特異性雜交、與目的核巧酸序列特異性結(jié)合， 任何長(zhǎng)度都可W。所述探針的長(zhǎng)度可短至25、20、15、13或10個(gè)堿基長(zhǎng)度。同樣，所述探針的 長(zhǎng)度可長(zhǎng)至60、80、100、150、300個(gè)堿基對(duì)或更長(zhǎng)，甚至整個(gè)基因。由于不同的探針長(zhǎng)度對(duì)雜 交效率、信號(hào)特異性有不同的影響，所述探針的長(zhǎng)度通常至少是14個(gè)堿基對(duì)，最長(zhǎng)一般不超 過(guò)30個(gè)堿基對(duì)，與目的核巧酸序列互補(bǔ)的長(zhǎng)度W15-25個(gè)堿基對(duì)最佳。所述探針自身互補(bǔ)序 列最好少于4個(gè)堿基對(duì)，W免影響雜交效率。
[0025] 進(jìn)一步，所述GRIK3蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述GRIK3蛋 白的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾，例如，嵌合抗體、SCFv Jab、 尸(曰6'）2少乂等。只要所述片段能夠保留與61?11(3蛋白的結(jié)合能力即可。用于蛋白質(zhì)水平的抗 體的制備時(shí)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且本發(fā)明可W使用任何方法來(lái)制備所述抗體。
[0026] 本發(fā)明的藥物還可包括藥學(xué)上可接受的載體，運(yùn)類載體包括(但并不限于）：稀釋 劑如乳糖、氯化鋼、葡萄糖、尿素、淀粉、水等;粘合劑如淀粉、預(yù)膠化淀粉、糊精、麥芽糖糊 精、薦糖、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、簇甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙締醇、聚乙二醇、聚 乙締比咯燒酬、海藻酸及海藻酸鹽、黃原膠、徑丙基纖維素和徑丙基甲基纖維素等;表面活 性劑如聚氧化乙締山梨聚糖脂肪酸醋、十二烷基硫酸鋼、硬脂酸單甘油醋、十六燒醇等;致 濕劑如甘油、淀粉等;吸附載體如淀粉、乳糖、斑脫±、硅膠、高嶺±和皂粘±等;潤(rùn)滑劑如硬 脂酸鋒、單硬脂酸甘油醋、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸巧和儀、聚乙二醇、棚酸粉末、氨化植物 油、硬脂富馬酸鋼、聚氧乙締單硬脂酸醋、單月桂薦糖酸醋、月桂醇硫酸鋼、月桂醇硫酸儀、 十二烷基硫酸儀等;填充劑如甘露醇(粒狀或粉狀）、木糖醇、山梨醇、麥芽糖、赤薛糖、微晶 纖維素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、薦糖、糊精、淀粉、海藻酸鋼、海帶多糖粉末、瓊脂粉 末、碳酸巧和碳酸氨鋼等;崩解劑如交聯(lián)乙締化咯燒酬、簇甲基淀粉鋼、低取代徑丙基甲基、 交聯(lián)簇甲基纖維素鋼、大豆多糖等。
[0027] 本發(fā)明的藥物可W使用不同的添加劑進(jìn)行制備，例如矯味劑、泡騰劑、穩(wěn)定劑、殺 菌劑、等滲劑、馨合劑、生物利用度劑等中的一種或幾種。所述矯味劑包括但不限于甘露醇、 木糖醇、甜菊武、乳糖、果糖、薦糖、蛋白糖、麥芽糖醇、甘草甜素、環(huán)己氨基橫酸鋼、明膠、阿 斯己甜、香蕉香精、渡蘿香精、香蘭素、香澄香精、枯子香精、薄荷香精、人參香精、草替香精