一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物及其制備方法，即三株益生菌與牛初乳 生長因子聯(lián)合使用的藥物，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC)是炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD)的一個主要類型，是一種原因不明的慢性非特異性腸道炎癥。資料顯示，每 年美國UC患病率為200/10萬人，治療UC的花費在1至1. 5億美元左右，截止到2012年， UC患者總數(shù)是2000年的2. 5倍，且復(fù)發(fā)率達72% ;近年來我國UC的患病人數(shù)呈明顯上升 趨勢。
[0003] 潰瘍性結(jié)腸炎病變主要位于結(jié)腸粘膜和粘膜下層；臨床表現(xiàn)為腹瀉，黏液膿血便， 腹痛，里急后重等，多呈反復(fù)發(fā)作的慢性病程。潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生已經(jīng)嚴重影響到患者的 身體健康和生活質(zhì)量，被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一。潰瘍性結(jié)腸炎的病因與發(fā)病 機制尚不十分清楚。多認為UC的病因可能與環(huán)境因素、遺傳因素、免疫因素等有關(guān)；其中， 遺傳及免疫因素在UC致病中起著至關(guān)重要的作用。UC發(fā)病機制雖還未完全闡明，但可以肯 定腸黏膜屏障功能失調(diào)參與了 UC的發(fā)生。腸黏膜屏障主要包括機械屏障、免疫屏障及生物 屏障。機械屏障由腸上皮細胞、腸黏液組成；免疫屏障（即腸道免疫防御系統(tǒng)），主要由分 泌性免疫球蛋白和腸相關(guān)淋巴組織構(gòu)成；生物屏障由腸道正常菌群構(gòu)成。腸道上皮屏障破 壞，黏膜通透性增加，腸組織長期暴露于大量抗原中，導(dǎo)致腸道免疫系統(tǒng)過度反應(yīng)和錯誤識 另IJ，引起巨噬細胞和淋巴細胞的激活，釋放一系列細胞因子和炎癥介質(zhì)，激活機體的免疫應(yīng) 答，炎癥反應(yīng)逐級放大，最終導(dǎo)致組織損傷，出現(xiàn)UC的病理改變和臨床表現(xiàn)。
[0004] 目前治療潰瘍性結(jié)腸炎的方法主要包括藥物治療、營養(yǎng)治療、心理治療及手術(shù)治 療，其中藥物治療是最主要的方法。在臨床上用于治療UC的藥物主要有氨基水楊酸類藥 物、腎上腺糖皮質(zhì)激素類和免疫抑制劑類等。氨基水楊酸類藥物能很好的抑制前列腺素合 成，清除氧自由基從而減輕炎癥反應(yīng)；然而其無法根治UC，且患者服藥劑量偏大時，易產(chǎn)生 諸多不良反應(yīng)（如：頭疼、惡心、白細胞下降等）。糖皮質(zhì)激素是重度或爆發(fā)性UC患者的首 選藥；然而該類藥物易導(dǎo)致機體代謝紊亂、水潴留等副作用，可作為應(yīng)急藥物，無法長期使 用。免疫抑制類藥物藥物依賴性大，治療期較長，且可能致毒致癌，副作用較大，所以一般 只作為輔助治療使用。總體來說，上述藥物治療見效快、療效好，可緩解UC患者燃眉之苦， 但仍存在很多問題。首先，無法根治患者UC，治標不治本；其次，不良作用大，易引起患者頭 疼、惡心，造成機體消化系統(tǒng)、血液系統(tǒng)異常；然后，潛在的致毒致癌性；最后，抗生素類藥 物（如應(yīng)用最廣的SASP)易導(dǎo)致機體耐藥抗藥性。
[0005] 牛初乳生長因子可通過與腸黏膜細胞酪氨酸激酶受體結(jié)合，從而促使腸黏膜細胞 生長和增殖，增加腸絨毛高度，促進腸道發(fā)育；并可通過調(diào)控炎性因子水平來促進機體免疫 力。益生菌可通過與有害菌競爭位點來調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，而且植物乳桿菌可產(chǎn)生細菌素， 抑制有害菌的增殖；嗜酸乳桿菌具有很好的益生作用。因此，我們假設(shè)牛初乳生長因子聯(lián)合 益生菌具有很好的抗?jié)冃越Y(jié)腸炎用途。因此，開發(fā)一種高效、安全且副作用較小的安全的 治療UC的藥物，具有十分重要的現(xiàn)實意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的之一是提供一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物，可以有效的治療潰瘍性 結(jié)腸炎，并且毒副作用較小，不易產(chǎn)生抗性。
[0007] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物的制備方法。
[0008] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0009] 一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物，包括132~198體積份益生菌和432~684質(zhì)量 份牛初乳生長因子，其中體積份/質(zhì)量份=ml/mg。
[0010] 優(yōu)選地，上述治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物，包括165體積份益生菌和540質(zhì)量份牛初 乳生長因子。所述的牛初乳生長因子為從牛初乳中提取的生長因子粗提物。所述的益生菌 為嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和瑞士乳桿菌；且均為活菌菌體形式。所述的益生菌活菌菌體是 由均處于穩(wěn)定初期的乳桿菌液體培養(yǎng)物分別離心收集的菌泥。
[0011] 優(yōu)選地，所述的嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和瑞士乳桿菌的數(shù)量比為1 : 1 : 1。
[0012] 上述治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物中，所述益生菌用量為I. 5X IOwCFlVkg,所述的牛 初乳生長因子用量為216~342mg/kg。即每千克的動物、人體等所用的藥物中嗜酸乳桿菌、 植物乳桿菌和瑞士乳桿菌的總數(shù)量為I. 5 X IOwCFU,牛初乳生長因子用量為216~342mg， 具體地，可以根據(jù)實際情況進行計算，比如，一個重量為20g的大鼠，其用藥中含有嗜酸乳 桿菌、植物乳桿菌和瑞士乳桿菌的總數(shù)量為3X IO8CFU,牛初乳生長因子用量為4. 32~ 6. 84mg ;-個重量為50kg的人，其用藥中嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和瑞士乳桿菌的總數(shù)量 為7. 5 X IO11CFU,牛初乳生長因子用量為10. 8~17. lg。
[0013] 前述治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物的制備方法，包括如下步驟：
[0014] (1)分別將嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和瑞士乳桿菌在MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)；
[0015] (2)分別選取培養(yǎng)14~18h的瑞士乳桿菌、培養(yǎng)12~16h的嗜酸乳桿菌和培養(yǎng) 12~16h的植物乳桿菌；
[0016] (3)分別取步驟（2)得到的瑞士乳桿菌菌液77~115體積份，嗜酸乳桿菌菌液 40~60體積份，植物乳桿菌菌液15~23體積份，離心取菌泥，然后分別將它們?nèi)苡?0體 積份無菌PBS中，得混合菌泥；
[0017] (4)對牛初乳離心脫脂、酸沉酪蛋白、二次超濾、透析及冷凍干燥制得牛初乳生長 因子粗提物；
[0018] (5)將牛初乳生長因子粗提物432~684質(zhì)量份加入到上述混合菌泥中，攪拌均 勻，然后加入合適的輔料制成臨床可接受的劑型。
[0019] 優(yōu)選地，治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物的制備方法，包括如下步驟：
[0020] (1)分別將嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和瑞士乳桿菌在MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)；
[0021] (2)選取對數(shù)期末穩(wěn)定期初的益生菌，即分別選取培養(yǎng)16h的瑞士乳桿菌、培養(yǎng) 14h的嗜酸乳桿菌和培養(yǎng)14h的植物乳桿菌；
[0022] (3)分別取步驟（2)得到的瑞士乳桿菌菌液96體積份，嗜酸乳桿菌菌液50體積 份，植物乳桿菌菌液19體積份，離心取菌泥，然后分別將它們?nèi)苡?0體積份無菌PBS中，得 混合菌泥；
[0023] (4)對牛初乳離心脫脂、酸沉酪蛋白、二次超濾、透析及冷凍干燥制得牛初乳生長 因子粗提物；
[0024] (5)將牛初乳生長因子粗提物540質(zhì)量份加入到上述混合菌泥中，攪拌均勾，然后 加入合適的輔料制成臨床可接受的劑型。
[0025] 本發(fā)明的有益效果：
[0026] 本發(fā)明以益生菌與牛初乳生長因子粗提取物制成的藥物具有較好的抗?jié)冃越Y(jié) 腸炎作用。具體表現(xiàn)在顯著改善潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的表觀狀態(tài)，增加潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的 體重、結(jié)腸長度，并顯著提高小鼠結(jié)腸組織的完整性。
【附圖說明】
[0027] 圖1為嗜酸乳桿菌鏡檢圖片（100倍）；
[0028] 圖2為嗜酸乳桿菌菌落圖；
[0029] 圖3為瑞士乳桿菌鏡檢圖片（100倍）；
[0030] 圖4為瑞士乳桿菌菌落圖；
[0031] 圖5為植物乳桿菌鏡檢圖片（100倍）；
[0032] 圖6為植物乳桿菌菌落圖；
[0033] 圖7為三株乳酸桿菌生長曲線；
[0034] 圖8為腸炎組小鼠表觀狀態(tài)；
[0035] 圖9為腸炎組小鼠表觀狀態(tài)特寫；
[0036] 圖10為腸炎組小鼠解剖圖；
[0037] 圖11為腸炎組小鼠結(jié)腸長度代表圖；
[0038] 圖12為完全空白組小鼠結(jié)腸長度代表圖；
[0039] 圖13為腸炎組小鼠 HE染色圖；
[0040] 圖14為試驗方案設(shè)計圖；
[0041] 圖15為聯(lián)合組小鼠表觀狀態(tài)圖；
[0042] 圖16為聯(lián)合組小鼠解剖圖；
[0043] 圖17為后續(xù)觀察聯(lián)合組小鼠表觀狀態(tài)；
[0044] 圖18為抗生素組小鼠表觀狀態(tài)；
[0045] 圖19為抗生素組小鼠解剖圖；
[0046] 圖20為后續(xù)觀察抗生素組小鼠表觀狀態(tài)；
[0047] 圖21為完全空白組小鼠表觀狀態(tài)；
[0048] 圖22為