硫磺在制備抑制腫瘤的組合物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域；更具體地，本發(fā)明涉及硫磺在制備抑制腫瘤的組 合物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人類生活水平的提高，人類的生存環(huán)境發(fā)生了很大改變，各種致癌因素不斷 增多，各類腫瘤已成為影響人類生存質(zhì)量，威脅人類生命健康的第一大因素。結(jié)腸癌是常見 的惡性腫瘤之一，發(fā)病率占所有惡性腫瘤的10~15%。前列腺癌是最常見的男性泌尿生殖 系統(tǒng)惡性腫瘤，歐美國家最多。而現(xiàn)在，我國前列腺癌的發(fā)病率的增加也居各種腫瘤之首。 早期前列腺癌多表現(xiàn)為雄激素依賴型，一般采用激素阻斷治療，但是經(jīng)過一段平穩(wěn)期后，多 轉(zhuǎn)化為雄激素非依賴型，激素療法失去效果。
[0003] 硫磺（sulfur)是一種淡黃色脆性結(jié)晶或粉末狀物質(zhì)。在中醫(yī)治療中，硫磺外用具 有解毒殺蟲、療瘡止癢的作用；內(nèi)用具有補(bǔ)火助陽通便作用。美國藥典（USP)規(guī)定，升華硫 磺和沉降硫磺是二種制劑用藥。
[0004] 近年來，中醫(yī)療法廣泛用于前列腺癌的臨床和理論研究中，中醫(yī)中藥治療配合西 醫(yī)的內(nèi)分泌治療對晚期前列腺癌可獲得療好的療效，而進(jìn)入雄激素抵抗階段后，中藥治療 可作為主要治療手段之一，改善生活質(zhì)量，延緩、甚或控制病情發(fā)展，延長生存期。中藥的給 藥成分比較復(fù)雜，目前很少有研究集中于中藥某種單一成份的功能探討，因此探討中藥單 一成分在癌癥治療中的作用及機(jī)制，對于抗腫瘤藥物的研究有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供硫磺在制備抑制腫瘤的組合物中的用途。
[0006] 在本發(fā)明的第一方面，提供一種硫磺的用途，用于制備抑制結(jié)腸癌或前列腺癌的 組合物。
[0007] 在一個優(yōu)選例中，所述的組合物用于降低結(jié)腸癌或前列腺癌細(xì)胞的克隆形成能 力。
[0008] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物用于降低結(jié)腸癌或前列腺癌組織中雄激素受體 (AR)基因，前列腺特異性抗原（PSA)基因，人同源盒基因 NKX3. 1的表達(dá)水平。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物是食物組合物或藥物組合物。
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述的硫磺通過口服的方式給藥。
[0011] 在另一優(yōu)選例中，所述的口服包括自由進(jìn)食或灌胃。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，給予裸鼠口服時，給予的劑量是10-60mg硫磺/天。
[0013] 在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于抑制結(jié)腸癌或前列腺癌的組合物，所述的組 合物中包含硫磺。
[0014] 在一個優(yōu)選例中，所述的組合物為單位劑型，每一劑包含10_60mg硫磺。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物包括食物組合物或藥物組合物。
[0016] 本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見 的。
【附圖說明】
[0017] 圖1、荷瘤裸鼠模型的照片。
[0018] 圖2、SW620腫瘤實(shí)驗(yàn)：裸鼠腫瘤生長曲線。
[0019] 圖3、DU145腫瘤實(shí)驗(yàn)。
[0020] A :第一批，使用不同劑量硫磺處理荷瘤裸鼠后，腫瘤生長曲線。
[0021] B :第二批，重復(fù)20mg劑量硫磺對荷瘤裸鼠腫瘤生長影響，生長曲線。
[0022] 圖4、22RV1腫瘤實(shí)驗(yàn)。
[0023] A :硫磺對荷瘤裸鼠腫瘤生長影響，腫瘤生長曲線。
[0024] B :硫磺對荷瘤裸鼠腫瘤生長影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時腫瘤平均重量變化。
[0025] C:荷瘤裸鼠腫瘤細(xì)胞離體后克隆形成能力檢測，左邊為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞形成克隆，右邊 克隆數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果。
[0026] D :荷22RV1瘤裸鼠腫瘤組織中前列腺癌相關(guān)基因 mRNA表達(dá)水平的RT-PCR檢測， 包括雄激素受體（AR)，前列腺特異性抗原（PSA)，人同源盒基因 NKX3. 1。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 為探究硫磺是否對于腫瘤的治療發(fā)揮作用，本發(fā)明人經(jīng)過深入的研究，首次揭示 了硫磺可有效地抑制腫瘤。本發(fā)明為新的抗癌藥物成分的研究提供了新的途徑。
[0028] 硫磺
[0029] 硫磺是一種淡黃色脆性結(jié)晶或粉末狀物質(zhì)。根據(jù)1995年版《中華人民共和國藥 典》，硫橫指單質(zhì)硫含量98. 5%以上的混合物。在中醫(yī)治療中，硫橫外用具有解毒殺蟲、療瘡 止癢的作用；內(nèi)用具有補(bǔ)火助陽通便作用。本發(fā)明中所使用的硫磺為升華硫，含硫量99% 以上。
[0030] 用途
[0031] 通過建立攝入硫磺的荷瘤裸小鼠模型，本發(fā)明人觀察了硫磺對結(jié)腸癌以及前列腺 癌細(xì)胞接種的裸鼠在體腫瘤生長的抑制作用。
[0032] 荷結(jié)腸癌細(xì)胞SW620腫瘤裸鼠和前列腺癌細(xì)胞DU145腫瘤裸鼠自由進(jìn)食，前列腺 癌細(xì)胞22RV1腫瘤裸鼠灌胃攝入硫磺。兩種給藥方法下，硫磺攝入組裸鼠的腫瘤體積明顯 低于對照組，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后腫瘤重量也明顯低于對照組。
[0033] 為了探究硫磺的最佳作用劑量，本發(fā)明人在DU145腫瘤實(shí)驗(yàn)中設(shè)計(jì)了不同劑量處 理裸小鼠的實(shí)驗(yàn)，通過給予荷瘤小鼠20mg，40mg三種劑量，比較其中抑瘤率的大小。實(shí)驗(yàn)結(jié) 果顯示，裸鼠每天攝取20mg硫磺能夠更有效地抑制腫瘤的生長。因此灌胃實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中選取 20mg劑量。
[0034] 為了探究硫磺對腫瘤的抑制作用是否具有持續(xù)性，本發(fā)明人對22RV1腫瘤從裸鼠 身上剝離后，進(jìn)行原代腫瘤細(xì)胞的分離培養(yǎng)。在細(xì)胞恢復(fù)在體外生長狀態(tài)后，及時進(jìn)行細(xì)胞 克隆形成能力檢測實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)硫磺處理組分離的腫瘤細(xì)胞的克隆形成能力明顯低于對 照組，下降36. 7%。這指示了硫磺對抑制22RV1腫瘤生長具有延續(xù)性，可能是硫磺的持續(xù)作 用使得腫瘤細(xì)胞本質(zhì)上發(fā)生了可遺傳變化。
[0035] 為了進(jìn)一步證實(shí)攝入硫磺會引起腫瘤細(xì)胞本質(zhì)上的變化，本發(fā)明人通過熒光定量 PCR方法分析22RV1腫瘤組織中前列腺癌相關(guān)基因的表達(dá)水平變化。結(jié)果顯示，在硫磺處 理裸鼠腫瘤組織中，22RV1細(xì)胞所需的雄激素受體AR的表達(dá)量明顯降低；同時受AR調(diào)控的 基因，包括前列腺特異性抗原PSA和盒基因 NKX3. 1的表達(dá)量也發(fā)生了明顯的降低。這些提 示，硫磺的確能夠引起腫瘤細(xì)胞內(nèi)分子水平的改變，從而影響其生長。
[0036] 基于本發(fā)明人的上述新發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供了硫磺的用途，用于制備抑制腫瘤的組 合物。硫磺能夠抑制腫瘤生長，這種作用是具有延續(xù)性的。經(jīng)硫磺作用過的腫瘤細(xì)胞，在離 體后仍具有低的分裂增殖能力。硫磺抑制腫瘤生長，能夠改變相關(guān)癌癥基因的表達(dá)水平。硫 磺可作為單一或復(fù)合藥物成分，用于腫瘤的治療。
[0037] 組合物
[0038] 如本文所用，術(shù)語"本發(fā)明的組合物"包括藥物組合物、飲食補(bǔ)充劑（如保健品組 合物）或食物組合物，只要它們含有硫磺作為抑制腫瘤的活性成分。
[0039] 所述的組合物可以含有有效量的（如0· l_20wt% ;更佳地0· 5-10wt% ;進(jìn)一步更 佳地l-7wt% )的硫磺作為活性成分；(b)藥物學(xué)上或食品上可接受的載體或賦形劑。
[0040] 本發(fā)明中，術(shù)語"含有"表示各種成分可一起應(yīng)用于本發(fā)明的混合物或組合物中。 因此，術(shù)語"主要由...組成"和"由...組成"包含在術(shù)語"含有"中。
[0041] 本發(fā)明中，"藥學(xué)上可接受的"成分是適用于人和/或動物而無過度不良副反應(yīng) (如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng)）即有合理的效益/風(fēng)險比的物質(zhì)。
[0042] 本發(fā)明中，"藥學(xué)上可接受的載體"是用于將本發(fā)明的硫磺傳送給動物或人的藥學(xué) 上或食品上可接受的溶劑、懸浮劑或賦形劑。載體可以是液體或固體。
[0043] 本發(fā)明所述的藥物組合物的劑型可以是多種多樣的，只要是能夠使活性成分有效 地到達(dá)哺乳動物體內(nèi)的劑型都是可以的。比如可選自：片劑、膠囊、粉末、顆粒、糖漿、溶液、 懸浮液、或氣霧劑。其中硫磺可以存在于適宜的固體或液體的載體或稀釋液中。
[0044] 從易于制備和給藥的立場看，優(yōu)選的藥物組合物是固態(tài)組合物，尤其是片劑和固 體填充或液體填充的膠囊。藥物組合物的口服給藥是優(yōu)選的。
[0045] 本發(fā)明的硫磺及其組合物也可儲存在適宜于注射或滴注或給藥的消毒器具中。 通常，在本發(fā)明的藥物組合物中，硫磺作為活性成分占總重量的（如0. l-20wt% ;更佳地 0. 5-lOwt%;進(jìn)一步更佳地l-7wt% )，其余為藥學(xué)上可接受的載體以及其他添加劑等物質(zhì)。 [0046] 所用的活性成分的有效劑量可隨所用的硫磺、給藥的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重 程度而變化。然而，通常當(dāng)本發(fā)明的化合物每天以約〇. 00001-2g/kg動物體重的劑量給予 時，能得到令人滿意的效果，也可以以緩釋形式給藥?？烧{(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng) 答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每天給予若干次分開的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。 例如，當(dāng)應(yīng)用于小鼠時，硫磺的最適抑制腫瘤生長劑量為每只小鼠每天攝取20mg硫磺，對 于其它哺乳動物或人，可以按照本領(lǐng)域公知的方式進(jìn)行劑量的調(diào)整；或通過有限次的實(shí)驗(yàn) 來獲得一個較佳的劑量。
[0047] 硫磺或其組合物還可與其它活性成分或藥物聯(lián)合給藥。當(dāng)兩種或兩種以上的藥物 聯(lián)合給藥時，一般具有優(yōu)于兩種藥物分別單獨(dú)給藥的效果。
[0048] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件如J.薩姆布魯克等編著，分子克隆實(shí)驗(yàn)指南，第三版，科學(xué)出版社，2002中所述的條件， 或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。
[0049] 除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意 義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明