三葉青葉的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及三葉青葉提取物的技術領域，具體涉及一種三葉青葉的乙醇提取物乙 酸乙酯萃取部位及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 中藥三葉青（Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)為葡萄科崖爬藤屬三葉 崖爬藤，生于陰濕的山坡、山谷或溪旁的林下，主要分布于我國西南以及浙江、安徽、江西、 福建、廣西等省區(qū)。三葉青主要以塊根，也有用全草入藥，但無特別說明，目前藥房出售的三 葉青和市售的三葉青中藥飲片粉劑均為三葉青塊根部位，藥典和文獻中的三葉青也大多是 指三葉青的塊根部位。三葉青的塊根具有提高免疫力、抗病毒、增強肝功能等作用，尤其對 乙肝、多種腫瘤、癌癥、小兒高熱驚厥、支氣管炎、肺炎、咽喉炎、病毒性腦炎等具有獨特的療 效，被中醫(yī)藥界譽為極品中草藥。目前市場上三葉青塊根的鮮藥價格高達每千克2000元， 中藥飲片三葉青塊根粉的市場價格達每克10元，供不應求。
[0003] 三葉青塊根的市場需求旺盛，而三葉青的藤和葉的部位的藥理學研究相對較少， 市場需求量也不大，大部分的三葉青的藤和葉被當做廢料扔棄。因此，對于積極開發(fā)三葉青 藤和葉在藥理學上面的應用，可以有效提高三葉青各部位的綜合利用，提高經(jīng)濟效益。
[0004] 三葉青因為對不明原因的高熱、小兒高熱驚厥、各類炎性水腫有獨特療效，民間素 有"植物抗生素"的美譽。但現(xiàn)有藥典和文獻記載的都針對三葉青退熱和消炎的功能，對于 三葉青能直接抑制細菌生長和殺死細菌的作用未見記載，特別是三葉青的藤和葉提取物抑 制細菌生長和殺死細菌的作用的藥效部位未見報道。
[0005][0006] 申請公布號為CN 103381222A(申請?zhí)枮?01210144289. 5)的中國發(fā)明專利申請 公開了一種植物三葉青氣體制劑及制備方法，其中，三葉青原液成分提取方法包括：三葉青 原藥lKg乙醇50% 3~4倍浸取兩次，將兩次提取的上清液混合，回收乙醇制成1 :1原液 備用。該技術方案通過以下重量百分含量的組分制成噴霧劑，配制組分如下：三葉青原液 10%~30%、聚維酮3%~6%、泊洛沙姆0? 3%~5%、甘油1 %~3%、乙醇2%~6%、薄 荷腦0. 02 %~0. 05 %、木糖醇2 %~4%、純化水余量。該噴霧劑通過上述組分的復配可用 于抗病毒、鎮(zhèn)痛消腫，可具體用于治療上感風寒、口腔等粘膜部分的上呼吸道感染、以及外 用于治療痔瘡膿腫。但是如何通過提取液，提取出抗菌性最好的三葉青原液，該專利申請說 明書并未公開。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供了一種三葉青葉的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位及其制備方法和應 用，該萃取部位能夠有效抑制細菌生長和殺死細菌。
[0008] -種三葉青葉的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位的制備方法，包括以下步驟：
[0009] 1)取干燥的三葉青的葉粉碎得到干粉，用乙醇水溶液提取，過濾，濾液經(jīng)干燥后得 到三葉青葉的總提取物；
[0010] 2)將三葉青葉的總提取物與水混懸，用乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯萃取物，乙酸 乙酯萃取物蒸干后得到三葉青的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位。
[0011] 本發(fā)明中，先通過乙醇水溶液提取，之后通過乙酸乙酯萃取，最后得到三葉青的乙 醇提取物乙酸乙酯萃取部位，上述得到的三葉青的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位能夠抑制 細菌生長和殺死細菌。
[0012] 步驟1)中，作為優(yōu)選，所述的乙醇水溶液中乙醇的體積百分數(shù)為70%~95%， 用乙醇水溶液提取60min~120min。上述條件下能夠更好地提取三葉青葉中抑菌和殺 菌成分。進一步優(yōu)選，所述的乙醇水溶液中乙醇的體積百分數(shù)為95 %，用乙醇水溶液提取 90min，上述濃度的乙醇水溶液的極性非常適合將三葉青的葉中抑菌和殺菌成分提取出來， 上述條件有利于三葉青的葉中抑菌和殺菌成分的提取。所述的乙醇水溶液的用量為干粉質(zhì) 量的5-50mL/g。即所述的干粉的質(zhì)量與乙醇水溶液的體積之比為lg :5-50mL，即每克干粉 加入5-50mL的乙醇水溶液。進一步優(yōu)選，所述的乙醇水溶液的用量為干粉質(zhì)量的20mL/g， 即所述的干粉的質(zhì)量與乙醇水溶液的體積之比為lg :20mL。
[0013] 步驟2)中，所述的三葉青葉的總提取物與水的體積比為1 :1~5。
[0014] 所述的制備方法制備的三葉青葉的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位，可用于制備抑 菌殺菌用品，用于藥物、化妝品、保健食品、食品以及用于人、動物、水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中的抑菌 和抗菌。
[0015] -種抗菌藥液的制備方法，包括以下步驟：
[0016] 將三葉青葉的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位溶解于含溶解劑的水中，經(jīng)0.2~ 〇. 5 y m的濾膜過濾除菌后，制得抗菌藥液；
[0017] 所述的三葉青葉的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位的質(zhì)量與含溶解劑的水的體積 之比為 l-16mg :lmL ;
[0018] 所述的溶解劑為二甲基亞砜（DMS0)或乙醇，所述的含溶解劑的水中溶解劑的體 積百分數(shù)為〇. 1 %~2%。本發(fā)明采用特定的溶解劑，能將三葉青葉的乙醇提取物乙酸乙 酯萃取部位中抗菌和殺菌成分很好地溶解在含溶解劑的水中，形成穩(wěn)定的溶液，并且經(jīng) 0.2~0.5ym的濾膜除去雜質(zhì)，雜質(zhì)主要為不能溶解（無抗菌功效）的雜質(zhì)。本發(fā)明采用 特定濃度的特定溶解劑，最大限度地將抗菌和殺菌成分保留在抗菌藥液中，使得本發(fā)明制 得的抗菌藥液對抑制細菌生長和殺死細菌具有較好的作用。進一步優(yōu)選，所述的含溶解劑 的水中溶解劑的體積百分數(shù)為2%。
[0019] 抗菌藥液可用于制備抑菌殺菌用品，用于藥物、化妝品、保健食品、食品以及用于 人、動物、水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中的抑菌和抗菌。
[0020] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點：
[0021] 本發(fā)明中，先通過乙醇水溶液提取，之后通過乙酸乙酯萃取，最后得到三葉青的乙 醇提取物乙酸乙酯萃取部位，上述方法將三葉青的葉中抗菌成分較好地提取出來，上述得 到的三葉青的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位能夠有效抑制細菌生長和殺死細菌。
[0022] 本發(fā)明方法制備的三葉青葉的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位具有抗菌殺菌作用， 可用于制備抑菌殺菌用品。如制成抗菌藥液，本發(fā)明采用特定濃度的特定溶解劑，最大限度 地將抗菌和殺菌成分保留在抗菌藥液中，使得本發(fā)明制得的抗菌藥液對抑制細菌生長和殺 死細菌具有較好的作用。該藥液可作為成分用于藥物、化妝品、保健食品、食品以及用于人、 動物、水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中的抑菌和抗菌。本發(fā)明為三葉青原有公開功效外的新的藥物、化妝 品、保健食品以及食品的用途，具有抑菌抗菌作用。
【具體實施方式】[0023] 實施例1
[0024] (1)取干燥的三葉青的葉粉碎得到干粉，用體積百分數(shù)95%乙醇水溶液為溶劑提 取90min，乙醇水溶液的用量為干粉質(zhì)量的20mL/g，過濾，濾液干燥得到三葉青葉的總提取 物；
[0025] (2)對三葉青葉的總提取物與水1:1混懸，用乙酸乙酯萃取，萃取物蒸干后得到三 葉青的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位；
[0026] (3)三葉青的葉的乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位以16mg/mL的濃度溶解于含體積 百分數(shù)2% DMS0的水中，0. 45 y m的濾膜過濾除菌后，制得抗菌藥液，各藥液在4°C條件下備 用。
[0027] (4)檢測各藥液對細菌的最小抑菌濃度（MIC)。即細菌在LB培養(yǎng)基中于37°C條件 下過夜培養(yǎng)，1:15轉接到新的LB培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)到0D 62Q= 0. 2±0. 02。細菌1:10000稀 釋到LB培養(yǎng)基中，加入等體積的藥液，混勻后取相同體積的混合物加入到下一個稀釋度， 一直對倍稀釋到最后一個濃度。陰性對照加入等體積的含體積百分數(shù)2% DMS0的水。
[0028] (5)細菌在37°C條件下培養(yǎng)18-20小時，讀