一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物開發(fā)領(lǐng)域，涉及一種從金頂側(cè)耳子實(shí)體中獲得多糖蛋白復(fù)合 物的方法及其在肌肉萎縮拮抗抵制方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]金頂側(cè)耳（PleurotuscitrinopileatusSinger)，又稱榆黃蘑、金頂蘑、 玉皇蘑和黃蘑，被譽(yù)為林區(qū)蘑葫之冠，隸屬于擔(dān)子菌亞門（Basidiomycotina)，層 菌綱（Hymenomycetes)，傘菌目（Agaricales)，側(cè)耳科（Pleurotaceae)，側(cè)耳屬 (Agaricochaete)，是我國東北地區(qū)較為著名的食用真菌，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和醫(yī)療保健 價(jià)值。研宄表明，其具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯和止痢作用，榆黃蘑還可入藥，有滋補(bǔ)健身、化痰定喘、平 肝健胃和降壓減脂等療效。
[0003]目前關(guān)于金頂側(cè)耳的藥用價(jià)值開發(fā)主要集中在免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤和抗氧化方面。 而其它藥用方面開發(fā)尚未被發(fā)現(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物及其制備方法和用途。
[0005] 本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：包括下列步驟：
[0006] 選干凈的金頂側(cè)耳菌子實(shí)體，烘干，粉碎，按料液質(zhì)量體積比1 :20~30,熱水浸提 4-6小時(shí)，提取2-3次，合并提取液，紗布過濾到燒杯中，減壓濃縮后，加入4-6倍體積85% 的乙醇，4°C冰箱沉淀12~16小時(shí)，離心收集沉淀，冷凍干燥。
[0007] 通過苯酚-硫酸法測定其多糖含量為52% -78%，通過考馬斯亮藍(lán)法測定其蛋白 含量為4. 14-10%。
[0008] 所述的金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物在制備治療肌肉萎縮的藥物中的應(yīng)用。
[0009] 所述的金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物在制備增加肌肉萎縮大鼠體重的藥物中的應(yīng)用。
[0010] 所述的金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物在制備改善肌肉萎縮大鼠比目魚肌和腓腸肌濕 重比的藥物中的應(yīng)用。
[0011] 所述的金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物在制備增加比目魚肌和腓腸肌肌纖維平均橫截 面積的藥物中的應(yīng)用。
[0012] 所述的金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物在制備改善比目魚肌內(nèi)自由基平衡的藥物中的 應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明的積極效果在于：本發(fā)明從金頂側(cè)耳子實(shí)體中獲得一種新的多糖蛋白復(fù)合 物，該復(fù)合物具有改善尾部懸吊致大鼠的肌肉萎縮的作用，該復(fù)合物對小鼠后肢肌肉萎縮 具有顯著的抵制作用，本發(fā)明為金頂側(cè)耳的藥用價(jià)值開發(fā)提供了重要研宄基礎(chǔ)。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 實(shí)施例1
[0015] 包括下列步驟：
[0016] 選干凈的金頂側(cè)耳菌子實(shí)體，烘干，粉碎，按料液質(zhì)量體積比1 :20,熱水浸提4小 時(shí)，提取2次，合并提取液，紗布過濾到燒杯中，減壓濃縮后，加入4倍體積85%的乙醇，4°C 冰箱沉淀12小時(shí)，離心收集沉淀，冷凍干燥。
[0017] 實(shí)施例2
[0018] 包括下列步驟：
[0019] 選干凈的金頂側(cè)耳菌子實(shí)體，烘干，粉碎，按料液質(zhì)量體積比1 :25,熱水浸提5小 時(shí)，提取3次，合并提取液，紗布過濾到燒杯中，減壓濃縮后，加入5倍體積85%的乙醇，4°C 冰箱沉淀14小時(shí)，離心收集沉淀，冷凍干燥。
[0020] 實(shí)施例3
[0021] 包括下列步驟：
[0022] 選干凈的金頂側(cè)耳菌子實(shí)體，烘干，粉碎，按料液質(zhì)量體積比1 :30,熱水浸提6小 時(shí)，提取3次，合并提取液，紗布過濾到燒杯中，減壓濃縮后，加入6倍體積85%的乙醇，4°C 冰箱沉淀16小時(shí)，離心收集沉淀，冷凍干燥。
[0023] 下邊通過具體試驗(yàn)例來一步說明本發(fā)明的效果。
[0024] 試驗(yàn)例1
[0025] 將大鼠隨機(jī)分為5組，每組6只，分別為空白組、模型組、給藥組：金頂側(cè)耳多糖蛋 白復(fù)合物75mg/kg、150mg/kg、300mg/kg，除空白組外，將其他各組大鼠尾部懸吊建立失重模 型，建立失重模型時(shí)，大鼠單籠飼養(yǎng)，籠體積為30X30X35cm，大鼠尾部懸吊，前肢著地，后 肢懸空，身體可以自由活動(dòng)，身體與水平線呈30-35度角，動(dòng)物在籠內(nèi)可以自由飲食飲水。 給藥期間，空白組與模型組給予0.9%的生理鹽水，其余各組給予不同劑量的金頂側(cè)耳多 糖蛋白復(fù)合物，各給藥組每日上午8:30準(zhǔn)時(shí)給藥，稱重，給藥30天，給藥30天結(jié)束時(shí)稱取 大鼠體重，然后用1%的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，心臟抽取血液，盡量使取下的肌肉不含 血液。分離大鼠后肢的比目魚肌和腓腸肌，稱重，部分保留在10%的甲醛內(nèi)，部分放入實(shí) 驗(yàn)-80°C冰箱內(nèi)，以備用。然后出去肝臟、胸腺、脾臟，稱重。
[0026] 生化指標(biāo)的測定檢測時(shí)，從-80°C冰箱內(nèi)去除比目魚肌，切取小塊，放入0°C~4°C 的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，加預(yù)冷的生理鹽水制成2%肌組織勻漿，離 心取上清液50yL-100yL按試劑盒說明測定SOD、和MDA水平，利用同樣的方法將測定MDA 用的肌組織勻漿配制成10%的肌組織勻漿液，用SpectraMaxPlus384連續(xù)光譜掃描式酶 標(biāo)儀測定MDA、SOD和GSH活性。
[0027] 肌組織ATP染色①4°C下，10%多聚甲醛固定5min后用冷蒸餾水沖洗；②37°C下， 預(yù)孵液浸泡15min，然后作用液浸泡45min，1 %的CaCl2溶液洗三次；③2%CoCl2溶液浸泡 3min后蒸餾水沖洗3次；④1 %硫化錢溶液顯色l-2min，蒸餾水沖洗5次，最后脫水，封固。
[0028] 表1金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物對尾部懸吊致肌萎縮大鼠體重的影響
[0029]
[0030]注與模型組比較P〈0. 05，''#"P〈0. 01
[0031] 從表1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，金頂側(cè)耳多糖-蛋白復(fù)合物可以增加尾部懸吊致肌 萎縮大鼠體重。
[0032] 表2金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物對尾部懸吊致肌萎縮大鼠比目魚肌和腓腸肌濕重 體重比的影響
[0034]注與模型組比較P〈0. 05，''#"P〈0. 01
[0035] 從表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出空白組與模型組相比，模型組大鼠尾部懸吊的大 鼠腓腸肌與比目魚肌的濕重體重比分別降低了 44. 15%和50%，顯示出了顯著性差異 (P〈0. 01)，說明尾部懸吊法可以使大鼠肌肉萎縮，造模成功。金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物低 劑量和高劑量組中大鼠腓腸肌和比目魚肌濕重體重比與模型組相比分別增加了 33. 51 %、 45. 5 %和58. 06 %、41. 94 % ;中劑量組中大鼠腓腸肌濕重體重比與模型組相比增加了 39. 39 %，比目魚肌增加了 54. 84 %。
[0036] 表3金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物對尾部懸吊致肌萎縮大鼠比目魚肌中SOD、MDA及 GSH-Px的影響
[0037]
[0038] 注與模型組比較P〈0. 05，''**"P〈0. 01
[0039] 從表3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出以I型為主的肌肉一比目魚肌在尾部懸吊致肌萎縮 大鼠中的模型組中，SOD和GSH-Px水平與空白組相比呈極顯著差異（P〈0. 01)，MDA含量也呈 極顯著差異（P〈〇.〇l)。說明肌肉萎縮模型可以把比目魚肌內(nèi)的自由基平衡破壞。給藥各組 與模型組相比SOD水平均呈極顯著升高（P〈0. 01)，其中，中劑量基本與空白組持平，MDA水 平中，中劑量和低劑量給藥組極顯著的高于模型組（P〈〇. 001)，高劑量給藥組顯著性高于模 型組（P〈0. 05)，低劑量給藥組MDA水平基本與空白持平，低劑量和中劑量給藥組中GSH-Px 水平與模型組相比均呈現(xiàn)顯著性差異（P〈〇. 05)，以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明各給藥組能夠改善肌肉 萎縮模型中比目魚肌內(nèi)的自由基平衡。
[0040] 表4金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物對尾部懸吊致肌萎縮大鼠比目魚肌和腓腸肌肌纖 維平均橫截面積的變化
[0042] 注："*" 與模型組比較P〈0. 05，"#"P〈0. 01
[0043] 肌萎縮大鼠的腓腸肌和比目魚肌經(jīng)ATP法染色后，可以將肌纖維分為兩部分，一 部分為I型肌纖維，成無色，另一部分是II型肌纖維，呈棕色。表4可以看出，尾部懸吊造模 30天后，比目魚肌和腓腸肌嚴(yán)重萎縮，且兩肌肉中的I型和II型纖維與空白組相比多數(shù)呈 現(xiàn)極顯著差異（P〈〇. 001)，在比目魚肌中給藥組I型纖維橫截面與模型組相比分別提高了 21.26% (高劑量），15.51% (中劑量），41.37 % (低劑量）；II型纖維與模型組相比分別 提高19.18% (高劑量），32.48% (中劑量），41.82% (低劑量）。在腓腸肌中給藥組I型 纖維橫截面與模型組相比分別提高了 10.33% (高劑量），25. 82% (中劑量），13. 98% (低 劑量），II型纖維與模型組相比分別提高17. 13% (高劑量），25.32% (中劑量），24. 59% (低劑量）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物可以有效改善尾部懸吊致大鼠肌萎縮 癥狀。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物，其特征在于它是由下列步驟得到的：選干凈的金頂 側(cè)耳菌子實(shí)體，烘干，粉碎，按料液質(zhì)量體積比1 :20~30,熱水浸提4-6小時(shí)，提取2-3次， 合并提取液，紗布過濾到燒杯中，減壓濃縮后，加入4-6倍體積85 %的乙醇，4°C冰箱沉淀 12~16小時(shí)，離心收集沉淀，冷凍干燥。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物，其特征在于通過苯酚-硫酸 法測定其多糖含量為52% -78%，通過考馬斯亮藍(lán)法測定其蛋白含量為4. 14-10%。3. 如權(quán)利要求1所述的一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物的制備方法，其特征在于包括下 列步驟：選干凈的金頂側(cè)耳菌子實(shí)體，烘干，粉碎，按料液質(zhì)量體積比1 :20~30,熱水浸提 4-6小時(shí)，提取2-3次，合并提取液，紗布過濾到燒杯中，減壓濃縮后，加入4-6倍體積85% 的乙醇，4°C冰箱沉淀12~16小時(shí)，離心收集沉淀，冷凍干燥。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物的制備方法，其特征在于 通過苯酚-硫酸法測定其多糖含量為52% -78%，通過考馬斯亮藍(lán)法測定其蛋白含量為 4. 14-10% 〇5. 如權(quán)利要求1所述的一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物在制備治療肌肉萎縮的藥物中 的應(yīng)用。6. 如權(quán)利要求1所述的一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物在制備增加肌肉萎縮大鼠體重 的藥物中的應(yīng)用。7. 如權(quán)利要求1所述的一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物在制備改善肌肉萎縮大鼠比目 魚肌和腓腸肌濕重比的藥物中的應(yīng)用。8. 如權(quán)利要求1所述的一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物在制備增加比目魚肌和腓腸肌 肌纖維平均橫截面積的藥物中的應(yīng)用。9. 如權(quán)利要求1所述的一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物在制備改善比目魚肌內(nèi)自由基 平衡的藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種金頂側(cè)耳多糖蛋白復(fù)合物及其制備方法和用途，屬于天然藥物開發(fā)領(lǐng)域。選干凈的金頂側(cè)耳菌子實(shí)體，烘干，粉碎，按料液質(zhì)量體積比1：20～30，熱水浸提4-6小時(shí)，提取2-3次，合并提取液，紗布過濾到燒杯中，減壓濃縮后，加入4-6倍體積85％的乙醇，4℃冰箱沉淀12～16小時(shí)，離心收集沉淀，冷凍干燥。本發(fā)明從金頂側(cè)耳子實(shí)體中獲得一種新的多糖蛋白復(fù)合物，該復(fù)合物具有改善尾部懸吊致大鼠的肌肉萎縮的作用，該復(fù)合物對小鼠后肢肌肉萎縮具有顯著的抵制作用，本發(fā)明為金頂側(cè)耳的藥用價(jià)值開發(fā)提供了重要研究基礎(chǔ)。
【IPC分類】A61P21/00, A61K36/07
【公開號】CN104940242
【申請?zhí)枴緾N201510292558
【發(fā)明人】王 琦, 宋則文, 劉洋, 李天舟, 胡會敏
【申請人】吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年6月1日