用于頭頸部腫瘤聯(lián)合治療的制劑及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種用于頭頸部腫瘤聯(lián)合治療的制劑，具體地 說(shuō)本發(fā)明涉及自噬抑制劑和精氨酸酶的聯(lián)合制劑，以及在制備治療頭頸部腫瘤藥物中的應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 精氨酸酶是哺乳動(dòng)物肝臟中參與尿素循環(huán)的一種關(guān)鍵酶，在尿素循環(huán)中將精氨酸 轉(zhuǎn)化為鳥氨酸和尿素。精氨酸是維持部分腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的必需氨基酸，腫瘤細(xì)胞內(nèi)精氨酸 水平低于一定值后，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。精氨酸酶能在體內(nèi)外特異高效的降解精氨酸。在體外 試驗(yàn)中，精氨酸酶能顯著殺傷肝癌細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞以及白血病細(xì)胞等（Lam TL, Wong GKj Chong HCj Cheng PNj Choi SC, Chow TL, et al. Recombinant human arginase inhibits proliferation of human hepatocellular carcinoma by inducing cell cycle arrest. Cancer letters. 2009 ;277:91-100. ；Hernandez CPj Morrow Kj Lopez-Barcons LA, Zabaleta J，Sierra R，Velasco Cj et al. Pegylated arginase I: a potential therapeutic approach in T-ALL. Blood. 2010 ；115:5214-21. ；Hsueh ECj Knebel SM, Lo WHj Leung YC，Cheng PN，Hsueh CT. Deprivation of arginine by recombinant human arginase in prostate cancer cells. Journal of hematology&oncology.2012 ； 5:17.)。精氨酸酶治療肝癌的一期臨床結(jié)果顯示了其良好的成藥性能（Yau T，Cheng PNj Chan Pj Chan Wj Chen Lj Yuen Jj et al. A phase Idose-escalating study of pegylated recombinant human arginase I (Peg-rhArgl)in patients with advanced hepatocellular carcinoma. Investigational new drugs. 2012.) 〇 盡管在體外顯亦出良 好的效果，精氨酸酶在體內(nèi)低親和力和較短的半衰期等因素影響了藥物的抗腫瘤療效。因 此，進(jìn)一步提高精氨酸酶體內(nèi)的抗腫瘤活性將有助于其抗腫瘤應(yīng)用。
[0003] 精氨酸在人體的正常生理功能中具有重要作用，是一種半必須氨基酸，正常體細(xì) 胞能夠通過(guò)尿素循環(huán)將其他氨基酸轉(zhuǎn)化為精氨酸，從而抵消外源性精氨酸缺乏；然而，對(duì)于 部分精氨酸依賴的腫瘤細(xì)胞，由于缺乏尿素循環(huán)過(guò)程中的關(guān)鍵酶，在外源性精氨酸剝奪時(shí)， 無(wú)法自身合成精氨酸，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。精氨酸酶能夠在體內(nèi)外降解精氨酸，導(dǎo)致精氨 酸依賴的腫瘤細(xì)胞死亡，而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)影響。因此，精氨酸酶是一種有很大應(yīng)用前景的 蛋白酶類藥物。目前，精氨酸酶用于肝癌的治療用研宄已經(jīng)完成二期臨床試驗(yàn)，表現(xiàn)出良好 的應(yīng)用前景（Mounier N, Heutte N, Thieblemont C，et al. Ten-Year Relative Survival and Causes of Death in Elderly Patients Treated With R-CHOP or CHOPin the GELA LNH-985Trial. Clin Lymphoma Myeloma Leuk.2012[Epub ahead of print]) 〇
[0004] 頭頸部惡性腫瘤（head and neck cancer)是威迫人類健康的常見的惡性腫瘤之 一，約占全身惡性腫瘤的4%~10%，90%頭頸部惡性腫瘤為鱗狀細(xì)胞癌（head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC) D依據(jù)全球流行病學(xué)研究機(jī)構(gòu)提供的數(shù)據(jù)，我國(guó)近幾年 來(lái)頭頸部腫瘤的每年平均發(fā)病率為25. 22/10萬(wàn)，每一年新發(fā)病例約為50萬(wàn)。我國(guó)是高發(fā)國(guó) 家，約占人體惡性腫瘤的10%。目前，對(duì)于HNSCC的治療方法主要以手術(shù)為主，綜合放療、 化療及靶向藥物治療。放射線對(duì)腫瘤和正常組織都產(chǎn)生了嚴(yán)重的損害，在殺傷腫瘤的同時(shí)， 也損傷了正常組織和細(xì)胞，引發(fā)一系列副作用，如口干，食欲減退，免疫力降低，可能導(dǎo)致嚴(yán) 重的體力不支。盡管HNSCC的治療方法不斷改進(jìn)，但HNSCC細(xì)胞已經(jīng)對(duì)放化療產(chǎn)生了抵抗 力，以及放化療所產(chǎn)生的副作用，HNSCC患者的5年生存率有明顯下降。喉癌是最常見的頭 頸部惡性腫瘤之一，放療對(duì)于局部早期的Tl和T2型喉癌具有較大優(yōu)勢(shì)，但由于喉癌有較高 的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率，喉癌的總體生存率及術(shù)后喉功能效果并未得到明顯改善。因此，尋找一 種新的治療方法來(lái)改善和增強(qiáng)對(duì)HNSCC的治療效果很有必要。
[0005] 細(xì)胞自卩莖（autophagy)又叫 II 型程序性死亡（type II programmed cell death)， 是真核生物體內(nèi)常見的"自我消化"（cellular degradation)的現(xiàn)象，能分解細(xì)胞內(nèi)受 損或多余的細(xì)胞器和蛋白產(chǎn)生核苷酸，氨基酸等小分子物質(zhì)供細(xì)胞合成新的蛋白質(zhì)，并能 維持細(xì)胞內(nèi)微環(huán)境的穩(wěn)定。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)及基因技術(shù)的發(fā)展和對(duì)細(xì)胞自噬的深 入認(rèn)識(shí)，發(fā)現(xiàn)其與多種疾病，尤其是腫瘤的發(fā)展關(guān)系密切。根據(jù)細(xì)胞內(nèi)底物運(yùn)送到溶酶體 腔內(nèi)方式的不同，哺乳動(dòng)物細(xì)胞自可分為三種方式：大自卩莖（macroautophagy)、小自· (microautophagy)和分子伴侶介導(dǎo)的自 (chaperone-mediated autophagy，CMA)。主 要概述的大自(以下簡(jiǎn)稱自)與腫瘤發(fā)展及治療關(guān)系最為密切（Sridhar S, Botbol Yj Macian Fj et al.Autophagy and disease:always two sides to a problem. J Pathol. 2012 ;226(2) :255-73.)。自噬是胞漿大分子物質(zhì)和細(xì)胞器在雙層膜包囊泡中 大量降解的生物學(xué)過(guò)程。該過(guò)程大致能分為4個(gè)階段：1、在饑餓、缺氧、藥物干擾等某 些因素的刺激下，自噬泡的雙層膜結(jié)構(gòu)開始逐漸形成并包圍在被降解物的周圍。2、自噬 泡完全成型并將要被降解的物質(zhì)完全隔離于細(xì)胞質(zhì)。3、自噬體與溶酶體融合形成自噬 溶酶體。4、自噬溶酶體最終被溶酶體中的水解酶溶解，降解產(chǎn)物可以在細(xì)胞內(nèi)再循環(huán)利 用(Martlnez-Borra J,Lopez-Larrea C. Autophagy and self-defense. Adv Exp Med Biol. 2012 ;738:169-84.)。自噬能對(duì)細(xì)胞對(duì)外部環(huán)境改變及各種刺激產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。細(xì) 胞在生長(zhǎng)條件下能發(fā)生較低水平的自噬，稱基礎(chǔ)自噬。然而，一旦受到外界的刺激，如饑 餓、缺氧、高溫、高細(xì)胞密度或是生長(zhǎng)因子剝奪等，細(xì)胞自噬的水平將會(huì)迅速上調(diào)。如在營(yíng) 養(yǎng)物質(zhì)缺乏的情況下，細(xì)胞自噬能分解體內(nèi)壞死細(xì)胞器產(chǎn)生氨基酸等供細(xì)胞合成新的蛋 白質(zhì)，維持細(xì)胞的存活（Piacentini M，D'Eletto M, Falasca L，et al. Transglutaminase 2at the crossroads between cell death and survival. Adv Enzymol Relat Areas Mol Biol. 2011 ；78:197-246. ；Cook KL，Shajahan AN, Clarke R. Autophagy and endocrine resistance in breast cancer. Expert Rev Anticancer Ther.2011 ；11(8):1283-94.； Wirawan E，Vanden Berghe T，Lippens S，et al. Autophagy: for better or for worse. Cell Res. 2012 ;22(1) :43-61.)。
[0006] 自噬能降解折疊錯(cuò)誤的蛋白質(zhì)、損傷的細(xì)胞器等，延緩機(jī)體衰老的發(fā)生。集體衰 老相關(guān)疾病一神經(jīng)退行性疾病可以被歸類為蛋白構(gòu)象錯(cuò)誤疾病，一般是由于大量折疊錯(cuò) 誤的蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)堆積從而引發(fā)細(xì)胞毒性而造成的。研究表明，大量衰老性疾病，如 神經(jīng)退行性疾病和惡性腫瘤都與細(xì)胞自密切相關(guān)（Martinez-Borra J，L0pez_Larrea C.Autophagy and self-defense. Adv Exp Med Biol. 201