專利名稱：Bpi蛋白產(chǎn)物在創(chuàng)傷出血病人中的治療用途的制作方法
這是1996年5月23日遞交的美國(guó)專利系列號(hào)08/652,292的部分繼續(xù)申請(qǐng)，此處引用該申請(qǐng)作為參考。發(fā)明背景本發(fā)明一般涉及通過施用殺細(xì)菌/通透性增加(BPI)蛋白產(chǎn)物治療創(chuàng)傷出血病人的方法和材料。
通常需要立即外科手術(shù)參與的急性創(chuàng)傷出血在美國(guó)占發(fā)病率和死亡率的很大比例。[Bickell等，New Eng.J.Med.311:1105-1109(1994),Tran等，Surgery,114:21-30(1993)。]在1982年，美國(guó)有大約165,000人死于創(chuàng)傷，另外對(duì)于每一例死亡還有至少二例永久性殘疾。由于直接損傷中樞神經(jīng)系統(tǒng)，心臟，或主要血管之一，50％的損傷立即導(dǎo)致死亡。還有大約30％的早期死亡，常常由于無法控制的出血而在損傷后幾小時(shí)之內(nèi)死亡。剩下20％的死亡稱之為“晚期死亡”，出現(xiàn)在損傷后幾天到幾星期的時(shí)期內(nèi)，這種死亡是由于創(chuàng)傷出血導(dǎo)致的并發(fā)癥，其中大約80％的病例包括感染或多器官系統(tǒng)衰竭(MOSF)。[Trunkey，美國(guó)科學(xué)，249:28-35(1983),Turkey,New Eng.J.Med.,324:1259-1263(1991)。]在立即搶救的外科手術(shù)干預(yù)下存活的病人中，大約10-40％患有一系列疾病，包括，例如，系統(tǒng)性炎癥，傷口感染，肺炎，膿毒癥，呼吸衰竭，腎衰竭，凝血癥，和胰腺炎。出血和輸血的需要可能特定地連帶增加手術(shù)后感染，呼吸并發(fā)癥，和多器官系統(tǒng)衰竭的危險(xiǎn)[Agarwal等.Arch.Surg.,128:171-177(1993),Duke等，Arch,Surg.,128:1125-1132(1993),Tran等，同上]。
由創(chuàng)傷出血導(dǎo)致的這些并發(fā)癥的原因是多因素和互相相關(guān)的。很多疾病可能與受傷后系統(tǒng)炎癥有關(guān)。已假設(shè)對(duì)組織的物理損傷，直接組織流血灌注不足，和內(nèi)生孢子細(xì)菌的轉(zhuǎn)移及從胃腔吸收內(nèi)毒素(由于流血灌注不足和/或其它對(duì)胃腸道的損傷)可能在這些并發(fā)癥的致病機(jī)制中起作用。然而這些提及的因素在與人體中急性失血休克相關(guān)的疾病和晚期殘廢的病理生理學(xué)中的關(guān)聯(lián)仍不清楚。
盡管急性創(chuàng)傷出血是血容量減少休克(即由于減少了血管容量的休克)的一個(gè)潛在原因，但也有大量的潛在原因，如內(nèi)出血，例如胃腸出血，腹膜內(nèi)或腹膜后腔出血，出血到股骨腔中，胸內(nèi)出血，分割性主動(dòng)脈瘤和破裂的主動(dòng)脈瘤；過度體液流失，例如由于腸或幽門梗阻而嚴(yán)重嘔吐，嚴(yán)重腹瀉，出汗，脫水，過度排尿[由于DM糖尿病，DI糖尿病(diabetes insipidus)，過度多尿，或急性腎衰竭的多尿期]，腹膜炎，胰腺炎，局部缺血(planchnic ischemia)，壞疽，燒傷；血管舒張，例如由于神經(jīng)系統(tǒng)損傷，麻醉，神經(jīng)節(jié)的和腎上腺素能的阻滯劑，巴比士酸鹽過量，毒藥；和代謝的，有毒的或體液的血管舒張，如急性腎上腺功能不全，或過敏反應(yīng)。其它與循環(huán)血量流失無關(guān)的休克原因包括心源性休克(例如急性心肌梗死，心壓塞)和梗阻休克(例如急性肺栓塞)。[參見，例如醫(yī)療手冊(cè)，第28版，Ewald等編輯，Little,Brown andCompany,Boston(1995)；塞西爾醫(yī)藥手冊(cè)，第17版，wyngaarden等編輯，W.B.Saunders公司，費(fèi)城(1985)。]如以下表Ⅰ列出的，正常人體可以很快地失去20％的血量而不表現(xiàn)任何體征或癥狀。當(dāng)失去多達(dá)30％血量時(shí)會(huì)出現(xiàn)有限的心血管窘迫，當(dāng)失血30-40％血量時(shí)，一般出現(xiàn)血量減少休克的體征和癥狀。
表
>病人常常少尿，每小時(shí)尿排出量少于20ml。一般地，身體發(fā)現(xiàn)如休克按照漸進(jìn)的模式從早期代償期向進(jìn)一步階段演化。在階段Ⅰ，生理代償機(jī)制，如增加心輸出量或提高系統(tǒng)血管抗性是有效的，只觀察到最小的臨床癥狀和體征。在階段Ⅱ，這些機(jī)制不能有效地代償血量流失，而病人可能表現(xiàn)低血壓，心動(dòng)過速和過度呼吸。重要器官灌注減少可能導(dǎo)致精神狀態(tài)改變，從焦慮到迷睡到昏迷；尿排出量減少，和心肌缺血(患冠狀動(dòng)脈疾病的病人中)。病人的外表發(fā)紫，發(fā)冷和皮膚濕冷反映了過度的交感神經(jīng)作用。在階段Ⅲ，可能是不可逆的，過度和長(zhǎng)期減少組織灌注導(dǎo)致細(xì)胞膜功能明顯改變，血細(xì)胞凝聚，和毛細(xì)血管中沉積。在更不重要的器官中為了保持血壓發(fā)生的血管收縮這時(shí)已經(jīng)過度，流量減少到出現(xiàn)細(xì)胞損傷的程度。
在創(chuàng)傷出血后，傳統(tǒng)的治療針對(duì)止血，防止休克和恢復(fù)血容量。優(yōu)選地通過插入外周大靜脈的大導(dǎo)管得到迅速的體液復(fù)蘇。充氣抗休克外衣，腿部和腹腔連續(xù)充氣到15-40mmHg，可以臨時(shí)地通過提高外周系統(tǒng)血管抗性穩(wěn)定病人?？梢酝ㄟ^靜脈輸注電解質(zhì)溶液；血漿蛋白白蛋白，或葡聚糖的蝕性溶液；或新鮮全血進(jìn)行血容量恢復(fù)。在緊急情況下，優(yōu)選電解質(zhì)溶液，白蛋白或葡聚糖而不是新鮮全血，這是因?yàn)樾枰罅康捏w液，而在輸血中如果進(jìn)行定型和交叉配血可能發(fā)生耽擱，并且有輸血過敏反應(yīng)的可能性。當(dāng)由于失血休克時(shí)，應(yīng)盡可以快地施用單獨(dú)包裝的紅血細(xì)胞。當(dāng)失血量很大時(shí)，血型特異的未配血的血可以安全地使用。很少見地，可以使用O型血。
失血后林格乳酸鹽注射液或生理鹽水的快速灌注是最廣泛使用的體液治療。開始進(jìn)行估計(jì)血流失量的2-3倍的灌注。因?yàn)檫@些溶液迅速地分布到內(nèi)管內(nèi)和血管外空隙，所以必需用蝕性溶液補(bǔ)充。當(dāng)灌注大量的電解質(zhì)溶液時(shí)，病人常常產(chǎn)生外周水腫，老年病人可能產(chǎn)生肺水腫。
廣泛使用的蝕性溶液包括6％高分子量葡聚糖(葡聚糖70)溶液，10％低分子量葡聚糖(葡聚糖40)溶液，和生理鹽水中含5％白蛋白的溶液。輸注葡聚糖70產(chǎn)生的起始用量影響稍多于輸注總量影響。葡聚糖在1-2天期間緩慢清除，使正常生理機(jī)制有時(shí)間補(bǔ)充血量流失。葡聚糖40的起始用量影響是輸注總量影響的幾乎兩倍。然而低分子量物質(zhì)更快被清除，用量延續(xù)的影響在24小時(shí)內(nèi)，正常血量補(bǔ)充機(jī)制達(dá)到最高前即被消除。在一些接受葡聚糖40的病人中出現(xiàn)急性腎衰竭。施用超過1升用量的任一葡聚糖溶液可能干擾血小板粘連和正常的凝血連鎖過程。在生理鹽水中含5％白蛋白的溶液在血容量減少的病人中產(chǎn)生已知的用量效應(yīng)的優(yōu)勢(shì)，但這種制品相對(duì)更貴并且制備時(shí)耗時(shí)。每升含120毫當(dāng)量乳酸鈉，120毫當(dāng)量氯化鈉和12.5g白蛋白的高滲白蛋白制品提供期望的用量效應(yīng)并將間隙流失減到最小。高滲溶液的使用需要認(rèn)真地監(jiān)測(cè)動(dòng)脈和中心靜脈壓以避免體液過量。必須嚴(yán)格監(jiān)測(cè)共同存在的問題如充血性心衰竭，心瓣膜疾病，心肌缺血，或腎功能不全，并且必須考慮急性處理時(shí)外來的血液動(dòng)力學(xué)控制。相關(guān)的凝血病和電解質(zhì)不平衡也必須得到調(diào)整。
BPI是一種從哺乳動(dòng)物多形核白細(xì)胞(PMNs或中性粒細(xì)胞)的顆粒中分離出來的蛋白，PMNs是抵抗外來微生物的必要的血細(xì)胞。人BPI蛋白通過酸抽提結(jié)合離子交換層析[Elsbach，生物化學(xué)雜志，254:11000(1979)]或大腸桿菌親和層析[weiss等，血液，69:652(1987)]從PMNs中分離。通過此處提及的這種方法獲得的BPI為天然的BPI，并表明其具有針對(duì)廣譜革蘭氏陰性細(xì)菌的殺菌活性。人BPI的分子量是大約55,000道爾頓(55KD)。完整的人BPI的氨基酸序列和編碼蛋白的DNA核苷酸序列已有報(bào)導(dǎo)，見

圖1,Gray等，生物化學(xué)雜志，264:9505(1989)，此處引用作為參考。Gray等測(cè)定的氨基酸序列在本說明書的SEQ ID No:1中列出。美國(guó)專利號(hào)5,198,541公開了編碼BPI蛋白的重組基因及表達(dá)BPI蛋白的方法，其中包括BPI全蛋白和BPI的片段。
BPI是一種強(qiáng)正電蛋白。BPI分子的N端部分帶大量?jī)粽姾伞７肿覥端部分帶-3的凈負(fù)電荷。[Elsbach and weiss(1981)，同上]。蛋白水解的分子量大約25KD的BPI的N端片段基本上具有天然來源的55KD人BPI全蛋白的所有抗菌效力。[Ooi等，生物化學(xué)雜志262:14891-14894(1987)]。與N-端部分相反，分離的人BPI蛋白的C端只顯示輕微的可檢測(cè)到的對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌的抗菌活性。[Ooi等，J.Exp.Med,174:649(1991)]大約23KD的BPIN端片段，稱為rBPI23，已通過重組方法得到，并且也保留了對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌的抗菌活性。Gazzano-Santoro等，Infect,Immun,60:4754-4761(1992)。
已有報(bào)道BPI的殺菌效力對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌高度特異，如，見Elsbach和Weiss，炎癥基本原理和臨床聯(lián)系，Gallin等編，第三十章，Raven出版公司(1992)。BPI殺革蘭氏陰性細(xì)菌的精確機(jī)制還不完全清楚，但已確認(rèn)，首先BPI必需通過帶正電的BPI蛋白和細(xì)菌脂多糖上帶負(fù)電位點(diǎn)間的靜電和疏水作用結(jié)合到細(xì)菌表面上。認(rèn)為在敏感的革蘭氏陰性細(xì)菌中，BPI的結(jié)合破壞LPS結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)菌內(nèi)降解磷脂和肽糖的酶的活化，改變細(xì)胞外膜的通透性，并起動(dòng)最終導(dǎo)致細(xì)菌死亡的事件。[Elsbach和Weiss(1992)，同上]。因?yàn)長(zhǎng)PS刺激有力的炎癥反應(yīng)，所以被稱為內(nèi)毒素，即宿主炎癥細(xì)胞所釋放的介質(zhì)可最終導(dǎo)致不可逆的內(nèi)毒素性休克。BPI可結(jié)合脂質(zhì)A，而根據(jù)報(bào)道脂質(zhì)A是LPS中毒性最強(qiáng)和生物活性最高的成分。
BPI蛋白從來沒有被用于治療患創(chuàng)傷出血或與創(chuàng)傷失血相關(guān)的休克(即低血容量休克)的病人。Bahrami等，在維也那國(guó)際內(nèi)毒素協(xié)會(huì)會(huì)議的發(fā)言，1992年8月，報(bào)道了對(duì)出血大鼠施用BPI蛋白。Yao等，Ann.Surg.,221:398-405(1995)，報(bào)道了對(duì)受180分鐘長(zhǎng)期出血損傷的大鼠施用rBPI21(下述)而后復(fù)蘇。美國(guó)專利號(hào)5,171,739、5,089,724和5,234,912報(bào)道了BPI在不同的體外和體內(nèi)動(dòng)物模式研究中的應(yīng)用，這些研究被認(rèn)為與治療內(nèi)毒素相關(guān)疾病有關(guān)，包括內(nèi)毒素相關(guān)的休克。在共同擁有，共同未決的1995年1月24日遞交的美國(guó)申請(qǐng)系列號(hào)08/378,228,1994年8月16日遞交的08/291,112，和1994年1月24日遞交的08/188,221中；此處引用作為參考，描述了BPI蛋白產(chǎn)物與循環(huán)中內(nèi)毒素一起施用給人體。[也見von der M_hlen等，J.Infect.Dis.172:144-151(1995)；von der M_hlen等，血液85:3437-3443(1995)；deWinter等，J.Inflam.45:193-206(1995)]。在共同擁有，共用未決的1995年5月10日遞交的美國(guó)申請(qǐng)系列號(hào)08/644,287中，描述了BPI蛋白產(chǎn)物施用給患嚴(yán)重腦膜炎球菌血癥的病人。
盡管有抗生素治療和本領(lǐng)域重癥監(jiān)護(hù)醫(yī)療療法，但是與創(chuàng)傷出血相關(guān)的死亡率和病態(tài)仍然很嚴(yán)重，這一難題尚未由現(xiàn)行的治療方法解決。需要新的治療方法以降低或改善這些不幸事件和改進(jìn)這些病人的臨床結(jié)果。
發(fā)明概述本發(fā)明提供治療患創(chuàng)傷出血的病人的新方法，涉及施用BPI蛋白產(chǎn)物以達(dá)到臨床上可證實(shí)地減輕這種疾病狀態(tài)的不良后果或相關(guān)并發(fā)癥，包括死亡率和并發(fā)癥或病態(tài)。
根據(jù)本發(fā)明，BPI蛋白產(chǎn)物和rBPI23以足以降低或防止死亡率和/或降低發(fā)病率或并發(fā)癥或病態(tài)的嚴(yán)重性的用量施用給患創(chuàng)傷出血的病人，并發(fā)癥或病態(tài)包括感染(例如外科手術(shù)部位感染)或器官功能障礙(例如彌散性血管內(nèi)凝血，急性呼吸窘迫，急性腎衰竭，或肝膽衰竭)。
本發(fā)明也包括BPI蛋白產(chǎn)物在用于治療患創(chuàng)傷出血的病人的醫(yī)藥制品中的應(yīng)用。
在考慮以下描述目前優(yōu)選實(shí)施方案的發(fā)明詳述的基礎(chǔ)上，對(duì)于本領(lǐng)域里技術(shù)人員，本發(fā)明的很多其它方面和優(yōu)點(diǎn)將變得很清楚。
附圖簡(jiǎn)述圖1表示在rPBI21和無效對(duì)照治療群體中不良事件的發(fā)生率。
發(fā)明詳述急性創(chuàng)傷出血是危及生命的疾病，即使本領(lǐng)域重癥監(jiān)護(hù)醫(yī)療，也有很嚴(yán)重的死亡率和病態(tài)。期望給患由于急性外傷損傷(如刺傷和/或鈍傷)而出血的病人施用BPI蛋白能有效地減少死亡率和降低與創(chuàng)傷出血有關(guān)或由創(chuàng)傷出血導(dǎo)致的并發(fā)癥或病態(tài)的嚴(yán)重性。并發(fā)病包括感染(例如在外科手術(shù)部位，傷口器官，解剖空間，血流，尿道，或肺炎)或器官功能障礙[例如彌散性血管內(nèi)凝血(ARDS)，急性呼吸窘迫，急性腎衰竭，或肝膽衰竭]，并且可以包括嚴(yán)重的并發(fā)癥。其它的并發(fā)癥可以是肺功能障礙，包括ARDS和肺炎。這些對(duì)死亡率和與創(chuàng)傷出血有關(guān)或由創(chuàng)傷出血導(dǎo)致的并發(fā)癥的未預(yù)料到的影響表明BPI蛋白產(chǎn)物有效地干擾或阻斷很多導(dǎo)致疾病不良后果的尚不清楚的多種病理生理過程。在治療或預(yù)防器官功能障礙和嚴(yán)重感染中可以使用BPI蛋白作為輔助治療。預(yù)期BPI蛋白產(chǎn)物對(duì)患創(chuàng)傷出血的病人提供有利影響，如減少損傷嚴(yán)重程度，減少氧氣支持和肌收縮力(作用于血管的)治療的時(shí)間長(zhǎng)度，減少伴發(fā)凝血病的持續(xù)時(shí)間或嚴(yán)重性，縮短在重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)中停留時(shí)間，減少住院時(shí)間，并減少并發(fā)癥如凝血癥，呼吸衰竭，肝功能衰竭，昏迷或不正常的精神狀態(tài)，腎上腺皮質(zhì)壞死，和嚴(yán)重感染的發(fā)病率和持續(xù)時(shí)間，包括在傷口，器官，解剖空間，血流，尿道或肺炎中的嚴(yán)重感染。
含有BPI蛋白產(chǎn)物的治療組合物可系統(tǒng)給藥或局部給藥。系統(tǒng)給藥途徑包括口服，靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，皮下注射(包括注射入貯存脂肪以長(zhǎng)期釋放)，眼內(nèi)和眼球后，鞘內(nèi)，腹膜內(nèi)(如腹腔灌洗)給藥，使用氣化的或霧化的藥物肺內(nèi)給藥，或經(jīng)皮膚給藥。優(yōu)選的途徑是靜脈注射。當(dāng)腸胃外給藥時(shí)，BPI蛋白產(chǎn)物組合物通常的注射劑量是每天1μg/kg-100mg/kg，優(yōu)選的劑量是每天0.1mg/kg-20mg/kg，更優(yōu)選的劑量是每天1-20mg/kg，最優(yōu)選的劑量是每天2-10mg/kg。治療可以在受傷后立即開始或受傷后一段時(shí)間內(nèi)進(jìn)行(包括，例如受傷后6,12，或24小時(shí)內(nèi)，或由治療醫(yī)生決定的臨床上合理的時(shí)間期限內(nèi)，例如，受傷后48至72小時(shí))。最近優(yōu)選地是以每天4-6mg/kg的劑量靜脈輸入BPI蛋白，連續(xù)48-72小時(shí)。治療可通過連續(xù)輸注或間歇注射或輸注持續(xù)給藥，同時(shí)每天減少或增加劑量，例如治療1～3天，并且其它的按照治療醫(yī)生的決定?？蛇x擇地，BPI蛋白產(chǎn)物大劑量起始靜脈注射后連續(xù)輸注，這樣的一次治療方案是1-20mg/kg靜脈大劑量BPI蛋白產(chǎn)物后以1-20mg/kg/日的劑量靜脈輸注，持續(xù)多達(dá)1周。另一個(gè)這樣的劑量方案是2-10mg/kg起始劑量后以2-10mg/kg/日的劑量靜脈輸注，繼續(xù)72小時(shí)。局部途徑包括以灌洗液給藥，例如沖洗傷口，或胸內(nèi)，或皮下腔。其它局部途徑包括以軟膏、滴眼液、滴耳液，或藥用洗發(fā)液形式給藥。例如對(duì)于以滴液形式的局部給藥，根據(jù)治療醫(yī)生決定的每天一次或多次地施用大約10-200μl的BPI蛋白產(chǎn)物組合物。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易地根據(jù)由良好的醫(yī)療實(shí)踐和個(gè)別病人的臨床狀況決定的優(yōu)化含BPI蛋白產(chǎn)物的治療組合物的有效劑量和給藥方案。
如此處所用的，“BPI產(chǎn)物”包含天然的和重組產(chǎn)生的BPI蛋白；天然的、合成的和重組的BPI具生物活性的蛋白多肽片段；BPI蛋白或其片段的生物活性多肽變體，包括雜交融合蛋白和二聚體；BPI蛋白或其片段或其變體的生物活性多肽類似物，包括半胱氨酸置換類似物；和BPI衍生肽，根據(jù)本發(fā)明施用的BPI蛋白產(chǎn)物可通過本領(lǐng)域已知的任何方法制備和/或分離。美國(guó)專利號(hào)5,198,541,此處引用其公開文本作為參考，公開了編碼BPI蛋白的重組基因和表達(dá)BPI蛋白包括重組的BPI全蛋白，稱為rBPI50(或rBPI)和BPI的重組片段的方法。共同擁有的，共同未決的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)07/885,501和它的部分繼續(xù)申請(qǐng)，1993年5月19日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)08/072,063和對(duì)應(yīng)的1993年5月19日遞交的PCT申請(qǐng)系列號(hào)93/04752，此處引用所有這些作為參考，公開了新的純化在基因轉(zhuǎn)化的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中表達(dá)并從中分泌的重組BPI蛋白產(chǎn)物的方法，并且公開了怎樣可以生產(chǎn)大量的適于摻入穩(wěn)定均一藥物制品的重組BPI產(chǎn)物的方法。
BPI的生物活性片段(BPI片段)包括具有與天然的人BPI全蛋白相同或相似氨基酸序列的生物活性分子，只是該片段分子缺少全蛋白的氨基端氨基酸，內(nèi)部氨基酸，和/或羧基端氨基酸。在Ooi等，J.Exp.Med,174:649(1991)中描述了包括天然人BPI的N-端，大約25KD的這樣的片段的非限制性例子，并且在Gazzano-Santoro等，Infect.Immun.60:4754-4701(1992)中描述了編碼天然人BPI從1到大約193或199位N-端氨基酸的DNA的重組表達(dá)產(chǎn)物，稱rPBI23。在此公開文本中，使用表達(dá)載體作為編碼重組表達(dá)產(chǎn)物(rBPI23)的DNA的來源，該表達(dá)載體有31個(gè)殘基的信號(hào)序列和成熟的人BPI N-端的前199個(gè)氨基酸，如Gray等，同上，圖1中列出的，除了151位Val由GTG而不是GTC限定和殘基185是谷氨酸(由GAG限定)而不是賴氨酸(由AAG限定)。已生產(chǎn)了具有在Gray等，同上，圖1中列出的序列(SEQ ID NOs:1和2)的重組的全蛋白(rBPI50)，除了有已知的rBPI23中的不同外，還有471殘基是丙氨酸(由GCT限定)而不是纈氨酸(由GTT限定)。其它例子包括BPI片段的二聚體形式，描述于共同擁有的，共同未決的1994年3月11日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)08/212,132和對(duì)應(yīng)的PCT申請(qǐng)No.PCT/US95/03125，此處引用這些公開文本作為參考。優(yōu)選的二聚體產(chǎn)物包括其中單體是具有BPI全蛋白的N端從大約1到175或大約1到199位殘基的BPI片段的二聚體BPI蛋白產(chǎn)物，特別優(yōu)選的二聚體產(chǎn)物是具有N-端1到193位殘基的BPI片段的二聚體形式，稱為rBPI42二聚體。
BPI的生物活性變體(BPI變體)包括但不局限于包含BPI全蛋白或其生物活性片段和至少一種其它多肽的至少一部分的重組的雜交融合蛋白，和BPI變體的二聚體形式。這樣的雜交融合的和二聚體形式的例子由Theofan等在共同擁有的，共同未決的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)07/885,911和1993年5月19日遞交的其部分繼續(xù)申請(qǐng)美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)08/064,693和1993年5月19日遞交的對(duì)應(yīng)的PCT申請(qǐng)?zhí)朥S93/04754中描述，此處引用所有這些作為參考，這些例子包括在氨基端含BPI蛋白或其生物活性片段和在羧基端含免疫球蛋白的重鏈的至少一個(gè)恒定區(qū)或其等位變體的雜交融合蛋白。包含部分或全部的脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)的相似構(gòu)象的雜交融合蛋白，也考慮在本發(fā)明中使用。
BPI的生物活性類似物(BPI類似物)包括但不限于其中1個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被不同的氨基酸置換的BPI蛋白產(chǎn)物。例如共同擁有、共同未決的1993年2月2日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)08,013,801和1994年2月2日遞交的對(duì)應(yīng)的PCT申請(qǐng)系列號(hào)US94/01235公開了其中半胱氨酸殘基被一個(gè)不同的氨基酰殘基置換的BPI和BPI片段的多肽類似物，此處引用這些公開文本作為參考。由此申請(qǐng)描述的優(yōu)選的BPI蛋白產(chǎn)物是編碼BPI全蛋白N端從1到大約193或199位氨基酸的DNA的表達(dá)產(chǎn)物，其中在132位殘基上半胱氨基被丙氨酸替換，該產(chǎn)物命名為rBPI21ΔACys或rBPI21。其它的例子包括BPI類似物的二聚體形式；如共同擁有和共同未決的1994年3月11日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)08/212,132，和對(duì)應(yīng)的PCT申請(qǐng)?zhí)朠CT/US95/03125，此處引用這些公開文本作為參考。
根據(jù)本發(fā)明的方法所述的其它有用的BPI蛋白產(chǎn)物是來自或以通過重組或合成的方式合成的BPI為基礎(chǔ)的肽(即BPI衍生肽)，如在對(duì)應(yīng)于1994年9月15日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?8/306,473和1994年3日11日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?8/209,762的共同擁有和共同未決的1995年7月20日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)08/504,841和共同擁有和共同未決的1994年9月15日遞交的PCT申請(qǐng)?zhí)朠CT/US94/10427中描述的。1994年3月11日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?8/209,762是1994年1月14日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?8/183,222的部分繼續(xù)申請(qǐng)，這一部分繼續(xù)申請(qǐng)又是1993年7月15日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?8/093,202的部分繼續(xù)申請(qǐng)(與之對(duì)應(yīng)的國(guó)際申請(qǐng)是1994年3月11日遞交的PCT申請(qǐng)?zhí)朥S94/02401)，這一部分繼續(xù)申請(qǐng)又是1993年3月12日遞交美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)08/030,644的部分繼續(xù)申請(qǐng)，此處引用所有這些公開文本作為參考。
目前優(yōu)選的BPI蛋白產(chǎn)物包括重組生產(chǎn)的BPI N端片段，尤其是那些分子量大約在21-25KD之間那些BPI蛋白產(chǎn)物如rBPI23或rBPI21，或這些N端片段的二聚體形式(如rBPI42二聚體)。另外，優(yōu)選的BPI蛋白產(chǎn)物包括rBPI50和BPI衍生肽。特別優(yōu)選的是rBPI21。
BPI蛋白產(chǎn)物的給藥優(yōu)選地用含有BPI蛋白產(chǎn)物和藥學(xué)上可接受的稀釋劑，佐劑，或載體的藥物組合物完成。BPI蛋白產(chǎn)物可單獨(dú)施用或結(jié)合已知表面活性劑、其它化學(xué)治療藥物或其它已知的抗微生物試劑施用。一種含BPI蛋白產(chǎn)物(如rBPI50,rBPI23)的藥物組合物包含在檸檬酸鹽緩沖液(5或20mM檸檬酸，150mM NaCl,pH5.0)中濃度為1mg/ml的BPI蛋白產(chǎn)物，按重量比0.1％的泊洛沙姆188(PluronicF-68,BASF Wyandotte,Parsippany,NJ)和0.002％的聚山梨酯(Tween 80,ICI Americas Inc.,Wilmington,DE)。另一種含BPI蛋白產(chǎn)物(例如rBPI21)的藥物組合物在5mM檸檬酸，150mM NaCl,0.2％泊洛沙姆188,0.002％的聚山梨酯中含濃度為2mg/ml的BPI蛋白產(chǎn)物。這樣的組合描述于共同擁有和共同未決的1994年2月2日遞交的PCT申請(qǐng)?zhí)朥S94/01239中，這一申請(qǐng)對(duì)應(yīng)于1994年2月2日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)No.08/190,869和1993年2月2日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?8/012,360，此處引用所有這些公開文本作為參考。
通過考慮以下說明的實(shí)施例，可了解本發(fā)明的其它方面和優(yōu)點(diǎn)。實(shí)施例1指出在人體中施用BPI蛋白產(chǎn)物對(duì)與創(chuàng)傷出血相關(guān)的死亡率的影響。實(shí)施例1臨床實(shí)驗(yàn)方案-BPI蛋白產(chǎn)物的治療效果設(shè)計(jì)人體臨床實(shí)驗(yàn)以檢查典型BPI蛋白產(chǎn)物(rBPI21)在治療急性創(chuàng)傷出血病人中的效果。因此，進(jìn)行多中心的，隨機(jī)的，雙盲的，具無效對(duì)照的實(shí)驗(yàn)，以比較在急性創(chuàng)傷出血病人中48小時(shí)期間無效對(duì)照處理和rBPI21處理的情況。大約400位患急性創(chuàng)傷出血并需要輸至少兩單位血的緊救室病人以1∶1比例隨機(jī)分開分別用rBPI21或無效劑處理。除了標(biāo)準(zhǔn)治療，每個(gè)病人通過連續(xù)靜脈輸注在48小時(shí)期間接受8mg/kg rBPI21或相同量的無效劑。在大多數(shù)情況下，病人的體重以kg進(jìn)行測(cè)定作為最佳估計(jì)值。
從第1天到第15天通過跟蹤病人并發(fā)癥如受損器官功能和感染的產(chǎn)生，和存活來監(jiān)測(cè)效率。通過在處理前和處理后系列化學(xué)和血液學(xué)參數(shù)測(cè)試以及15天中每天對(duì)不良事件的評(píng)估來監(jiān)測(cè)安全性。在第29天得到存活和不良并發(fā)癥的最終評(píng)估。
如果患急性創(chuàng)傷出血送進(jìn)醫(yī)院的病人符合以下包含標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)，則選作實(shí)驗(yàn)的對(duì)象。包含標(biāo)準(zhǔn)是(1)年齡(或承諾年齡)18-75，含首尾年齡；(2)病人患創(chuàng)傷繼發(fā)性急性出血；(3)實(shí)驗(yàn)藥物在創(chuàng)傷事件出現(xiàn)6或12小時(shí)內(nèi)施用(如果事件的精確時(shí)間未知，可提供最佳估計(jì)值)；(4)病人需要并已開始接受第二單位包裝的紅血細(xì)胞；以及(5)病人提供口頭通知的同意或最近的親屬提供書面通知的同意。排除標(biāo)準(zhǔn)是(1)允許進(jìn)急救室按修正的傷員外傷評(píng)分(TRTS，評(píng)分0-12)小于2，見下表2[Champion等，Crit.Care Med.,9(9):672-676(1981)；Greenfield等，第10章，Surgery ScientificPrinciples and Practices,J.B.Lippincott公司，費(fèi)城，pp252-255(1993)]；(2)嚴(yán)重頭部創(chuàng)傷[Glasgow昏迷評(píng)分(GCS)≤5或等效的證據(jù)]，見下表3[Teasdalet等，Lancet,1:81(1974)]；(3)單獨(dú)的顱部傷；(4)伴隨麻痹的脊柱損傷；(5)身體表面積的至少20％二級(jí)燒傷；(6)已知HIV陽性(進(jìn)醫(yī)院時(shí)非強(qiáng)迫性的化驗(yàn))；(7)已知先前已患腎病(肌酸酐＞2.0)；(8)已知先前已患心臟病(紐約心臟協(xié)會(huì)分級(jí)大于Ⅲ，見下表4[Braunwald，于Branuwald等，心臟病，心血管藥物手冊(cè)，第三版，W.B.Saunders公司，費(fèi)城，PA，第12頁(1988)；J.Am.Med.Ass’n 249:539-544(1988)]；(9)已知先前已患早期或轉(zhuǎn)移的內(nèi)臟器官癌癥；(10)主動(dòng)脈pH值(初期值)＜6.8或堿短缺值＞15(如果已測(cè)量)；(11)已知的電流類固醇治療(＞10mg潑尼松/日，持續(xù)一個(gè)月)(12)已知已患肝硬變或活動(dòng)性肝炎；(13)懷孕或泌乳期；(14)在此前30天內(nèi)有其它試驗(yàn)性藥品(包括試驗(yàn)性血液產(chǎn)物)參與；(15)體重(估計(jì))超過120kg；以及(16)“不能復(fù)蘇”(DNR)或等效的指令。
表2修正的傷員外傷評(píng)分(TRTS)*
*TRTS是RR,SBP和GCS分類的總結(jié)(范圍0-12)
表3 Glasgow昏迷評(píng)分
分?jǐn)?shù)的范圍從3到15。
表4修正的紐約心臟協(xié)會(huì)功能分級(jí)
對(duì)所有隨機(jī)處理的病人記錄以下情況(1)事故的日期和估計(jì)時(shí)間，以及送進(jìn)急救室的日期和時(shí)間；(2)對(duì)于隨機(jī)抽樣且未進(jìn)行處理的病人，其未進(jìn)行處理的原因；(3)從到達(dá)醫(yī)院至手術(shù)后的大約48個(gè)小時(shí)內(nèi)，病人在諸如急救室、手術(shù)室、麻醉后臨護(hù)室或外科重癥監(jiān)護(hù)室之類的地方接受血液、血液制品和體液如包裝的紅血細(xì)胞、全血、自身輸血、血小板、新鮮凍血漿、類晶體或蝕體的日期，時(shí)間，用量和部位，如果病人未做外科手術(shù)，在實(shí)驗(yàn)期第1、2、3天內(nèi)收集的上述內(nèi)容是合適的；(4)施用第二單位血的日期和時(shí)間(應(yīng)在進(jìn)外科前進(jìn)行，以確定是由創(chuàng)傷而不是外科手術(shù)引起的出血)，以及麻醉的日期和開始與終止時(shí)間；(5)外科手術(shù)的日期，開始和結(jié)束時(shí)間，在手術(shù)室的估計(jì)出血量，以及在麻醉后監(jiān)護(hù)室的日期和時(shí)間；(6)實(shí)驗(yàn)藥物輸注開始和結(jié)束的日期和時(shí)間，輸注量，暫時(shí)中斷或永久停止的原因；如果可能，如果中斷了，輸注量；(7)直接病歷(包括損傷的程度和性質(zhì)，間發(fā)病，導(dǎo)致失血的情況等)，個(gè)人情況和直接體檢信息如性別、年齡、體重(估計(jì)或測(cè)量)、身高(估計(jì)或測(cè)量)、重要體征、受傷的體征；(8)篩選適當(dāng)女病人(所有可能懷孕的婦女，即既未外科絕育又未記錄的絕經(jīng)的所有婦女)時(shí)的懷孕測(cè)驗(yàn)結(jié)果；(9)在篩選合格性時(shí)進(jìn)行TRTS的結(jié)果(包括真實(shí)測(cè)量)。
開始輸注第二單位的血后，研究者以連續(xù)編號(hào)順序施用來自試劑盒的未知的實(shí)驗(yàn)藥物。每個(gè)試劑盒包含rBPI21或無效劑。rBPI21作為在10毫升一次性使用的玻璃瓶中的澄清、無色、無菌、非致熱溶液提供，該溶液濃度為在5mM檸檬酸鈉/0.15M氯化鈉緩沖液(pH5.0)中含2mg/ml，緩沖液中含有0.2％的泊洛沙姆(poloxamer)188和0.002％聚山梨脂80，不含防腐劑，RBPI21在施用前一直保存在冰箱中，溫度為2～8℃。無效劑作為在10ml一次性使用的玻璃瓶中的澄清、無色、無菌、非致熱溶液提供。無效劑在5mM檸酸鈉/0.15M氯化鈉緩沖液(pH=5.0)中含0.2mg/m1人血清白蛋白，不含防腐劑。無效劑在施用前也一直保存在冰箱中，溫度為2-8℃。給每個(gè)病人使用的試劑盒包含了含有對(duì)病人所有劑量的實(shí)驗(yàn)藥物的足夠藥量的小瓶，每個(gè)小瓶含10毫升測(cè)試物質(zhì)。
試驗(yàn)如上所述分成兩組(活性rBPI21和無效對(duì)照)。實(shí)驗(yàn)藥品藥在輸注前放在室溫下，在整個(gè)劑量過程中，按照靜脈注射的良好無菌技術(shù)。實(shí)驗(yàn)藥物在48小時(shí)時(shí)期通過靜脈輸注到中心或外周靜脈血管施用。24小時(shí)后將輸注包/管這一套注射用品完全更換。靜脈注射口是否恰當(dāng)由從注射口血順暢回流以及靜脈液體無滲入的順暢輸注確定。在輸注過程中這些實(shí)驗(yàn)藥物是在選定部位施用的唯一藥劑，靜脈注射部位不是肝素化的，而必須和生理鹽水一起注入。輸注部位的任何反應(yīng)癥狀都作為不良感受記錄在病人的病情記錄表和備存檔案中。
對(duì)在所選實(shí)驗(yàn)部位處理的病人進(jìn)行如下評(píng)估(1)rBPI21的血中含量用于評(píng)估rBPI21含量的血在以下時(shí)間抽取(僅在所選研究部位)輸注開始前(輸注開始前60分鐘之內(nèi))，輸注開始后的以下時(shí)間1、4、8、12、20、24、32、36、40小時(shí)，48小時(shí)輸注結(jié)束前的15分鐘內(nèi)，以及輸注結(jié)束后的以下時(shí)間7分鐘(48:07)、15分鐘(48:15)、30分鐘(48:30)、1小時(shí)(49:00)、3小時(shí)(51:00)、6小時(shí)(54:00)和24小時(shí)(72:00)；(2)抗rBPI21的抗體用于評(píng)估抗rBPI21的抗體的血液在所選實(shí)驗(yàn)部位在以下時(shí)間抽取實(shí)驗(yàn)藥物輸注前一天，以及如果病人仍在醫(yī)院或返回診所，則在第15和29天(實(shí)際抽取時(shí)間可以在第10-20以第21-29天內(nèi)變化)；以及(3)細(xì)胞素，用于評(píng)估細(xì)胞素的血液在選定實(shí)驗(yàn)部位抽取。
在實(shí)驗(yàn)藥物輸注前一天、輸注結(jié)束后的第3天和第8天評(píng)估下列實(shí)驗(yàn)室安全化驗(yàn)指標(biāo)，但是如果病人在第8天或之前離開，如果可能，該評(píng)估在離開前進(jìn)行(1)血液學(xué)指標(biāo)血紅蛋白、血細(xì)胞比容、紅細(xì)胞含量、白細(xì)胞含量和差異和血小板含量；(2)血清化學(xué)指標(biāo)鈉、鉀、鈣、氯、亞磷酸、血尿氮量、肌酸酐、尿酸、葡萄糖(空腹)、肌酸磷酸激酶(CPK)、膽固醇、白蛋白、總蛋白、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST,SGOT)、血清谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT,SGPT)、膽紅素(總)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)、乳酸脫氫酶(LDH)和堿性磷酸酶。
對(duì)所有處理的病人在實(shí)驗(yàn)藥物輸注后至第15天和/或第29天記錄下列情況(1)不良事件(持續(xù)至第29天)；(2)存活狀態(tài)包括死亡的日期和原因(持續(xù)至第29天)；(3)在ICU的日期(持續(xù)至第29天)；(4)在醫(yī)院內(nèi)的日期(持續(xù)至第29天)；(5)通氣的日期(持續(xù)至第29天)；(6)用指定方法滲析或血過濾的日期(持續(xù)至第29天)；(7)伴隨藥物包括每天輸血量(持續(xù)至第29天)；(8)進(jìn)行主要外科手術(shù)過程，例如包括再次手術(shù)但不包括如中心線、Swan-Ganz導(dǎo)管和主動(dòng)脈線的替換，腰部穿刺等過程(持續(xù)至第29天)；(29)在目前住院期間進(jìn)行基于診斷評(píng)估的創(chuàng)傷嚴(yán)重性評(píng)分(ISS)；(10)器官功能障礙和存在感染的每日評(píng)估(持續(xù)至第15天)；(11)與每天最高和最低溫度相關(guān)的并包含每天最高和最低溫度的每天重要體征(持續(xù)至第15天)；以及(12)至少每八個(gè)小時(shí)對(duì)施用試驗(yàn)藥品的輸注部位的監(jiān)視，觀察結(jié)果記錄在進(jìn)展筆記中或相應(yīng)的地方。
使用下列定義評(píng)估器官功能障礙。在下列情況下病人被認(rèn)為具有彌散性血管內(nèi)凝聚(DIC)(1)血小板異常低值(或比原先記錄值有＞25％的減少)和增加的凝血酶原時(shí)間或增加的部分促凝血酶時(shí)間和流血臨床證據(jù)，或(2)如果得到，確認(rèn)實(shí)驗(yàn)是陽性的(FDP＞1∶40或D型二聚體(D-Dimers)＞2.0)。這些異常必須在缺少醫(yī)學(xué)上明顯混淆因素，如肝衰竭，嚴(yán)重血腫，或抗凝聚治療時(shí)存在。
當(dāng)病人具有以下情況時(shí)被認(rèn)為有急性呼吸窘迫綜合癥(CARDS)兩側(cè)肺滲入與肺水腫一起存在，和PaO2/FiO2＜200。這些體征必須在不存在出血性心衰竭或原發(fā)肺疾病如肺栓或肺炎時(shí)出現(xiàn)。肺動(dòng)脈楔形壓力(PAWP)測(cè)量時(shí)必須＜18mmHg。
病人具有以下情況時(shí)被認(rèn)為有急性腎衰竭(ARF):(1)需要滲析或血滲透(對(duì)第一次分析使用的定義)(2)或血清肌酸酐變得異常，在病人中比記錄的正?；鶞?zhǔn)肌酸酐增加≥2.0mg/dl，或(3)血清肌酸酐在不知道有腎功能不全而且其基準(zhǔn)肌酸酐未知的病人中≥3.0mg/dl，或(4)血清肌酸酐是住院前2倍或者在已患腎功能不全的病人中是rBPI21處理前含量的兩倍。這些發(fā)現(xiàn)天然情況下必須不是腎前的(例如與脫水或胃腸出血相關(guān)的)或由于橫紋肌溶解的。
僅在沒有原發(fā)肝病(如肝炎或肝硬化)、酒精中毒或膽病的病人中才評(píng)估手術(shù)后肝膽功能障礙(HBD)。在下列情況下認(rèn)為病人具有肝膽功能障礙膽紅毒超過3.0mg/dl，以及堿性磷酸酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT，或SGPT)、或天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST，或SGOT)超過正常上限值的兩倍。這些發(fā)現(xiàn)必須在不存在混淆疾病時(shí)出現(xiàn)。
也評(píng)估了病人的傷口、外科手術(shù)部位(表層和深層切口部位)、器官、解部空間、血流(菌血癥)、尿道或呼吸道(肺炎)的感染情況。
向醫(yī)生基礎(chǔ)研究者提供了各個(gè)器官功能障礙的定義并要求他們?cè)谔幚砬昂偷?-15天的每日記錄下列情況(a)根據(jù)提供的定義各器官功能障礙是否“存在”、“臨床上存在”、“不存在但臨床上存在”、或“未知”；以及(b)定義所要求的所有可得到的真實(shí)實(shí)驗(yàn)或臨床數(shù)據(jù)，看其是否滿足定義。也向調(diào)查者提供了感染的定義并要求他們記錄(a)在第1～15天期間的任何時(shí)間每種類型的感染是“存在”還是“不存在”以及(b)如果“存在”定義所要求的真實(shí)的培養(yǎng)和臨床數(shù)據(jù)。
為了提供這些終點(diǎn)的更客觀的分析，并基于獨(dú)立數(shù)據(jù)安全監(jiān)測(cè)板的推薦，在首次功效中期分析之前開發(fā)了計(jì)算機(jī)程序，以50％的精確度使用用于每個(gè)定義所需的真實(shí)實(shí)驗(yàn)、臨床和培養(yǎng)數(shù)據(jù)進(jìn)行相同器官功能障礙和感染的定義。在預(yù)處理和第1-15天內(nèi)的每天該算法把每一種器官功能障礙定義為“存在”、“臨床上存在”、“不存在但臨床上存在”還是“未知”。如果在某一天定義所需的最低限度的評(píng)估沒有提供，這一天的每個(gè)器官功能障礙就分類為“不知道”。如果在所選日進(jìn)行了所有評(píng)估且每一種評(píng)估都滿足特定器官功能障礙的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，則定義為“存在”。因此，那些在所選日缺少一種或多種所需評(píng)估的病人不能被分類為在那天對(duì)于那種器官功能障礙是“存在”。在那些評(píng)估不完全的日期，如果每一種未缺少的評(píng)估滿足那種器官功能障礙的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，這種器官功能障礙就被分類為“臨床上存在”。因此，“臨床上存在”意味著基于不完全的證據(jù)，當(dāng)天可能存在器官功能障礙，且當(dāng)天沒有記錄相反的證據(jù)。由于嚴(yán)重的ARF定義為在第1～15天期間的至少一天中使用了透析/血滲透，“臨床上存在”不適用于嚴(yán)重的ARF。如果那天不符合“存在”、“臨床上存在”、“未知”的定義，器官功能障礙就認(rèn)為是“不存在或臨床上存在”。被分類為其器官功能障礙為“存在”、“臨床上存在”的病人需要已經(jīng)滿足另一并發(fā)癥的主要終點(diǎn)的預(yù)處理，以使其已被分類為滿足第1～15天內(nèi)的主要終點(diǎn)。
對(duì)于感染，在第1-15天期間算法把每一種感染都定義為“存在”或“不存在”。每一次定義為“存在”的都根據(jù)所提供數(shù)據(jù)需要至少在第1-15期間至少一天嚴(yán)格滿足定義。如果病人不滿足感染“存在”定義，對(duì)于這種感染就被分類為“不存在”。
有下列嚴(yán)重感染發(fā)生時(shí)，定義為嚴(yán)重并發(fā)癥(1)外科手術(shù)部位深層切口的感染；(2)器官或解剖空間感染；(3)繼發(fā)性血流感染；(4)原發(fā)血流感染；及(5)肺炎；或下列嚴(yán)重的器官功能障礙(1)彌散性血管內(nèi)凝聚(DIC)或凝血病(2)急性呼吸窘迫綜合癥(ARDS)；(3)需要透析/血滲透的急性腎衰竭(ARF)以及(4)肝膽功能障礙(HBD)。不管并發(fā)癥的數(shù)目，把患并發(fā)證的病人算為一個(gè)。
檢測(cè)19個(gè)部位，1411個(gè)病人并隨機(jī)選取401個(gè)病人為被研究組，并接受治療。在401個(gè)病人中，199個(gè)接受無效劑處理，202個(gè)接受rBPI21處理。31個(gè)病人(15個(gè)無效劑，16個(gè)rBPI21)未接受實(shí)驗(yàn)藥物的全部施用。12個(gè)病人(6個(gè)無效劑和6個(gè)rBPI21)在第29天之前從研究中退出。來自所有接受任何用量的實(shí)驗(yàn)藥品的病人的數(shù)據(jù)都包含在所有安全和功效分析中，即使輸注是不完全的，也不管病人是否從研究中退出。
實(shí)驗(yàn)人群的平均年齡是35(范圍16-80歲)；80％的病人在45歲以下。平均劑量體重為79kg(范圍45-145kg)。77％的病人為男性。創(chuàng)傷來源分為鈍傷(50％)、刺傷(48％)或二者都有(2％)。在其它與創(chuàng)傷相關(guān)的特征中，平均TRTS為10.6(范圍0-12)；平均GCS為13.2(范圍3-15)；平均ISS(版本’90)為23.9(范圍1-75天)；在實(shí)驗(yàn)藥物輸注前開始的平均PRBC單位數(shù)為6.4(范圍0-57)；從創(chuàng)傷事故到藥物輸注的平均時(shí)間為9.5小時(shí)(范圍1.3-21.8小時(shí))。處理組的年齡、體重、種族、創(chuàng)傷來源、TRTS、GCS和輸注時(shí)間無明顯不同(對(duì)部位控制P＞0.10)，但無效劑組的女性比例稍高(P-0.11，控制部位)。抽樣進(jìn)行rBPI21和無效劑處理的病人在藥物輸注前輸入的包裝的紅血細(xì)胞(PRBC)單位數(shù)是相似的。無效對(duì)照病人的平均ISS(平均25.1)略差于rBPI21處理的病人(平均22.7)(P=0.07，控制部位)。
預(yù)指定的原始功效分析集中在第0小時(shí)至第15天中任何時(shí)間發(fā)生的死亡率原始終點(diǎn)或嚴(yán)重交發(fā)癥(定義為如用算術(shù)方法評(píng)估的嚴(yán)重器官功能障礙或嚴(yán)重感染)。在這個(gè)研究中的全部死亡率是低的(約5-6％)。處理組用科克期線性回歸比較、按部位分級(jí)且未用斜方差修正。通過計(jì)算機(jī)算法使用“存在”的嚴(yán)格定義并隨后結(jié)合不完整證據(jù)(導(dǎo)致分類為“存在”或臨床上存在)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。不考慮算術(shù)方法，到第15天對(duì)于rBPI21病人的死亡率和嚴(yán)重并發(fā)癥比無效劑對(duì)照病人低7％。用兩種算術(shù)方法對(duì)死亡和嚴(yán)重并發(fā)癥的事件率Kaplan-Meier評(píng)估總結(jié)在表5中表示。
表5<
>如從科克期線性回歸的概率比值測(cè)得的，通過兩種算術(shù)方法，無效對(duì)照病人經(jīng)受死亡或嚴(yán)重并發(fā)癥的可能性比rBPI21處理的病人大1.27倍(rBPI21對(duì)無效劑的概率比值為0.79；用“存在”時(shí)對(duì)于死亡和嚴(yán)重并發(fā)癥P=0.13；用“存在或臨床上存在”時(shí)對(duì)于死亡和嚴(yán)重并發(fā)癥P=0.09，由中心分級(jí))。
作為第二次分析，用校正的顯著斜方差重復(fù)第一次分析，得到下述概率比值使用“存在”=0.79,P=0.14(根據(jù)年齡、損傷來源和在藥物輸注前輸入的ISS’90和單位PRBC調(diào)整)的rBPI21對(duì)無效劑的概率比值；用“存在或臨床上存在”=0.81,P=0.16(根據(jù)年齡、在藥物輸注前輸入ISS’90和單位PRBC調(diào)整)的概率比值。對(duì)于每一次二次功效測(cè)量的事件發(fā)生率評(píng)估表示于圖1。分析這些二次功效測(cè)量表明在用rBPI21處理的病人比用無效劑制品處理的病人中出現(xiàn)下列并發(fā)癥的頻率更小任何并發(fā)癥、任何嚴(yán)重并發(fā)癥、任何器官障礙、任何嚴(yán)重器官障礙、任何感染、任何嚴(yán)重感染和肺炎。還注意到由于rBPI21的處理，發(fā)病人發(fā)展成彌散性血管內(nèi)凝聚或凝血病，或原發(fā)或繼發(fā)性血流感染和菌苗癥的比例略有下降。
在嚴(yán)重創(chuàng)傷的人群中無論用rBPI21還是用無效劑處理都會(huì)頻繁地出現(xiàn)不良事件。然而，與rBPI21處理組相比，無效對(duì)照組F出現(xiàn)不良事件的百分率要高得多。而且，還發(fā)現(xiàn)，與rBPI21處理組相比，無效對(duì)照組得到任何非常異常的處理后實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的百分率也更高。這些數(shù)據(jù)表明可能的附加有益效果。
總之，評(píng)估單劑量配方的這種對(duì)照的臨床實(shí)驗(yàn)表明，在整個(gè)15天內(nèi)的原始死亡率終點(diǎn)或嚴(yán)重并發(fā)癥方面rBPI21處理有良好的療效。還注意到并發(fā)癥的病人的比例減少。這些結(jié)果結(jié)合起來表明rBPI21對(duì)治療創(chuàng)傷出血病人有良好的效果。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員預(yù)料會(huì)出現(xiàn)對(duì)上面所描述的發(fā)明的大量改良和變化，因此，只有如附加的權(quán)利要求中出現(xiàn)的限定才應(yīng)起作用。
序列表(1)基本信息(ⅰ)申請(qǐng)人XOMA公司(ⅱ)發(fā)明名稱BPI蛋白在創(chuàng)傷出血病人中的治療用途(ⅲ)序列數(shù)2(ⅳ)聯(lián)系地址(A)收信人Marshall,O’Toole,Gerstein,Murray &amp;
Borun(B)街道6300 Sears Tower,233 South Wacker Drive(C)城市Chicago(D)州名Illinois(E)國(guó)家美國(guó)(F)郵政編號(hào)60606-6402(ⅴ)計(jì)算機(jī)可讀形式(A)介質(zhì)類型軟盤(B)計(jì)算機(jī)IBM PC兼容機(jī)(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatentIn Release#1.0，版本#1.25(ⅵ)目前申請(qǐng)資料(A)申請(qǐng)?zhí)?B)遞交日(C)分類(ⅶ)在先申請(qǐng)資料(A)申請(qǐng)?zhí)?8/652,292(B)遞交日1996年5月23日(C)分類(ⅷ)律師/代理人信息(A)名稱Borun,Michael F.
(B)登記號(hào)25,447
(C)參考/著錄號(hào)27129/33959 PCT(ⅸ)電信信息(A)電話312/474-6300(B)傳真312/474-0448(C)電傳25-3856(2)關(guān)于SEQ ID NO:1的信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度1813個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線型(ⅱ)分子類型cDNA(ⅸ)特征(A)名稱/關(guān)鍵CDS(B)位置31..1491(ⅸ)特征(A)名稱/關(guān)鍵mat-肽(B)位置124..149l(ⅸ)特征(A)名稱/關(guān)鍵misc-feature(B)其它信息“rBPI”(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:1CAGGCCTTGA GGTTTTGGCA GCTCTGGAGG ATG AGA GAG AAC ATG GCC AGG GGC54Met Arg Glu Asn Met Ala Arg Gly-31 -30 -25CCT TGC AAC GCG CCG AGA TGG GTG TCC CTG ATG GTG CTC GTC GCC ATA102Pro Cys Asn Ala Pro Arg Trp Val Ser Leu Met Val Leu Val Ala Ile-20 -15 -10GGC ACC GCC GTG ACA GCG GCC GTC AAC CCT GGC GTC GTG GTC AGG ATC150Gly Thr Ala Val Thr Ala Ala Val Asn Pro Gly Val Val Val Arg Ile-51 5TCC CAG AAG GGC CTG GAC TAC GCC AGC CAG CAG GGG ACG GCC GCT CTG198Ser Gln Lys Gly Leu Asp Tyr Ala Ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu10 15 20 25CAG AAG GAG CTG AAG AGG ATC AAG ATT CCT GAC TAC TCA GAC AGC TTT246Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys Ile Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe30 35 40AAG ATC AAG 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TCT GCG CTT CGA AAC AAG630Leu Ile Gln Leu Phe Hls Lys Lys Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys155 160 165ATG AAC AGC CAG GTC TGC GAG AAA GTG ACC AAT TCT GTA TCC TCC AAG678Met Asn Ser Gln Val Cys Glu Lys Val Thr Asn Ser Val Ser Ser Lys170 175 180 185CTG CAA CCT TAT TTC CAG ACT CTG CCA GTA ATG ACC AAA ATA GAT TCT726Leu Gln Pro Tyr Phe Gln Thr Leu Pro Val Met Thr Lys Ile Asp Ser190 195 200GTG GCT GGA ATC AAC TAT GGT CTG GTG GCA CCT CCA GCA ACC ACG GCT774Val Ala Gly Ile Asn Tyr Gly Leu Val Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala205 210 215GAG ACC CTG GAT GTA CAG ATG AAG GGG GAG TTT TAC AGT GAG AAC CAC822Glu Thr Leu Asp Val Gln Met Lys Gly Glu Phe Tyr Ser Glu Asn His220 225 230CAC AAT CCA CCT CCC TTT GCT CCA CCA GTG ATG GAG TTT CCC GCT GCC870His Asn Pro Pro Pro Phe Ala Pro Pro Val Met Glu Phe Pro Ala Ala235 240 245CAT GAC CGC ATG GTA TAC CTG GGC CTC TCA GAC TAC TTC TTC AAC ACA918His Asp Arg Met Val Tyr Leu Gly Leu Ser Asp Tyr Phe Phe Asn Thr250 255 260 265GCC GGG CTT GTA TAC CAA GAG GCT GGG GTC TTG AAG ATG ACC CTT AGA966Ala Gly Leu Val Tyr Gln Glu Ala Gly Val Leu Lys Met Thr Leu Arg270 275 280GAT GAC ATG ATT CCA AAG GAG TCC AAA TTT CGA CTG ACA ACC AAG TTC 1014Asp Asp Met Ile Pro Lys Glu Ser Lys Phe Arg Leu Thr Thr Lys Phe285 290 295TTT GGA ACC TTC CTA CCT GAG GTG GCC AAG AAG TTT CCC AAC ATG AAG 1062Phe Gly Thr Phe Leu Pro Glu Val Ala Lys Lys Phe Pro Asn Met Lys300 305 310ATA CAG ATC CAT GTC TCA GCC TCC ACC CCG CCA CAC CTG TCT GTG CAG 1110Ile Gln Ile His Val Ser Ala Ser Thr Pro Pro His Leu Ser Val Gln315 320 325CCC ACC GGC CTT ACC TTC TAC CCT GCC GTG GAT GTC CAG GCC TTT GCC 1158Pro Thr Gly Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Val Asp Val Gln Ala Phe Ala330 335 340 345GTC CTC CCC AAC TCC TCC CTG GCT TCC CTC TTC CTG ATT GGC ATG CAC 1206Val Leu Pro Asn Ser Ser Leu Ala Ser Leu Phe Leu Ile Gly Met His350 355 360ACA ACT GGT TCC ATG GAG GTC AGC GCC GAG TCC AAC AGG CTT GTT GGA 1254Thr Thr Gly Ser Met Glu Val Ser Ala Glu Ser Asn Arg Leu Val Gly365 370 375GAG CTC AAG CTG GAT AGG CTG CTC CTG GAA CTG AAG CAC TCA AAT ATT 1302Glu Leu Lys Leu Asp Arg Leu Leu Leu Glu Leu Lys His Ser Asn Ile380 385 390GGC CCC TTC CCG GTT GAA TTG CTG CAG GAT ATC ATG AAC TAC ATT GTA 1350Gly Pro Phe Pro Val Glu Leu Leu Gln Asp Ile Met Asn Tyr Ile Val395 400 405CCC ATT CTT GTG CTG CCC AGG GTT AAC GAG AAA CTA CAG AAA GGC TTC 1398Pro Ile Leu Val Leu Pro Arg Val Asn Glu Lys Leu Gln Lys Gly Phe410 415 420 425CCT CTC CCG ACG CCG GCC AGA GTC CAG CTC TAC AAC GTA GTG CTT CAG 1446Pro Leu Pro Thr Pro Ala Arg Val Gln Leu Tyr Asn Val val Leu Gln430 435 440CCT CAC CAG AAC TTC CTG CTG TTC GGT GCA GAC GTT GTC TAT AAA 1491Pro His Gln Asn Phe Leu Leu Phe Gly Ala Asp Val Val Tyr Lys445 450 455TGAAGGCACC AGGGGTGCCG GGGGCTGTCA GCCGCACCTG TTCCTGATGG GCTGTGGGGC 1551ACCGGCTGCC TTTCCCCAGG GAATCCTCTC CAGATCTTAA CCAAGAGCCC CTTGCAAACT 1611TCTTCGACTC AGATTCAGAA ATGATCTAAA CACGAGGAAA CATTATTCAT TGGAAAAGTG 1671CATGGTGTGT ATTTTAGGGA TTATGAGCTT CTTTCAAGGG CTAAGGCTGC AGAGATATTT 1731CCTCCAGGAA TCGTGTTTCA ATTGTAACCA AGAAATTTCC ATTTGTGCTT CATGAAAAAA 1791AACTTCTGGT TTTTTTCATG TG1813(2)關(guān)于SEQ ID NO:2的信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度487個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:2Met Arg Glu Asn Met Ala Arg Gly Pro Cys Asn Ala Pro Arg Trp Val-31 -30 -25 -20Ser Leu Met Val Leu Val Ala Ile Gly Thr Ala Val Thr Ala Ala Val-l5 -10 -5 1Asn Pro Gly Val Val Val Arg Ile Ser Gln Lys Gly Leu Asp Tyr Ala5 10 15Ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys20 25 30Ile Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe Lys Ile Lys His Leu Gly Lys Gly35 40 45His Tyr Ser Phe Tyr Ser Met Asp Ile Arg Glu Phe Gln Leu Pro Ser50 55 60 65Ser Gln Ile Ser Met Val Pro Asn Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile Ser70 75 80Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe85 90 95Leu Lys Met Ser Gly Asn Phe Asp Leu Ser Ile Glu Gly Met Ser Ile100 105 l10Ser Ala Asp Leu Lys Leu Gly Ser Asn Pro Thr Ser Gly Lys Pro Thr115 120 125Ile Thr Cys Ser Ser Cys Ser Ser His Ile Asn Ser Val His Val His130 135 140 145Ile Ser Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys150 155 160Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys Met Asn Ser Gln Val Cys Glu Lys165 170 175Val Thr Asn Ser Val Ser Ser Lys Leu Gln Pro Tyr Phe Gln Thr Leu180 185 190Pro Val Met Thr Lys Ile Asp Ser Val Ala Gly Ile Asn Tyr Gly Leu195 200 205Val Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala Glu Thr Leu Asp Val Gln Met Lys210 215 220 225Gly Glu Phe Tyr Ser Glu Asn His His Asn Pro Pro Pro Phe Ala Pro230 235 240Pro Val Met Glu Phe Pro Ala Ala His Asp Arg Met Val Tyr Leu Gly245 250 255Leu Ser Asp Tyr Phe Phe Asn Thr Ala Gly Leu Val Tyr Gln Glu Ala260 265 270Gly Val Leu Lys Met Thr Leu Arg Asp Asp Met Ile Pro Lys Glu Ser275 280 285Lys Phe Arg Leu Thr Thr Lys Phe Phe Gly Thr Phe Leu Pro Glu Val290 295 300 305Ala Lys Lys Phe Pro Asn Met Lys Ile Gln Ile His Val Ser Ala Ser310 315 320Thr Pro Pro His Leu Ser Val Gln Pro Thr Gly Leu Thr Phe Tyr Pro325 330 335Ala Val Asp Val Gln Ala Phe Ala Val Leu Pro Asn Ser Ser Leu Ala340 345 350Ser Leu Phe Leu Ile Gly Met His Thr Thr Gly Ser Met Glu Val Ser355 360 365Ala Glu Ser Asn Arg Leu Val Gly Glu Leu Lys Leu Asp Arg Leu Leu370 375 380 385Leu Glu Leu Lys His Ser Asn Ile Gly Pro Phe Pro Val Glu Leu Leu390 395 400Gln Asp Ile Met Asn Tyr Ile Val Pro Ile Leu Val Leu Pro Arg Val405 410 415Asn Glu Lys Leu Gln Lys Gly Phe Pro Leu Pro Thr Pro Ala Arg Val420 425 430Gln Leu Tyr Asn Val Val Leu Gln Pro His Gln Asn Phe Leu Leu Phe435 440 445Gly Ala Asp Val Val Tyr Lys450 45權(quán)利要求
1．一種治療創(chuàng)傷出血病人的方法，包括給上述病人施用治療有效劑量的殺細(xì)菌/通透性增強(qiáng)(BPI)蛋白產(chǎn)物這一步驟。
2．權(quán)利要求1的方法，其中BPI蛋白產(chǎn)物是分子量大約21-25KD的BPI蛋白產(chǎn)物的氨基端片段。
3．權(quán)利要求1的方法，其中BPI蛋白產(chǎn)物是rBPI23或二聚體形式。
4．權(quán)利要求1的方法，其中BPI蛋白產(chǎn)物是rBPI21。
5．BPI蛋白產(chǎn)物在用于治療創(chuàng)傷出血病人的藥物制品中的應(yīng)用。
6．根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中BPI蛋白產(chǎn)物選自分子量大約為21-25KD的BPI蛋白產(chǎn)物的氨基端片段，rBPI23或其二聚體形式，和rBPI21。
全文摘要
本發(fā)明提供治療創(chuàng)傷出血病人的方法和材料,其中施用治療有效劑量的BPI蛋白產(chǎn)物。
文檔編號(hào)A61K38/00GK1222859SQ97195728
公開日1999年7月14日 申請(qǐng)日期1997年5月23日 優(yōu)先權(quán)日1996年5月23日
發(fā)明者P·J·斯卡諾恩, N·維德爾 申請(qǐng)人:愛克斯歐瑪公司