本發(fā)明涉及遺傳工程化b細胞，其中該b細胞表達并在其表面上帶有嵌合b細胞受體(cbcr)，并且其中該遺傳工程化b細胞進一步表達和分泌抗體或細胞因子。

背景技術(shù)：

1、在過去的十年里，免疫檢查點阻斷抑制劑(cbi)和car-t細胞徹底改變了我們治療癌癥的方式。雖然這些療法中的兩種療法均涉及患者的免疫系統(tǒng)，但都不能主動啟動抗腫瘤免疫應答。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的方面涉及遺傳工程化b細胞。

2、在實施方案中，該遺傳工程化b細胞表達并在其表面上帶有嵌合b細胞受體(cbcr)，并且其中該遺傳工程化b細胞進一步表達和分泌抗體或細胞因子。

3、在實施方案中，該嵌合b細胞受體包含細胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和細胞內(nèi)信號傳導結(jié)構(gòu)域。

4、在實施方案中，該細胞外結(jié)構(gòu)域是抗體或抗體片段。在實施方案中，該抗體是納米抗體、scfv、雙特異性或fab。在實施方案中，該抗體對腫瘤相關(guān)抗原具有特異性。例如，該腫瘤相關(guān)抗原選自由以下項組成的組：caix、bcma、cd138、pd-l1、pd-l2、vegf、cd70、cd99、cea、her-2、gd2、cd171、αfr、pmsa、il13α、msln、tag-72和trop2。例如，該雙特異性抗體對pd-1和ctla4、pd-1和tigit、tigit和ccr4、gitr和tigit或pd-1和ccr4具有特異性。在實施方案中，該抗體是抗ighv?1-69抗體。在實施方案中，該抗體對感染性疾病相關(guān)抗原，諸如ha1、ha2、na或刺突蛋白具有特異性。例如，感染性疾病是病毒疾病，諸如流感、冠狀病毒、hiv或結(jié)核病。

5、在實施方案中，該抗體或該細胞因子的表達由誘導型應答元件控制。例如，該誘導型應答元件是nfat或nfkb應答元件。在實施方案中，該抗體是檢查點阻斷調(diào)節(jié)劑。在實施方案中，該抗體是檢查點阻斷抑制劑。在實施方案中，該抗體對ca-9、pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla4、tigit、vista、cd70、tim-3、lag-3、cd40l、ccr4、gitr或cxcr4具有特異性。在實施方案中，該抗體對ha1、ha2、na或刺突蛋白具有特異性。在實施方案中，該細胞因子選自由以下項組成的組：il-2、il-7、il-12、il-15、il-18、cd40-l或baff。在實施方案中，該抗體包含單克隆抗體。在實施方案中，該抗體包含人源化抗體。在實施方案中，該抗體包含納米抗體、scfv、fab、抗體-細胞因子融合體或雙特異性抗體。例如，該雙特異性抗體對pd-1和ctla4、pd-1和tigit、tigit和ccr4、gitr和tigit或pd-1和ccr4具有特異性。例如，該抗體-細胞因子融合蛋白包含抗pd1-scil12。

6、本發(fā)明的方面涉及一種編碼第一多肽和第二多肽的核酸，其中該第一多肽包含嵌合b細胞受體，其中該嵌合b細胞受體包含細胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和細胞內(nèi)信號傳導結(jié)構(gòu)域，并且其中該第二多肽包含抗體或細胞因子。

7、在實施方案中，該細胞外結(jié)構(gòu)域是抗體或抗體片段。在實施方案中，該抗體是納米抗體、scfv、雙特異性或fab。在實施方案中，該抗體對腫瘤相關(guān)抗原具有特異性。例如，該腫瘤相關(guān)抗原選自由以下項組成的組：caix、bcma、cd138、pd-l1、pd-l2、vegf、cd70、cd99、cea、her-2、gd2、cd171、αfr、pmsa、il13α、msln、tag-72和trop2。例如，該雙特異性抗體對pd-1和ctla4、pd-1和tigit、tigit和ccr4、gitr和tigit或pd-1和ccr4具有特異性。在實施方案中，該抗體是抗ighv?1-69抗體。在實施方案中，該抗體對感染性疾病相關(guān)抗原，諸如ha1、ha2、na或刺突蛋白具有特異性。例如，感染性疾病是病毒疾病，諸如流感、冠狀病毒、hiv或結(jié)核病。

8、在實施方案中，該抗體或該細胞因子的表達由誘導型應答元件控制。例如，該誘導型應答元件是nfat或nfkb應答元件。在實施方案中，該抗體是檢查點阻斷調(diào)節(jié)劑。在實施方案中，該抗體對ca-9、pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla4、tigit、vista、cd70、tim-3、lag-3、cd40l、ccr4、gitr或cxcr4具有特異性。在實施方案中，該抗體對ha1、ha2、na或刺突蛋白具有特異性。在實施方案中，該細胞因子選自由以下項組成的組：il-2、il-7、il-12、il-15、il-18、cd40-l或baff。在實施方案中，該抗體包含單克隆抗體。在實施方案中，該抗體包含人源化抗體。在實施方案中，該抗體包含納米抗體、scfv、fab或雙特異性抗體。例如，該雙特異性抗體對pd-1和ctla4、pd-1和tigit、tigit和ccr4、gitr和tigit或pd-1和ccr4具有特異性。

9、本發(fā)明的方面另外涉及一種載體，該載體包含如本文所述的核酸。在實施方案中，該載體是慢病毒載體或腺相關(guān)病毒(aav)載體。慢病毒和aav是可用作基因療法載體的病毒，諸如crispr/cas系統(tǒng)。

10、更進一步地，本發(fā)明的方面涉及一種細胞，該細胞包含如本文所述的載體。

11、而且，本發(fā)明的方面涉及一種組合物，該組合物包含第一表達載體和第二表達載體，其中該第一表達載體的基因組包含編碼嵌合b細胞受體的核苷酸序列，并且其中該第二表達載體的基因組包含編碼抗體或細胞因子的核苷酸序列。在實施方案中，該第一表達載體和該第二表達載體是慢病毒載體或腺相關(guān)病毒載體。

12、在實施方案中，編碼誘導型應答元件的核苷酸序列與編碼抗體或細胞因子的核苷酸序列可操作地連接。例如，該誘導型應答元件是nfat應答元件或nfkb應答元件。

13、在實施方案中，該嵌合b細胞受體包含細胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和細胞內(nèi)信號傳導結(jié)構(gòu)域。在實施方案中，該細胞外結(jié)構(gòu)域是抗體或抗體片段。在實施方案中，該抗體是納米抗體、scfv或fab。在實施方案中，該抗體對腫瘤相關(guān)抗原具有特異性。例如，該腫瘤相關(guān)抗原選自由以下項組成的組：caix、bcma、cd138、pd-l1、pd-l2、vegf、cd70、cd99、cea、her-2、gd2、cd171、afr、pmsa、il13α、msln、tag-72和trop2。在實施方案中，該抗體是抗ighv?1-69抗體。在實施方案中，該抗體對感染性疾病相關(guān)抗原，諸如ha1、ha2、na或刺突蛋白具有特異性。例如，感染性疾病是病毒疾病，諸如流感、冠狀病毒、hiv或結(jié)核病。

14、在實施方案中，該抗體或該細胞因子的表達由誘導型應答元件控制。例如，該誘導型應答元件是nfat或nfkb應答元件。在實施方案中，該抗體是檢查點阻斷調(diào)節(jié)劑。在實施方案中，該抗體是檢查點阻斷抑制劑。在實施方案中，該抗體對ca-9、pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla4、tigit、vista、cd70、tim-3、lag-3、cd40l、ccr4、gitr或cxcr4具有特異性。在實施方案中，該抗體對ha1、ha2、na或刺突蛋白具有特異性。在實施方案中，該細胞因子選自由以下項組成的組：il-2、il-7、il-12、il-15、il-18、cd40-l或baff。在實施方案中，該抗體包含單克隆抗體。在實施方案中，該抗體包含人源化抗體。在實施方案中，該抗體包含納米抗體、scfv、fab、抗體細胞因子融合體或雙特異性抗體。例如，該雙特異性抗體對pd-1和ctla4、pd-1和tigit、tigit和ccr4、gitr和tigit或pd-1和ccr4具有特異性。例如，該抗體-細胞因子融合體包含抗pd1-scil12。

15、本發(fā)明的方面還涉及一種制備遺傳工程化b細胞群體的方法。在實施方案中，該方法包括：從受試者中分離b細胞群，并且用如本文所述的載體轉(zhuǎn)導該b細胞群體，從而產(chǎn)生遺傳工程化b細胞群體。實施方案還可包括在轉(zhuǎn)導之前活化該b細胞群體的步驟。實施方案還可包括培養(yǎng)該遺傳工程化b細胞群體的步驟。實施方案還可包括向有需要的受試者施用該遺傳工程化b細胞群體的步驟。

16、另外，本發(fā)明的方面涉及通過向受試者施用如本文所述的遺傳工程化b細胞、如本文所述的核酸或如本文所述的組合物來治療患有癌癥的受試者的方法。

17、更進一步地，本發(fā)明的方面涉及通過向受試者施用如本文所述的遺傳工程化b細胞、如本文所述的核酸或如本文所述的組合物來預防受試者癌癥的方法。例如，該癌癥是bcll、nsclc、ccrcc、間皮瘤。

18、本發(fā)明的方面涉及通過向受試者施用如本文所述的遺傳工程化b細胞、如本文所述的核酸或如本文所述的組合物來治療患有感染性疾病的受試者的方法。

19、更進一步地，本發(fā)明的方面涉及通過向受試者施用如本文所述的遺傳工程化b細胞、如本文所述的核酸或如本文所述的組合物來預防感染性疾病的方法。例如，感染性疾病是病毒疾病，諸如流感、冠狀病毒、hiv或結(jié)核病。

20、本發(fā)明的其他目的和優(yōu)點將從隨后的描述中變得顯而易見。