本發(fā)明涉及抗氧化成分提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及油茶籽皮中抗氧化成分提取物及其提取方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

油茶(camelliaoleiferaabel.)，別名茶子樹、茶油樹、白花茶，山茶科山茶屬常青小喬木，是我國特有的木本油料樹種。油茶與油橄欖、油棕、椰子并稱為世界四大木本油料植物，與烏桕、油桐和核桃并稱為我國四大木本油料植物。油茶具有種植成活率高，不與糧棉爭(zhēng)地的優(yōu)勢(shì)，在經(jīng)濟(jì)、社會(huì)、生態(tài)等各方面效益顯著，對(duì)維護(hù)國家糧油安全、發(fā)展南方山區(qū)經(jīng)濟(jì)、改善國民食用油結(jié)構(gòu)等均具有重大意義，受到國家的高度重視，發(fā)展前景廣闊。

現(xiàn)階段，對(duì)油茶資源的利用絕大部分集中在茶籽榨取食用油上，茶油富含不飽和脂肪酸，是媲美橄欖油的優(yōu)質(zhì)油料，在中醫(yī)上對(duì)燒燙傷也有很好的療效。茶籽皮是指茶籽榨油前除去的內(nèi)外種皮，一般將其用作動(dòng)植物飼料或食用菌的培養(yǎng)基，也可用于提取茶皂素及制備活性炭等化工原料。但總體來說，目前為止油茶籽皮的利用程度低，所產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)價(jià)值不高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種油茶籽皮中抗氧化成分提取物及其提取方法和應(yīng)用，采用本發(fā)明提供的方法能夠成功的從油茶籽皮中提取出抗氧化成分，提高了油茶籽皮的利用程度；將所述抗氧化成分應(yīng)用于化妝品中，提高了油茶籽皮的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種油茶籽皮中抗氧化成分提取物的提取方法，包括以下步驟：

(1)將油茶籽皮與第一提取劑混合，進(jìn)行第一提取，將所得第一提取物料進(jìn)行固液分離，得到第一提取固體物料；

所述第一提取劑包括正己烷、石油醚或環(huán)己烷；

(2)將所述步驟(1)中第一提取固體物料與第二提取劑混合，進(jìn)行第二提取，將所得第二提取物料進(jìn)行固液分離，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；

所述第二提取劑包括乙醇、質(zhì)量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質(zhì)量百分含量為55％以上甲醇水溶液；

(3)將所述步驟(2)中第二提取固體物料與第三提取劑混合，進(jìn)行第三提取，將所得第三提取物料進(jìn)行固液分離，得到第三提取液體物料；

所述第三提取劑包括乙醇、質(zhì)量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質(zhì)量百分含量為55％以上甲醇水溶液；

(4)將所述步驟(2)中第二提取液體物料與所述步驟(3)中第三提取液體物料合并，采用大孔樹脂對(duì)得到的合并物料進(jìn)行純化，得到純化物料；

(5)將所述步驟(4)中純化物料進(jìn)行濃縮，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

優(yōu)選的，所述步驟(1)中油茶籽皮與第一提取劑的質(zhì)量比為1：(1.5～2.5)。

優(yōu)選的，所述步驟(1)中第一提取的溫度為45～55℃；第一提取的時(shí)間為3～5h。

優(yōu)選的，所述步驟(2)中第一提取固體物料與第二提取劑的質(zhì)量比為1：(5～10)。

優(yōu)選的，所述步驟(3)中第二提取固體物料與第三提取劑的質(zhì)量比為1：(3～5)。

優(yōu)選的，所述步驟(4)中大孔樹脂的孔徑為0.3～1.25mm。

優(yōu)選的，所述步驟(4)中純化采用梯度洗脫，所述梯度洗脫所采用的洗脫劑的體積為9～11bv。

優(yōu)選的，所述步驟(5)中濃縮是將純化物料濃縮至所述純化物料原體積的6～8％。

本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述提取方法提取得到的油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述油茶籽皮中抗氧化成分提取物在化妝品中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種油茶籽皮中抗氧化成分提取物的提取方法，將油茶籽皮與第一提取劑混合，進(jìn)行第一提取，將所得第一提取物料進(jìn)行固液分離，得到第一提取固體物料；將所述第一提取固體物料與第二提取劑混合，進(jìn)行第二提取，將所得第二提取物料進(jìn)行固液分離，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；將所述第二提取固體物料進(jìn)行與第三提取劑混合，進(jìn)行第三提取，將所得第三提取物料進(jìn)行固液分離，得到第三提取液體物料；將所述第二提取液體物料與所述第三提取液體物料合并，采用大孔樹脂對(duì)得到的合并物料進(jìn)行純化，得到純化物料；將所述純化物料進(jìn)行濃縮，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。采用本發(fā)明提供的方法能夠成功的從油茶籽皮中提取出抗氧化成分，提高了油茶籽皮的利用程度。實(shí)施例中實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的油茶籽皮中抗氧化成分提取物具有較高的總酚含量，達(dá)251.84mggae/g；具有較好的抗氧化性，自由基半數(shù)抑制率(ic50)為135.81～181.21μg/ml；與維生素c相比，具有較好的穩(wěn)定性。

采用本發(fā)明提供的方法得到的抗氧化成分提取物能夠直接應(yīng)用于化妝品中，提高了油茶籽皮的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例4中沒食子酸濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例4中待測(cè)樣品溶液的自由基清除率-濃度關(guān)系曲線圖；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例4中vc水溶液的自由基清除率-濃度關(guān)系曲線圖；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例4中待測(cè)樣品溶液和vc水溶液的自由基清除率-時(shí)間關(guān)系曲線圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一種油茶籽皮中抗氧化成分提取物的提取方法，包括以下步驟：

(1)將油茶籽皮與第一提取劑混合，進(jìn)行第一提取，將所得第一提取物料進(jìn)行固液分離，得到第一提取固體物料；

所述第一提取劑包括正己烷、石油醚或環(huán)己烷；

(2)將所述步驟(1)中第一提取固體物料與第二提取劑混合，進(jìn)行第二提取，將所得第二提取物料進(jìn)行固液分離，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；

所述第二提取劑包括乙醇、質(zhì)量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質(zhì)量百分含量為55％以上甲醇水溶液；

(3)將所述步驟(2)中第二提取固體物料與第三提取劑混合，進(jìn)行第三提取，將所得第三提取物料進(jìn)行固液分離，得到第三提取液體物料；

所述第三提取劑包括乙醇、質(zhì)量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質(zhì)量百分含量為55％以上甲醇水溶液；

(4)將所述步驟(2)中第二提取液體物料與所述步驟(3)中第三提取液體物料合并，采用大孔樹脂對(duì)得到的合并物料進(jìn)行純化，得到純化物料；

(5)將所述步驟(4)中純化物料進(jìn)行濃縮，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

本發(fā)明將油茶籽皮與第一提取劑混合，進(jìn)行第一提取，將所得第一提取物料進(jìn)行固液分離，得到第一提取固體物料；所述第一提取劑包括正己烷、石油醚或環(huán)己烷。在本發(fā)明中，采用第一提取劑對(duì)所述油茶籽皮進(jìn)行第一提取是為了去除油茶籽皮中的油脂類成分，如甘油三酯和油酸。

本發(fā)明對(duì)于所述油茶籽皮的來源沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的油茶籽榨油前除去的種皮即可。在本發(fā)明中，所述油茶籽皮的粒度優(yōu)選為30～50目。本發(fā)明優(yōu)選通過粉碎使所述油茶籽皮的粒度為30～50目。本發(fā)明對(duì)于所述粉粹的方法及所采用的設(shè)備沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的粉碎的技術(shù)方案即可。在對(duì)所述油茶籽皮進(jìn)行粉粹前，本發(fā)明優(yōu)選對(duì)所述油茶籽皮進(jìn)行篩選。本發(fā)明對(duì)于所述篩選沒有特殊的限定，能夠除去有病蟲害的油茶籽皮即可。

在本發(fā)明中，所述油茶籽皮與第一提取劑的質(zhì)量比優(yōu)選為1：(1.5～2.5)，更優(yōu)選為1：(1.8～2.2)，最優(yōu)選為1：2。

在本發(fā)明中，所述第一提取的溫度優(yōu)選為45～55℃，更優(yōu)選為47～53℃，最優(yōu)選為50℃；所述第一提取的時(shí)間優(yōu)選為3～5h，更優(yōu)選為3.5～4.5h，最優(yōu)選為4h。在本發(fā)明中，所述第一提取優(yōu)選在攪拌條件下進(jìn)行；所述攪拌的速率優(yōu)選為30～60rpm，更優(yōu)選為40～50rpm，最優(yōu)選為45rpm。

本發(fā)明對(duì)于將所述第一提取物料進(jìn)行固液分離所采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的能夠?qū)崿F(xiàn)固液分離的技術(shù)方案即可。本發(fā)明優(yōu)選將第一提取物料進(jìn)行過濾，得到第一提取固體物料。

完成所述過濾后，本發(fā)明優(yōu)選將所得濾渣進(jìn)行干燥，得到第一提取固體物料。本發(fā)明對(duì)于所述干燥沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的干燥的技術(shù)方案即可，如自然晾干。

得到第一提取固體物料后，本發(fā)明將所述第一提取固體物料與第二提取劑混合，進(jìn)行第二提取，將所得第二提取物料進(jìn)行固液分離，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；所述第二提取劑包括乙醇、質(zhì)量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質(zhì)量百分含量為55％以上甲醇水溶液。在本發(fā)明中，采用第二提取劑對(duì)所述第一提取固體物料進(jìn)行第二提取是為了提取茶籽皮中的酚類化合物等抗氧化成分。

在本發(fā)明中，作為第二提取劑，所述乙醇水溶液的質(zhì)量百分含量?jī)?yōu)選為65～95％，更優(yōu)選為70～90％，最優(yōu)選為75～85％。

在本發(fā)明中，作為第二提取劑，所述甲醇水溶液的質(zhì)量百分含量?jī)?yōu)選為60～95％，更優(yōu)選為70～90％，最優(yōu)選為75～85％。

在本發(fā)明中，所述第一提取固體物料與第二提取劑的質(zhì)量比優(yōu)選為1：(5～10)，更優(yōu)選為1：(6～9)，最優(yōu)選為1：(7～8)。

在本發(fā)明中，所述第二提取的溫度優(yōu)選為40～50℃，更優(yōu)選為43～57℃，最優(yōu)選為45；所述第二提取的時(shí)間優(yōu)選為4～6h，更優(yōu)選為4.5～5.5h，最優(yōu)選為5h。在本發(fā)明中，所述第二提取優(yōu)選在攪拌條件下進(jìn)行；所述攪拌的速率優(yōu)選為30～60rpm，更優(yōu)選為40～50rpm，最優(yōu)選為45rpm。

本發(fā)明對(duì)于將所述第二提取物料進(jìn)行固液分離所采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的能夠?qū)崿F(xiàn)固液分離的技術(shù)方案即可。本發(fā)明優(yōu)選將第二提取物料進(jìn)行過濾，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料。

得到第二提取液體物料和第二提取固體物料后，本發(fā)明將所述第二提取固體物料與第三提取劑混合，進(jìn)行第三提取，將所得第三提取物料進(jìn)行固液分離，得到第三提取液體物料；所述第三提取劑包括乙醇、質(zhì)量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質(zhì)量百分含量為55％以上甲醇水溶液。在本發(fā)明中，采用第三提取劑對(duì)所述第二提取固體物料進(jìn)行第三提取是為了進(jìn)一步提取茶籽皮中的酚類化合物等抗氧化成分。

在本發(fā)明中，作為第三提取劑，所述乙醇水溶液的質(zhì)量百分含量?jī)?yōu)選為65～95％，更優(yōu)選為70～90％，最優(yōu)選為75～85％。

在本發(fā)明中，作為第三提取劑，所述甲醇水溶液的質(zhì)量百分含量?jī)?yōu)選為60～95％，更優(yōu)選為70～90％，最優(yōu)選為75～85％。

在本發(fā)明中，所述第二提取固體物料與第三提取劑的質(zhì)量比優(yōu)選為1：(3～5)，更優(yōu)選為1：(3.5～4.5)，最優(yōu)選為1：4。

在本發(fā)明中，所述第三提取的溫度優(yōu)選為40～50℃，更優(yōu)選為43～47℃，最優(yōu)選為45℃；所述第三提取的時(shí)間優(yōu)選為4～6h，更優(yōu)選為4.5～5.5h，最優(yōu)選為5h。在本發(fā)明中，所述第三提取優(yōu)選在攪拌條件下進(jìn)行；所述攪拌的速率優(yōu)選為30～60rpm，更優(yōu)選為40～50rpm，最優(yōu)選為45rpm。

本發(fā)明對(duì)于將所述第三提取物料進(jìn)行固液分離所采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的能夠?qū)崿F(xiàn)固液分離的技術(shù)方案即可。本發(fā)明優(yōu)選將第三提取物料進(jìn)行過濾，得到第三提取液體物料。

得到第三提取液體物料后，本發(fā)明將所述第二提取液體物料與所述第三提取液體物料合并，采用大孔樹脂對(duì)得到的合并物料進(jìn)行純化，得到純化物料。在本發(fā)明中，采用大孔樹脂對(duì)所述合并物料進(jìn)行純化，是為了去除所述合并物料中蛋白成分以及其他大分子糖苷類物質(zhì)。

在本發(fā)明中，所述大孔樹脂的孔徑優(yōu)選為0.3～1.25mm，更優(yōu)選為0.5～1.1mm，最優(yōu)選為0.7～0.9mm。在本發(fā)明中，所述大孔樹脂優(yōu)選為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。本發(fā)明對(duì)于所述非極性大孔樹脂的種類沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的非極性大孔樹脂即可，具體如da201、dm301或dm130型非極性大孔樹脂。本發(fā)明對(duì)于所述弱極性大孔樹脂的種類沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的弱極性大孔樹脂即可，具體如ab-8或lsa-10型弱極性大孔樹脂。

在本發(fā)明中，所述純化優(yōu)選采用梯度洗脫，所述梯度洗脫所采用的洗脫劑的體積優(yōu)選為9～11bv，更優(yōu)選為10bv。在本發(fā)明中，所述梯度洗脫優(yōu)選依次采用第一洗脫劑、第二洗脫劑、第三洗脫劑和第四洗脫劑進(jìn)行洗脫。在本發(fā)明中，所述第一洗脫劑優(yōu)選為質(zhì)量百分含量為25～35％的乙醇水溶液，更優(yōu)選為28～32％，最優(yōu)選為30％；所述第二洗脫劑優(yōu)選為質(zhì)量百分含量為45～55％的乙醇水溶液，更優(yōu)選為48～52％，最優(yōu)選為50％；所述第三洗脫劑優(yōu)選為質(zhì)量百分含量為65～75％的乙醇水溶液，更優(yōu)選為68～72％，最優(yōu)選為70％；所述第四洗脫劑優(yōu)選為質(zhì)量百分含量為100％的乙醇。本發(fā)明在進(jìn)行所述梯度洗脫時(shí)，所述第一洗脫劑、第二洗脫劑、第三洗脫劑和第四洗脫劑的總體積優(yōu)選為9～11bv；所述第一洗脫劑、第二洗脫劑、第三洗脫劑和第四洗脫劑的體積優(yōu)選相等。

得到純化物料后，本發(fā)明將所述純化物料進(jìn)行濃縮，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。在本發(fā)明中，所述濃縮優(yōu)選是將純化物料濃縮至所述純化物料原體積的6～8％，更優(yōu)選為7％。在本發(fā)明中，所述濃縮優(yōu)選為減壓濃縮；所述減壓濃縮的溫度優(yōu)選為40～50℃，更優(yōu)選為43～47℃，最優(yōu)選為45℃。

本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述提取方法提取得到的油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述油茶籽皮中抗氧化成分提取物在化妝品中的應(yīng)用。在本發(fā)明中，所述油茶籽皮中抗氧化成分提取物無需進(jìn)行其它后處理，可直接作為化妝品原料，根據(jù)實(shí)際需要，通過加入其它助劑進(jìn)行稀釋復(fù)配包裝，即得市售化妝品產(chǎn)品。

下面將結(jié)合本發(fā)明中的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1

(1)選取無病蟲害的油茶籽皮，粉粹，得到粒度為30～50目的油茶籽皮粉末；

(2)取5kg所述步驟(1)中油茶籽皮粉末與12l正己烷混合，在45rpm攪拌速率下，于45℃進(jìn)行第一提取5h，將所得第一提取物料進(jìn)行過濾，將所得濾渣自然晾干，得到第一提取固體物料；

(3)將所述步驟(2)中第一提取固體物料與25l質(zhì)量百分含量為90％的乙醇水溶液混合，在45rpm攪拌速率下，于40℃進(jìn)行第二提取6h，將所得第二提取物料進(jìn)行過濾，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；

(4)將所述步驟(3)中第二提取固體物料與20l質(zhì)量百分含量為90％的乙醇水溶液混合，在45rpm攪拌速率下，于50℃進(jìn)行第三提取4h，將所得第三提取物料進(jìn)行過濾，得到第三提取液體物料；

(5)將所述步驟(3)中第二提取液體物料與所述步驟(4)中第三提取液體物料合并，采用da201型非極性大孔樹脂對(duì)得到的合并物料進(jìn)行純化，得到純化物料；其中，所述純化采用梯度洗脫，具體是依次采用質(zhì)量百分含量為30％的乙醇水溶液2.5bv、質(zhì)量百分含量為50％的乙醇水溶液2.5bv、質(zhì)量百分含量為70％的乙醇水溶液2.5bv和質(zhì)量百分含量為100％的乙醇2.5bv進(jìn)行洗脫。

(6)將所述步驟(5)中純化物料于40℃進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至所述純化物料原體積的7％，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

實(shí)施例2

(1)選取無病蟲害的油茶籽皮，粉粹，得到粒度為30～50目的油茶籽皮粉末；

(2)取5kg所述步驟(1)中油茶籽皮粉末與18l石油醚混合，在40rpm攪拌速率下，于55℃進(jìn)行第一提取3h，將所得第一提取物料進(jìn)行過濾，將所得濾渣自然晾干，得到第一提取固體物料；

(3)將所述步驟(2)中第一提取固體物料與35l質(zhì)量百分含量為80％的乙醇水溶液混合，在40rpm攪拌速率下，于50℃進(jìn)行第二提取4h，將所得第二提取物料進(jìn)行過濾，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；

(4)將所述步驟(3)中第二提取固體物料與15l質(zhì)量百分含量為80％的乙醇水溶液混合，在40rpm攪拌速率下，于40℃進(jìn)行第三提取6h，將所得第三提取物料進(jìn)行過濾，得到第三提取液體物料；

(5)將所述步驟(3)中第二提取液體物料與所述步驟(4)中第三提取液體物料合并，采用da201型非極性大孔樹脂對(duì)得到的合并物料進(jìn)行純化，得到純化物料；其中，所述純化采用梯度洗脫，具體是依次采用質(zhì)量百分含量為28％的乙醇水溶液2.5bv、質(zhì)量百分含量為52％的乙醇水溶液2.5bv、質(zhì)量百分含量為70％的乙醇水溶液2.5bv和質(zhì)量百分含量為100％的乙醇2.5bv進(jìn)行洗脫。

(6)將所述步驟(5)中純化物料于50℃進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至所述純化物料原體積的6％，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

實(shí)施例3

(1)選取無病蟲害的油茶籽皮，粉粹，得到粒度為30～50目的油茶籽皮粉末；

(2)取5kg所述步驟(1)中油茶籽皮粉末與15l正己烷混合，在50rpm攪拌速率下，于50℃進(jìn)行第一提取4h，將所得第一提取物料進(jìn)行過濾，將所得濾渣自然晾干，得到第一提取固體物料；

(3)將所述步驟(2)中第一提取固體物料與30l質(zhì)量百分含量為70％的甲醇水溶液混合，在50rpm攪拌速率下，于45℃進(jìn)行第二提取5h，將所得第二提取物料進(jìn)行過濾，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；

(4)將所述步驟(3)中第二提取固體物料與18l質(zhì)量百分含量為70％的甲醇水溶液混合，在50rpm攪拌速率下，于55℃進(jìn)行第三提取5h，將所得第三提取物料進(jìn)行過濾，得到第三提取液體物料；

(5)將所述步驟(3)中第二提取液體物料與所述步驟(4)中第三提取液體物料合并，采用da201型非極性大孔樹脂對(duì)得到的合并物料進(jìn)行純化，得到純化物料；其中，所述純化采用梯度洗脫，具體是依次采用質(zhì)量百分含量為32％的乙醇水溶液2.5bv、質(zhì)量百分含量為48％的乙醇水溶液2.5bv、質(zhì)量百分含量為68％的乙醇水溶液2.5bv和質(zhì)量百分含量為100％的乙醇2.5bv進(jìn)行洗脫。

(6)將所述步驟(5)中純化物料于45℃進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至所述純化物料原體積的8％，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

實(shí)施例4

將本發(fā)明實(shí)施例1～3得到的油茶籽皮中抗氧化成分提取物作為待測(cè)樣品，進(jìn)行總酚含量及抗氧化性測(cè)定。

1、總酚含量測(cè)定

以待測(cè)樣品中沒食子酸當(dāng)量代表總酚含量，利用福林酚法測(cè)定待測(cè)樣品中沒食子酸的含量，包括以下步驟：

(1)建立沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別配置濃度為0.25、0.50、0.75、1.05、1.5mg/ml的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，在試管中分別加入各濃度沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液1ml，福林酚試劑1ml，再用質(zhì)量百分含量為10％的碳酸鈉水溶液補(bǔ)足至10ml，搖勻，室溫放置1h后，于760nm處測(cè)量吸光度，空白對(duì)照為1ml去離子水；

以沒食子酸的濃度為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度之為縱坐標(biāo)，建立沒食子酸濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。

(2)待測(cè)樣品中總酚含量的測(cè)定

分別取實(shí)例1～3中制備的油茶籽皮中抗氧化成分提取物干燥至恒重，各稱量1.0g，用質(zhì)量百分含量為80％的乙醇水溶液定容于100ml容量瓶中，搖勻，得到待測(cè)樣品溶液；

在與建立沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的操作步驟下，測(cè)量待測(cè)樣品溶液的吸光度；

根據(jù)沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到待測(cè)樣品中總酚含量(若待測(cè)樣品溶液的吸光度值超出沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍，則在測(cè)量吸光度前對(duì)所述待測(cè)樣品溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋)，總酚含量以沒食子酸總酚當(dāng)量(gae)表示，單位為mggae/g，表示每g油茶籽皮中抗氧化成分提取物中沒食子酸的質(zhì)量(mg)，結(jié)果如表1所示。

表1實(shí)施例1～3中制備的油茶籽皮中抗氧化成分提取物中總酚含量

由表1可知，本發(fā)明提供的油茶籽皮中抗氧化成分提取物具有較高的總酚含量，達(dá)251.84mggae/g。

2、抗氧化性測(cè)定

dpph自由基清除法適合化妝品行業(yè)中原料抗氧化性的檢測(cè)，因此采用dpph自由基清除法來測(cè)定待測(cè)樣品的抗氧化性，包括以下步驟：

(1)配置dpph測(cè)試液

準(zhǔn)確稱量1mgdpph，用質(zhì)量百分含量為95％的乙醇水溶液定容于50ml容量瓶中，超聲3min使之完全溶解，得到dpph測(cè)試液；

量取1mldpph測(cè)試液，于519nm處測(cè)量吸光度，吸光度值a在0.6～0.8之間可用。

(2)待測(cè)樣品測(cè)定

分別取實(shí)例1～3中制備的油茶籽皮中抗氧化成分提取物干燥至恒重，各稱量1.0g，用質(zhì)量百分含量為80％的乙醇水溶液定容于100ml容量瓶中，搖勻，得到待測(cè)樣品溶液；

移取3mldpph測(cè)試液，向所述dpph測(cè)試液中緩慢滴加待測(cè)樣品溶液，至dpph測(cè)試液基本褪色，根據(jù)滴加待測(cè)樣品溶液的體積初步擬定實(shí)驗(yàn)中待測(cè)樣品溶液的濃度范圍，最終，本實(shí)驗(yàn)中待測(cè)樣品溶液的濃度范圍確定為40、60、80、120、160、200μg/ml；

將待測(cè)樣品溶液分別稀釋至以上濃度，準(zhǔn)確移取各濃度的待測(cè)樣品溶液0.5ml，分別加入3ml的dpph測(cè)試液，混合均勻，作為實(shí)驗(yàn)組溶液，靜置2min后于519nm處測(cè)量吸光度，為避免溶液顏色影響，設(shè)置不加dpph測(cè)試液的陰性對(duì)照組，計(jì)算待測(cè)樣品溶液的吸光度值(ax)為實(shí)驗(yàn)組溶液的吸光度值減去對(duì)陰性照組吸光度值；

空白對(duì)照為1ml去離子水(吸光度值為a0)；

每個(gè)待測(cè)樣品、每種濃度的待測(cè)樣品溶液的吸光度需要測(cè)定三個(gè)平行數(shù)據(jù)，而且在測(cè)定三個(gè)平行數(shù)據(jù)后，都要重新測(cè)一次a0；

按照自由基清除率＝100％*(a0-ax)/a0，計(jì)算待測(cè)樣品溶液的自由基清除率，以待測(cè)樣品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以待測(cè)樣品溶液的自由基清除率為縱坐標(biāo)，做待測(cè)樣品溶液的自由基清除率-濃度關(guān)系曲線圖，如圖2所示；并確定待測(cè)樣品溶液的自由基半數(shù)抑制率(ic50)，結(jié)果見表2。

(3)標(biāo)準(zhǔn)品維生素c(vc)的測(cè)定

將vc用去離子水配置成8、20、40、60、80、100μg/ml的vc水溶液，作為實(shí)驗(yàn)組溶液，按照步驟(2)中的方法，得到vc水溶液的自由基清除率-濃度關(guān)系曲線圖，如圖3所示；并確定vc水溶液的自由基半數(shù)抑制率(ic50)，結(jié)果見表2。

表2待測(cè)樣品溶液和vc水溶液的自由基半數(shù)抑制率

由表2可知，本發(fā)明提供的油茶籽皮中抗氧化成分提取物具有較好的抗氧化性，自由基半數(shù)抑制率(ic50)為135.81～181.21μg/ml。

3、穩(wěn)定性測(cè)定

抗氧化劑的穩(wěn)定性是確定其品質(zhì)的一個(gè)重要指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)主要檢測(cè)待測(cè)樣品溶液的抗氧化性隨時(shí)間的變化情況，以此驗(yàn)證所述待測(cè)樣品溶液的穩(wěn)定性，包括以下步驟：

分別移取濃度為200μg/ml的待測(cè)樣品溶液和濃度為100μg/ml的vc水溶液10ml，各均勻分為4等份，置于避光陰涼處保存，分別在2星期、4星期、6星期和8星期時(shí)各取其中一份，按照實(shí)驗(yàn)2中抗氧化性測(cè)定方法，分別測(cè)出待測(cè)樣品溶液和vc水溶液的自由基清除率，以自由基清除率為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，做待測(cè)樣品溶液和vc水溶液的自由基清除率-時(shí)間關(guān)系曲線圖，如圖4所示。由圖4可知，與維生素c相比，本發(fā)明提供的油茶籽皮中抗氧化成分提取物具有較好的穩(wěn)定性。

由以上實(shí)施例可知，采用本發(fā)明提供的方法能夠成功的從油茶籽皮中提取出抗氧化成分，提高了油茶籽皮的利用程度；本發(fā)明提供的油茶籽皮中抗氧化成分提取物具有較好的抗氧化性和穩(wěn)定性，作為原料應(yīng)用于化妝品中，提高了油茶籽皮的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。