本發(fā)明屬于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種基于心率變異性作為檢測(cè)指標(biāo)的動(dòng)物模型的構(gòu)建方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

心率變異性(heartratevariability,hrv)是心電圖中r-r間期的微小漲落，反映了交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)(迷走神經(jīng))活動(dòng)的緊張性和平衡性。心率變異性降低反映迷走神經(jīng)張力減弱，交感神經(jīng)張力增強(qiáng)，說(shuō)明自主神經(jīng)系統(tǒng)功能下降。當(dāng)自主神經(jīng)系統(tǒng)處于機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，會(huì)激活交感神經(jīng)系統(tǒng)釋放兒茶酚胺類(lèi)激素，如去甲腎上腺素，腎上腺素，5-羥色胺等，伴隨著自主神經(jīng)系統(tǒng)功能增強(qiáng)，機(jī)體心率加快、汗腺分泌增加、細(xì)支氣管擴(kuò)張等。

自1965年hrv的臨床意義被認(rèn)識(shí)到以來(lái)，hrv已有肯定應(yīng)用價(jià)值的領(lǐng)域如急性心肌梗死和糖尿病，以及陣發(fā)性心律失常、心力衰竭、高血壓、冠心病等，顯示出hrv的監(jiān)測(cè)對(duì)疾病早期診斷、病中監(jiān)護(hù)和預(yù)后評(píng)估等有重大意義。目前hrv的分析方法主要有基于線性分析的時(shí)域分析、頻域分析和非線性分析這三類(lèi)，前兩種分析hrv方法已經(jīng)很成熟，其中常用的時(shí)域分析法指標(biāo)包括:均值標(biāo)準(zhǔn)差(sdann)，差值均方的平方根(rmssd),pnn50(相鄰間期差值>50ms的百分比,)等，常用的頻域分析法指標(biāo)包括:總功率(tp)、高頻(hf)、超低頻(ulf)、極低頻(vlf)、低頻(lf)等，lf/hf提示交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)張力的平衡狀態(tài)，并廣泛地應(yīng)用在臨床評(píng)價(jià)和各種生理實(shí)驗(yàn)中。hrv作為一種公認(rèn)的無(wú)創(chuàng)性定量自主神經(jīng)系統(tǒng)功能評(píng)價(jià)指標(biāo)，近年來(lái)臨床醫(yī)務(wù)工作者越來(lái)越關(guān)注hrv分析在諸如功能性消化不良、腸易激綜合征、失眠癥、抑郁癥、精神障礙、神經(jīng)官能癥等疾病的臨床意義。

脾胃為后天之本，氣血生化之源，脾的主要功能是主運(yùn)化、主升清和統(tǒng)攝血液，對(duì)于整個(gè)人體的生命活動(dòng)至關(guān)重要,是一身氣機(jī)升降的樞紐，是長(zhǎng)養(yǎng)五臟六腑之根，是一身正氣的源泉，是人體抗邪防病、愈病康復(fù)、保養(yǎng)生生之氣、延年益壽的根本。金元四大家的李杲在《脾胃論》中不僅提到“百病皆由脾胃衰而生也”,而且將脾胃與元?dú)饴?lián)系起來(lái)，元?dú)馐侨梭w健康之源，脾胃?jìng)麆t元?dú)獠怀洌嗅t(yī)脾虛是一組比較集中地反映脾胃各種生理功能不足的綜合證。脾虛可導(dǎo)致臟腑虛損、氣血虛弱，從而導(dǎo)致疾病、加速衰老的進(jìn)程?！捌⒃谥緸樗肌?，脾具有思考、思慮的功能。脾氣健運(yùn)，水谷精微充足，氣血旺盛，則遇事能夠周密思考，從而協(xié)助心神正確處理事務(wù)，提升自我調(diào)節(jié)的功能。“思傷脾”，一旦過(guò)渡思慮或所思不遂，就會(huì)影響氣的正常運(yùn)行，導(dǎo)致脾氣壅塞結(jié)滯，影響運(yùn)化功能，出現(xiàn)納少、腹脹、便溏、肢體倦怠、少氣懶言、消瘦等癥狀，人的自我調(diào)節(jié)能力下降。隨著現(xiàn)代社會(huì)工作節(jié)奏日益加快，臨床上具有自主神經(jīng)功能失衡的多種疾病中，往往常見(jiàn)伴有中醫(yī)辨證的脾虛證候，各種因素導(dǎo)致類(lèi)似相關(guān)癥狀的亞健康人群臨床多見(jiàn)，如果有診斷脾虛證的客觀量化指標(biāo)，則可有助于診斷或鑒別診斷，或用藥后客觀地及時(shí)追蹤治療效果。

脾虛包括脾氣虛、脾陽(yáng)虛、脾陰虛及脾虛兼證等多種證型。脾虛動(dòng)物模型的建立推動(dòng)了與脾虛相關(guān)的現(xiàn)代醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)研究。利血平脾虛證動(dòng)物模型為采用副交感神經(jīng)功能亢進(jìn)法建立的脾虛模型，不僅應(yīng)用多和適應(yīng)范圍廣，而且可靠性和重現(xiàn)性強(qiáng)，具有簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、易行的特點(diǎn)。副交感神經(jīng)功能亢進(jìn)法原理：利血平主要影響節(jié)后交感神經(jīng)末梢遞質(zhì)去甲腎上腺素的儲(chǔ)存和釋放，并能降低腦內(nèi)和外周神經(jīng)中單胺類(lèi)遞質(zhì){如去甲腎上腺素、腎上腺素、5-羥色胺等}的含量，從而降低交感神經(jīng)的功能，使副交感神經(jīng)功能相對(duì)或絕對(duì)亢進(jìn)，同時(shí)又引起腹瀉而耗氣。適量利血平制成的脾虛模型與臨床上患者自主神經(jīng)功能紊亂相一致。

抑郁癥是一組以情感障礙為突出表現(xiàn)的心理疾病，表現(xiàn)為一種持久的抑郁狀態(tài),伴情緒低落、軀體不適和睡眠障礙等癥狀。目前關(guān)于抗抑郁藥物作用機(jī)理的認(rèn)識(shí)，包括單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)及其受體、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子、各種神經(jīng)肽、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、nmda受體、hpa軸和hpt軸、炎癥細(xì)胞因子等。

腹腔注射利血平構(gòu)建抑郁癥模型已被廣泛應(yīng)用。對(duì)利血平引起的行為和生理變化的拮抗是最早發(fā)展的抑郁癥動(dòng)物模型。利血平為受體阻斷劑，主要抑制囊泡膜胺泵對(duì)兒茶酚胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的主動(dòng)攝取過(guò)程，使囊泡內(nèi)貯存的神經(jīng)遞質(zhì)遂漸耗竭，當(dāng)神經(jīng)遞質(zhì)排空后，必須等待新的囊泡形成，才能恢復(fù)神經(jīng)功能，并且神經(jīng)遞質(zhì)的合成需要一定時(shí)間，神經(jīng)遞質(zhì)排空后再加大劑量也沒(méi)有神經(jīng)遞質(zhì)釋放。而留在囊泡外神經(jīng)遞質(zhì)，易被單胺氧化酶降解，從而使兒茶酚胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)如ne、e、5-ht耗竭，引起行為和生理上的變化。從模型構(gòu)建的機(jī)理來(lái)說(shuō)，利血平脾虛證動(dòng)物模型與利血平抑郁癥動(dòng)物模型都是與利血平耗竭兒茶酚胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)，都涉及到自主神經(jīng)調(diào)節(jié)作用。

因此，hrv的變化，作為一個(gè)無(wú)創(chuàng)性定量評(píng)價(jià)指標(biāo)，利用利血平誘導(dǎo)的動(dòng)物模型，能很好地反映出脾虛證或抑郁癥建模是否成功。但是現(xiàn)有的技術(shù)中均沒(méi)有該技術(shù)的提出和記載。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種基于心率變異性作為檢測(cè)指標(biāo)的動(dòng)物模型的構(gòu)建方法及其應(yīng)用。

一種基于心率變異性的動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，所述構(gòu)建方法是以心率變異性作為檢測(cè)指標(biāo)、通過(guò)利血平誘導(dǎo)而形成的。

進(jìn)一步地，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮下注射0.01～10mg/kg.d的利血平，每天一次，連續(xù)3～60天，觀察心率變異值。

進(jìn)一步地，所述在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮下注射利血平期間每日口服灌胃動(dòng)物番瀉葉、芒硝、大黃或大承氣湯中至少一種的生藥浸煎液。

優(yōu)選地，所述生藥浸煎液每1ml含1g廣豆根、旋覆花、檳榔中至少一種，口服灌胃劑量為每100g體重灌0.2-4.0ml。

更優(yōu)選地，所述生藥浸煎液的ph值為2≤ph＜7。

更優(yōu)選地，所述生藥浸煎液的溫度為4℃。

進(jìn)一步地，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物靜脈一次性注射利血平0.01～10mg/kg.d，觀察心率變異值。

優(yōu)選地，所述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為小鼠、大鼠、驢、兔。

基于心率變異性的動(dòng)物模型的應(yīng)用，所述動(dòng)物模型可以用于脾虛癥的建模。

進(jìn)一步地，所述動(dòng)物模型可以用于抑郁癥的建模。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明提出了利用利血平誘導(dǎo)構(gòu)建基于心率變異性作為檢測(cè)指標(biāo)的動(dòng)物模型方法，該構(gòu)建無(wú)創(chuàng)，低成本，周期短，可重復(fù)，不僅可以模擬脾虛癥、抑郁癥的部分病理生理變化，作為一種新的醫(yī)藥研究手段來(lái)探討相關(guān)分子機(jī)理機(jī)制和建立藥物篩選平臺(tái)，而且還具有中、西醫(yī)理論融合特色，為臨床研究相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制、診斷治療相關(guān)疾病以及篩選、研究治療相關(guān)疾病藥物創(chuàng)造條件，具有好的應(yīng)用前景。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1構(gòu)建的基于心率變異性顯著變化的利血平誘導(dǎo)的模型大鼠造模后hrv值(n＝6)：實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組(心率變異性部分指標(biāo))相比，p﹤0.01；

圖2為實(shí)施例2構(gòu)建的基于心率變異性顯著變化的利血平誘導(dǎo)的模型大鼠造模后hrv值(n＝6)：實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組(心率變異性部分指標(biāo))相比，p﹤0.01。

具體實(shí)施方法

以下通過(guò)對(duì)本發(fā)明具體實(shí)施方式的描述說(shuō)明但不限制本發(fā)明。

實(shí)施例1

1.造模方法和分組

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物sd大鼠，體重180±20g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。將動(dòng)物隨機(jī)分為為1個(gè)模型組和1個(gè)正常對(duì)照組。模型組每只動(dòng)物皮下注射利血平0.2mg/kg·d，連續(xù)11天。

2、檢測(cè)指標(biāo)及檢測(cè)方法

末次給藥后次日麻醉，利用多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)檢測(cè)hrv值。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

數(shù)據(jù)的處理采用excel統(tǒng)計(jì)分析，各組數(shù)據(jù)比較運(yùn)用方差分析。

4.結(jié)果

圖1為正常組大鼠麻醉后、利血平脾虛模型組大鼠麻醉后、腎上腺雙側(cè)摘除大鼠麻醉后尾靜脈注射一定劑量利血平前后的sdann值、rmssd值(心率變異性部分指標(biāo))對(duì)比(n＝6)：實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組(心率變異性部分指標(biāo))相比，p﹤0.01。

實(shí)施例2

1.造模方法和分組

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物sd大鼠，體重180±20g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。正常大鼠麻醉后，利用多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)檢測(cè)hrv值。之后尾靜脈一次性注射利血平1.0mg/kg·d后檢測(cè)hrv值。對(duì)比靜脈注射利血平前后hrv值。

2、檢測(cè)指標(biāo)及檢測(cè)方法同實(shí)施例1

3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法同實(shí)施例1

4、結(jié)果

圖2為正常大鼠麻醉后尾靜脈注射利血平前后的sdann值、rmssd值、tinn值(心率變異性部分指標(biāo))對(duì)比(n＝6)：實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組(心率變異性部分指標(biāo))相比，p﹤0.01。

本發(fā)明提出了利用利血平誘導(dǎo)的、基于心率變異性作為檢測(cè)指標(biāo)的動(dòng)物模型構(gòu)建方法，該構(gòu)建無(wú)創(chuàng)，低成本，周期短，可重復(fù)，不僅可以模擬脾虛癥、抑郁癥的部分病理生理變化，作為一種新的醫(yī)藥研究手段來(lái)探討相關(guān)分子機(jī)理機(jī)制和建立藥物篩選平臺(tái)，而且還具有中、西醫(yī)理論融合特色，為臨床研究相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制、診斷治療相關(guān)疾病以及篩選、研究治療相關(guān)疾病藥物創(chuàng)造條件，具有好的應(yīng)用前景。